MAGEA1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进恶性黑色素瘤的转移

背景 恶性黑色素瘤是源自黑色素细胞的恶性肿瘤,恶性程度高.其中转移性黑色素瘤患者的5年生存率不足10％,且发病率逐渐增加.黑色素瘤相关抗原家族A1(melanoma?associated?antigen?family?A1,MAGEA1)是MAGE-A基因亚家族的成员,在多种恶性肿瘤中均有表达,但其在恶性黑色素瘤中的表达和作用机制尚不明确.目的 探讨MAGEA1促进恶性黑色素瘤转移的信号通路,并进行验证.方法 通过黑色素瘤细胞系A375与A2058的RNA-Seq数据分析,确定MAGEA1正向调控Wnt/β-catenin信号通路,利用TOP/FOP、免疫荧光染色研究通路活性,利用Western?blot和qRT-PCR分别在蛋白水平与转录水平验证通路基因的表达情况.结果 MAGEA1通过c-Jun激活Wnt/β-catenin信号通路,促进黑色素瘤细胞上皮-间充质转化,提高黑色素瘤细胞的侵袭与迁移能力.结论 MAGEA1作为一种与恶性肿瘤转移相关的基因,在恶性黑色素瘤中可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞的转移.     

间歇给药联合ERK1/2-MITF通路激活剂抑制耐药黑色素瘤细胞增殖的研究

目的 探讨ERK1/2通路在耐药黑色素瘤药物成瘾性中的作用,并在此基础上,探究间歇性给药联合ERK1/2-MITF通路激活剂对耐药黑色素瘤细胞增殖的影响。方法 体外培养黑色素瘤药物敏感株（A375和M14细胞）和对威罗菲尼耐受的细胞株（A375/R0.5、A375/R2.0、M14/R0.5和M14/R2.0）,用MEK抑制剂U0126抑制ERK1/2激活,用Western-blot检测ERK1/2等蛋白的表达,用克隆形成实验观察细胞的增殖能力。利用活性分子TBHQ激活ERK1/2通路,利用ML329抑制MITF,二者均可上调ERK1/2-MITF通路活性,导致下游MITF抑制。采用耐药细胞A375/R2.0观察“撤除威罗菲尼”联合“TBHQ或ML329”对细胞增殖的影响。结果 克隆形成实验显示,在撤除威罗菲尼后,耐药细胞增殖减慢,如在撤药同时,用MEK抑制剂U0126抑制ERK1/2活化,可逆转撤药导致的增殖抑制,证明ERK1/2活化是耐药细胞药物成瘾性的关键机制。相反,如在撤除威罗菲尼同时,添加ERK1/2激活剂TBHQ或MITF抑制剂ML329,以进一步激活ERK1/2-MITF通路,结果发现,二者均可进一步抑制耐药细胞的增殖,提示撤药和ERK1/2-MITF通路活化产生了协同抑瘤效应。结论 本研究从新的角度证明了ERK1/2通路在耐药黑色素瘤细胞药物成瘾性中的作用,并提示间歇性给药联合ERK1/2-MITF通路激活剂可更有效地抑制耐药黑色素瘤增殖,有望为防治黑色素瘤耐药提供新思路。     

卵巢癌顺铂耐药转录组学分析和拮抗剂筛选的研究

目的 探讨卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药后的转录组差异,并基于此筛选找寻潜在的拮抗剂。方法 以A2780细胞为研究对象,构建DDP耐药细胞A2780-DDP;通过转录组学测序分析,找寻DDP耐药的关键因素,并以实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot实验进行验证;通过小分子抑制剂筛选,采用CCK-8细胞活力检测的方法找寻潜在拮抗剂。结果 成功构建了A2780-DDP细胞株,发现耐药后细胞增殖无差异,但细胞侵袭和迁移能力增强;通过转录组学测序分析,发现ITGB7、Akt等可能是DDP耐药的关键基因,且qPCR和Western blot验证发现两者在A2780-DDP细胞株中存在高表达。CCK-8结果显示,雷公藤内酯醇(TPL)、奥拉帕尼等在A2780-DDP细胞株中具有较好的抑制效果。结论 ITGB7/Akt通路在DDP耐药中发挥重要作用,TPL、奥拉帕尼等潜在的DDP耐药拮抗剂可为卵巢癌治疗提供新思路。     

雷公藤甲素通过抑制CCL2-CCR2信号通路调节黑色素瘤细胞的增殖、凋亡和免疫逃避

目的 探讨雷公藤甲素(TP)通过抑制趋化因子配体2(CCL2)-趋化因子C-C-基元受体2(CCR2)信号通路调节黑色素瘤(Mel)细胞的增殖、凋亡和免疫逃避。方法 将A375细胞分为对照组(未做任何处理的A375细胞)、L-TP组(10nM TP处理A375细胞)、M-TP组(20nM TP处理A375细胞)、H-TP组(40nM TP处理A375细胞)、Bindarit组(300μM CCL2-CCR2信号通路抑制剂Bindarit处理A375细胞)、H-TP+GW0742组(1.0μM CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742和40nM TP共同处理A375细胞)；CCK8法检测A375细胞增殖；流式细胞术检测A375细胞凋亡；Transwell法以及伤口愈合试验检测A375细胞侵袭和迁移；ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；Western blot检测通路蛋白以及凋亡相关蛋白表达。结果 与对照组比较，L-TP组、M-TP组、H-TP组、Bindarit组OD值、迁移率、侵袭细胞数量、Bcl-2、CCL2、CCR2、程序性细胞死...     

人 Dickkopf1 基因腺病毒载体的构建及感染黑色素瘤后 β-catenin 表达的研究

目的 构建高表达外源性Dickkopf1(DKK1)基因的重组腺病毒载体(Ad-DKK1);感染黑色素瘤细胞株后研究Wnt信号通路中主要信号分子β-catenin的表达变化. 方法 利用PCR技术扩增目的 基因DKK1;应用分子克隆技术和AdEasy系统重组腺病毒技术,把目的 基因亚克隆到穿梭质粒;经酶切和测序后,在BJAdeasy中同源重组;用PacⅠ酶切过的重组腺病毒DNA在HEK293中包装并扩增;实验分为5组:Ad-DKK1感染组、Ad-SimDKK1感染组、Ad-GFP感染组、Ad-RFP 感染组和空白细胞对照组.按照MOI值为80感染恶性黑色素瘤细胞株A375,观察细胞形态;RT-PCR法检测DKK1、β-catenin基因的表达,MTT法检测细胞活力. 结果 重组腺病毒Ad-DKK1经酶切鉴定与测序证实构建成功.感染A375细胞,感染率均大于80%,感染后细胞形态无明显改变.Ad-DKK1感染组DKK1的表达水平(1.638±0.067)与其他4组(0.718±0.086、1.424±0.125、1.414±0.089、1.423±0.088)比较差异具有统计学意义(P<0.05),其β-catenin的表达水平(0.590±0.011)与其他4组(0.895±0.012,0.749±0.024,0.754±0.012,0.759±0.014)比较差异具有显著统计学意义(P<0.01).MTT法检测细胞活力:Ad-DKK1感染组(0.370±0.014)与其他4组(0.412±0.017、0.398±0.006、0.395±0.007、0.426±0.016)比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 成功构建重组腺病毒Ad-DKK1,经其感染的恶性黑色素瘤细胞中DKK1的表达明显增强,β-catenin的表达显著降低,A375的细胞活力受到抑制.     

PI3K-Akt信号通路阻抑对结肠癌细胞LS-174T顺铂耐药逆转机制的研究

目的：观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和（或）蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1（Y-Box binding protein-1,YB-1）的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法：采用顺铂（cisplatin,DDP）药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的顺铂耐药细胞系LS-174T/DDP,药物Ly294002阻断PI3K-Akt信号通路传导后,采用Western Blot方法检测耐药肿瘤细胞磷酸化Akt表达水平,电泳迁移改变分析（EMSA）方法检测其核中转录因子YB-1活性的改变,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果：阻断PI3K-Akt信号通路后,顺铂耐药细胞株中磷酸化Akt蛋白表达水平显著下降,同时其细胞核中YB-1的活性明显降低,且细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高（P〈0.01）.结论：阻断PI3K-Akt信号通路能够提高顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,PI3K-Akt信号通路可能通过激活YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中发挥重要作用.     

雌激素受体在MCF-7乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药中的作用

目的探讨雌激素受体(ER)在MCF-7乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的作用。方法建立ERα基因沉默的MCF-7细胞株(A组)和ERβ基因沉默的MCF-7细胞株(B组),以亲本MCF-7为阴性对照,MTT法检测MCF-7乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药性,RT-PCR检测耐药相关基因:多药耐药基因1(MDR1)、肺耐药相关蛋白(LRP)、π类谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)等的表达水平,Western blotting检测耐药相关的蛋白激酶B(AKT)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)等的表达水平。结果与亲本MCF-7细胞株(C组)对比,ERα基因沉默的MCF-7细胞株(A组)细胞株增强了他莫昔芬对肿瘤细胞增殖的抑制率(P0.05),ERβ基因沉默的MCF-7细胞株(B组)细胞株降低了他莫昔芬对肿瘤细胞增殖的抑制率(t=8.23,48.36,78.57,P0.05)。与C组比较,A组耐药基因MDR1、LRP、GST-π的表达水平显著降低(P0.05),B组耐药基因MDR1、LRP、GST-π表达水平显著增加(P0.05)。与C组比较,A组能够显著抑制AKT及ERK的磷酸化,降低p-AKT及p-ERK的表达水平(P0.05),B组能够显著促进AKT及ERK的磷酸化,增加p-AKT及p-ERK的表达水平(P0.05)。结论雌激素受体在乳腺癌的耐药性中发挥重要作用,ERβ可能通过抑制相关耐药基因及蛋白表达从而降低了TAM的耐药性,ERβ可能成为肿瘤治疗的有效靶点。     

绿色荧光蛋白示踪的HSV1-tk/GCV系统重组慢病毒载体的构建及活性检测

【目的】构建绿色荧光蛋白(GFP)示踪的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶基因(HSV1-tk)的重组慢病毒载体,并检测该系统对人皮肤黑色素瘤细胞株A375的感染活性。【方法】构建含有HSV1-tk、GFP融合基因的重组慢病毒表达载体p LV-tk-GFP,并使用限制性内切酶消化进行鉴定及序列测定;用该重组质粒与辅助质粒共转染包装细胞HEK293T,获得重组活病毒并感染A375,以嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株;使用荧光显微镜观察GFP基因的表达,更昔洛韦(GCV)杀伤实验验证tk-GFP基因的活性。【结果】重组质粒p LV-tk-GFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,tk基因已连接到载体正确位置,序列无突变;包装病毒并感染细胞后,荧光显微镜下观察显示tk-GFP基因在A375中表达;筛选得到稳定表达细胞株A375/tk-GFP,GCV能显著杀伤A375/tk-GFP细胞,表明tk基因活性正常。【结论】成功构建了重组p LV-tk-GFP慢病毒载体,该载体能包装产生活病毒且在感染的人黑色素瘤细胞株A375中tk-GFP具有生物活性。     

姜黄素对子宫内膜癌孕激素抵抗的影响

目的 观察不同浓度姜黄素对子宫内膜癌孕激素耐药细胞的影响,探讨相关信号通路在影响子宫内膜癌孕激素耐药中的作用.方法 采用ETCM、GEPIA数据库分析姜黄素的靶点基因,进而筛选出与子宫内膜癌及耐药相关的基因;测定已建立的子宫内膜癌Ishikawa细胞的孕激素耐药模型(IshikawaPR细胞系)的耐药性,将耐药细胞按不...     

PIAS1通过调控Sonic hedgehog信号通路使胰腺癌细胞SW1990获得对吉西他滨的耐药性

目的:研究吉西他滨耐药性胰腺癌细胞中Sonic hedgehog(Shh)信号通路异常激活的机制?方法:通过间歇梯度倍增法筛选出对吉西他滨产生耐药性的胰腺癌细胞SW1990-GEM,荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测耐药细胞中PIAS1的表达;利用RNA干扰技术构建稳定低表达PIAS1的细胞株SW1990-GEM-shPIAS1,从增殖速度?克隆形成能力及裸鼠皮下成瘤能力等方面考察PIAS1?Shh信号通路与胰腺癌耐药性的相关性?结果:耐药株SW1990-GEM中PIAS1基因表达量明显升高;PIAS1的高度表达正向激活了Shh信号通路的活性,使得细胞获得耐药能力;人为降低PIAS1的高表达后,耐药株的耐药能力同时被减弱?结论:PIAS1是使耐药株获得耐药性的关键因子,PIAS1通过正向调控Shh信号通路使其获得耐药能力?     

P62 基因对恶性黑色素瘤细胞侵袭的 影响及机制研究

目的 探讨P62 基因在恶性黑色素瘤A375 细胞迁移、侵袭中的作用及其机制。方法 取对数生 长期的恶性黑色素瘤A375 细胞,采用干扰P62 基因表达的siRNA 及阴性对照siRNA 分别转染A375 细胞。 采用Transwell 法检测干扰组及对照组的细胞迁移、侵袭能力,Western blotting 检测干扰组及对照组Wnt/ β-catenin 信号通路的表达。结果 干扰组细胞Transwell 迁移、侵袭能力较对照组下降（P <0.05）;且干扰 组Wnt/β-catenin 及下游通路因子（P62、ZEB1、β-catenin、TCF4、c-Myc、c-Jun 及CCND1）均受抑 制（P <0.05）。结论 P62 可能通过调控Wnt/β-catenin 及下游通路促进黑色素瘤细胞的迁移、侵袭。     

含CYP2E1基因的重组腺病毒载体转染人骨髓间充质干细胞联合达卡巴嗪的抗肿瘤效应

目的 构建含人细胞色素P-450 CYP2E1(CYP2E1)基因的缺陷型重组腺病毒载体,检测其协同化疗药物的抗肿瘤效应,为基因介导酶前药治疗提供新的思路.方法 克隆人肝CYP2E1全长cDNA,制备高滴度的重组腺病毒颗粒(1.2×1012 pfu/ml).分离、培养、传代纯化及鉴定人骨髓间充质干细胞(BMSC).用Transwell小室检测BMSC向肿瘤细胞的趋化迁移.将重组腺病毒分别转染BMSC和人黑色素瘤细胞A375细胞.荧光显微镜和RT-PCR、Western印迹法分别检测转基因细胞中外源增强绿色荧光蛋白(EGFP)、CYP2E1的表达.倒置显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测CYP2E1协同酶前药达卡巴嗪(DTIC)的抗肿瘤效应(实验分A375-CYP2E1组、BMSC-CYP2E1组和BMSC-CYP2E1+A375组,并以各自空载体组作为对照;细胞接种后分别加入不同浓度DTIC).结果 成功构建重组腺病毒载体pAd5CMV-NpA-CYP2E1和pAd5CMV-NpA-EGFP.成功分离BMSC,并证明BMSC可通过聚碳酸酯膜分别向下室内的K562和A375细胞迁移.荧光显微镜检测到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR和Western印迹法均检测到目的基因在转基因细胞中高表达.倒置显微镜下见加入DTIC后BMSCCYP2E1+A375组的死亡细胞明显多于对照组.MTT法示DTIC呈浓度依赖性抑制转CYP2E1基因的细胞生长,其中BMSC-CYP2E1+A375组药物半数抑制量(IC50)值为(0.17±0.13)mmol/L,其对照组为(0.65±0.20)mmol/L,二者差异有统计学意义(P＜0.01),可选0.05 mmol/L DTIC浓度作人BMSC的相对安全浓度.Annexin V/PI法示0.05 mmol/L DTIC处理细胞48 h后BMSC-CYP2E1+A375组细胞凋亡率明显高于其对照组(26.8±2.0比8.7±1.3,P＜0.01).结论 BMSC体外具有向肿瘤细胞趋化迁移的特性.重组腺病毒载体介导的CYP2E1转染BMSC具有协同化疗前药的抗肿瘤效应.     

赤芍总苷逆转黑色素瘤细胞株多药耐药的效果及机制研究

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法采用不同剂量TPG(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)处理体外培养的黑色素瘤A375细胞,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞多药耐药基因1(MDR1)、生存素(Survivin)、拓扑异构酶Ⅱ同工酶(TOP2α)、多药耐药相关蛋白(MRP1)mRNA的表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1蛋白表达水平。结果TPG对人黑色素瘤细胞有明显的抑制作用;TPG组较对照组细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1 mRNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 TPG可抑制黑色素瘤细胞生长,通过调节多药耐药因子的表达逆转MDR。     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

黄连素靶向调控TLR4信号通路对恶性黑色素瘤生物学行为的影响及机制研究

目的 探讨黄连素对恶性黑色素瘤Toll样受体4(TLR4)信号通路的调节作用,评估其对脂多糖(LPS)诱导的恶性黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的影响,为防治恶性黑色素瘤提供新的药物(黄连素)治疗依据.方法 采用Western blotting法检测不同浓度黄连素对A375细胞TLR4、核因子κB (NF-κB)表...     

人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的耐药机制

目的 研究人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系A549-Gem的耐药机制。方法 免疫组织化学法检测人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的P-糖蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法检测多药耐药基因(mdr1)以及脱氧胞苷激酶(dCK)mRNA的转录,并采用基因芯片检测了A549和A549-Gem的基因表达谱。结果 A549-Gem中P一糖蛋白(P—gp)呈弱阳性表达,A549未见表达。。A549-Gem细胞中出现mdr1的mRNA转录增加,却未检测到dCK mRNA的产物。基因芯片检测A549和A549-Gem基因表达谱,结果表明,18．8％的基因出现差异表达,包括癌基因和抑癌基因、细胞周期相关基因、热休克蛋白基因、细胞凋亡相关基因、DNA转录因子(如锌指蛋白等)、DNA修复和重组基因、信号传导基因、蛋白翻译基因以及大量的代谢相关基因。结论 肺腺癌细胞对吉西他滨的耐药既与dCK缺乏相关,也有mdr1／P—gp高表达的参与。在肺腺癌细胞对吉西他滨产生耐药的过程中,发生了多种基因表达的变化,提示耐药的产生是多因素参与的复杂生化过程。     

CLEC4M对脑星形胶质母细胞瘤的增殖和迁移的影响

目的探讨C型凝集素蛋白家族4成员M（CLEC4M）对脑星形胶质母细胞瘤增殖和迁移的影响及其作用机制。方法慢病毒转染法构建过表达和干扰CLEC4M的脑星形胶质母细胞瘤细胞系；并用实时定量PCR法检测CLEC4M的转录水平。CCK-8细胞毒性实验和细胞划痕实验分别检测CLEC4M对细胞增殖和迁移的影响，流式细胞术分析CLEC4M对细胞周期的影响。转录组测序技术鉴定癌症信号通路上被CLEC4M调控的基因。结果过表达和干扰CLEC4M脑星形母细胞瘤细胞株被成功构建，且过表达和干扰的效果显著（P < 0.01）。CLEC4M促进脑星形胶质母细胞瘤的增殖和迁移，且CLEC4M主要影响G₀/G₁和S期来调控细胞周期进程（P < 0.05~P < 0.01）。此外，转录组测序结果发现在脑星形胶质母细胞瘤中过表达CLEC4M导致5 857个基因在转录水平上有明显变化，其中2 897个基因显著上调，2 960个基因显著下调。KEGG富集通路分析显示这些差异表达的基因显著富集于核糖体、细胞周期以及癌症信号通路中。CLEC4M与癌症信号通路中的CCNB1、CCND3、APAF1、STEAP3、RRM2B、FAS这些基因相互作用共同促进脑星形胶质母细胞瘤增殖和迁移（P < 0.05~P < 0.01）。结论CLEC4M促进脑星形胶质母细胞瘤的增殖和迁移。     

个体价值认同的社会主义核心价值观培育探析

目的 建立人结直肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株,检测其多药耐药性并初步探讨可能的耐药机制。 方法 采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP细胞株HCT-8/L-OHP。MTT法鉴定药敏性,并检测耐药细胞株的多药耐药性、生长曲线和细胞群体倍增时间。用光镜、电镜、流式细胞术等方法观察亲本细胞和耐药细胞的形态、周期及细胞凋亡。通过实时荧光定量PCR和Western-blot检测HOXB8基因和ABCC1(MRP or MRP1),ERCC1,P-gp,GST-π的mRNA及蛋白表达水平。 结果 建成了肠癌耐药细胞模型HCT-8/L-OHP,半抑制浓度(IC50)为62.33 μmol/L,耐药指数(RI)为10.78。耐药株细胞形态发生变化,代谢率降低,生物活力减弱。HCT-8/L-OHP细胞株具有耐药性,细胞增殖减慢。HCT-8/L-OHP细胞在G₂/M期的比例增多,在S期及G₀/G₁期的比例减少,相较于亲本细胞株,差别具有统计学意义(P<0.01); HCT-8/L-OHP细胞凋亡率低于HCT-8细胞。ABCC1(MRP or MRP1),ABCB1(P-gp)等耐药相关基因在耐药细胞株中高表达; HOXB8基因在HCT-8/L-OHP细胞中表达,较亲本细胞株表达明显升高,差别具有统计学意义(P<0.01)。 结论 成功构建了肠癌耐药细胞株HCT-8/L-OHP,耐药的分子机制可能是ABCC1(MRP or MRP1)及ABCB1(P-gp)等基因的表达升高。HOXB8基因过表达可能与人结直肠癌对L-OHP耐药的机制相关。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP的建立及相关基因表达水平的研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP,初步探讨其耐药机制。方法采用顺铂(DDP)浓度梯度递增诱导法,建立人卵巢癌OVCAR-3细胞株的顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP;通过细胞计数和MTT法评估细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期情况,以评价OVCAR-3/DDP的生物学特性;采用RT-PCR法检测Mfn2、EGFR及MMP2 mRNA水平。结果成功建立了OVCAR-3/DDP顺铂耐药细胞株,其对DDP耐药指数是1.92;与亲本细胞株OVCAR-3相比,OVCAR-3/DDP生长速度减慢,倍增期是OVCAR-3细胞的1.36倍(P<0.05);流式细胞术检测结果显示细胞主要停滞于G2/M期(P<0.05);与OVCAR-3细胞相比,OVCAR-3/DDP细胞中Mfn2、EGFR及MMP2 mRNA水平均明显升高(P<0.05)。结论建立的OVCAR-3/DDP细胞株对顺铂耐药性稳定;OVCAR-3/DDP细胞对顺铂耐药可能与Mfn2、EGFR、MMP2基因转录水平上调有关。