细胞因子对内皮细胞蛋白C受体的调节及参附注射液的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-（TNF-）、白介素-1（IL-1）及白介素-6（IL-6）培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内皮细胞蛋白C受体（EPCR）和磷酸化JNK（P-JNK）的表达,并探讨参附注射液对其的干预作用。方法分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹技术测定正常对照组、TNF-组、IL-1组、IL-6组、参附（TNF-）组、参附（IL-1）组及参附（IL-6）组培养的HUVECEPCRmRNA、蛋白及磷酸化JNK蛋白的表达。结果与正常对照组比较,TNF-组、IL-1组EPCRmRNA及EPCR蛋白含量均低（均〈0.05）,TNF-组、IL-1组磷酸化JNK蛋白含量均高（均〈0.01）。结论细胞因子TNF-、IL-1可以从基因、蛋白水平减少HUVEC上EPCR的表达,参附注射液可以调节细胞因子TNF-、IL-1对HUVEC上EPCR的表达的影响,其调节机制可能是通过JNKMAPK途径实现的。     

参附注射液对失血性休克大鼠血清及人脐静脉内皮细胞TM和EPCR表达的影响

目的探讨参附注射液对失血性休克大鼠血清和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中血栓调节蛋白（TM）、内皮细胞蛋白C受体（EPCR）表达的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常对照组、假休克组、失血性休克组、林格注射液治疗组（林格组）、林格注射液加参附注射液治疗组（参附组）,分别检测各组可溶性TM（sTM）、可溶性EPCR（sEPCR）水平及TM、EPCR mRNA和蛋白表达水平。结果与假休克组比较,休克组和林格组sTM、sEPCR及TM、EPCR mRNA含量均增高（P〈0.05）,TM和EPCR蛋白含量均降低（P〈0.05）。与林格组比较,参附组sTM、sEPCR含量和TM、EPCR mRNA含量均下降（P〈0.05）,TM和EPCR蛋白含量均升高（P〈0.05）。结论参附注射液可从基因、蛋白水平影响人血清和HUVEC中TM和EPCR的表达,从而阻止失血性休克的进展。     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞EPCR和NF-B表达的影响及参附注射液的干预作用

目的观察脂多糖（LPS）培养的人脐静脉内皮细胞内皮细胞蛋白C受体（EPCR）和核因子-B（NF-B）的表达,并探讨参附注射液对其的干预作用。方法分别在12、24及48h采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹技术测定正常对照组、LPS组、参附干预组培养的人脐静脉内皮细胞EPCRmRNA、蛋白及NF-B的表达。结果与正常对照组比较,LPS（24h）组EPCRmRNA、EPCR蛋白表达水平均低（均〈0.01）,LPS（48h）组EPCRmRNA、EPCR蛋白表达水平亦均低（均〈0.05）;与LPS（24h）组比较,正常对照组、参附（12h）组EPCRmRNA、EPCR蛋白表达水平均高（均〈0.01）,LPS（12h）组、参附（24、48h）组EPCRmRNA、EPCR蛋白表达水平亦高（均〈0.05）。与正常对照组比较,LPS（24h）组NF-B蛋白表达水平显著增高（〈0.01）,LPS（48h）组NF-B蛋白表达水平亦高（〈0.05）;与LPS（24h）组比较,正常对照组、参附（12、48h）组NF-B蛋白表达水平均低（均〈0.01）,LPS（12h）组、参附（24h）组NF-B蛋白表达水平亦低（均〈0.05）。结论 LPS可以从基因、蛋白水平减少人脐静脉内皮细胞上EPCR的表达,可能是通过NF-B途径实现的;参附注射液可以调节LPS对人脐静脉内皮细胞上EPCR的表达的影响,从而对脓毒症起到防治作用。     

IFN-γ、IL-32、IL-1β在慢性阻塞性肺疾病中的临床意义

目的探讨干扰素-γ、白介素-32和白细胞介素-1β在慢性阻塞性肺疾病患者血清中的表达及临床意义。方法 ELISA法检测健康对照组、COPD稳定组、AECOPD组血清中IFN-γ、IL-32和IL-1β的浓度。结果 AECOPD组的IFN-γ、IL-32和IL-1β的浓度水平显著高于健康对照组、COPD稳定组（P〈0.01）。COPD稳定组较健康对照组的IL-32、IL-1β的浓度水平均显著升高（P均〈0.05）;COPD稳定组较健康对照组的IFN-γ水平无显著性差异（P〉0.05）。结论 IFN-γ、IL-1β、IL-32反馈环可能参与了COPD患者急性加重的炎症反应。     

IFN-γ、IL-32、IL-1β在原因不明习惯性流产中的临床意义

目的探讨干扰素-γ、白介素-32和白细胞介素-1β在原因不明习惯性流产中的表达及临床意义。方法ELISA法检测URSA组、正常妊娠组和健康对照组血清中IFN-γ、IL-32和IL-1β的浓度,并进行统计学分析。结果URSA组IFN-γ、IL-32和IL-1β的血清浓度水平显著高于健康对照组和正常妊娠组（P〈0．01）;正常妊娠组较健康对照组的IFN-γ、IL-32和IL-1β血清浓度水平均显著下降（P均〈0．01）。结论IFN-γ、IL-1β、IL-32反馈环可能参与了URSA的发生,对其血清浓度的检测可作为监测URSA病人治疗效果和再次妊娠结局的指标。     

参附注射液对失血性休克大鼠肾脏血栓调节蛋白及内皮细胞蛋白C受体基因表达的影响

目的探讨参附注射液对失血性休克大鼠肾脏血栓调节蛋白（TM）及内皮细胞蛋白C受体（EPCR）基因表达的影响及可能的机制。方法成年健康SD大鼠50只,随机分为5组：正常对照组、实验对照组、失血性休克组、林格液复苏组、参附复苏组,每组10只。建立失血性休克大鼠模型。林格液组用3倍失血量的林格液复苏;参附组用含参附注射液（10ml/kg）和林格液组成的3倍失血量的液体复苏。休克后4h及复苏后3h处死大鼠,留取肾组织,用RT-PCR法检测TM及EPCR的基因表达。结果与正常对照组比较,实验对照组肾组织TM和EPCR的mRNA表达升高（P〈0.05）,休克后明显升高（P〈0.01）;林格液组和参附组复苏后肾组织TM和EPCR的mRNA表达较休克组均下降,差异有统计学意义,林格液组下降更明显（P〈001）;林格液组与参附组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论失血性休克时大鼠肾脏组织TM和EPCR表达增加,这与休克时存在内皮细胞功能损伤有关,参附注射液可以从基因水平影响大鼠肾组织TM和EPCR的mRNA表达,保护内皮细胞功能。     

黄芪对哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的影响

目的 探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶（p38 MAPK）表达的变化以及黄芪注射液对其影响。方法 应用鸡卵清蛋白（OVA）腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入刺激复制大鼠哮喘模型。随机分成3组：正常对照组、哮喘模型组和黄芪干预组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-5含量和肺组织磷酸化p38MAPK表达的变化,并观察BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化。结果哮喘模型组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达水平及BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加（P〈0．01）;黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低（P〈0．01）,肺组织病理学损伤程度明显减轻。肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关（r=0．73,0．65,P〈0．01）。结论 p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关。     

金线莲提取物对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的观察金线莲提取物对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效并探讨其作用机制。方法60只健康ICR小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和金线莲低、中、高剂量组。地塞米松组给予5.0mg/kg地塞米松溶液腹腔注射,金线莲低、中、高剂量组分别给予1.3、2.6、5.2g/kg的金线莲提取物灌胃,对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药2d。第3天对照组给予0.9%氯化钠溶液气管滴注,其余各组均给予5.0mg/kgLPS构建ALI模型。造模后各组再给药1次。12h后颈椎脱臼处死小鼠,获取肺组织及肺泡灌洗液。HE染色观察肺组织病理学变化,测定肺湿干比,ELISA法测定肺泡灌洗液中IL-6、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-12/p70、IFN-γ、TNF-α和IL-10的水平,免疫组化法检测肺组织中髓过氧化物酶（MPO）、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）、人核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和磷酸化人核因子κB抑制蛋白α（p-IκBα）的蛋白表达水平,Westernblot法检测肺组织中细胞外信号调节激酶（ERK）、p-ERK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、p38、磷酸化p38（p-p38）、腺苷酸-活化蛋白激酶α（AMPKα）、磷酸化腺苷酸-活化蛋白激酶α（p-AMPKα）、MPO蛋白相对表达量。结果与对照组相比,模型组小鼠肺组织出现炎性病理变化,肺泡灌洗液中IL-6、MCP-1、IL-12/p70、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平均显著升高（均P＜0.01）。与模型组相比,金线莲高剂量组肺组织湿干比明显降低（P＜0.01）,肺泡灌洗液中IL-6、MCP-1、IL-12/p70、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平均显著降低（均P＜0.05）,肺组织MPO、p-ERK、p-IκBα蛋白表达水平均显著降低（均P＜0.05）,p-ERK、p-JNK、p-p38、p-AMPKα、MPO蛋白相对表达量均显著降低（均P＜0.05）。结论一定剂量金线莲提取物可有效保护LPS所致ALI,其作用机制可能与调节丝裂原活化蛋白激酶信号通路、减轻炎症反应有关。     

肿瘤坏死因子-α对人脐静脉内皮细胞中组织蛋白酶K表达的影响

目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）和不同TNF-α作用时间对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）中组织蛋白酶K（Cat K）表达的影响。方法取对数生长期HUVEC进行实验。将HUVEC分为正常对照组、0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组、100 ng／ml TNF-α组,分别采用DMEM培养基、0．1 ng／ml TNF-α、1 ng／ml TNF-α、10 ng／ml TNF-α、100 ng／ml TNF-α作用24 h。另取HUVEC分为对照组、TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组、TNF-α48 h组,对照组DMEM培养基作用24 h,其他组采用10 ng／ml TNF-α作用相应时间。检测各组HUVEC 中的Cat K mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,不同TNF-α浓度组的Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组 Cat K mRNA 和 Cat K 蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）,100 ng／ml TNF-α组Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平较10 ng／ml TNF-α组下降（P＜0．05）。与对照组比较,TNF-α各作用时间组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平增高（P＜0．05）;TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）;TNF-α48 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平较TNF-α24 h组明显下降（P＜0．05）。结论在一定作用浓度及作用时间内,TNF-α可以呈剂量和时间依赖性刺激HUVEC中Cat K表达。 TNF-α可能通过促进Cat K的表达促进动脉硬化的发生。     

TNF-α、IL-1β和IL-2在评估急性胰腺炎病情中的临床意义

目的探讨急性胰腺炎（AP）患者血清的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白介素-1（IL-1β）和白介素-2（IL-2）水平的临床意义。方法应用ELISA法检测9例重症急性胰腺炎（SAP）、34例轻型急性胰腺炎（MAP）及30例正常对照组血TNF-α、IL-1β和IL-2的水平,并分析三个检测指标在急性胰腺炎病情变化中的临床意义。结果与正常对照组比较,治疗前SAP、MAP患者血TNF-α、IL-1β水平升高（P〈0.01）,IL-2水平下降（P〈0.01）,以SAP组改变更为显著（P〈0.05）;治疗后患者血TNF-α、IL-1β水平下降,IL-2水平升高。结论动态观察AP患者血清中TNF-α,IL-1β,IL-2的水平变化,对SAP的早期诊断、病情判断和预后评估具有重要的临床意义。     

高迁移率族蛋白B1在IL-1α诱导的内皮细胞衰老过程中的作用

目的：探讨炎症因子白介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老的影响,并探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)在其中的作用及机制。方法：将HUVECs随机分为对照组(不加处理)、IL-1α组(10 ng/mL IL-1α孵育)、HMGB1组(100 ng/mL HMGB1孵育)、HMGB1+IL-1α组(100 ng/mL HMGB1和10 ng/mL IL-1α共同孵育),采用细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase,SA β-gal)染色检测细胞衰老数目,采用Western 印迹检测沉默信息调节子1(silent information regulator 1,SIRT1)的蛋白表达,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测衰老相关基因p53,p21和p16的mRNA表达。结果：与对照组相比,IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞数目明显增加(P<0.05),SIRT1蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。与IL-1α组相比,HMGB1+IL-1α组SA β-gal染色阳性细胞减少,p21和p53的mRNA表达下调(均P<0.05),但p16的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论：IL-1α能诱导血管内皮细胞的衰老,其中HMGB1可能通过p53-p21 途径抑制IL-1α诱导的内皮细胞衰老过程。     

脂多糖和氧化型低密度脂蛋白协同促进人内皮细胞表达细胞间黏附分子-1

目的探讨脂多糖(LPS)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达(HU-VEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA以及p38蛋白激酶是否参与此过程。方法将生长至汇合的HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+SB203580组、ox-LDL组、HUVEC+SB203580组、LPS+ox-LDL组。采用原位杂交检测其细胞间黏附分子-1 mRNA的表达。用免疫细胞化学法检测正常对照组、脂多糖组和氧化型低密度脂蛋白组p38蛋白激酶蛋白的表达。结果培养的HUVEC能表达较低水平的ICAM-1 mRNA。原位杂交显示各实验组的ICAM-1 mRNA明显高于对照组(P<0.01)。免疫细胞化学显示,p38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为8.3%,当HUVEC暴露于LPS或ox-LDL后,细胞核阳性表达率升至38.5%或48.6%。结论LPS和ox-LDL能诱导HUVEC表达ICAM-1 mRNA,p38蛋白激酶可能参与了该过程。     

脂多糖和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达的影响

目的探讨脂多糖和同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA及其机制.方法将生长至汇合的人脐静脉内皮细胞分为对照组、脂多糖组,脂多糖+SB203580组,同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸+SB203580组,脂多糖+同型半胱氨酸组.采用斑点杂交和RT-PCR检测其MCP-1 mRNA的表达.用免疫细胞化学法检测对照组、脂多糖组和同型半胱氨酸组P38蛋白激酶蛋白的表达.结果培养的人脐静脉内皮细胞能表达较低水平的MCP-1 mRNA.斑点杂交和RT-PCR均显示各实验组的MCP-1 mRNA明显高于对照组.免疫细胞化学显示,P38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为9.6%,当人脐静脉内皮细胞暴露于脂多糖或同型半胱氨酸后,细胞核阳性表达率升至46.7%或57.7%.结论脂多糖和同型半胱氨酸能诱导人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1 mRNA,P38蛋白激酶可能参与了该过程.     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞表达白细胞介素8

目的　探讨同型半胱氨酸是否能诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达白细胞介素 8(IL 8)。方法　将培养的人脐静脉内皮细胞经相同浓度同型半胱氨酸处理后 ,采用原位杂交和流式细胞术分别检测其IL 8mRNA和蛋白的表达。结果　原位杂交显示 ,人脐静脉内皮细胞暴露于 0 .1mmol·L-1同型半胱氨酸分别孵育 4h和 8h后 ,其IL 8mRNA表达的平均吸光度值分别为 0 .0 313± 0 .0 0 5 5和 0 .0 4 2 5± 0 .0 0 6 9,均显著高于对照组 (0 .0 197± 0 .0 2 5 1,P <0 .0 1)。方差分析表明 ,各组之间均有显著性差异 (F=16 .5 5 ,P <0 .0 5 )。流式细胞术显示 ,上述实验组的IL 8荧光标记抗体阳性细胞的百分率分别为 34.7%和 38.7% ,均显著高于对照组 (2 9.5 % ,P <0 .0 1)。结论　同型半胱氨酸能诱导内皮细胞表达IL 8,与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用机制有关     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
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百草枯中毒鼠肺组织中TM-EPCRmRNA与IL-1β的表达

目的探讨IL-1β与TM、EPCR基因在百草枯中毒鼠所致急性肺损伤中的表达．方法90只SD雄性大鼠分为正常对照组（C组30只）、百草枯中毒组（PQ组60只）．PQ组一次性灌胃PQ25mg/kg染毒,C组予等体积生理盐水灌胃．观察各组大鼠在中毒后6h、12h、1d、3d、5d、7d肺组织病理改变,采用反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测鼠肺组织TM、EPCRmRNA的表达;采用ELISA方法检测血清的IL-1β表达．结果C组肺组织结构完整,无炎症细胞渗出．PQ组肺组织炎性细胞浸润明显增多,且随时间推移肺损伤加重．C组TM和EPCRmRNA有一定水平表达;与c组相比PQ组鼠肺组织TM和EPCRmRNA的表达增强,差异有统计学意义（P〈0．05）;PQ组TM和EPCRmRNA的表达在1d达高峰之后下降,第3天基本恢复到C组水平．PQ组IL-1β与TM表达呈正相关（P〈0．01）;IL-1β与EPCR表达呈正相关（P〈0．01）．结论IL-1β与TM、EPCR基因介导的炎症反应参与百草枯中毒所致肺损伤．     

急性百草桔中毒大鼠肺组织TM和EPCR基因水平表达的变化

目的观察急性百草枯（PQ）中毒大鼠肺组织中血栓调节蛋白（TM）和内皮细胞蛋白C受体（EPCR）基因表达的变化,以探讨丁M和EPCR在PQ致肺损伤中的作用。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC组,8只）和PQ染毒组（PQ组,32只,腹腔注射1％的PQ溶液20mg／kg）,分别检测肺组织中TM和EPCR mRNA的表达水平,并观察PQ组大鼠的中毒表现。结果PQ组大鼠在染毒后6h和第一天时肺组织TM和EPCR mRNA的表达水平均较NC组增强（均P〈0．05或0．01）;PQ组大鼠在染毒后第一天时上述指标水平已开始下降,至第七天时降至正常。结论急性PQ中毒大鼠肺组织TM和EPCR mRNA的表达水平明显上调,肺组织TM和EPCR mRNA的表达增强可能是PQ引起急性肺组织损伤的机制之一。     

Expression of interleukin-15 and its receptor on the surface of stimulated human umbilical vein endothelial cells

Summary： Human interleukin-15 （hIL-15） is an important cytokine to activate endothelial cells and can be regulated by many other cytokines. The aim of this study is to examine the ability of interferon-γ （IFN-γ）, and tumor necrosis factor-or （TNF-α to induce the production of human interleukin-15 （hIL-15） and IL-15 receptor （IL-15Rα by human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. The data are summarized as follows： 1. Northern blot revealed that IL-15 mRNA was up-regulated by IFN-γ and TNF-α 2. Intracellular IL-15 protein was visualized by fluorescence microscopy, whereas the expression of IL-15 on the surface of HUVECs was detected by fluorescence activated cell sorting （FACS）, and no detectable IL-15 in the medium was verified by ELISA. 3. IL-15Rα was detected on the surface of HUVECs by FACS after IFN-α and TNF-α stimulation, whereas Western blotting revealed that the elevated expression on surface IL-15Rα was not due to the increased protein expression. The conclusion demonstrated from our results is that IFN-α and TNF-α play an important role in regulating the expression of IL-15 and IL-15Rα on the surface of HUVECs.