4-羟基他莫昔芬对泌乳素腺瘤GH3细胞增殖和分泌的影响

目的探讨雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬（OHTam）对泌乳素腺瘤GH3细胞增殖和分泌泌乳素的影响。方法用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）的方法测定泌乳素腺瘤GH3细胞中雌激素受体-mRNA（ER—mRNA）的表达,并观察在去激素培养条件下以及不同浓度的OHTam和雌二醇（E2）对GH3细胞生长速度、生长抑制率、雌激素受体-mRNA（ER—mRNA）及泌乳素分泌水平的影响。结果在E2（10^-8mol／L）组细胞吸光度为0．561±0．018,抑制率为-0．06,细胞计数、生长抑制率、ER—mRNA及泌乳素分泌水平与去激素培养组差异显著（P〈0．05）;E2（10^-6mol／L）＋OHTam（10^-6mol／L）组吸光度为0．504±0．014,抑制率为0．08,细胞计数、ER—mRNA及泌乳素分泌水平与E2（10^-8mol／L）组差异显著（P〈0．05）。结论泌乳素腺瘤GH3细胞有雌激素受体表达,E2可以促进GH3细胞的增殖和泌乳素的分泌,而雌激素受体拮抗剂OHTam能够有效抑制雌激素的作用。     

雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素分泌及雌激素受体蛋白表达的影响

目的 通过检测雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素(PRL)分泌及雌激素受体蛋白表达的影响,探讨雌激素在垂体催乳素腺瘤发生、发展中的作用机制.方法 对去激素培养条件及加入外源性E2培养条件下的GH3细胞采用不同方法进行检测:应用MTT 法检测OHTam与ICI对GH3细胞增殖的影响;ELISA法检测对GH3细胞PRL分泌的影响;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot检测对GH3细胞ERα、ERβ表达的影响.结果 E2对GH3细胞增殖有显著的生长刺激作用,低浓度E2(10-12mol/L)即显著高于去激素培养组;OHTam与ICI对GH3细胞增殖有抑制作用,当给药浓度达到10 -6mol/L时,增殖指数分别为0.62和0.47,呈剂量依赖性;OHTam与ICI可抑制E2对GH3细胞的生长刺激作用;以上结果与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).E2可促进GH3细胞的PRL的分泌,随着E2浓度的增高,PRL的分泌增加;OHTam与ICI可抑制GH3细胞PRL的分泌,并且能够抑制E2的促进作用.OHTam与ICI能够诱导GH3细胞凋亡,以早期凋亡为主.GH3细胞有ERα与ERβ的表达,E2可上调ERβ的表达水平,ICI可下调ERα的表达水平,而OHTam对ERα与ERβ的表达水平无显著影响.结论 雌激素受体拮抗剂是通过抑制细胞增殖、PRL分泌及抗雌激素而发挥抑瘤作用,而ICI的作用还与下调ERα的表达有关.     

17β-雌二醇对垂体腺瘤GH3细胞增殖作用的实验研究

雌激素可能在泌乳素腺瘤的发生中起重要作用[1 ] 。本实验用不同浓度 17β-雌二醇 (E2 )作用于垂体腺瘤GH3细胞株 ,探讨E2与GH3细胞增殖的关系 ,建立E2对GH3细胞增殖活性检测平台 ,为筛选有效治疗泌乳素腺瘤的抗雌激素药物奠定基础。1　资料1 1　细胞培养[2 ] :GH3大鼠垂体腺瘤细胞株引自中国医学科学院基础所细胞中心 (由美国ATCC建株 )。E2 (Sigma)设 10 - 9～10 - 1 4mol/L 6个浓度 ,每个浓度设两个复孔 ,同时设溶媒对照孔(0 0 1%乙醇 )。在一组不同浓度的E2中同时加入 1μmol/L非选择性完全雌激素受体拮抗剂ICI182 780 (ICI…     

急性一氧化碳中毒后迟发性脑病患者血及脑脊液中乙酰胆碱水平变化及其意义

目的 探讨急性一氧化碳(CO)中毒后迟发性脑病(DEACMP)患者治疗前后血及脑脊液(CSF)中乙酰胆碱(Ach)水平变化及其意义.方法 采用Hestrin碱性羟胺比色法检测45例DEACMP患者治疗前后血和CSF中Ach水平,用日常生活能力量表(ADL)、常识-记忆-注意测验(IMCT)、长谷川痴呆量表(HDS)评价病情,并与40例其他脑病患者和38例非脑病患者进行比较.结果 DEACMP组治疗前血Ach水平[(638.02 ±126.57)×10<'-6>mol/L]明显低于非脑病组[(737.16±175.51)×10<'-6>mol/L]及其他脑病组[(765.92±203.63)×10<'-6>mol/L](均P<0.01);治疗后血Ach水平[(692.88±180.07)×10<'-6>mol/L]升高,但与治疗前相比差异无统计学意义.DEACMP组治疗前CSF Ach水平[(634.69±175.33)×10<'-6>mol/L]明显高于非脑病组[(412.93±94.48)×10<'-6>mol/L]及其他脑病组[(408.66±127.72)×10<'-6>mol/L](均P<0.01),治疗后[(414.63±108.46)×10<'-6>mol/L]显著下降(P<0.01).DEACMP组治疗前后ADL、IMCT、HDS评分差异有统计学意义(均P<0.01).结论 DEACMP患者治疗前后血和CSF Ach水平变化与病情变化基本一致,动态检测Ach水平变化可作为DEACMP病情变化和治疗效果的生物学指标之一.     

氟维司群对泌乳素瘤GH3细胞系增殖和分泌的影响

目的探讨雌激素受体拮抗剂氟维司群对泌乳素腺瘤GH3细胞增殖和分泌泌乳素的影响。方法将GH3细胞分为对照组、不同浓度的氟维司群组（0．04、1、25、625nM）和雌二醇组。观察氟维司群和雌二醇对GH3细胞活力、泌乳素水平、凋亡以及转化生长因子-β3（Transforming growth factorβ3,TGF—β3）的影响。结果与对照组相比,雌二醇组GH3细胞活力明显增加（P〈0．01）,氟维司群25nM组和625nM组细胞活力分别下降35．3％和42．4％,差异显著（P〈0．01）。与对照组和雌二醇组相比,1nM组凋亡细胞增加,差异有统计学意义（P〈0．05）,25nM组和625nM组凋亡细胞数分别占总细胞数12．9％和17．3％．差异显著（P〈0．01）。与对照组相比,氟维司群能抑制泌乳素分泌,25nM组和625nM组分别下降62.3％和81．6％,差异佩著（P〈0．01）。蛋白印迹试验证实雌激素可抑制TGF—β3表达,随着氟维司群浓度增加,TGF-β3表达量逐渐上升。结论雌二醇可促进GH3细胞增殖和泌乳素分泌,而雌激素受体拮抗剂氟维司群能够有效抑制雌激素作用,期问有TGF—β3参与,为泌乳素瘤临床治疗提供新的药物选择。     

雌激素与垂体泌乳素腺瘤

泌乳素 (PRL)瘤是人类最常见的功能性垂体腺瘤 ,女性明显多于男性 ,且临床上观察到孕期妇女的泌乳素腺瘤增大 ,变性人长期服用雌激素可以引起泌乳素腺瘤和高PRL血症。可见雌激素可能在人类泌乳素腺瘤的发生上起重要作用[1 ,2 ] 。大鼠的腺垂体为研究雌激素对泌乳素细胞的增殖、生存和肿瘤形成机制提供了极好的模型[3] 。1　雌激素对腺垂体的生理作用腺垂体含有 5种不同类型的分泌细胞 ,即生长激素 (GH)细胞、泌乳素 (PRL)细胞、促肾上腺皮质激素 (ACTH)细胞、促甲状腺素 (TSH)细胞和促性腺激素 (LH/FSH)细胞。泌乳素和生长激素细…     

慢病毒介导的shRNA沉默PTTG基因表达对人生长激素型垂体腺瘤细胞生长的影响

目的观察慢病毒介导shRNA沉默PTTG基因表达对人生长激素型垂体腺瘤细胞生长的影响。方法原代培养人生长激素型垂体腺瘤细胞,分为正常对照组、阴性对照组和实验组。实验组构建PTTG-shRNA的慢病毒表达载体并转染肿瘤细胞,阴性对照组转染空慢病毒载体,正常对照组细胞不转染。流式细胞仪分析细胞转染效率,RT-PCR和Western blot检测肿瘤细胞PTTG mRNA和蛋白的表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与正常对照组和阴性对照组比较,实验组细胞转染PTTG-shRNA慢病毒载体后,PTTG mRNA和蛋白表达显著下降(均P<0.01),细胞生长显著变慢(均P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增高(均P<0.05),凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论慢病毒介导shRNA沉默PTTG基因表达可显著抑制人生长激素型垂体腺瘤细胞的生长,为进一步研究垂体腺瘤的发病机制和肿瘤的基因治疗提供实验基础。     

垂体瘤转化基因在垂体大腺瘤中表达的研究

目的 探讨垂体瘤转化基因（PTTG）在垂体大腺瘤中的表达及意义。方法收集经手术和病理证实的垂体大腺瘤患者40例，其中无功能腺瘤22例，生长激素（GH）腺瘤8例，泌乳素（PRL）腺瘤10例。同期经手术和病理证实的垂体微腺瘤11例为对照组，其中促肾上腺皮质激素（ACTH）腺瘤8例。PRL腺瘤3例。采用免疫组化技术（LSAB法）检测垂体大腺瘤和垂体微腺瘤中PTTG的表达水平。结合临床资料及影像学分级标准，分析PTTG表达水平与垂体大腺瘤发生机制、生物学行为之间的联系。结果40例垂体大腺瘤中均发现PTTG的表达显著高于垂体微腺瘤组（P〈0．01）。在侵袭性垂体大腺瘤中，PTTG的表达显著高于非侵袭性垂体大腺瘤（P〈0．01）。PTTG的表达与大腺瘤向鞍上生长的高度和向海绵窦侵袭性生长的程度显著相关（P〈0.05）。结论PTTG表达增高与垂体大腺瘤的生长以及肿瘤的侵袭性密切相关。PTTG的表达水平及结合影像学资料可以为患者预后及术后的辅助治疗提供可靠的判断依据。     

泌乳素腺瘤ER、PTTG、PCNA的表达与肿瘤侵袭性的关系

目的 分析泌乳素(PRL)腺瘤中雌激素受体(ER)、垂体瘤转化基因(PTTG)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平与肿瘤侵袭性的关系.方法 对侵袭性PRL腺瘤24例(侵袭性组)和非侵袭性PRL腺瘤32例(非侵袭性组)采用免疫组化方法 检测腺瘤组织中ER蛋白、PTTG蛋白和PCNA蛋白表达水平;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测腺瘤组织中ER-mRNA表达水平.结果 ER蛋白在侵袭性组中23例阳性表达,积分光密度(IOD)为(4935.12±1246.56),显著低于非侵袭性组(P＜0.01);PTTG蛋白在侵袭性组中有21例阳性表达,IOD为(9874.24±2143.56),与非侵袭性差异有统计学意义(P＜0.01);PCNA蛋白在侵袭性组中有18例阳性表达,IOD为(8456.24±1534.56),与非侵袭性差异有统计学意义(P＜0.01);RT-PCR 检测显示54例腺瘤有ER-mRNA特异扩增条带,但在侵袭性表达水平降低(P＜0.05).结论 ER表达降低及PTTG、PCNA表达增高与肿瘤的侵袭性有密切关系,可作为临床判定肿瘤侵袭性的标志分子.     

17β-雌二醇对垂体腺瘤细胞增殖和电压依赖性钾电流的影响

目的　研究 17β 雌二醇 (E2 )对垂体腺瘤GH3细胞增殖和电压依赖性K+ 电流 (IK(V) )的影响 ,探讨IK(V) 与细胞增殖的关系。方法　不同浓度E2作用GH3细胞 ,应用MTT比色法测定细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期分布 ,运用全细胞膜片钳技术记录和分析E2对GH3细胞中IK(V) 的作用。结果　E2作用GH3细胞 3d后 ,0 1nmol/L、1nmol/L和 10nmol/LE2组均明显诱导细胞增殖(P <0 0 1) ,并使细胞增殖周期中G0 /G1 期细胞比例下降 ,进入S期细胞增加。E2作用GH3细胞 2 4h后 ,E2以浓度效应关系增加IK(V) 。结论　电压依赖性K+ 通道可能参与E2对GH3细胞的促增殖作用。提示可应用K+ 通道阻断性药物治疗垂体腺瘤。     

姜黄素对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因下调作用的体外研究

目的 探讨姜黄素对体外培养胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响.方法 体外培养胶质瘤C6细胞,给予不同浓度的姜黄素(10μmol/L、20 μmol/L、30μmol/L)作用24h后应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG mKNA表达情况,Western blot方法 检测PTTG蛋白水平的变化. 结果 姜黄素作用后,C6细胞PTTG mRNA表达与PTTG蛋白水平均下降,差异有统计学意义(P<0.01),且随着浓度的增加,其下降越明显. 结论 姜黄素具有下调胶质瘤C6细胞PTTG表达的作用,并呈剂量依赖性.     

重组人类肝细胞生长因子对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因的影响

目的探讨重组人类肝细胞生长因子（rhHGF）对胶质瘤细胞垂体瘤转化基因（PTTG）的影响。方法体外培养胶质瘤C6细胞,给予不同浓度的rhHGF（0、10、20、30μG/L）,半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PTTGmRNA表达,Western blot检测P1TG蛋白表达。结果不同浓度rhHGF作用后C6细胞PTFGmRNA表达与蛋白水平均增高,且随着浓度的增加,其升高越明显,各组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论rhHGF可上调PTTG的表达,且呈剂量依赖性。     

曲格列酮减少CyclinD1的表达抑制体外培养GH3细胞增殖的实验研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖激活受体-γ(PPAR-γ)高亲和力配体-噻唑烷二酮类药物曲格列酮对大鼠垂体腺瘤GH3细胞系增殖的影响.并初步探讨其作用机制. 方法 不同浓度的曲格列酮作用于GH3细胞,用MTT法检测各组GH3细胞生长情况,用流式细胞技术检测各组GH3细胞周期的变化,用半定量RT-PCR方法 检测各组GH3细胞CyclinD1基因mRNA的表达.结果 曲格列酮干预GH3细胞72 h后.以浓度效应关系抑制GH3细胞增殖,并使GH3细胞明显被阻滞于G1/S检测点,CyclinD1 mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 曲格列酮能明显抑制大鼠垂体腺瘤细胞的增殖,其分子机制可能是其与PPAR-γ结合后导致CyclinD1 mRNA表达减少,从而抑制了细胞增殖,促进肿瘤细胞死亡.     

PTTG、p16和cyclinD1的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系

目的通过对垂体腺瘤中垂体瘤转化基因(pituitarytumortransforminggene,PTTG)、周期素依赖激酶抑制因子p16(cyclin-de-pendentkinaseinhabitor,p16Ink4)mRNA和蛋白以及细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的检测和相关性比较,探讨PTTG、p16和cyclinD1的表达与垂体腺瘤细胞周期调控和侵袭性之间的关系。方法将30例垂体腺瘤手术标本分为侵袭组和非侵袭组,采用RT-PCR法检测PTTG和p16mRNA的表达,免疫组化检测PTTG、P16和cyclinD1蛋白的表达,分析侵袭组和非侵袭组PTTG、p16和cyclinD1表达水平的差异和相关性。结果在垂体腺瘤中,p16mRNA表达缺失或低下的发生率为73.3%,以p16mRNA缺失和表达分组,PTTGmRNA的表达水平在垂体腺瘤p16mRNA缺失组和表达组之间无显著性差异;侵袭组垂体腺瘤的PTTG、cyclinD1蛋白表达较非侵袭组显著性增高;且二者表达程度呈正相关;P16蛋白的表达在侵袭组垂体腺瘤显著减低,并与PTTG和cyclinD1蛋白表达程度呈负相关。结论p16mRNA在垂体腺瘤表达的缺失或低下与垂体腺瘤侵袭性无关。PTTG、p16和cyclinD1蛋白表达的差异与细胞周期调控相关,可作为垂体腺瘤侵袭性的评估指标。     

白藜芦醇通过下调CD44表达抑制胶质瘤U251细胞增殖和侵袭

目的 探讨白藜芦醇对脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子调控机制。方法 体外培养胶质瘤U251细胞,分别用浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白藜芦醇继续培养48 h,参考Lipofectamine2000TM说明书将pcDNA3.1/CD44(CD44过表达)、pcDNA3.1（过表达对照）等质粒转染胶质瘤U251细胞并培养24 h进行后续实验。利用CCK-8法检测细胞增殖,利用Transwell实验检测细胞侵袭;RT-PCR和免疫印迹法检测细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达。结果 白藜芦醇明显抑制U251细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）;所以,用150μmol/L白藜芦醇进行CD44干预实验。白藜芦醇明显抑制U251细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）。CD44过表达明显抑制白藜芦醇对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0....     

小檗碱抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白的表达：c-JUN 末端激酶信号转导途径*☆

背景：当细胞受到各种细胞因子及环境刺激时,c-JUN 末端激酶信号转导通路可以通过激活不同的受体,对细胞的发育、分化、凋亡、癌变、炎症和免疫反应起调节作用。 目的：观察中药小檗碱是否通过c-JUN 末端激酶信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白表达。 方法：取人外周静脉血分离培养单核细胞,分为5组培养：空白对照组、脂多糖组、脂多糖+小檗碱25 µmol/L组、脂多糖+小檗碱50 µmol/L组、脂多糖+小檗碱100 µmol/L组。分别在培养后30 min, 6 h, 12 h, 24 h提取细胞,采用RT-PCR测定COX-2 mRNA水平,采用Western blot测定c-JUN 末端激酶及COX-2蛋白水平。同时加入选择性c-JUN 末端激酶抑制剂,测定COX-2 mRNA及蛋白水平。 结果与结论：与空白对照组相比,脂多糖组COX-2 mRNA及蛋白表达明显增强(P < 0.01)。加入不同浓度小檗碱后COX-2 mRNA及蛋白表达明显被抑制(P < 0.05),且随着浓度增加,抑制作用更明显,给药后12 h,抑制作用最强。但c-JUN 末端激酶活性水平无明显变化(P > 0.05),脂多糖+小檗碱100 µmol/L组c-JUN 末端激酶活性水平变化明显(P < 0.05)。加入c-JUN 末端激酶抑制剂后,COX-2 mRNA及蛋白水平降低明显(P < 0.05)。证实小檗碱能抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白水平,并呈浓度依赖性,高浓度小檗碱对c-JUN 末端激酶活性蛋白表达有明显抑制作用,其可能通过c-JUN 末端激酶信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2 mRNA及蛋白表达。     

BMP-4及其拮抗剂对PRL腺瘤细胞分泌、增殖和凋亡的影响

目的研究骨形态生成蛋白4（BMP-4）及其拮抗剂Noggin对PRL腺瘤细胞分泌、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的BMP-4和Noggin对原代培养的PRL腺瘤细胞进行干预,观察不同时间的细胞形态,测量PRL的浓度。以免疫细胞化学、Western blot及RT-PCR检测BMP-4蛋白和BMP-4mRNA在PRL腺瘤细胞的表达,甲基噻唑基四唑（MTT）法计算Noggin对PRL腺瘤细胞生长的半最大抑制浓度（IC50）值,透射电镜,流式细胞仪观察检测Noggin处理后的细胞形态和周期改变,计算凋亡率。结果 5ng/ml的BMP-4培养基可促进PRL腺瘤细胞分泌,最大效应浓度为20ng/m·l MTT法测定IC50值为18μg/m·l 加入Noggin后;免疫细胞化学,Western blot显示,与对照组相比,作用后24hPRL腺瘤细胞表达BMP-4无明显差异,但作用48h和72h的表达显著降低（P〈0.05）,RT-PCR示Noggin作用24h,48h和72h后BMP-4mRNA基因扩增条带亮度逐渐减弱,电镜观察显示。Noggin作用24h、48h后PRL腺瘤细胞形态无明显改变,72h时可见典型的凋亡细胞。结论 BMP-4在一定浓度范围内呈剂量依赖性地促进PRL腺瘤细胞生长,增殖与分泌,其拮抗剂Noggin呈时间依赖性地诱导PRL腺瘤细胞的凋亡