当归拈痛汤及其拆方对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织MMP-3调节作用的实验研究

目的以免疫组织化学法检测当归拈痛汤对佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶的影响,探讨当归拈痛汤部分作用机制。方法采用弗氏完全佐剂造成AA大鼠模型,观察各组大鼠关节滑膜组织中MMP-3的蛋白表达。结果当归拈痛汤各组均能降低AA大鼠滑膜组织中MMP-3的表达。结论当归拈痛汤可以抑制MMP-3表达。     

当归拈痛汤及其拆方对类风湿性关节炎大鼠炎症因子谱的调控作用研究

目的系统性分析当归拈痛汤及其拆方干预类风湿性关节炎(RA)大鼠血清和滑膜组织炎症因子谱的改变,解析当归拈痛汤治疗RA的可能机制,探讨当归拈痛汤组方的科学性。方法 SD大鼠分为6组:空白对照组、模型组、雷公藤多苷组、当归拈痛汤全方组、当归拈痛汤祛邪组、当归拈痛汤扶正组,8只/组。处理28d后采用液相芯片系统检测各组大鼠血清及关节滑膜组织的细胞因子谱改变,包括:IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、RANTES、MIP-1α、MCP-1。结果当归拈痛汤全方组可显著提高血清IL-10水平降低TNF-α、RANTES水平;两种拆方组可以显著降低血清TNF-α、RANTES水平。当归拈痛汤全方组可显著提高滑膜组织IL-4、IL-10水平,显著降低TNF-α水平;两种拆方组可显著降低组织中TNF-α水平,但对IL-4、IL-10无明显影响。结论当归拈痛汤可以通过抑制TNF-α、增加IL-4和IL-10等细胞因子来发挥治疗类风湿性关节炎的作用。当归拈痛汤组方合理,其祛邪与扶正成分必须联合应用,才能达到最佳治疗效果。     

当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织VEGF表达的影响

目的:以免疫组织化学法检测当归拈痛汤对佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠滑膜组织血管内皮生长因子的影响,探讨当归拈痛汤部分作用机制。方法:采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,观察当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠炎症关节滑膜组织中VEGF的蛋白表达。结果:当归拈痛汤全方组、拆方2组、拆方1组均能降低佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中VEGF的表达,以全方组疗效最佳。两拆方组疗效相当,具有协同作用。结论:VEGF参与了RA病理的形成和发展,而当归拈痛汤可能通过抑制VEGF表达而阻断滑膜血管新生、血管翳形成。     

当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Fas/FasLmRNA表达的影响

目的：以原位杂交法检测当归拈痛汤对佐剂性关节炎（adjjuvantarthritis，AA）大鼠滑膜细胞凋亡的影响，探讨当归拈痛汤作用机制。方法：采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎（AA）大鼠模型，观察当归拈痛汤及其拆方对佐剂性关节炎大鼠炎症关节滑膜组织中Fas、FasL的mRNA表达。结果：当归拈痛汤全方组、拆方2组、拆方1组均能明显增加佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Fas／LmRNA的表达，以全方组疗效最佳。结论：全方组和各拆方组可以促进凋亡因子Fas／LmRNA表达，改善AA大鼠的滑膜细胞凋亡障碍。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织内外凋亡途径关键因子的影响

目的:观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织内、外凋亡途径中关键调控因子表达水平的影响,进一步探讨该方防治类风湿关节炎的作用机制.方法:将40 只SPF 级SD 大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤组(11.34 g·kg-1)和雷公藤组(9.45 mg·kg1),除正常组外,其余各组采用灭活结核分支杆菌佐...     

当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸的影响

目的:探讨当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸的影响并观察大鼠肾脏脏器指数及关节滑膜的病理改变。方法:采用腺嘌呤和乙胺丁醇造成大鼠体内高尿酸血症模型,在大鼠高尿酸前提下,采用尿酸钠(MUS)诱导大鼠急性痛风性关节炎模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、全方组、茵陈组、羌活组、西药组,每组10只。正常组、模型组均予生理盐水治疗,全方组、茵陈组、羌活组、西药组分别予当归拈痛汤、当归拈痛汤拆方1、当归拈痛汤拆方2、秋水仙碱治疗。测定各组大鼠血尿酸值及肾脏脏器指数,并观察大鼠关节滑膜的病理改变。结果:与模型组比较,西药组、茵陈组、羌活组、全方组血尿酸值、肾脏脏器指数均下降(P<0.01或P<0.05);与西药组比较,全方组、茵陈组、羌活组血尿酸值、肾腺脏器指数升高(P<0.05);茵陈组血尿酸值下降较羌活组明显(P<0.05);茵陈组、羌活组间肾脏脏器指数差异无统计学意义(P>0.05);全方组及西药组可明显减少关节滑膜中炎性细胞浸润,减轻急性痛风性关节炎大鼠关节滑膜的充血及肿胀情况;茵陈组减轻滑膜组织肿胀作用较好,羌活组炎性细胞浸润较少。结论:当归拈痛汤全方改善急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值、降低肾脏指数、减轻滑膜病理变化作用优于当归拈痛汤拆方1、当归拈痛汤拆方2。     

当归拈痛汤防治类风湿性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的 观察当归拈痛汤干预类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜病变的蛋白质改变,分析当归拈痛汤治疗RA可能的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、当归拈痛汤组3组,每组10只。双向电泳(2-DE)分离滑膜组织蛋白质,用PDQuest7.1.0软件包进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定蛋白质。选择2个差异蛋白用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot)进行验证。结果 获得8个差异表达的蛋白:Myosin regulatory light chain 2,40S ribosomal protein SA,Mimecan,Heat shock protein beta-1,Vimentin,Peroxiredoxin-2,Interleukin-1 receptor antagonist protein,Lamin A。Q-PCR和Western-blot验证Hsp27 Peroxiredoxin-2表达水平变化与2-DE结果一致。结论 当归拈痛汤可能通过以下机制抑制RA滑膜组织的炎症反应:(1)抑制组织局部的炎症反应信号通路;(2)保护细胞结构;(3)抑制氧化应激反应。     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL—1β和TNF-α的影响

目的：研究当归拈痛汤及拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响，进一步探讨该药物的作用机制。方法：建立佐剂性关节炎大鼠诱导大鼠类风湿性关节炎模型，观察当归拈痛汤及拆方对实验性大鼠足肿胀的抑制作用，检测血清相关炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的水平。结果：当归拈痛汤及各拆方组可显著抑制AA大鼠足跖肿胀及多发性关节炎，抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α、IL-1分泌，其中拆方1组作用强于拆方2组。结论：当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平，提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-β的影响

目的:研究当归拈痛汤及拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响,进一步探讨该药物的作用机制.方法:建立佐剂性关节炎大鼠诱导大鼠类风湿性关节炎模型,观察当归拈痛汤及拆方对实验性大鼠足肿胀的抑制作用,检测血清相关炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的水平.结果:当归拈痛汤及各拆方组可显著抑制从大鼠足跖肿胀及多发性关节炎,抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α、IL-1分泌,其中拆方1组作用强于拆方2组.结论:当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平.提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关.     

当归拈痛汤及拆方对类风湿性关节炎大鼠血清IL-6的影响

目的:研究当归拈痛汤及其拆方对类风湿性节炎大鼠血清IL-6的影响,进一步深入探讨该药物的作用机制。方法:建立大鼠类风湿性关节炎实验模型,检测血清中相关炎性细胞因子IL-6的水平。结果:当归拈痛汤及其各拆方组可显著抑制SD大鼠过高的炎性细胞因子IL-6分泌,其中全方组明显强于拆方组,拆方1组作用强于拆方两组。结论:当归拈痛汤及拆方在类风湿性关节炎大鼠中具有下调致炎因子IL-6的作用,提示这与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。     

当归拈痛汤对急性痛风性关节炎患者血清MMP-3的影响

目的：观察急性痛风性关节炎关节液的基质金属蛋白酶（MMP-3）的变化及当归拈痛汤对MMP-3的影响,探讨其疗效的作用机理及环节。方法：治疗组采用当归拈痛汤治疗3个月。采用ELISA法检测患者治疗前后血清MMP-3水平,并设正常对照组观察。结果：与正常对照组比较,MMP-3值明显升高,当归拈痛汤治疗后血清MMP-3水平明显下降。治疗组临床总有效率89．4％。结论：当归拈痛汤能有效降低急性痛风性关节炎血清MMP-3水平,对急性痛风件关节炎有较好的防治作用。     

刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎大鼠滑膜组织MMP-9表达的影响

目的观察刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎(RA)大鼠血清TNF-α、IL-1β、VEGF水平以及滑膜组织MMP-9蛋白表达的影响,探讨其对RA软骨保护的作用机制。方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和刺山柑组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠足跖底部注射完全弗氏佐剂复制RA模型。阳性药组和刺山柑组分别以伤湿止痛膏和刺山柑果风湿止痛贴外敷,模型组以同样方式予以空白凝胶膏剂外敷,正常组不干预;各组均连续干预21 d(3个疗程),观察大鼠AI指数评分、足爪容积和热痛阈,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β和VEGF水平,Western blot法检测滑膜组织中MMP-9蛋白表达。结果与正常组比较,造模后大鼠均出现炎症表现和热痛阈降低,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β和VEGF水平明显升高(P0.05,P0.01),MMP-9蛋白表达显著增高(P0.01)。与模型组比较,阳性药组和刺山柑组的关节炎症和热痛阈敏感均明显改善,且刺山柑果风湿止痛贴的消肿作用起效更快(7 d),并能显著降低大鼠血清VEGF水平和滑膜组织中MMP-9蛋白的表达(P0.05),而阳性药组均无明显变化(P0.05)。结论刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎大鼠的消炎止痛作用可能与降低血清TNF-α、IL-1β、VEGF水平,抑制滑膜组织MMP-9蛋白表达有关。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠血清中MMP-3表达的影响

目的 探讨当归拈痛汤高、中、低剂量对佐剂性关节炎大鼠血清中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响及其治疗作用.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模犁组、当归拈痛汤高剂量组、中剂量组和低剂量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等.在灌服当归拈痛汤18d后.用ELISA法检测MMP-3在血清中的表达.结果 各组致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数差异显著;与模型组比较,各用药组的MMP-3表达显著减少.结论 当归拈痛汤高、中剂量对大鼠佐剂性关节炎有较好的治疗作用,其降低血清MMP-3含量可能是治疗类风湿关节炎的机制之一.     

当归拈痛汤加味膏剂对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用

目的观察当归拈痛汤加味制成膏剂对佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis,AA）大鼠滑膜细胞凋亡及血清细胞因子的影响。方法建立AA大鼠模型,将wistar大鼠随机分成空白组、模型组、治疗组（甲氨蝶呤＋当归拈痛汤加味膏剂）、对照组（甲氨蝶呤＋双氯芬酸二乙胺乳）。检测各组大鼠足跖肿胀程度及疼痛指数,滑膜细胞凋亡及血清细胞因子浓度。结果治疗组能显著抑制注射足跖肿胀程度,显著提高滑膜细胞的凋亡率,并降低大鼠血清中IL-17、TNF-α的水平,与对照组效果相当。结论当归拈痛汤加味膏剂可能通过促进AA大鼠滑膜细胞的凋亡,抑制某些炎性因子的释放,达到治疗的作用。     

复方黑骨藤提取物对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9和TIMP-1的影响

目的探讨复方黑骨藤50%乙醇提取物对类风湿性关节炎的治疗作用机理。方法构建大鼠完全弗式佐剂性(AA)关节炎模型,通过免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果空白对照组、阳性对照组及复方黑骨藤提取物实验组大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9及TIMP-1的阳性表达均与模型对照组存在显著或极显著性差异。结论复方黑骨藤提取物能显著减轻佐剂性关节炎大鼠关节肿胀,抑制TNF-α及MMP-9的表达,增强TIMP-1的表达,调整MMP-9/TIMP-1的失衡,从而减轻关节炎的症状和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜增生具有显著的抑制作用。     

穴位埋线对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的 探讨穴位埋线治疗类风湿性关节炎(RA)的可能机制,为穴位埋线治疗RA在临床上的运用提供新的理论和实验依据.方法 采用弗氏完全佐剂(FCA)复制出佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,将SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、穴位埋线组.选用足三里、肾俞穴采用穴位埋线的方法进行治疗.应用免疫组织化学的方法,检测MMP-2、MMP-9在局部关节滑膜组织中的表达.结果 治疗后,与模型组比较,埋线组AA大鼠滑膜细胞MMP-2、MMP-9的平均光密度值显著增高(P＜0.05),免疫阳性细胞数显著减少(P＜0.01).结论 穴位埋线通过下调MMP-2、MMP-9的表达,减轻其参与或介导的对滑膜组织造成的损害,从而控制关节滑膜炎,阻止关节软骨和骨损害的发生.     

当归拈痛汤加味膏剂对AA大鼠抗炎镇痛作用的实验研究

目的：通过观测当归拈痛汤加味膏剂对佐剂性关节炎（AA）大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-17（IL-17）的影响,探讨当归拈痛汤加味膏剂治疗类风湿性关节炎（RA）的可能机制,为当归拈痛汤加味膏剂治疗RA在临床上的运用提供理论和实验依据。方法：采用弗氏完全佐剂（FCA）复制出大鼠AA模型,将wistar大鼠随机分成空白组、模型组、治疗组（甲氨蝶呤MTX＋当归拈痛汤加味膏剂组）、对照组（甲氨蝶呤MTX＋双氯芬酸二乙胺乳）,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等,外敷18天后取血液,离心取血清,-20℃冰箱保存备用,采用酶联免疫法（ELISA）检测TNF-α、IL-17的水平。结果：各组致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数差异有统计学意义;佐剂性关节炎大鼠模型组血清TNF-α、IL-17水平均高于正常对照组（P〈0.05）;经当归拈痛汤加味膏剂治疗后,当归拈痛汤加味膏剂组的TNF-α、IL-17水平低于模型组（P〈0.05）。结论：当归拈痛汤加味膏剂具有抑制AA大鼠TNF-α、IL-17的异常分泌的作用,从而发挥抗炎及免疫抑制作用。     

电针“足三里”“悬钟”穴对佐剂性关节炎大鼠血清基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察电针"足三里""悬钟"穴对佐剂性关节炎大鼠关节病理变化和血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨电针治疗关节炎的分子机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、非穴位组和穴位组,每组10只。在大鼠足垫部注射弗氏完全佐剂制备关节炎模型。穴位组大鼠予电针双侧"足三里""悬钟"穴,15 min/次,每2天1次,共8次。非穴位组在"足三里""悬钟"穴旁开5 mm处予以电针干预,电刺激强度与穴位组相同。采用关节炎指数评分评价各组大鼠的关节炎严重程度;HE染色法观察大鼠踝关节的病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清MMP-3和MMP-9的含量。结果:造模后各个时间点模型组大鼠的关节指数评分显著高于对照组(P<0. 01);电针治疗结束后,穴位组大鼠的关节炎指数评分显著低于模型组和非穴位组(P<0. 01)。模型组大鼠滑膜组织细胞增殖明显,炎性细胞浸润;与模型组比较,穴位组大鼠的关节滑膜组织炎性反应显著减轻,而非穴位组的关节炎性反应依然严重。模型组大鼠血清MMP-3、MMP-9的含量显著高于对照组(P<0. 01);穴位组和非穴位组血清MMP-3、MMP-9的含量低于模型组(P<0. 01);穴位组血清MMP-3、MMP-9的含量低于非穴位组(P<0. 01)。结论:电针穴位干预可以显著减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎性反应,其作用机制可能与电针降低血清MMP-3、MMP-9的含量有关。     

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响

目的:通过观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞亚群CD4的影响.评价当归拈痛汤治疗类风湿性关节炎(RA)的疗效.方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、高剂量组、中剂量组和低刑量组,采用弗氏完全佐剂造模,观察不同时间点各组大鼠的疼痛指数、肿胀指数等;在灌服当归拈痛汤18d后,用ELIASA法检测血清CD4的水平.结果:致炎后不同时间关节肿胀度、疼痛指数采用重复测量资料的方差分析(P＜0.01);与模型组比较,各用药组的CD4水平显著减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:当归拈痛汤能抑制大鼠过高的CD4水平,当归拈痛汤能提高外周血T淋巴细胞免疫功能.     

基于定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎大鼠的作用机制

目的 应用定量蛋白质组学研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎（AA）大鼠的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤低、中、高剂量组及甲氨蝶呤（MTX）组,每组10只,大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂（Mtb）进行AA的造模,人工气候箱干预16 d建立风湿热痹证模型,造模当天开始给药干预,持续干预28 d。提取大鼠滑膜组织蛋白质,使用4D非标记定量（4D-LFQ）蛋白质组学研究当归拈痛汤中剂量组与风湿热痹证模型组之间的差异蛋白情况,采用免疫组化及蛋白免疫印迹法（Western blot）验证与线粒体途径细胞凋亡相关的差异蛋白。结果 从滑膜组织中检测出4 756个蛋白质,其中4 234个蛋白质包含定量信息。当归拈痛汤与模型组差异蛋白为814个。基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示,当归拈痛汤对风湿热痹证AA大鼠的滑膜蛋白质组确有影响,且差异蛋白集中在对免疫系统的调控、急性炎症的反应和凋亡水平的调节。免疫组织化学与蛋白免疫印迹法验证发现,与模型组比较,当归拈痛汤各剂量组及MTX组滑膜组织中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）及细胞色素Ｃ（Cyt C）蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2的表达水平明显下降（P<0.05,P<0.01）,剪切型胱天蛋白酶-9（cleaved Caspase-9）/胱天蛋白酶-9（Caspase-9）显著升高（P<0.01）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）/蛋白激酶B（Akt）明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 当归拈痛汤对风湿热痹证类风湿关节炎的治疗涉及多靶点,其可能通过调节Akt/Bax/Bcl-2通路,促进线粒体途径细胞凋亡,从而发挥其对风湿热痹证类风湿关节炎的防治作用。