血清尿酸紫外分光光度参考方法的建立及性能评价

目的以尿酸酶紫外光度法为基础,建立血清中尿酸测定的参考方法并评价其性能.方法 用新鲜患者血清样本、迈瑞常规复合校准品等对方法的精密度进行评估;用有证参考物质SRM909bⅠ和Ⅱ、IFCC参考实验室质评样本Rela A/B对方法的准确度进行初步评价,同时测定新鲜人血清并与同位素稀释质谱法进行方法学对比,验证方法准确度.结果 方法对新鲜患者血清、厂家复合校准品等不同类型样本批内不精密度CVintra小于1%,总不精密度CVt小于2%;有证参考物质SRM909bⅠ/Ⅱ测定结果均在参考值范围内,对UA参考实验室能力验证样本Rela A/B测定结果与中心值结果相对偏差小于0.5%;血清样本测定结果与同位素稀释液相质谱法可比,线性回归斜率1.005,相关系数0.999,医学决定水平处引入的相对误差小于3.25%.结论 血清尿酸紫外分光光度法已基本建立,精密度和准确度符合要求,测量结果和同位素稀释液相色谱/质谱法可比,可为常规系统尿酸溯源体系的建立和性能评估提供便捷有效的方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定人血清尿酸

目的建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血清尿酸的候选参考方法。方法用[1,3]1-5N2尿酸作内标,与一定量的血清充分混匀,加入等量乙腈沉淀血清蛋白并提取尿酸,氯仿纯化上清液后用液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分离测定。优化LC/MS/MS的色谱条件,评价该法的精密度、回收率和偏倚,并计算不确定度。结果对3个浓度水平的室间质量评价用质控血清测定3批,批内、批间和总变异系数（CV）的均值（范围）分别为0.54%（0.44%-0.69%）、0.66%（0.45%-0.79%）和0.86%（0.66%-1.02%）。加样回收试验回收率范围为98.38%-102.64%。美国国家标准与技术研究所（NIST）标准物质SRM 909b-Ⅰ、Ⅱ的测定均值与靶值的偏倚分别为0.04%和0.25%。3种质控血清的相对扩展不确定度分别为1.80%、2.19%和2.04%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清尿酸的方法精密、准确,有望作为血清尿酸测定的参考方法。     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法;并应用此方法评价常规酶比色法测定血清UA的结果偏倚。方法对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法的准确性及可靠性。以反相HPLC内标法为比较方法,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法,对61份血清样本进行测定。组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估。结果反相HPLC内标法测定UA线性范围达1190μmol/L,批内变异系数(CV)<2.1%,日间CV<3.9%,绝对回收率为96.2%~101.0%,平均相对回收率为95.1%~99.4%。测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%~-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的...     

血清铁自动化分析及其在肾病综合征中的临床意义

目的评价亚铁嗪法检测血清铁,并探讨血清铁与肾病综合征(NS)的关系。方法用全自动生化分析仪采用亚铁嗪比色法检测血清铁,并检测100例NS患者的血肌酐、尿素、尿酸、尿β2-微球蛋白(β2-MG)浓度。结果不同浓度血清铁的检测结果线性相关,r2=0.9999,回收率平均值为97.14%,批内与批间重复性试验的CV值分别为0.94%、1.13%;检测灵敏度为1.25μmol/L。NS患者的血清铁降低无统计学意义(P>0.05),血清铁与尿素、尿酸、肌酐、β2-MG无相关性(P>0.05)。结论血清铁自动化分析快速、灵敏、准确、简便,符合临床需要。NS患者的血清铁浓度降低,降低程度与肾小球损伤程度无明显关系。     

罗氏电化学发光检测系统检测泌乳素的方法学评价及参考范围建立

目的按美国病理家协会（CAP）对实验室的要求,对罗氏电化学发光系统检测泌乳素（PRL）的方法进行评估和建立本实验室的参考区间。方法取中、低值患者混合血清,分别进行批内20次和连续20 d检测,统计分析批内变异系数（CV）和日间CV;用不同浓度低值血清连续检测10 d,统计分析检测功能灵敏度;将高、低值血清按一定比例混合,检测PRL,回归分析确定测量范围;将中值血清按一定比例稀释后检测PRL,分析稀释后样本和原始样本结果的符合程度,得出临床可报告范围（CRR）;取292名健康人群样本检测PRL,统计分析建立参考范围。结果中、低值批内CV分别为0.95%、1.16%,日间CV分别为2.39%、3.14%;功能灵敏度为0.065μg/L;分析测量范围（AMR）为0.105-452.88μg/L;CRR为0.065-4 528.80μg/L;本实验室的参考区间男性为3.86-22.80μg/L,女性为4.61-30.74μg/L。结论本系统检测性能符合CAP要求,参考区间上限略高于厂家提供的参数,说明厂家提供的参考区间不可直接引用。     

血清肌酐参考方法的建立及其在正确度调查中的应用

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定人血清肌酐的参考方法,并运用于临床实验室正确度调查新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法按照国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐方法,建立本实验室肌酐参考方法,利用参考物质SRM909c及RELA比对样本考察所建方法的精密度与准确度,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度调查新鲜冰冻血清肌酐靶值的确立。结果参考方法测量参考物质SRM909c相对偏移为0.69%,测量不精密度2%,初步验证了方法的准确度和精密度。正确度调查样本201411、201412、201421、201422酶法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为14.97%、-2.77%、-1.37%、-1.92%;苦味酸法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为21.39%、2.10%、6.22%、2.38%。除201411样本(为低浓度样本)外,其余样本不同常规分析系统测定的血清肌酐浓度与参考方法赋值结果的相对偏移均不超过8%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清肌酐的方法精密度、准确度均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望在上海地区临床实验室正确度计划中发挥一定作用,并建议临床实验室重视低浓度下肌酐测量的准确度和一致性。     

PETIA法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C方法学评价

目的对颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）进行方法学评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A、EP6-A、EP9-A及EP7-P文件对PETIA测定血清Cys C的精密度、可报告范围、方法学比较及干扰实验进行评价和比较。结果PETIA的低水平样本批内变异系数（CV）为1.34%、批间CV为2.19%、日间CV为1.82%、总CV为2.56%;高水平样本批内CV为1.15%、批间CV为1.40%、日间CV为2.23%、总CV为2.58%。可报告范围为0.44-4.46 mg/L。PETIA与颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）呈显著相关[决定系数（r^2）=0.997 2,P〈0.01]。血红蛋白（Hb）〈5 g/L、三酰甘油（TG）〈12 mmol/L、总胆红素（TB il）〈150μmol/L时,PETIA测定Cys C高、低水平样本的干扰值均在干扰限度值（1.96s）范围内。结论PENIA具有良好的重复性,与PENIA有良好的相关性,抗干扰能力较强。因此PETIA是测定血清Cys C较理想的方法,可应用于临床检测。     

尿素参考方法建立及在正确度验证中的应用

目的建立同位素稀释气相色谱串联质谱(isotope dilution gas chromatography tandem mass spectrometry,ID-GC/MS)测定人血清尿素(Urea)参考方法,并用于临床实验室正确度验证新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法参照国际检验医学溯源联合委员会推荐方法,建立本实验室Urea参考方法,采用美国国家标准和技术研究院标准参考物质(standard reference material,SRM)909c及国际临床化学协会提供的比对样本2014RELA-A和2014RELA-B考察所建方法的精密度与准确性,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度验证新鲜冰冻血清Urea靶值的确立。结果参考方法测量SRM909c相对偏移为-0.25%,2014RELA-A和2014RELA-B测定结果与靶值的相对偏移分别为0.00%、-0.10%,测量不精密度≤1.5%,验证了方法的准确性和不精密度。以实验室检测结果均值为靶值,允许总误差8%为标准评价,正确度调查样品201411、201412、201511、201512的不合格率分别为4.17%、1.39%、0.00%、1.59%;若以参考方法定值结果为靶值,则正确度调查样品不合格率分别为11.11%、1.39%、1.59%、3.17%。结论建立的ID-GC/MS测定血清Urea参考方法精密度、准确性均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望用于上海地区临床实验室正确度验证计划。     

血清尿酸参考测量程序的优化及其在常规系统中的应用

目的 优化血清尿酸参考测量程序(简称参考方法),为尿酸常规测量系统的建立提供参考。方法 建立美国临床化学协会(AACC)推荐的血清尿酸参考方法,并进行优化(离心40 min后再次离心15 min),采用美国国家标准和技术研究院(NIST)标准品SRM 909C和国际比对样本RELA20B、RELA21A进行正确度验证。通过高、中、低值临床剩余血清样本验证精密度。配置6个浓度梯度进行线性评估。采用优化后的参考方法和临床常规方法同时测量40份单人份血清样本,将2种方法检测结果进行回归分析。根据美国临床实验室标准化学会(CLSI)EP14-A3文件要求对常规方法使用的校准品进行互换性分析。比较优化前后尿酸检测结果。结果 尿酸参考方法优化前后SRM 909C、RELA20B、RELA21A的测定结果均在国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)等效限范围内(±3.25%),SRM 909C优化前后的测量结果均在其证书范围内[(278.57±5.95)μmol/L]。优化后的重复性明显提高,实验室内精密度虽然改善不明显,但其低值精密度有很大改善,达到实验室对精密度的要求[变异系数(CV)<2...     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的 评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法 ,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法 ;并应用此方法 评价常规酶比色法测定血清UA的结果 偏倚.方法 对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法 学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法 的准确性及可靠性.以反相HPLC内标法为比较方法 ,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法 ,对61份血清样本进行测定.组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估.结果 反相HPLC内标法测定UA线性范围达1 190 μmol/L,批内变异系数(CV)＜2.1%,日间CV＜3.9%,绝对回收率为96.2%～101.0%,平均相对回收率为95.1%～99.4%.测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果 与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%～-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的酶比色法分别与反相HPLC内标法比较,各组中2种方法 均相关良好(R2=0.996 9、0.997 2、0.995 2、0.996 7、0.997 3、0.994 7),在UA为120、470L、630 μmol/L时,预期相对偏倚范围分别为-14.6%～4.3%、-0.4%～8.0%、0.8%～8.8%,其中Beckman封闭系统测定结果 与反相HPLC内标法的一致性好,Roche封闭系统低值偏低,Dade和Vitros封闭系统高值偏高,封闭系统比开放系统结果 略好.结论 拟推荐以5-FU为内标的反相HPLC法作为血清UA测定的候选参考方法 .酶比色法在不同检测系统中所测结果 存在一些差异.     

Colorimetric determination of urinary iron, chelated with deferoxamine B, using a single reagent

A new colorimetric method for the determination of urinary iron chelated with desferrioxamine B is proposed. A single reagent (ferrozine plus thioglycolic acid 1%) is utilized. Analytical range reached about 25 mg of iron/l, while the detection limit was 0.2 p.p.m. The evaluation of imprecision and inaccuracy were within acceptable limits. Moreover, there is good correlation with the atomic absorption spectrophotometric technique. This test shows good reliability.     

Do we measure bilirubin correctly anno 2005?

We observed 30% discrepancy between liquid chemistry and dry chemistry analysers for the determination of total bilirubin in human adult serum samples, which were consistent with a 20% overestimation and 10% underestimation relative to a Jendrassik-Grof reference method, respectively. In contrast, standard reference material SRM916, which was recently recommended as being the most suitable material for attaining interlaboratory agreement, shows very good agreement on both types of analysers, as well as close to 100% recovery with respect to the reference method. We show that the liquid vs. dry bilirubin discrepancies seem to originate in the presence of either conjugated or delta-bilirubin. Our observations make it clear that good interlaboratory (or inter-analyser) agreement between bilirubin reference materials does not guarantee the same for bilirubin concentrations in human serum samples.     

血清葡萄糖参考方法的复现及与临床常用检测方法的比对研究

目的 复现血清葡萄糖测定己糖激酶的参考方法 (紫外分光光度法),对此方法 进行性能验证,并评价5种临床常用检测方法 .方法 按照美国CDC推荐的血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 的要求,建立参考方法 ;通过测定标准参考物质(SRM),以及参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)主办的参考实验窒间的国际环形比对试验(ring-trial),来验证参考方法 的准确性;按照美国临床和实验室标准委员会(CLSI)EP9-A2试验方案,己糖激酶参考方法 作为比对方法 ,5种临床常用检测方法 作为待评方法 ,同时测定40份血清样品.结果 用己糖激酶参考方法 测定SRM965a,水平2和水平3与靶值的偏倚分别为0.93%、-0.23%;参加参考实验室国际比对,血清葡萄糖检测结果 在可接受范围内;5种常用检测方法 在医学决定点(Xc=6.11 mmol/L)预期偏差的95%可信区间在实验窜定义的可接受偏差(10%)范围内,也在生物学变异的可接受偏差(6.9%)范围内.结论 本室已复现并验证了血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 ;5种常用血清葡萄糖检测方法 的测定结果 与参考方法 的测定结果 有差异,但误差在临床可接受范围,不会影响临床检测结果 .     

电感耦合等离子体质谱测定血清钠

目的 建立一种应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定血清中钠(Na)元素含量的候选参考方法.方法 以铝(Al)作为Na的内标用重量法加入到标准溶液和血清中,样品经过硝酸消解、稀释,以ICP-MS测定其23Na/27Al同位素比值,应用标准曲线法定量.结果 应用ICP-MS测定2份血清中Na的平均分析回收率分别为100.67%和100.15%,精密度分别为0.08%和0.04%.标准参考物质(SRM)909b两水平血清Na浓度的总变异系数分别为0.18%和0.22%,结果与认定值的中间值偏差分别为0.17%和0.14%,SRM956b 3水平血清Na浓度的总变异系数分别为0.41%、0.41%和0.66%,结果与认定值的中间值偏差分别为-0.09%、-1.05%和-0.48%.结论 建立了ICP-MS测定血清Na的方法,此法操作简单快速、准确、精密,有望成为血清Na测定的参考方法.     

Certification of creatinine in a human serum reference material by GC-MS and LC-MS

BACKGROUND: To meet recommendations given by the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program for improving serum creatinine measurements, NIST developed standard reference material (SRM) 967 Creatinine in Frozen Human Serum. SRM 967 is intended for use by laboratories and in vitro diagnostic equipment manufacturers for the calibration and evaluation of routine clinical methods. METHODS: The SRM was produced from 2 serum pools with different creatinine concentrations. The concentrations were certified using a higher-order isotope-dilution GC-MS method and an isotope-dilution LC-MS method. The LC-MS method is a potential higher-order reference measurement procedure. RESULTS: The GC-MS mean (CV) concentrations were 67.0 (0.9%) mumol/L for serum pool 1 and 346.1 (0.45%) mumol/L for serum pool 2. The LC-MS results were 66.1 (0.2%) mumol/L and 346.3 (0.2%) mumol/L, respectively. For serum pool 1, there was a 1.4% difference between the mean GC-MS and LC-MS measurements, and a 0.10% difference for serum pool 2. The results from the 2 methods were combined to give the certified concentrations and expanded uncertainties. CONCLUSIONS: The certified concentration (expanded uncertainty) of SRM 967 was 66.5 (1.8) mumol/L for serum pool 1 (a value close to the diagnostically important concentration of 88.4 mumol/L) and 346.2 (7.4) mumol/L for serum pool 2 (a concentration corresponding to that expected in a patient with chronic kidney disease).     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

ICP-AES法测定全血锰的方法学评价

目的对电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定血锰进行方法学评价,并应用于日常检测工作。方法全血样本经1 mol/L硝酸处理后吸取上清液,采用ICP-AES在279.544 nm处测定样本,评价其精密度、回收率、灵敏度及抗干扰能力;同时采用ICP-AES测定1 027名健康体检儿童的全血锰浓度,确定正常参考范围。结果 ICP-AES测定血锰的批内变异系数(CV)为6.2%～6.6%,批间CV为7.1%～7.6%,总CV为7.2%～7.8%,相对偏差(RSD)为1.66%～2.36%,加标回收率为95.0%～96.9%,线性方程为Y=7 035.6X+759.02,r=0.999 7;在水空白和100μg/L锰标准储备液中按1∶1分别加入25 mg/L钾、钠、氯、钙、镁标准溶液和2 mg/L铁标准溶液后未检测出锰浓度有明显变化。1 027名健康体检儿童的全血锰正常参考范围为(4.89±2.67)μg/L。结论 ICP-AES检测全血锰未发现明显系统误差,且精密度高、准确度好,可作为检测全血锰的常规方法。     

Validation of a reference method for total cholesterol measurement in human serum and assignation of reference values to proficiency testing samples

ObjectivesOur objective was to develop a reference method to measure total cholesterol in human serum, in order to assign values and assess the accuracy of field methods in French clinical laboratories.Design and methodsA reference method based on gas chromatography coupled with mass spectrometry and isotope dilution (GC–IDMS) was developed and validated. It was then used to assign reference values to five frozen serum samples from voluntary proficiency testing schemes gathering 170 French clinical laboratories. Three peer groups were defined and bias against the reference method target value was calculated.ResultsAccuracy of the reference method was assessed against NIST SRM 1951b. Bias of the reference method was less than 0.5% and imprecision was less than 1.0%. Our study indicated that field methods tended to overestimate total cholesterol concentration, mean bias being + 5.02% ± 1.02%. The most popular methods (phenolic chromogen with spectrophotometric detection, 80% of participants) exhibited the highest bias (peer group mean bias: + 5.51 ± 1.24%). Neither these methods nor those using a non-phenolic chromogen with reflectometric detection (10% of participants, peer group mean bias: + 4.20 ± 1.44%) met NCEP recommendations according to which bias should be less than 3%. Only the methods using a non phenolic chromogen with a spectrophotometric detection met these recommendations (10% of participants, peer group mean bias: + 1.39 ± 2.75%).ConclusionsAs all three peer groups provided positively biased results, the consensus mean usually used to assess the trueness of routine methods is biased as well, which results in an erroneous estimation of method bias. Therefore, this study highlights the value added by reference method target values to assess trueness of field methods and monitor performance of clinical laboratories.     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。