实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产色筛选平板法和聚合酶链反应（PCR）检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的　评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)在临床的应用价值。方法　用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的 94株金黄色葡萄球菌 ,并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂稀释法及mecA基因检测进行比较。结果　mecA基因阳性的 77株金黄色葡萄球菌 ,头孢西丁纸片扩散法均显示耐药。结论　头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致 ,是筛选和确认MRSA的一种可靠的试验方法。     

三种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的评估

目的评价PBP2a乳胶凝集法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林纸片扩散法对检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用价值。方法以PCR法扩增mecA基因为金标准,用三种方法对临床分离的105株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较。结果105株细菌中有82株mecA基因阳性,头孢西丁纸片扩散法、乳胶凝集法与PCR法结果一致,苯唑西林纸片扩散法与PCR法结果相符合均为98.8%。结论头孢西丁纸片扩散法与PBP2a乳胶凝集法一样比苯唑西林纸片扩散法能更准确检测MRSA,值得推广应用。     

三种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的评估

目的 评价PBP2a乳胶凝集法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林纸片扩散法对检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用价值.方法 以PCR法扩增mecA基因为金标准,用三种方法对临床分离的105株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较.结果 105株细菌中有82株mecA基因阳性,头孢西丁纸片扩散法、乳胶凝集法与PCR法结果一致,苯唑西林纸片扩散法与PCR法结果相符合均为98.8%.结论 头孢西丁纸片扩散法与PBP2a乳胶凝集法一样比苯唑西林纸片扩散法能更准确检测MRSA,值得推广应用.     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRsA)在临床的应用价值。方法用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的94株金黄色葡萄球菌，并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂稀释法及mecA基因检测进行比较。结果mecA基因阳性的77株金黄色葡萄球菌，头孢西丁纸片扩散法均显示耐药。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致，是筛选和确认MRSA的一种可靠的试验方法。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的可靠性和临床实用性进行评估。方法 用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的124株金黄色葡萄球菌,并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂筛选法、琼脂稀释法和胶乳凝集法、mecA基因的检测结果进行比较。结果 mecA基因阳性的90株金黄色葡萄球菌头孢西丁纸片扩散法和胶乳凝集法的敏感性分别为100％和98．9％,特异性均为100％,苯唑西林纸片扩散法、琼脂筛选法和琼脂稀释法的敏感性分别为97．8％、98．9％和97．8％,特异性均为100％。结论 头孢西丁纸片扩散法与mecA基因的检测结果高度一致,是筛选和确认MRSA的一种简便可靠的方法。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

头孢西丁纸片法筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法采用NCCLS推荐的30μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法检测MRSA,以PCR方法检测mecA基因为金标准.同时做头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC).结果用PCR方法检测145株金黄色葡萄球菌,其中mecA基因阳性83株,阴性62株.用头孢西丁纸片法筛查MRSA阳性82株,阴性63株.敏感性为98.8%,特异性为100%.而苯唑西林纸片法检测MRSA敏感性为95.2%,特异性为96.8%.结论头孢西丁纸片法筛查MRSA与mecA基因检测具有很好的一致性,该方法可在常规工作中推广使用.     

三种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的比较

[摘要]目的:对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)3种检测方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法：用检测mecA基因的PCR扩增法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁制片扩散法对临床分离的84株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较。结果:苯唑西林纸片扩散法检的敏感性、特异性分别为97.6%、95.3%,mecA基因的PCR扩增法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性、特异性均为100.0%。结论:PCR技术检测MRSA具有快速、敏感和特异的特点,是一种非常有效的鉴别方法。纸片扩散法简便易行,成本低廉, 尤其是头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性较苯唑西林纸片扩散法更高,值得在临床实验室中推广应用。 [关键词]　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；mecA基因；PCR；苯唑西林；头孢西丁     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的评价与应用

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的临床应用价值。方法经培养鉴定的70例已知细菌中22例为MRSA,48例为非MRSA,对已知细菌用实时荧光定量PCR进行检测,了解该方法的特异性和敏感性。对临床88例医护人员和患者的鼻拭子进行实时荧光定量PCR检测,了解医院内MRSA的携带情况。结果培养为MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为MRSA,敏感性为100%;培养为非MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为非MRSA,特异性为100%。实时荧光定量PCR检测MRSA的敏感性可确定为1×103cfu/mL。48例患者的鼻拭子mecA耐药基因阳性26例,金黄色葡萄球菌阳性28例,两者同时阳性(即为MRSA)20例,MRSA阳性检出率为41.6%;40例医护人员鼻拭子mecA耐药基因阳性12例,金黄色葡萄球菌阳性13例,两者同时阳性(即为MRSA)9例,MRSA阳性检出率为22.5%。结论实时荧光定量PCR可用于临床对MRSA的快速检测。     

多重实时荧光定量聚合酶链反应检测携带耐药基因及肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌

目的 建立一种快速鉴定携带耐药基因和肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc、甲氧西林耐药基因mecA和肠毒素A基因sea的序列,设计特异性的引物和不同荧光素标记的TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立了能同时检测鉴定耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌的多...     

一种PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株新方法的建立

目的建立一种PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株新方法。方法收集2016年1月至2018年12月入住本院ICU的重症患者的脓液、分泌物、血液等标本中分离培养病原菌株,共43个样本,且均为初次分离所得。以mecA基因检测呈阳性为"金标准",对样本分别进行实时荧光PCR检测和纸片扩散法检测。结果实时荧光PCR方法检测法准确度高于头孢西丁及苯唑西林纸片扩散法;所有耐甲氧西林葡萄球菌对青霉素和苯唑西林药耐药性最强,对红霉素和克林霉素次之,对万古霉素、利奈唑胺、替加环素、利福平均表现为敏感,对四环素、庆大霉素等具备一定的敏感性。结论新建立的荧光PCR检测法相比头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林纸片扩散法不仅准确度高,而且特异性好,能够准确检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性、mecA及6laTEM基因检测

目的 了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicinin-resistant Staphylococcu8all—reus，MRSA）耐药性、mecA及6laTEM基因存在状况。方法采用ATBStaph药敏试验板微量肉汤法对40株MRSA进行15种抗菌药物敏感性测定，采用聚合酶链反应（PCR）技术检测mecA和6laTEM基因。结果 所有菌株对万古霉素、替考拉宁、呋西地酸和奎奴普丁-达福普汀均敏感。对青霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素、四环素、诺氟沙星和左旋沙星均耐药，对利福平、呋喃妥因、复方新诺明和米诺四环素的耐药率分别为5．0％、2．5％、97．5％和97．5％。mecA和blaTEM基因阳性率分别100．0％和37．5％。结论 临床分离的MRSA多重耐药性十分严重；金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药均由mecA基因介导．blaTEM基因阳性率较高；治疗MRSA引起的感染。应以药敏试验结果为依据。     

Agar diffusion,agar dilution,Etest, and agar screening test in the detection of methicillin resistance in staphylococci

Methicillin resistant Staphylococcus is an important worldwide problem. Resistance is verified in strains harboring the mecA gene and laboratory methods used to detect resistance are object of constant investigation. In the present study, 99 clinical isolates of staphylococci (41 S. aureus, 33 S. epidermidis, 12 S. saprophyticus and 13 members of other species) were submitted to different phenotypic methods and conditions. Detection of the mecA gene by PCR was used as the reference method and detected 14/41, 10/33, and 10/25 isolates of S. aureus, S. epidermidis and other species, respectively. Results showed that, for S. aureus and S. epidermidis, agar diffusion, agar dilution, and the E test incubated during 24h at 35 degrees C correctly discriminated mecA positive from mecA negative isolates. For other species, all methods and conditions presented low specificity (ranging from 20% to 66.7%) and, particularly S. saprophyticus, may need molecular methods to correctly assess methicillin resistance.     

两种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的K-B法应用评价

目的评价两种分别使用MH琼脂(头孢西丁)和高盐琼脂(苯唑西林)纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用价值。方法用头孢西丁纸片在MH琼脂平板上进行纸片扩散法(K-B法)检测临床分离的89株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并与苯唑西林纸片扩散法(K-B法)、mecA基因检测进行比较。结果在MH琼脂使用头孢西丁纸片检测MRSA优于高盐琼脂苯唑西林纸片扩散法,并与PCR检测mecA基因的方法高度一致。结论头孢西丁纸片扩散法是筛选和确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)一种简单、可靠的实验方法。     

实时荧光定量-聚合酶链反应检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究

目的利用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time PCR）技术,建立食品中金黄色葡萄球菌（金葡萄）污染的快速敏感特异的检测方法。方法以金葡菌的IFemB/I基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以金葡菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mgsup2+/sup浓度,以金葡菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8 mol/L、0.6 mol/L,Mgsup2+/sup浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除金葡菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,最低检测限为44 cfu/ml。稳定性分析表明:同一样品重复检测3次IC/It值的变异系数均5％。检测样品结果显示real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。     

Evaluation of a latex agglutination assay for rapid detection of oxacillin resistant Staphylococcus aureus

Oxacillin resistance in Staphylococcus aureus is mediated by the mecA gene, resulting in production of penicillin-binding protein 2a (PBP2a), which is not present in the oxacillin susceptible strains. We evaluated the ability of a 30-min latex agglutination (LA) test (Seiken, Tokyo, Japan) to detect production of PBP2a in 315 clinical isolates of S. aureus. The LA results were compared with results of susceptibility testing using the Vitek GPS-SV test card. The latex test was positive for all 206 isolates determined to be methicillin resistant by Vitek (sensitivity 100%), the latex test was negative for 108 of 109 isolates determined to be oxacillin susceptible by Vitek, and the latex test was positive for 1 isolate determined to be susceptible by Vitek (specificity 99.1%). The discrepant isolate was negative for the mecA gene by polymerase chain reaction (PCR). The LA test is a rapid and reliable method for detecting oxacillin resistant S. aureus.     

双重PCR反向杂交快速检测及鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的　研究以非培养法为基础的快速检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法。方法　将金黄色葡萄球菌mecA基因特异性探针固定在尼龙膜上 ,双重聚合酶链反应 (PCR)同时扩增待检DNA片段 ,在扩增中用bio 11 dUTP标记扩增产物 ,然后与探针膜杂交。结果　 5 0株金黄色葡萄球菌sa4 4 2特异性基因片段检测结果为 10 0 %阳性 ,mecA基因结果阳性占 72 %。结论　该方法灵敏度高、特异性强 ,适用于临床快速检测和鉴定MRSA。