细胞粘附肽(RGDS)抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡

目的 研究细胞粘附肽(RGDS)对人胃癌细胞系BGC823(Human stomach cancer BGC823)生长增殖的影响,进而探讨RGDS诱导BGC823细胞凋亡的作用.方法 用不同浓度的RGDS处理BGC823细胞48 h后,MTT法检测RGDS对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,通过HE染色、透射电子显微镜、免疫组织化学、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片断等方法观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡.结果 RGDS能抑制BGC823细胞的生长增殖,并呈浓度依赖性;RGDS诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白Survivin的表达引发这一途径.结论 RGDS能够通过诱导BGC823细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖.     

佛波酯不同浓度和不同时问对人胃癌BGC823细胞的MMP-9表达

目的观察佛波酯（12-myristate13-acetate,PMA）不同浓度和不同时间对人体胃癌BGC823细胞MMP-9表达的影响,探讨PMA能诱导MMP-9表达增加的最佳浓度和诱导时间。方法采用mRNA（RealTimeRT-PCR）蛋白（West-blot）明胶酶活性分析（Zymography）观察不同浓度的PMA作用于人胃癌BGC823细胞不同时间后的MMP-9表达。结果PMA浓度1．5mg／L、3．0mg／L、6．Omg／L、12．Omg／L、24．Omg／L24h时对人胃癌BGC823细胞作用后MMP-9表达率分别为（19．1±1．27）％、（25．3±5．7）％、（52．6±4．8）％、（67．94-3．6）％、（91．34-2．3）％;48h时分另0为（21．14-1．9）％、（29．2±3．6）％、（56．6±4．3）％、（76．1±5．1）％、（93．34-2．9）％;72h时分另l为（23．44-3．7）％、（37．84-4．2）％、（60．3±14．5）％、（83．6±18．1）％、（95．64-1．3）％。结论PMA对MMP-9表达的影响浓度剂量和时间依赖性,最佳浓度24．0mg／L,最佳时间24h。     

新城疫病毒HN基因重组体对人胃癌细胞BGC-823凋亡作用机制研究

目的本实验研究旨在探讨含新城疫病毒HN基因的重组质粒对人胃癌细胞BGC-823凋亡的联合作用机制。方法将含有HN基因的重组质粒pIRVP3IL-18HN经脂质体介导转染人胃癌细胞BGC-823，通过MTT方法检测细胞活力；电镜下观察细胞形态；罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位（△ψ）和活性氧（ROS）水平变化；底物染色反应检测Caspase-3活性。结果重组质粒pIRVP3IL-18HN转染人胃癌细胞BGC-823后，MTT法结果显示致肿瘤细胞死亡率升高，细胞活力下降；电镜观察肿瘤细胞呈现明显凋亡状态；与阴性空白质粒对照显示，线粒体△ψ下降，ROS水平升高；Caspase-3活性被激活。结论含新城疫病毒HN基因的重组质粒可以诱导人胃癌细胞BGC-823进入特定的凋亡程序，从而导致人胃癌细胞BGC-823的凋亡。     

华蟾素联合放疗对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的:观察华蟾素对胃癌细胞BGC-823的增殖抑制及联合放疗对细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:MTT法测定华蟾素对胃癌细胞BGC-823的抑制率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率。结果:华蟾素能抑制胃癌细胞BGC-823增殖,48h的IC50值为1.73μg/mL。华蟾素与放疗联合使G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,联合组与各单独作用组相比差异显著。联合组诱导胃癌细胞株BGC-823的凋亡率显著高于各单独作用组。结论:华蟾素联合放疗可诱导BGC-823细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而抑制BGC-823细胞生长。     

薤白挥发油诱导人胃癌细胞的凋亡

目的：分析中药薤白挥发油对人胃癌细胞的诱导凋亡作用及其途径，为胃癌患者康复期的中药辅助治疗提供理论依据。 方法：实验于2005—04／08在哈尔滨医科大学微生物教研室病毒实验室完成。①胃癌细胞SGC-7901的生长抑制实验：将对数生长期的胃癌细胞以每孔5&;#215;10^4加入培养板中，每孔体积100μL，4个实验孔加入不同浓度（依次为50，100，200，400mg／L）的薤白挥发油（由薤白的干燥鳞茎提取），以二甲基亚砜作为阴性对照。采用噻唑蓝比色法检测吸光度，细胞生长抑制率=（1-实验组吸光度）／对照组吸光度&;#215;100％。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。②免疫细胞化学法检测p53，bcl-2蛋白表达：将对数生长的胃癌细胞SGC-7901以每孔2&;#215;10^5加入培养板，加入薤白挥发油（200mg／L）；在对照孔中加入等量的细胞培养液。应用免疫细胞化学法进行细胞凋亡的定性与定量指标测定。结果评估：p53免疫反应定位于细胞核，bcl-2免疫反应定位于胞质和胞膜，细胞染色呈棕褐色或棕黄色为阳性，连续观察5个高倍视野，计算阳性细胞百分率。 结果：①薤白挥发油50，100，200，400mg／L组SGC-7901细胞的生长抑制率分别为15．02％，32．33％，60．17％和93.41％；细胞凋亡率分别为10．03％，21．33％，47．65％和88．78％，均显著高于对照组（F=5．93，5．84，P（0．05）。②薤白挥发油组SGC-7901细胞中p53蛋白的阳性率显著高于对照组[（56．06&;#177;7．31）％，（10．23&;#177;5．19）％（F=5．63，P〈0．05）]。但两组bcl-2蛋白表达差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：薤白挥发油对人胃癌细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡来实现，且这种凋亡作用呈剂量依赖性，提升p53蛋白表达可能是诱发胃癌细胞凋亡的作用途径之一。     

应用Cell-IQ筛选榄香烯诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的初步研究

目的应用全自动活细胞观测分析系统(Cell-IQ)及流式细胞仪观察榄香烯诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡的影响。方法应用不同浓度的榄香烯作用于人胃癌BGC-823细胞,使用Cell-IQ筛选抑制增殖的最佳浓度,并根据最佳作用浓度,应用流式细胞仪观察分析榄香烯对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。结果榄香烯对人胃癌BGC-823细胞的抑制作用随其浓度增加而逐渐增强,以150μg/mL为最佳,之后榄香烯浓度再增高,其抑制肿瘤细胞增殖作用不再增强;150μg/mL的榄香烯作用于胃癌BGC-823细胞24 h后,主要表现为诱导早期凋亡为主,细胞凋亡率为(36.9±3.23)%,较对照组有明显差异(P<0.01)。结论 Cell-IQ能够进行细胞毒性、活性和增殖的检测和筛选;榄香烯对于人胃癌BGC-823细胞有明确抑制作用,最佳浓度为150μg/mL;榄香烯抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的主要机制可能为诱导细胞凋亡,而非细胞毒作用。     

大黄素对K562细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用

本研究观察中药大黄素（emodin）对人慢性髓系白血病K562细胞株的增殖及凋亡影响,探讨P210融合蛋白和caspase-3激活在其中的作用。采用MTT法、集落形成试验观察大黄素对K562增殖的影响;AnnexinV FITC／PI法、DNA倍体分析及DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡;Westem blot检测大黄素作用后不同时间段P210、磷酸化P210、caspase。3前体蛋白及PARP表达水平的变化。结果表明,大黄素能抑制K562细胞增殖,作用48小时的半数抑制浓度（IC50）为38．25μmol/L;Annexin V FITC／PI法、亚二倍体峰（凋亡峰）及DNA片段化检测证实,大黄素能诱导K562细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用飚62细胞后P210、磷酸化P210、caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,PARP的活性片段85kD表达增加,这些变化呈时效关系。结论：大黄素能够有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。P210磷酸化抑制,P210表达下调和caspase-3激活可能参与了该过程。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

薤白挥发油诱导人胃癌细胞的凋亡

目的:分析中药薤白挥发油对人胃癌细胞的诱导凋亡作用及其途径,为胃癌患者康复期的中药辅助治疗提供理论依据。方法:实验于2005-04/08在哈尔滨医科大学微生物教研室病毒实验室完成。①胃癌细胞SGC-7901的生长抑制实验:将对数生长期的胃癌细胞以每孔5×104加入培养板中,每孔体积100μL,4个实验孔加入不同浓度穴依次为50,100,200,400mg/L雪的薤白挥发油(由薤白的干燥鳞茎提取),以二甲基亚砜作为阴性对照。采用噻唑蓝比色法检测吸光度,细胞生长抑制率=穴1-实验组吸光度雪/对照组吸光度×100%。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。②免疫细胞化学法检测p53,bcl-2蛋白表达:将对数生长的胃癌细胞SGC-7901以每孔2×105加入培养板,加入薤白挥发油(200mg/L);在对照孔中加入等量的细胞培养液。应用免疫细胞化学法进行细胞凋亡的定性与定量指标测定。结果评估:p53免疫反应定位于细胞核,bcl-2免疫反应定位于胞质和胞膜,细胞染色呈棕褐色或棕黄色为阳性,连续观察5个高倍视野,计算阳性细胞百分率。结果:①薤白挥发油50,100,200,400mg/L组SGC-7901细胞的生长抑制率分别为15.02%,32.33%,60.17%和93.41%;细胞凋亡率分别为10.03%,21.33%,47.65%和88.78%,均显著高于对照组(F=5.93,5.84,P<0.05)。②薤白挥发油组SGC-7901细胞中p53蛋白的阳性率显著高于对照组眼(56.06±7.31)%,(10.23±5.19)%(F=5.63,P<0.05)演。但两组bcl-2蛋白表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论:薤白挥发油对人胃癌细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡来实现,且这种凋亡作用呈剂量依赖性,提升p53蛋白表达可能是诱发胃癌细胞凋亡的作用途径之一。     

丙戊酸钠抑制胃癌细胞系-BGC823增殖的实验研究

目的探讨丙戊酸钠抑制胃癌细胞系BGC-823增殖作用。方法将0.75mmol/L~4.0mmol/L丙戊酸钠作用于BGC-823细胞48小时,观察细胞数量、形态的变化并用MTT法分析细胞生长抑制、AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率的改变和PI法观察细胞周期的变化。结果1.丙戊酸钠干预后细胞数量明显减少、形态不规则、细胞核固缩、胞浆减少;2.与对照组比较,丙戊酸钠可造成BGC-823细胞生长抑制率(F=417.11,p=0.000)、细胞凋亡率(F=385.24,p=0.000);以及增殖周期G1期比例(F=385,p=0.000)明显升高。结论丙戊酸钠可明显抑制HepG2的生长,诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用,在胃癌治疗方面具有重要理论价值和实践意义。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

脂肪酸合成酶抑制剂抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的 明确脂肪酸合成酶（FAS）在人多发性骨髓瘤（MM）细胞中的高表达；探讨FAS抑制剂抑制MM细胞增殖及诱导其凋亡的机制。方法 通过RT-PCR方法检测FAS在MM细胞系U266、RPMI8226细胞中的表达；以MM细胞系U266细胞为模型，MTT法观察FAS抑制剂浅蓝菌素（cerulenin）对U266细胞增殖抑制率；以流式细胞术检测经cerulenin处理后U266细胞Annexin V的表达及细胞周期变化。结果 MM细胞系U266、RPMI8226细胞均有FAS mRNA的高表达，而健康献血员外周血单个核细胞（PBMNC）中不表达FAS mRNA；cerulenin对U266细胞增殖有显著的抑制作用，并呈剂量-效应相关；20μg／ml的cerulenin作用于U266细胞12h，细胞早期凋亡率为56．9％，24h细胞早期凋亡率为69．3％，而对照组分别为4．3％和1．8％（P＜0．01）；细胞周期DNA分析发现，20μg／mlcerulenin作用于U266细胞12h，S期细胞从对照组的9．7％上升至20．3％，作用24h，S期细胞上升为29．8％。结论 FAS在MM细胞中高表达；FAS抑制剂可抑制U266细胞的增殖；DNA合成阻止在S期，其抑制增殖的作用可能是通过促进U266细胞早期凋亡；FAS可能是一个潜在的抗MM的靶位。     

幽门螺杆菌硫氧还蛋白1表达量对胃癌BCG-823细胞生长的影响

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)不同表达量硫氧还蛋白1(Trx1)对人胃癌细胞(BCG-823)生长的作用.方法 将高表达Trx1及低表达Trx1 Hp分别以1∶50,1∶100,1∶200细胞细菌浓度比进行细菌细胞共培养,设不加菌空白对照组,分别于24 h及48 h后分别用倒置显微镜及MTT法观察细胞形态及细胞存活率,并收集1∶100浓度组细胞用流式细胞仪检测细胞周期.结果 从镜下观察及测细胞OD值均发现Hp可使BCG-823细胞增生活跃,并呈浓度及时间依赖性,高Trx1组细胞存活率明显高于对应时间及浓度的低Trx1组,两组比较有统计学差异;用流式细胞仪检测细胞周期结果表明高Trx1组BCG-823细胞进入S期的比例于24 h及48 h均明显高于低Trx1细菌组,且无亚二倍体出现,结果有统计学差异.结论 高表达Trx1的Hp对胃癌细胞有促增殖作用,Trx1与Hp的致癌机制可能有关.     

紫草素对人绒癌耐药细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的 研究紫草素对体外培养的人绒癌耐药细胞株(JAR/MTX)抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经不同浓度的紫草素分别作用24 h、48 h、72 h后,应用cck-8试剂盒检测其细胞毒性,应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,应用荧光显微镜观察凋亡现象.结果 当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,其48h抑制率从46.48±12.0%升高到92.05±9.2%,0.75μg/ml紫草素分别作用24 h、48 h、72 h,其抑制率分别为43.94±10.1%、68.56±10.2%、84.97 ±18.63%,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01),可见随着紫草素剂量的增加和作用时间的延长,对绒癌耐药细胞生长的抑制率也明显增加.当紫草素浓度从0.1875 μg/ml增加到3μg/ml时,与细胞作用48h后,凋亡率由12.13±5.67%升高到30.08±7.85%(P＜0.05或P＜0.01),随着药物浓度增加凋亡率亦增加,并可见典型的凋亡细胞核形态学变化.细胞周期分布也呈浓度依赖性改变,一方面增高C,0/G1期细胞比例(P＜0.05),另一方面降低S期和G2/M期细胞比例(P＜0.05).结论 紫草素对JAR/MTX具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,值得进一步深入研究与探讨.     

长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的增殖抑制和凋亡促进作用及其机制

目的 观察长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的抑制及凋亡促进作用,探讨其作用的分子机制.方法 以0、5、10、20、50、100 μg·L-1不同浓度长春新碱处理的MG63细胞,分别经CCK-8及Hoechest 33342检测细胞增殖和细胞凋亡水平,用实时定量RT-PCR分析mRNA表达水平.结果 长春新碱可抑制MG63细胞增殖;长春新碱可以促进细胞凋亡;长春新碱可以下调c-myc及上调caspase9基因表达（P〈0.05）.结论 长春新碱从较低浓度起即有抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用,其作用机制是通过下调c-myc及上调caspase9的基因表达实现的.     

藤蟾方抑制人胃癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的探讨中药复方藤蟾方在体外对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及凋亡诱导作用.方法用MTT法及流式细胞仪分析法分析藤蟾方对人胃癌细胞SGC-7901细胞的抑制作用及诱导凋亡情况.结果 (1)藤蟾方在3.5μg/ml时显示对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用,并随浓度升高而增强,具有显著性差异(P＜0 01);(2)通过散点图可看出,随浓度的增加右下象限和右上象限出现高染现象,呈剂量依赖性.其中与空白组比较,低、中、高三剂量的凋亡率均有显著性差异(P＜0.01),中、高剂量的坏死率亦有差异(P＜0.01或P＜0.05).结论提示藤蟾方在体外能抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导细胞凋亡,这可能为藤蟾方抑制其生长的机理之一.