放线菌素D诱导卵巢癌细胞凋亡中热休克蛋白(HSP)的作用的研究

目的探讨热休克蛋白(heat shock protein,HSP)在放线菌素D(actinomycin D,Act-D)诱导卵巢癌细胞A2780凋亡中的作用,为进一步探讨热休克蛋白抗凋亡机制及卵巢癌生物治疗提供实验依据。方法体外培养的卵巢癌细胞A2780于RPMI1640,10%(v/v)胎牛血清,5%(v/v)CO_2孵育,取指数生长期细胞1×10~5/ml接种反应板24h,分为非热休克组(NHS)和热休克组(HS),两组分别由不同浓度(5,10,20μg/ml)Act-D诱导,作用4h。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和~3H-TdR掺入试验检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)及DNA合成情况。结果HS组比NHS组凋亡指数明显下降(P<0.01);cpm值明显升高(P<0.01),呈现剂量依赖效应。结论热休克反应对卵巢癌细胞A2780经Act-D诱导凋亡具有抑制作用,此作用与Act-D呈剂量依赖效应。     

热休克蛋白的抗凋亡作用

热休克蛋白（ＨＳＰｓ）,尤其是ＨＳＰ７０、ＨＳＰ２７对热休克、氧化应激、电离射线、ＴＮＦ－α等引起的细胞凋亡有保护任用,其作用机制与ＨＳＰｓ抑制应激激活蛋白激酶,抑制凋亡基因Ｐ５３和Ｂａｘ的表达,抵制凋亡信号转导中的蛋白水解酶和抑制氧自由基生成,以及对细胞线粒体功能的保护作用有关。     

热休克蛋白的抗凋亡作用

热休克蛋白（ＨＳＰｓ）,尤其是ＨＳＰ７０、ＨＳＰ２７对热休克、氧化应激、电离射线、ＴＮＦ－α等引起的细胞凋亡有保护作用,其作用机制与ＨＳＰｓ抑制应激激活蛋白激酶,抑制凋亡基因Ｐ５３和Ｂａｘ的表达,抑制凋亡信号转导中的蛋白水解酶和抑制氧自由基生成,以及对细胞线粒体功能的保护作用有关。     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG诱导K562细胞凋亡作用的研究

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG诱导人白血病细胞系K562细胞凋亡及其分子机制。方法用17-AAG处理K562细胞,用四氮唑盐还原法(MTT法)检测17-AAG对K562细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系,瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态学变化,Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞核的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot检测相关蛋白分子的变化。结果17-AAG呈时间和剂量依赖性抑制K562细胞,5μmol／L 17-AAG作用24 h,K562细胞增殖抑制率接近50％,阻断细胞周期于G0／G1期。5μmol／L 17-AAG作用12 h G0／G1期细胞占47．22％;24 h占71．62％,并出现明显的凋亡峰。17-AAG可有效清除Hsp90底物蛋白,阻断Raf／Mek- Erk及PI3K／Akt信号通路。结论17-AAG通过抑制K562细胞中Hsp90的分子伴侣功能,清除其底物蛋白Bcr-Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等,导致细胞内与增殖和抗凋亡相关的Raf/Mek-Erk、PI3K／Akt信号通路被阻断,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

热休克蛋白在白血病细胞凋亡和耐药中的分子机制

热休克蛋白（hsps)是一组普遍存在于各类细胞的具同源谱功能的高度保守的蛋白。hsps的活化和异常表达涉及多个凋亡信号传导通路和凋亡调节因子，其与化疗耐药及肿瘤的发生，发展密切有关，本文着重讨论了hsp27,hsp70,hsp90等在白血病细胞耐药和抗凋亡中的作用以及可能的分子机制。     

细胞凋亡的线粒体信号通路在大鼠缺血延迟预适应抗心肌细胞凋亡机制中的作用

目的：以细胞凋亡的线粒体途径为切入点,探讨心肌缺血延迟预适应抑制心缺血再灌注（MI/R）后细胞凋亡的可能机制.方法：SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、延迟缺血预处理组.缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1h,再灌1h.延迟缺血预处理组采用缺血5min,再灌5min,反复循环3次,24h后缺血1h,再灌1h.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,进行细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的Western blotting分析及Caspase-3活性测定,并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌HSP70的表达.结果：与缺血再灌注组相比较,心肌缺血预处理24h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率,抑制CytC和AIF自线粒体向胞浆的释放及caspase-3的活化,上调HSP70蛋白表达.结论：心肌缺血延迟预适应可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制与其诱导HSP70的生成,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关.     

热休克蛋白在白血病细胞凋亡和耐药中的分子机制

热休克蛋白(hsps)是一组普遍存在于各类细胞的具同源谱功能的高度保守的蛋白.hsps的活化和异常表达涉及多个凋亡信号传导通路和凋亡调节因子,其与化疗耐药及肿瘤的发生、发展密切有关.本文着重讨论了hsp27、hsp70、hsp90等在白血病细胞耐药和抗凋亡中的作用以及可能的分子机制.     

低强度运动对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的：探讨不同强度的运动对2型糖尿病大鼠热休克蛋白72（HSP72）基因的表达和心肌凋亡的影响。方法：雄性SD大鼠36只,分成糖尿病组（DFM）和对照组（CFM）。糖尿病造模成功后随机分成糖尿病非运动组（DRN）,糖尿病高强度运动组（DRH）,糖尿病低强度运动组（DRL）;对照组分成正常大鼠非运动组（CRN）,正常大鼠高强度运动组（CRH）,正常大鼠低强度运动组（CRL）。采用活动平板耐力运动8周,检测大鼠心肌HSP72基因表达以及TUNEL染色观察。结果：糖尿病大鼠心肌HSP72基因表达均显著低于正常大鼠,其中CRL组和DRL组显著高于CRN组和DRN组,而CRH组和DRH组显著低于CRN组和DRN组。DRN组和DRH组心肌凋亡指数（AI）显著高于CRN组和CRL组,DRL组心肌AI显著高于CRL组。Pearson相关分析显示,在DRN组与DRL组HSP72 mRNA与心肌AI呈显著负相关（P<0.05）,而在DRN组与DRH组HSP72 mRNA与心肌AI无相关性。结论：低强度运动可以增加HSP72基因的表达,抑制糖尿病大鼠的心肌凋亡率,对糖尿病心肌病变具有保护作用。     

在卵巢癌细胞凋亡中热休克的作用

[目的]探讨热休克对卵巢癌细胞A2780经TNF-α诱导凋亡的影响，为卵巢癌细胞凋亡与热体克相关关系提供实验依据。[方法]采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数(AI),^3 H-TdR掺入试验检测DNA合成情况。[结果]热休克组凋亡指数比非热休克组的凋亡指数明显下降，差异有显著性意义，且呈剂量依赖效应，cpm值热休克组细胞比非热休克组明显增高，抑制率下降，也呈剂量依赖效应。[结论]热休克对卵巢癌细胞。A2780凋亡具有抑制作用，且呈剂量依赖效应。     

热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素对人肝癌BEL7404细胞株凋亡作用的研究

目的:研究热休克蛋白90 (heat shock protein 90,HSP90)抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人肝癌细胞株BEL7404的凋亡作用,并探讨其用于肝癌治疗的可行性.方法:体外培养BEL7404细胞株,以GA作用处理;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对BEL7404细胞株的增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色法及Annexin V-EGFP/PI双染法、透射电镜等方法研究GA对BEL7404细胞株的凋亡作用;流式细胞仪检测BEL7404细胞株的细胞周期变化.结果:GA对BEL7404细胞株具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA各剂量组作用24 h凋亡率均明显高于阴性对照组(6.31±0.82)%;流式细胞仪检测各剂量组GA均可使BEL7404细胞株细胞周期阻滞于G0/G1期.结论:抑制HSP90的功能可引起肝癌细胞增殖抑制和凋亡,HSP90有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

红景天甙对体外培养腺样囊性癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究红景天甙诱发体外培养腺样囊腺癌细胞（ACC）发生凋亡的作用及机制。方法 用免疫组化的方法检测红景天甙作用后ACC细胞中Caspase3及Caspase8蛋白表达情况。结果 给予红景天甙治疗组的ACC细胞的Caspase3及Caspase8蛋白表达均呈阳性表达，对照组均为阴性表达。结论 红景天甙可以诱发ACC细胞凋亡，可作为临床腮腺癌治疗的药物之一。     

Mitochondria-mediated apoptosis in human breast carcinoma MCF-7 cells induced by a novel selenadiazole derivative.

The role of organoselenium compounds as potent cancer chemopreventive and chemotherapeutic agents has been supported by epidemiological, preclinical and clinical studies. In this study, a novel selenadiazole derivative, 1,2,5-selenadiazolo-[3,4-d]pyrimidine-5,7-(4H,6H)-dione (SPO), is identified as a potent antiproliferative agent against human breast adrenocarcinoma MCF-7 cells, human hepatoma HepG2 cells and human melanoma A375 cells. Induction of apoptosis in MCF-7 and A375 cells by SPO was evidenced by accumulation of sub-G1 cell population, DNA fragmentation and nuclear condensation. Further investigation on intracellular mechanisms found that SPO treatments induced activation of caspase-8 and caspase-9, overproduction of reactive oxygen species, and depletion of mitochondrial membrane potential (Delta Psi m) through regulating the expression of pro-survival and pro-apoptotic Bcl-2 family members. Our findings suggest that SPO is a promising novel organoselenium compound with potential in the treatment of human cancers.     

顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制的研究

目的 研究顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制.方法 采用酶联免疫吸附法M30-ApoptosisTM-ELISA-kits、流式细胞仪测定不同浓度顺铂作用不同时间HCT116细胞的凋亡情况;West-ern-Blotting测定p53、p21、Bcl-2蛋白水平的表达.结果 顺铂可抑制直肠癌HCT116细胞生长,并呈时效(F=1129.383,P=0.000)和量效(F=125.267,P=0.000)关系;2.5、5.0、10.0、15.0 μmol/L顺铂分别作用直肠癌HCT116细胞0、12、24、48、72 h,通过亚G1峰检测其凋亡率,顺铂作用24、48、72 h细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(χ2值分别为5.669、14.110、12.221,P值分别为0.010、0.003、0.000),不同时间顺铂抑制HCT116细胞生长率的差异有统计学意义(χ2=14.008,P=0.003);不同时间顺铂诱导HCT116细胞释放CK18-Asp237-Asp396含量的比较,不同药物浓度结果差异有统计学意义(F=48.667,P=0.000),同时间结果差异有统计学意义(F=1194.394,P=0.000),Western-Blotting结果提示顺铂作用直肠癌HCT116细胞后p53、p21蛋白水平表达随着12、24、48、72 h与0 h比较逐步升高,p53蛋白(t值分别为9.873、-2.906、7.229、2.776,P值分别为0.000、0.007、0.000、0.011);p21蛋白(t值分别为-10.692、-8.867、-15.063、-16.281,P值分别为0.000、0.001、0.000、0.000);Bcl-2蛋白的表达无变化(t值分别为1.429、2.011、2.247、2.001,P值分别为0.178、0.069、0.053、0.062).结论 顺铂通过恢复pS3的功能,诱导肿瘤细胞凋亡,起到抑制肿瘤生长的作用.     

细胞周期蛋白依赖激酶对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（cyclin dependent kinase,CDK）对原发性肝癌（肝癌）细胞增殖及凋亡的影响。方法：对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721分别予浓度为0μmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／L、16μmol／L、32μmol／LCDK抑制剂rosco-vitine干预72h,分别通过倒置显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪、逆转录PCR法观察SMMC-7721细胞的生长、增殖,细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、半胱氨酸蛋白酶-3和BCL-2mRNA的表达。结果：予roscovitine干预72h后,光镜下可见随着roscovitine浓度的增加,部分细胞核固缩、胞体折光性减弱、胞浆内可见有颗粒和核碎片形成,其中以32μmol／L组的改变最为明显。四甲基偶氮唑蓝法结果显示,不同浓度的roscovitine对细胞生长均有一定的抑制作用,roscovitine对细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现,经roscovitine干预后肝癌细胞G0期、G1期及凋亡细胞的比例增加。逆转录PCR发现,随着roscovitine浓度的增加．CDK2mRNA及凋亡相关基因BCL-2mRNA水平降低,半胱氨酸蛋白酶-3mRNA表达升高。结论：CDK表达降低可抑制增殖期肝癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,凋亡机制可能与BCL-2、半胱氨酸蛋白酶．3的表达改变有关。CDK在肝癌细胞增殖及凋亡中起着重要作用。     

肿瘤细胞裂解物致敏树突状细胞对小鼠乳腺癌作用的研究

目的观察肿瘤细胞裂解物致敏树突状细胞 (DC)对小鼠乳腺癌的治疗作用。方法无菌取小鼠骨髓细胞 ,在体外培养条件下经细胞因子作用诱导为树突状细胞 (DC) ,用EMT6肿瘤抗原裂解物冲击致敏DC细胞 ,检测DC体外刺激活化淋巴细胞作用 ,以及经DC免疫产生的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性 ,观察致敏DC免疫对小鼠乳腺癌模型的治疗作用。结果镜下可见抗原致敏后的DC可吸引淋巴细胞聚集成团 ;致敏DC诱导生成的特异性CTL在体外对肿瘤细胞可产生杀伤作用 (与PBS对照组比较 ,P =0 .0 2 7) ,而未成熟DC细胞组和肿瘤抗原组与PBS对照组间无显著性差异 (P =0 .17,P =0 .0 72 ) ;经致敏DC注射免疫后 ,小鼠负荷肿瘤得到抑制 (与PBS对照组比较 ,P =0 .0 3 5 ) ,而单纯肿瘤抗原及未致敏DC免疫组与PBS对照组间无显著性差异 (P =0 .2 6,P =0 .11)。结论肿瘤抗原裂解物致敏的DC可有效递呈抗原并诱导淋巴细胞杀伤肿瘤细胞。     

三丁酸甘油酯对早幼粒细胞白血病细胞株的诱导分化及促凋亡作 …

目的 研究三丁酸甘油酯（ＴＢ）与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）不同浓度组合对ＮＢ４及ＭＲ２细胞的诱导分化作用,并观察ＴＢ对ＮＢ４,ＭＲ２细胞是否具有促凋亡作用。方法 通过硝基四唑氮蓝（ＮＢＴ）还原率及细胞表面抗原ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ３３表达观察细胞分化程度;通过细胞形态、ＤＮＡ片段化电泳,流式细胞术（ＦＣＭ）ＤＮＡ含量分析及凋亡细胞原位标记（ＴＵＮＥＬ）试剂盒检测细胞凋亡;用逆转录－聚合酶链反应（     

甘氨脱氧胆酸对人肝癌细胞增殖抑制与诱导凋亡的实验研究

目的探讨甘氨脱氧胆酸（GDCA）对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响以及细胞凋亡作用。方法采用96孔细胞培养板体外培养人肝癌细胞株SMMC7721,在24、48、96h后加入GDCA,并进行四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,计算肝癌细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的影响。结果GDCA对肝癌细胞SMMC7721有增殖抑制作用,GDCA作用细胞72h后,200、400、800／μmo／L GDCA抑制率分别为18．18％、29．94％和88．54％;细胞周期分析显示,G1期细胞比例与对照组相比明显升高,GDCA200、400／μmol／L处理组P〈0．05,S期有不同程度的下降,GDCA400／μmol／L处理组P〈0．01。Annexin V-FITC检测结果显示GDCA 200、400μmol／L处理组48和72h后细胞凋亡比例比对照组明显增加,差异具有统计学意义。结论GDCA对人肝癌细胞有增殖抑制作用,并能诱导SMMC7721细胞凋亡。     

烟酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡

目的探讨烟酸对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法分别使用不同浓度烟酸(0.25 mM,0.5 mM或1.0 mM)预处理HUVECs不同时间(1 h、3 h、6 h、12 h)后,使用血管紧张素Ⅱ(1μM)诱导HUVECs凋亡。终端转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL法)检测内皮细胞的凋亡指数;H2DCF-DA荧光标记法测定细胞内氧自由基(ROS)的生成。结果预处理一定时间后,烟酸能抑制血管紧张素II诱导的HUVECs的凋亡,而且这种抑制呈浓度依赖性。HUVECs在使用1 mM烟酸预处理6 h后,血管紧张素II加烟酸(AngII+Niacin)组与血管紧张素Ⅱ(AngII)组相比,ROS的生成有明显降低(P<0.05)。结论烟酸能抑制AngII诱导的HUVECs凋亡,抑制ROS生成是可能的机制之一。     

雷帕霉素对胶质瘤干细胞的特异性凋亡作用

目的探索磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂雷帕霉素对胶质瘤干细胞的特异性凋亡作用。方法应用磁式分选系统将胶质瘤细胞分为CD133+和CD133-细胞。应用MTT法检测雷帕霉素对两种胶质瘤细胞的生长抑制作用。Annex-in V-FITC和碘化丙锭(PI)双染检测细胞凋亡。流式细胞仪检测细胞周期。Western blot检测PI3K蛋白表达。结果雷帕霉素以浓度依赖方式抑制胶质瘤细胞的生长,且对CD133+细胞的生长抑制作用显著强于CD133-细胞。比起CD133-细胞,雷帕霉素对CD133+细胞具有更强的凋亡作用。结论雷帕霉素对胶质瘤干细胞具有特异性的抗肿瘤效应,可能与胶质瘤干细胞具有较强的PI3K活性有关。     

乳腺分泌型癌

报道７例少见乳腺分泌型癌。男性２例，女性５例。年龄６～８１岁。１例肿瘤来源于副乳。我们结合文献复习讨论了分泌型癌的发病率、临床和病理特征及其预后。