绿色荧光蛋白标记的大鼠C6胶质瘤模型的构建

目的探讨绿色荧光蛋白（GFP）标记的大鼠C6胶质瘤模型的构建方法并观察其作用。方法用带有增强型GFP（EGFP）基因的p EGFP-C1质粒转染C6细胞,通过G418筛选获得稳定表达EGFP的C6细胞克隆EGFPC1-C6细胞。采用立体定向法,将浓度为1×10^6/L的EGFP-C1-C6细胞悬液10μL注入16只SD大鼠的颅内,建立EGFP标记的大鼠C6胶质瘤模型。观察大鼠接种肿瘤细胞后的反应及存活时间。分别于造模后第7、14、21天对大鼠行头颅MRI检查,计算肿瘤体积。常规HE染色观察病理学形态,激光共聚焦显微镜下观察胶质瘤的浸润及侵袭情况。结果成功培养了具有EGFP标记的EGFP-C1-C6细胞,MRI及病理学检查发现所有大鼠颅内均有肿瘤生长,肿瘤体积为（244.60±36.06）mm^3,采用激光共聚焦显微镜观察易于发现经EGFP标记的肿瘤组织,肿瘤区域清晰可见,并较易发现单个肿瘤细胞的远处浸润生长。结论采用EGFP-C1-C6细胞成功构建了大鼠C6胶质瘤模型,该模型有助于显示胶质瘤细胞的侵袭、转移及微小侵袭灶。     

C6/IL-24对鼠脑胶质瘤治疗作用的研究

目的 观察C6/IL-24对大鼠脑胶质瘤的治疗作用.方法 建立SD大鼠脑胶质瘤模型,实验组皮下注射C6/IL-24细胞,对照组皮下注射同等体积的生理盐水,观察大鼠的生存期及颅内肿瘤的生长变化.结果 实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组大鼠各时段肿瘤体积明显小于对照组,实验组大鼠存活时间明显长于对照组.结论 通过逆转录病毒将IL-24导入C6细胞而形成的C6/IL-24细胞对鼠脑胶质瘤具有较好的治疗效果,建立稳定可靠的脑胶质瘤动物模型是进行各种脑胶质瘤在体实验研究的基础,治疗时间窗的选择应在肿瘤指数生长期以前.     

近红外光谱技术对胶质瘤大鼠优化散射系数的研究

目的探讨应用近红外光谱技术测量C6荷瘤大鼠脑胶质瘤优化散射系数的特点。方法选取40只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。将培养的C6细胞立体定向接种于SD大鼠的尾状核,MR I检查肿瘤生长至直径0.5～1.0 cm时作为实验组,正常大鼠作为对照组。利用稳态光纤光谱仪的微创光学探头测量各组的优化散射系数。结果胶质瘤组的优化散射系数低于对照组（P〈0.05）。结论近红外光谱技术可以应用于胶质瘤的检测,其中优化散射系数是检测脑胶质瘤的良好指标。     

不同移植方法对脑胶质瘤大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的观察移植方法对脑质瘤大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）迁移能力的影响。方法立体定向法建立大鼠C6脑胶质瘤模型。A组大鼠用小剂量缓激肽后经荷瘤侧颈内动脉灌注BMSCs组，B组经荷瘤侧颈内动脉灌注尾静脉灌注组，每组6只。免疫组化染色显示MSCs，观察其在正常脑组织和胶质瘤组织中的数量和分布规律。结果三组均可见BMSCs在胶质瘤组织中广泛分布，A组明显多于B、C组（P〈0.01）。BMSCs主要分布于肿瘤内部，在肿瘤与正常脑组织的交界处亦有分布。结论小剂量缓激肽有助于BMSCs进入胶质瘤组织。     

冷冻联合rhTNF-α对C6大鼠脑胶质瘤细胞凋亡的影响及其调控机制

目的 探讨冷冻联合肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对C6大鼠脑胶质瘸细胞凋亡的影响及其调控机制。方法 建立C6大鼠脑胶质瘤动物模型，将80只大鼠均分为四组（对照组、冷冻组、rhTNF-α组、冷冻联合rhTNF-α组），治疗后第15天留取标本，以末端标记法、流式细胞仪（FCM）检测肿瘤细胞凋亡，以免疫组化技术检测p21基因表达。结果 与其他三组比较，冷冻联合TNF-α组诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及上调p21表达明显（P〈0．01），二者呈显著正相关（P〈0．01）。FCM分析显示。G1峰前出现典型的亚二倍体峰。结论 诱导细胞凋亡可能是冷冻联合TNF-α杀伤脑胶质瘤细胞的重要机制之一；p21基因可能参与这种细胞凋亡的调控。     

偏侧帕金森病大鼠尾壳核神经型一氧化氮合酶表达的变化

目的　探讨神经型一氧化氮合酶 (nNOS)在帕金森病 (PD)大鼠尾壳核内的变化。方法　通过 6 OHDA立体定向注射破坏一侧黑质 ,制备PD大鼠模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ 黄递酶 (NADPH d)组织化学方法和形态计量学技术 ,对其尾壳核NOS阳性神经元进行观察和计数。结果　 6 OHDA注射侧尾壳核内NOS阳性神经元数量显著低于健侧 (P <0 0 5)。结论　PD脑内DA的减少与尾壳核NOS神经元的减少密切相关 ,这可能是PD发病及病情渐进发展的重要因素之一。     

MRI导引下壳核靶向注射GDNF治疗帕金森病的实验研究

目的 探讨MRI导引下壳核置管注射神经胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)治疗帕金森病(PD)的实验价值.方法 PD猴动物模型3只,在无菌条件下,采用MRI引导立体定向技术,在PD猴模型右侧壳核置管输注GDNF.结果所有实验动物置管术后反应良好,在6周的给药期间无不良反应,PD症状明显改善.结论 MRI导引下壳核置管输注GDNF治疗PD猴模型安全、有效.     

两种不同方法建立脑胶质瘤裸鼠移植模型及组织学特征分析

采用C6型鼠胶质瘤细胞悬液接种至裸鼠皮下,同时用瘤组织块异体移植至裸鼠皮下,建立脑胶质瘤细胞裸鼠移植动物模型,分别观察裸鼠皮下移植瘤长出时间,并分析肿瘤的病理组织学及免疫组织化学特征.结果 两种方法所建肿瘤模型其成功率均为100%,均符合胶质瘤细胞的形态学特征.采用瘤组织块异体移植法建立的肿瘤模型,所需时间均明显短于细胞接种法,裸鼠肿瘤组织块生长速度基本相同.认为利用肿瘤组织块移植的方法可快速建立裸鼠皮下移植瘤模型,并能作为研究胶质瘤发病机制、生物学特性以及基因治疗的可靠动物模型.     

内皮祖细胞磁性标记及MR示踪在大鼠脑胶质瘤血管生成研究中的应用

目的探讨内皮祖细胞磁性标记及磁共振成像(MR)示踪在大鼠脑胶质瘤血管生成研究中的应用。方法通过C6胶质瘤细胞株系定位注射建立大鼠脑胶质瘤模型。结果未磁性标记的内皮祖细胞T2*map序列下肿瘤区见线状针道信号,肿瘤组织在T2*map序列未见明显异常的信号,而磁性标记的内皮祖细胞T2WI和T2*map扫描下发现瘤周异于针道信号的间断线状低信号,并可见信号变弱的趋势,迁移后的内皮祖细胞在血管生成处定位。结论 USPIO对于内皮祖细胞磁性标记和MR示踪是一种有效的标记物,而MRI也是活体示踪观察USPIO标记脑胶质瘤血管生成的有效手段。     

小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠微血管密度和肿瘤细胞增殖活性的影响

目的探讨小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠微血管密度和肿瘤细胞增殖活性的影响。方法 18月龄清洁级Wistar老年雄性大鼠60只,右前肢腋窝皮下接种2×106/20μl的细胞悬液;随机分为6组,连续服药5 d,休息4 d,共给药3次,于最后1次给药后2 d处死动物,眼球取血及肿瘤组织。采用ELISA法检测大鼠血清及肿瘤组织中CD34和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白含量;采用免疫组织化学方法检测大鼠肿瘤组织中CD34的蛋白水平,计数其微血管密度(MVD);同时通过检测PCNA的表达反映肿瘤细胞的增殖活性,并计算其增殖指数。结果与肿瘤对照组比较,小柴胡汤和阳性药各剂量组大鼠血清、肿瘤组织中CD34和PCNA的水平均明显降低(均P<0.01),且二者之间呈正相关(r=0.735,P<0.01);各组MVD和增殖指数均下降(均P<0.01),且二者之间呈正相关(r=0.726,P<0.01),尤以小柴胡汤高、中剂量组作用显著。结论 C6胶质瘤大鼠的微血管生成和肿瘤细胞增殖密切相关,小柴胡汤各剂量组均能通过降低CD34和PCNA的水平从而降低MVD和增殖指数,达到治疗C6胶质瘤的作用,高、中剂量组作用最为显著。     

大鼠骨髓间充质干细胞对胶质瘤的趋向性

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体外和体内对胶质瘤细胞的趋向性.方法 免疫组织化学方法检测BMSCs和C6细胞CXCR4和SDF-1的表达.在体外应用Transwell试验检测BMSCs向C6胶质瘤细胞的迁移特性;BMSCs移植到荷瘤大鼠健侧脑内21 d后,荧光显微镜观察其迁移.免疫组织化学方法检测脑组织及肿瘤组织中CXCR4和SDF-1的表达.结果 仅少数BMSCs表达CXCR4,阳性率为0.86%;C6胶质瘤细胞表达CXCR4和SDF-1,阳性率分别为63.53%和48.42%.BMSCs在体外表现出明显的向胶质瘤细胞的迁移特性;免疫组织化学检测肿瘤组织CXCR4和SDF-1表达均呈强阳性,移植21 d后,BMSCs表现了明显的向脑内胶质瘤迁移的特性,广泛分布于肿瘤和正常脑组织之间的胼胝体、皮层和血管.结论 CXCR4和其配体SDF-1参与大鼠BMSCs向胶质瘤细胞的迁移.     

脑胶质瘤细胞、组织中PGAM1 mRNA、蛋白的表达变化及意义

目的观察脑胶质瘤细胞、组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)mRNA及其蛋白的表达变化。方法用半定量RT-PCR检测大鼠C6胶质瘤组织和星形胶质细胞中的PGAM1 mRNA。用免疫组化法检测43例人脑胶质瘤组织标本(胶质瘤组)和15例瘤周脑组织(对照组)中的PGAM1蛋白。结果星形胶质细胞中PGAM1 mRNA表达量为1.26±0.05,C6胶质瘤细胞中为0.75±0.07,二者相比P<0.05。对照组、胶质瘤组PGAM1蛋白阳性表达分别为3、29例,两组相比,P<0.05。结论脑胶质瘤组织中PGAM1 mRNA、蛋白表达增高,可能与脑胶质瘤的发病有关。     

脑室内注射脂多糖致脑内炎症大鼠模型黑质多巴胺能神经元与胶质细胞的早期变化

目的 用脑室内注射脂多糖的方法 建立脑内炎症大鼠模型,观察造模早期胶质细胞的变化及脑内炎症反应对黑质多巴胺能神经元的影响,探讨炎症反应在多巴胺能神经元变性过程中的作用.方法 健康SD雄性大鼠36只,随机分为6组,定位后右侧脑室内一次性注射脂多糖20 μl (5 mg/ml)或生理盐水20 μl, 在注射1、6、24h后,灌杀动物,用免疫组化染色方法 观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化及全脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的激活情况.结果 ①OX-42免疫组化染色显示,脂多糖注射1 h后可见海马、纹状体部位小胶质细胞激活,而黑质部位未见有明显的小胶质细胞激活;脂多糖注射6、24 h后,海马、纹状体、黑质部位均有小胶质细胞激活.②GFAP免疫组化染色显示,脑内星形胶质细胞在脂多糖注射后各时间点均未见明显激活.③酪氨酸羟化酶免疫组化染色显示,黑质部位酪氨酸羟化酶阳性神经元的形态及数量在脂多糖注射后各时间点亦无明显变化.结论 脂多糖侧脑室内注射可成功建立全脑内炎症大鼠模型,此模型中,小胶质细胞在短时间内被迅速激活,而脑内炎症反应在短期内不会引起黑质多巴胺能神经元的损伤.     

替莫唑胺抑制大鼠C6胶质瘤增殖及对P53、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究替莫唑胺(TMZ)抑制大鼠C6胶质瘤增殖及对p53、caspase3蛋白表达的影响。方法 120只SD雄性大鼠,构建C6胶质瘤模型。荷瘤大鼠随机平均分为模型组、生理盐水组、替莫唑胺组。处理15 d后检测脑胶质瘤的体积和重量;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;分离脑胶质瘤细胞,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western-blot检测脑胶质瘤中p53、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达情况。结果生理盐水组与模型组各项检测均无明显差异(P0.05)。与模型组相比,替莫唑胺处理后脑胶质瘤体积明显减少(P0.01),脑胶质瘤的重量也明显降低(P0.05),IL-6、TNF-α、VEGF表达显著降低(P0.05),胶质瘤细胞的凋亡率明显升高(P0.01),p53、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达明显上升(P0.01)。结论替莫唑胺可能通过活化凋亡信号途径p53/Bax/caspase-9/caspase-3促进胶质瘤细胞凋亡,抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖。     

抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原表达的影响

目的 研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤增殖细胞核抗原的影响.方法 采用鼠脑立体定向的方法建立大鼠脑胶质瘤动物模型并进行分组:抑胶素不同浓度实验组(Ⅰ:8 μg/kg;Ⅱ:16 μg/kg;Ⅲ:32 μg/kg;Ⅳ:64 μg/kg)、对照组,于治疗14 d后计算瘤体变化,应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,观察瘤细胞增殖变化情况.结果 抑胶素Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组对C6脑胶质瘤细胞有显著抑制作用,其瘤体积及抑瘤率与对照组比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01);抑胶素能够使胶质瘤PCNA指数下降,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组PCNA指数(%)与对照组相比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).结论 抑胶素能够抑制大鼠脑胶质瘤体内生长.其机制之一可能与胶质瘤内PCNA表达,使肿瘤细胞增殖水平下降有关.     

整合素αvβ3拮抗剂治疗大鼠脑胶质瘤的实验观察

目的观察整合素αvβ3拮抗剂IS201治疗大鼠脑胶质瘤的效果,并探讨其机制。方法建立SD大鼠C6脑胶质瘤模型,将荷瘤鼠随机分为对照组和实验组。实验组给予整合素αvβ3拮抗剂IS201,对照组给予PBS液,两组均行腹腔注射。观察治疗后大鼠的生存期,测量大鼠肿瘤体积,用免疫组化法检测肿瘤中微血管密度（MVD）和整合素αvβ3、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平。结果实验组大鼠生存期显著长于对照组,C6脑胶质瘤体积明显小于对照组（P〈0．01）;实验组大鼠C6脑胶质瘤中MVD低于对照组,整合素αvβ3、PCNA的表达水平亦低于对照组（P〈0．01）。结论整合素αvβ3拮抗剂IS201能够降低大鼠C6脑胶质瘤的血管生成和肿瘤细胞增殖,对C6胶质瘤的生长有明显的抑制作用。     

嘌呤核苷酸对海洛因处理过大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响

目的 探讨海洛因及嘌呤核苷酸对大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠C6神经胶质瘤细胞,分别以不同浓度的海洛因及嘌呤核苷酸处理细胞,MTT比色法检测海洛因和嘌呤核苷酸对细胞增殖的影响.结果 MTT实验表明,海洛因对大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,120 mg/L海洛因作用24 h对C6细胞的抑制率达52%,并表现为剂量依赖性;嘌呤核苷酸对C6细胞的增殖有促进作用,120 mg/L嘌呤核苷酸作用24 h,细胞增殖率为30%,并表现为剂量依赖性.结论 海洛因抑制大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖;嘌呤核苷酸促进大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖,并在某种程度上对抗海洛因对C6细胞增殖的抑制作用.     

重复常压低氧预适应对慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响

目的探讨重复常压低氧预适应(repetitive normobaric hypoxic preconditioning,RNHP)对慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响。方法选择健康成年雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、RNHP组,每组8只。假手术组只分离而不结扎双侧颈总动脉,整个实验过程呼吸环境空气;模型组:结扎双侧颈总动脉,整个实验过程呼吸环境空气;RNHP组:结扎双侧颈总动脉,术前给予2周低氧预适应。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,Klüver-Barrera染色评价脑白质损伤的严重程度,胶质纤维酸性蛋白抗体、Iba-1抗体、CNPase抗体分别用于免疫标记脑白质中星形胶质细胞、小胶质细胞和少突胶质细胞。结果与模型组比较,RNHP组和假手术组大鼠目标象限游泳时间百分比明显延长[(27.26±2.06)%、(29.06±1.72)%vs(20.58±2.23)%,P0.05,P0.01],胼胝体、尾壳核和前联合脑白质损伤评分明显降低,脑白质中星形胶质细胞、小胶质细胞明显减少,而少突胶质细胞明显增多,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 RNHP可改善慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍。     

环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织核因子-κB及细胞间黏附分子1表达的影响

目的研究环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织NF-κB和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法健康SD大鼠125只,随机分为假手术组(25只)、治疗组(50只)和对照组(50只),采用Fredrik建立的自体股动脉取血,并向大鼠尾壳核注射方法复制脑出血模型。各组按术后6、24、48、72 h及5 d分为5个时间点,经尾壳核行冠状切片,分别按干湿重法测脑含水量,免疫组织化学法测定血肿周围组织NF-κB及ICAM-1的表达。结果假手术组各时间点NF-κB、ICAM-1表达无明显变化。除6 h及5 d,治疗组24、48、72 h血肿周围脑组织含水量及NF-κB、ICAM-1表达均明显低于对照组(P0.05)。NF-κB表达与ICAM-1表达呈现同步性,而且NF-κB的表达高峰时间先于ICAM-1的表达。结论环磷酰胺能够减少并抑制NF-κB的表达,减轻脑出血血肿周围组织的炎性反应,起到神经保护作用。     

IL-2、IL-18与C6抗原修饰树突状细胞对大鼠脑胶质瘤的治疗作用

建立C6脑胶质瘤模型.分为对照组、治疗组.治疗组用IL-18、IL-2和C6肿瘤细胞抗原致敏树突状细胞(DC)反复输入荷瘤鼠体内,对照组注射相同体积的无血清培养液.观察各组大鼠的生存状态、生存时间,采用MRI动态检测胶质瘤的生长情况.结果:治疗组C6胶质瘤生长受到抑制,荷瘤大鼠存活率提高,生存期明显延长.认为在C6胶质瘤荷瘤大鼠的治疗中,以DC为主的免疫疗法有显著疗效.