淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。     

芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株黑素生成及其相关基因表达的影响

目的:研究芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株的黑素生成及其相关基因表达的影响。方法:分别测定不同浓度芦荟素作用后的Melan-a鼠黑素细胞株的细胞增殖率、酪氨酸酶(TRY)含量及黑素量变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1和TRP-2的表达,并与相应浓度的氢醌进行比较。结果:0.01～10.00mmol/L的芦荟素对黑素细胞的增殖率无影响,芦荟素可显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性和黑素量生成,抑制作用随芦荟素的浓度升高而增加,0.10mmol/L芦荟素处理的Melan-a鼠黑素细胞株的TRY抑制率及黑素量与0.10μmol/L的氢醌相当(P>0.05);芦荟素还能显著下调TRP-1和TRP-2 mRNA的表达水平(P<0.01),但是TRP-1和TRP-2的变化与TRY及黑素量的变化不平行。结论:芦荟素显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性、黑素量和TRP-1/TRP-2 mRNA的表达水平,直接测定黑素细胞TRY浓度和黑素量比检测TRP-1/TRP-2mRNA更能确切地反映芦荟素对黑素细胞的影响。     

中药桂枝抑制黑素生成的作用机理研究

目的研究中药桂枝对小鼠黑素细胞系M el-a黑素生成、酪氨酸酶活性及基因表达的影响,阐明桂枝抑制黑素生成的机理。方法用药物处理M el-a细胞后进行黑素含量、L-DOPA染色、放免法测定酪氨酸酶活性,western b lot和实时RT-PCR分别测酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白的蛋白和mRNA表达水平。选取熊果苷作为阳性对照。结果10μg/m l浓度的桂枝提取物在细胞培养水平对黑素生成有明显地抑制作用,强于20μg/m l浓度的熊果苷。桂枝可以抑制酪氨酸酶mRNA表达;减少这种限速酶的蛋白产量,在细胞量相同的情况下,桂枝明显抑制酪氨酸酶的氧化活性。结论中药桂枝有很强的抑制黑素产生的作用,其作用是通过抑制酪氨酸酶的基因表达、蛋白合成和氧化活性这三方面来实现。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人表皮黑素细胞黑素合成的影响及机制

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对体外培养的人表皮黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶（TYR）活性以及TYR、酪氨酸酶相关蛋白（TRP）-1、TRP-2mRNA表达的影响,探讨EGCG对黑素合成的影响及其作用机制。方法：选择5．0、10．0、12．5、15．0、20．0μg／mL5个浓度的EGCG作用于体外培养的人表皮黑素细胞72h,分别测定细胞增殖活性、TYR活性、黑素含量;采用逆转录（RT）-PCR半定量检测EGCG对黑素细胞中TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达的影响。结果：EGCG显著抑制黑素合成和TYR活性,且呈浓度依赖性;EGCG可明显抑制黑素细胞中TYR mRNA和TRP-1 mRNA的表达,但对TRP-2mRNA的表达无明显影响。结论：EGCG可抑制黑素合成和TYR活性,这种作用可能与EGCG下调TYR和TRP-1的表达有关。     

苦参碱及肉桂酸对体外培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响

目的:观察苦参碱和肉桂酸对melan-a小鼠黑素细胞黑素生成的影响。方法:用药物干预melan-a小鼠,观察黑素细胞的形态并测定各组黑素量及酪氨酸酶的活性。结果:肉桂酸干预melan-a小鼠黑素细胞2d后就表现出明显的促进树突生成的作用。肉桂酸和苦参碱在高、中、低浓度(1.00、0.10、0.01mmol/L)有抑制melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性的作用(除外0.01mmol/L苦参碱),其抑制作用均弱于对照药氢醌(P<0.01)。苦参碱(0.001～1.000mmol/L)和肉桂酸(0.001～1.000mmol/L)均能使melan-a小鼠黑素细胞黑素量减少,但其抑制黑素合成的作用明显低于同浓度氢醌。Fontana-Masson染色表明,经苦参碱干预后的melan-a小鼠黑素细胞内黑素颗粒少于空白对照组。结论:苦参碱和肉桂酸均有抑制melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性的作用及使黑素合成量减少的作用,且苦参碱作用强于肉桂酸,而肉桂酸有促进黑素细胞树突形成的作用。     

甘草提取物对人黑素细胞黑素合成的影响

目的: 评价甘草提取物对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响.方法:选择2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 mg/L6个浓度的甘草作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量,western blot方法检测甘草作用后黑素细胞中酪氨酸酶蛋白的表达.结果: 甘草显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论: 甘草通过下调酪氨酸酶的表达抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响

目的:观察山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响。方法:山奈素干预melan-a后,观察对黑素细胞增殖率的影响并测定各组酪氨酸酶活性大小及黑素量。结果:山奈素表现出轻度的促melan-a增殖作用(P<0.01),当山奈素浓度在0.001mmol/L至0.1mmol/L之间时,细胞增殖率和浓度呈指数关系,而浓度高于0.1mmol/L后进入平台期。山奈素在1mmol/L浓度时,促黑素合成的作用与同浓度8-MOP类似(P>0.05)。Fontana-Masson染色后与空白对照比较,经山奈素干预的细胞内,黑素颗粒染成黑色,融合成片,明显多于空白对照。结论:山奈素能够激活melan-a黑素细胞酪氨酸酶的活性,并具有促进黑素细胞增殖、使黑素合成量增加的作用。     

墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。     

TRP-1编码基因反义核酸对黑素细胞增殖及功能的影响

目的 构建酪氨酸相关蛋白-1(TRP-1)反义真核表达载体并转染TRP-1高表达的黑素细胞及恶性黑素瘤细胞,进一步研究其对黑素细胞及恶性黑素瘤细胞增殖及功能的影响。方法 将TRP-1基因反向亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,转染黑素细胞及恶性黑素瘤细胞。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRP-1mRNA水平的变化,免疫印迹法检测TRP-1蛋白水平的改变。通过流式细胞仪检测细胞周期的变化,并用L-多巴测定酪氨酸酶活性的改变。结果 成功构建重组反义表达载体pcDNA3.1/TRP-1(-),转染细胞稳定表达TRP-1反义核酸。RT-PCR提示TRP-1mRNA水平显著下降,免疫印迹提示其TRP-1蛋白表达水平降低。流式细胞检测表明反义TRP-1转染细胞发生细胞周期G1期阻滞。转染组黑素细胞及黑素瘤细胞酪氨酸酶活性抑制率分别达46%和54%。结论 TRP-1在黑素细胞及黑素瘤细胞的增殖及功能方面发挥重要作用,TRP-1反义核酸转染细胞细胞周期受到阻滞,酪氨酸酶活性明显降低。     

全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线诱导的melan-a黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨外用维甲酸脱色素作用的机制.方法 利用体外培养的melan-a黑素细胞,观察全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线(UVB)诱导的melan-a黑素细胞黑素合成的影响.结果 二者可剂量依赖性抑制UVB诱导的细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,使其回复到基础水平,但对基础黑素合成无明显影响,10-5M的全反式维甲酸可抑制黑素细胞增殖,阿达帕林对细胞增殖无明显影响.全反式维甲酸和阿达帕林对细胞黑素合成的影响无明显差异.结论提示维甲酸可直接作用于黑素细胞抑制其黑素合成,这可能是维甲酸脱色素作用的机制之一.     

维A酸促毛囊外毛根鞘无色素黑素细胞分化的实验研究

目的：研究维A酸(all-transretinoic acid，ATA)对毛囊无色素黑素细胞（famelanotic melangeytes，AMMC)的激活作用。方法：以高、中、低3种不同浓度的ATA作用于培养的人毛囊外毛根鞘AMMC，倒置显微镜观察细胞形态的变化，细胞计数法测定ATA对AMMC增殖率的影响，通过间接免疫荧光法结合激光共聚焦显微镜半定量分析药物作用前后AMMC酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1，TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)表达的变化。结果：ATA能抑制AMMC的增殖，并能促进AMMC表达TYR和TRP-1，但对TRP-2的表达没有影响。结论：ATA能够促进AMMC的分化，同时抑制增殖，其抑制机制可能与凋亡有关。