miR-138-5p通过调控Survivin表达对食管鳞癌细胞活性的影响

目的 探究miR-138-5p通过调控Survivin表达对食管鳞癌细胞活性的影响。方法 将实验分为W组（无转染组）、C组（食管鳞癌细胞转染NC组）、Z组（转染miR-138-5p组）。RT-PCR检测Survivin、miR-138-5p水平;Western blot检测Notch1、HIF-1α、MMP-9的表达;Transwell小室测迁移能力;CCK-8检测增殖能力;流式细胞仪检测凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p与Survivin靶向关系。结果 miR-138-5p在食管鳞癌组织中的水平低于癌旁组织（P<0.05）;食管鳞癌组织中Survivin水平较癌旁组织高（P<0.05）。miR-138-5p、Survivin在W组与C组中的水平较为接近（P>0.05）;与C组相比,Z组miR-138-5p的水平有所上升、Survivin水平有所下降（P<0.05）,由此可看出,miR-138-5p转染成功。W组与C组中Notch1、HIF-1α、MMP-9水平较为接近（P>0.05）;与C组相比,Z组中Notch1水平有所升高、HIF-1α、MMP-9水平有所下降（P<0.05）。W组食管鳞癌细胞迁移数量（282.67±27.65）与C组细胞迁移数量（279.31±28.22）相差较小（P>0.05）;与C组相比,Z组的迁移数量（76.57±6.71）有所降低（P<0.05）。W组与C组在各时间点的OD值较为接近（P>0.05）;Z组在各时间点的OD值均较W组与C组低（P<0.05）。W组食管鳞癌细胞凋亡率（2.47±0.11）%与C组食管鳞癌细胞凋亡率（2.45±0.13）%较为接近（P>0.05）;Z组食管鳞癌细胞凋亡率（13.32±1.23）%高于W组与C组（P<0.05）。双荧光素梅报告基因检测实验结果显示Survivin′-UTR-WT在miR-NC组表达水平为（0.79±0.09）、miR-138-5p组表达水平为（0.59±0.07）,组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）;Survivin′-UTR-MUT在miR-NC组（0.91±0.11）及miR-138-5p组（1.02±0.12）表达无显著差异（P＞0.05）。与食管癌组比较,miR-138-5p组大鼠移植瘤的瘤体积、瘤质量降低,抑瘤率升高（P<0.05）。结论 miR-138-5p可通过降低Survivin的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖及迁移,并促进其凋亡。     

长链非编码RNA DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA）DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR检测lncRNA DRAIC和miR-181在卵巢癌细胞株中的表达差异;双荧光素酶实验检测lncRNA DRAIC和miR-181之间的关系;平板克隆细胞实验和Transwell侵袭实验分别检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞成瘤能力的影响;Western Blot实验检测lncRNA DRAIC对JAK1/STAT2信号通路激活的影响。结果 SKOV3中lncRNA DRAIC的表达（2.51±0.26）高于COC1（2.31±0.21）,CAOV3（1.03±0.13）和A2780（1.93±0.12）细胞株（P<0.05）;SKOV3中miR-181的表达（2.55±0.31）高于CAOV3（0.76±0.11）和A2780（1.62±0.13）细胞株（P<0.05）,稍低于COC1细胞株（2.72±0.24）;DRAIC-siRNA转染卵巢癌细胞后,miR-181-WT的表达水平明显降低[（1.02±0.11）vs（0±0.05）,P<0.05],而miR-181-MUT的表达水平变化不大[（1.02±0.11）vs（0.96±0.08）,P>0.05];转染DRAIC-siRNA 48、60 h后,SOKV3细胞的增殖能力明显低于对照组;Transwell侵袭实验显示DRAIC-siRNA组的侵袭细胞数目[(186.4±12.4) vs (73.6±8.6),P<0.05]显著降低;划痕愈合实验显示DRAIC-siRNA组的细胞迁移距离比例[(2.53±0.24) vs (1.21±0.09),P<0.05]显著降低;裸鼠成瘤实验显示DRAIC-siRNA组平均肿瘤体积明显小于对照组[(1.135±0.09)cm3 vs (2.13±0.13)cm3, P<0.05],DRAIC-siRNA组平均肿瘤重量也显著低于对照组[(1.52±0.12)g vs (1.89±0.21)g,P<0.05];Western Blot实验显示DRAIC-siRNA组的磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应下调,而同时过表达miR-181-mimic后,磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应的恢复。结论 LncRNA DRAIC通过调控miR-181的表达激活JAK1/STAT2磷酸化进而影响卵巢癌细胞的恶性生物学行为的发生。     

miR-494-3p/RRS1轴对结直肠癌影响作用及机制

目的 探讨miR-494-3p/RRS1轴对结直肠癌的影响作用及机制。方法 选取内蒙古医科大学附属医院自2018年1月至2020年1月收治的192例结直肠癌患者为研究对象。收集患者的治疗前癌组织及癌旁组织。检测结直肠癌患者的miR-494-3p表达水平并分析其对结直肠癌患者生存率、细胞增殖的影响;分析RRS1对结直肠癌患者细胞增殖的影响及miR-494-3p靶向RRS1对结直肠癌患者细胞增殖的调控作用;分析miR-494-3p及RRS1对结直肠癌患者细胞周期相关因子表达水平的影响。结果 miR-494-3p在结直肠癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。miR-494-3p高表达生存率高于miR-494-3p低表达(P<0.05)。与结直肠正常细胞株NCM460比较,miR-494-3p表达水平在结直肠癌细胞株RKO、HCT116、SW480、HT-29中均处于低表达水平,且SW480细胞株中miR-494-3p表达水平最低(P<0.05)。过表达miR-494-3p后,结直肠癌细胞SW480增殖水平下降(P<0.05);敲低miR-494-3p后,结直...     

miR-885-3p靶向AKT1对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响

目的 探究miR-885-3p对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响以及作用机制。方法 荧光定量PCR检测经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射后HT-29细胞中miR-885-3p的表达量;建立过表达miR-885-3p细胞株,功能试验探讨其对HT-29细胞放射敏感性的影响;生物信息学预测miR-885-3p下游调控的靶基因,双荧光素酶报告基因法进一步验证;上调和下调miR-885-3p表达量探讨miR-885-3p与靶基因丝苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）表达量的调控关系;慢病毒转染敲减AKT1表达量,观察其对HT-29细胞放射敏感性的影响;共转染miR-885-3p模拟物,探讨过表达AKT1对miR-885-3p诱导的HT-29细胞放射敏感性的影响。结果 miR-885-3p在放射诱导的HT-29细胞中表达上调（F=46.64,P<0.05）;过表达miR-885-3p和敲减AKT1可通过抑制HT-29细胞存活、促进其凋亡,从而增强HT-29细胞放射敏感性（t=12.33、12.95,P<0.05）,放射增敏比（SER）分别为1.602和1.946;抑制miR-885-3p可通过促进HT-29细胞存活、抑制其凋亡从而促进HT-29细胞放射抵抗（t=11.94,P<0.05）,SER为0.839;AKT1是miR-885-3p下游靶基因;过表达AKT1反转miR-885-3p增强HT-29放射敏感性的作用,SER为0.680。结论 miR-885-3p通过直接靶向AKT1增加结直肠癌HT-29细胞放射敏感性,为提高临床结直肠癌放疗敏感性提供一个靶点。     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

长链非编码RNA ZFAS1在食管癌中的表达及作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1（zinc finger antisense 1,ZFAS1）在食管癌中的表达及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR法分别检测癌旁组织和食管癌组织、正常食管上皮细胞和食管癌细胞的ZFAS1表达水平,通过细胞增殖活性检测、细胞划痕实验及流式细胞仪检测细胞凋亡技术,评价干扰食管癌细胞表达ZFAS1对细胞增殖、迁移及凋亡的影响,采用荧光素酶报告基因验证微小RNA（microRNA,miRNA）miR-302b-3p是ZFAS1的作用靶点,Western蛋白印迹法检测ZFAS1及miR-302b-3p作用下c-Jun氨基末端激酶2（c-Jun N-terminal kinase 2,JNK2）、胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R）、白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4）和上皮细胞激酶（epithelial cell kinase 2,EphA2）蛋白的表达变化。结果与癌旁组织相比,食管癌组织表达ZFAS1水平升高（t=19.40,P<0.001）,与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞表达ZFAS1水平增加（t=13.80,P<0.001）,通过抑制细胞表达ZFAS1发现,与NC干扰组相比,显著降低ZFAS1干扰组细胞增殖活性（t值分别=2.933,8.568,10.04,均P<0.05,）及迁移能力（t=13.96,P<0.001）,且细胞凋亡率升高（t=10.68,P<0.001）。ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p调节JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2蛋白的表达。结论ZFAS1在食管癌组织中表达显著增加,具有促进食管癌细胞增殖、迁移,抑制凋亡的能力,且ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p激活JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2,有望成为治疗食管癌的潜在靶点。     

MiR-138在脑胶质瘤患者血清表达的生物学效应及临床意义

目的 探讨脑胶质瘤患者血清微小RNA-138（microRNA-138,miR-138）表达变化及其生物学效应。方法 选择脑胶质瘤患者60例、健康体检者60例,采用实时荧光定量PCR技术检测2组血清miR-138表达,受试者工作曲线确定血清miR-138检测对脑胶质瘤的诊断价值;体外对脑胶质瘤细胞系U251和U87分别转染miR-138类似物（miR-138 mimic）与阴性对照（miR-NC）,通过MTT实验与Transwell实验测定脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移。结果 与健康体检者比较,脑胶质瘤患者血清miR-138表达明显下降（t=14.60,P<0.01）,且随脑胶质瘤患者恶性程度的增加,miR-138表达量逐渐减少;曲线下区域面积为0.75（95%置信区间为0.65-0.85,P=0.00）,当截断值为2.19时,其诊断脑胶质瘤的灵敏度为92%、特异性为52%。MTT实验表明miR-138表达增加抑制脑胶质瘤细胞增殖。Transwell实验表明miR-138表达增加抑制脑胶质瘤细胞侵袭及转移。结论 脑胶质瘤患者血清miR-138呈现低表达,对诊断脑胶质瘤具有较高的诊断效率,miR-138可作为一种肿瘤抑制因子参与脑胶质瘤的发生发展。     

MiR-514与胃癌细胞凋亡的关系及机制

目的 探讨微小RNA-514（microRNA-514,miR-514）与胃癌细胞凋亡的关系及机制。方法 实时定量PCR检测80例胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中miR-514的表达情况,分析miR-514与患者各病理参数之间的关系。应用miR-514模拟物转染人胃癌细胞株MGC803,检测转染前后细胞凋亡率及凋亡相关基因的情况。结果 胃癌组织中miR-514水平（0.3619±0.2103）明显低于癌旁正常胃黏膜（0.6943±0.3032）（t=-8.0573;P<0.001）;miR-514表达与肿瘤的淋巴结转移有关（t=-2.5620,P=0.012 3）;miR-514模拟物转染人胃癌细胞株MGC803后细胞的活性明显降低而凋亡率明显增高（P<0.05）;转染后凋亡相关基因Bcl-2、xIAP的mRNA和蛋白表达明显降低,而Bax的mRNA和蛋白表达明显增高（P<0.05）。结论 胃癌组织中miR-514的表达减弱,miR-514可能通过调节一些凋亡基因表达而参与肿瘤的凋亡过程。     

miR-27b-3p通过靶向PLK2促进乳腺癌细胞的辐射抵抗

目的 研究miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗的影响。方法 通过检索基因表达（GEO）数据库，筛选分析miR-27b-3p在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同乳腺癌细胞系中的表达水平。通过细胞克隆形成、免疫荧光和5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）检测技术评价miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗作用。采用荧光素酶报告基因技术确定miR-27b-3p的靶基因PLK2，并在乳腺癌细胞中进一步验证miR-27b-3p的辐射抵抗作用。结果 与正常乳腺组织和细胞相比，miR-27b-3p在乳腺癌组织（t=2.99，P<0.01）和乳腺癌细胞中表达水平显著上调（t=21.21、32.88，P<0.05）。尤其在抗辐射细胞MCF-7R中升高更加明显（t=25.63，P<0.05）。过表达miR-27b-3p增强了MCF-7细胞的克隆形成能力（t=10.32，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，miR-27b-3p对MCF-7增殖能力的保护效应逐渐凸显（t=8.77、8.26、8.03，P<0.05）；干扰miR-27b-3p则抑制MCF-7R细胞克隆形成数（t=40.00，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，进一步削弱了MCF-7R细胞的增殖能力（t=8.54、8.32、8.23，P<0.05）。报告基因实验结果表明，PLK2是miR-27b-3p的直接靶标。过表达PLK2抑制了miR-27b-3p介导的乳腺癌细胞辐射抵抗（MCF-7：t=9.66，P<0.05；MCF-7R：t=6.42，P<0.05）。结论 miR-27b-3p可通过靶向PLK2提高乳腺癌细胞的辐射抗性。     

长链非编码RNA肝癌高表达转录本对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（LncRNA）肝癌高表达转录本（HULC）对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。方法 shRNA HULC慢病毒感染骨肉瘤细胞,以qRT-PCR测定干扰效果。以8 Gy X射线照射处理感染shRNA HULC慢病毒的骨肉瘤细胞,MTT、PI单染、Annexin V-FITC/PI双染法分别测定细胞增殖、周期和凋亡变化。Western blot检测细胞中p21、Cyclin D1、C-Caspase-3蛋白水平和胞浆、线粒体中细胞色素C（Cyt-C）蛋白水平。平板克隆实验检测骨肉瘤细胞的放射敏感性。结果 shRNA HULC慢病毒感染可以明显下调骨肉瘤细胞中HULC表达水平。下调HULC或放射处理均可以抑制骨肉瘤细胞增殖[（100.00±9.65）%vs.（71.36±5.27）%、（63.48±5.93）%,t=4.512、5.585,P<0.05]、阻滞细胞周期[（50.15±5.14）%vs.（62.35±4.22）%、（66.05±5.23）%,t=3.177、3.756,P<0.05]和诱导细胞凋亡[（2.98±0.23）%vs.（22.61±3.26）%、（26.14±2.81）%,t=8.898、10.498,P<0.05],促进细胞中p21、C-Caspase-3蛋白表达并下调Cyclin D1蛋白水平,提高胞浆中Cyt-C蛋白水平并下调线粒体中Cyt-C蛋白水平。下调HULC联合放射对骨肉瘤细胞增殖[（71.36±5.27）%、（63.48±5.93）%vs.（49.32±5.76）%,t=4.890、2.967,P<0.05]、周期[（62.35±4.22）%、（66.05±5.23）%vs.（77.17±7.54）%,t=2.983、2.106,P<0.05]、凋亡[（22.61±3.26）%、（26.14±2.81）%vs.（36.21±3.26）%,t=6.164、4.564,P<0.05]及Cyclin D1、C-Caspase-3、Cyt-C蛋白表达影响作用更大。下调HULC后骨肉瘤细胞放射增敏比为1.432。结论 下调HULC提高骨肉瘤细胞放射敏感性,这可能与协同放射阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡有关。     

microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响.方法 通过细胞转染获得Z138c-TMP2细胞株和稳定高表达miR-17-92的Z138c-TMP2-miR-17-92细胞株.采用锥虫蓝染色活细胞计数和3H-TdR掺入方法,观察两组细胞外照射后生长情况.采用流式细胞仪检测两组细胞照射后周期时相分布和细胞晚期死亡率.结果 随着照射剂量的增加,miR-17-92组较TMP2组有更多存活细胞(t=-3.12和-3.28,P＜0.05);TMP2组细胞出现G2/M期阻滞,miR-17-92组未出现明显周期阻滞(t=2.885,P＜0.05).2和4 Gy照射后培养96 h以上,TMP2组细胞PI单染阳性细胞百分比(24.02%和36.16%)明显高于miR-17-92组(6.49%和11.39%),差异有统计学意义(t=-17.59、-4.972,P＜0.05).结论 miR-17-92高表达可明显降低人套细胞淋巴瘤细胞株Z138c细胞的放射敏感性.改变细胞周期和抵抗照射诱导的凋亡是miR-17-92发挥作用途径之一.     

CD40与CD138在骨髓瘤细胞表面的表达

 目的探讨CD40与CD138在多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)患者骨髓瘤细胞表面的表达程度.方法应用间接免疫荧光化学方法,分别用一抗和二抗羊抗鼠IgG-FITC标记30例MM患者骨髓涂片中骨髓瘤细胞中CD40与CD138,计数阳性细胞.结果CD40与CD138在骨髓瘤细胞都有较高的表达,根据多发性骨髓瘤的分期不同,CD403b1和CD 138在MMⅢ期患者与Ⅱ期患者的表达率分别为(68±0.22)%,(77±0.60)%,(75±0.46)%,(90±0.35)%,差异有显著性意义(P＜0.05),CD40和CD138在IgA型MM患者和IgG型中的表达差异没有显著性意义(P＞0.05).结论CD40和CD138在多发性骨髓瘤细胞都有较高的表达,并且与疾病的分期有一定的关系.     

异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的:探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组）,同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（...     

miR-302a在胃癌中表达及其对胃癌细胞凋亡与细胞周期影响

目的研究微小RNA-302a(miRNA-302a)在胃癌标本中的表达水平与临床病理特征的关系,以及其对胃癌细胞的凋亡和细胞周期调控作用,以探讨将miR-302a用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法采用实时PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中miR-302a的相对表达水平,并分析其与对应患者的临床病理资料的相关性。同时,采用RTPCR方法检测miR-302a在胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1中的表达情况;选取miR-302a表达水平最低者为癌细胞,并转染过表达miR-302a的真核重组质粒p CDNA3.1-miR-302a;转染后,采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和PI单染法检测miR-302a对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果胃癌组织中miR-302a的相对表达水平显著低于癌旁正常胃癌黏膜组织(P<0.05),且其表达与临床分期、病理分级和转移均有密切关系(P<0.05)。同时,在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823中miR-302a的相对表达水平显著低于正常细胞GES-1中的表达(P<0.05),且在BGC-823中表达水平最低。p CDNA3.1-miR-302a质粒转染组与空白组和p CDNA3.1质粒转染组比较,miR-302a质粒转染后48 h后细胞凋亡水平显著升高,且G2/M期细胞数显著增高(P<0.05)。结论在胃癌组织和细胞中miR-302a均呈现低水平表达,当miR-302a过表达后,能显著增高胃癌细胞的凋亡水平并使细胞出现G2/M期阻滞,可能成为胃癌治疗的新靶点。     

MicroRNA-34a通过Notch1对膀胱肿瘤细胞株T24增殖的影响

目的 探讨膀胱肿瘤细胞株中microRNA-34a(miR-34a)与Notch1的相互作用关系以及过表达miR-34a对T24细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学软件预测miR-34a与Notch1的作用位点,并通过荧光素酶实验验证两者的直接调控关系.在膀胱癌细胞株T24过表达miR-34a,采用实时定量PCR和蛋白印迹检测Notch1表达水平的变化;分别通过新型四唑氮盐(MTS)实验和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡以及细胞周期的变化.结果 T24细胞中荧光素酶报告基因实验显示,miR-34a在膀胱癌细胞中能与报告基因结合,使萤火虫荧光强度减弱(P=0.006).过表达miR-34a后,T24细胞内源性Notch1的mRNA水平和蛋白水平均明显下调;T24细胞生长明显受抑(P＜0.001),并呈现一定时间依赖性;凋亡率增加(P=0.003),G0-G1期细胞显著增多(P=0.002).结论 过表达miR-34a能通过降低靶基因Notch1的表达,抑制膀胱肿瘤细胞的增殖.     

miR-19a-3p靶向调控CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制

 目的 探究miR-19a-3p靶向CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 癌细胞分组转染(空白组、阴性对照组、miR-19a-3p mimic组、siRNA-CCND1组、miR-19a-3p mimic + siRNA-CCND1组)。分别应用qRT-PCR、Western blot、MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验检测相关基因mRNA和蛋白表达及细胞生物学行为变化趋势。结果 人乳腺癌组织和细胞中CCND1和Fra-1的表达明显上升,而miR-19a-3p明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组的miR-19a-3p、CCND1、FrA-1表达水平均上调(P<0.05),miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中上调更为明显(P<0.05)。各组细胞在24 h时无明显差异。48 h和96 h各组细胞增殖能力均提高。空白组与阴性对照组细胞增殖能力相比无明显差异。另外3组的细胞增殖能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),但miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中细胞增殖变化趋势较弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组细胞迁移、侵袭能力均减弱,差异有统计学意义(P<0.05),且miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组迁移、侵袭能力最弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-19a-3p在乳腺癌中呈下降趋势,上调miR-19a-3p可有效抑制CCND1基因表达和FrA-1/IL-6/Stat3通路激活,从而降低乳腺癌细胞侵袭转移。     

X射线诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的适应性反应及相关miRNA筛选的研究

目的 研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选适应性反应相关的微RNA（miRNA）。 方法 将NSCLC A549细胞分为6组,包括 50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy）,前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射,培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射,20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA,并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果 50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%,低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%,且差异均有统计学意义（t=10.680、8.006,均P<0.01）。与20 Gy照射组相比,50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR-193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示,差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示,靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示,miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论 X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选到一组共同差异表达的miRNA,可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用,有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。