灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)氧化损伤的保护作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,CD31免疫荧光法鉴定细胞。以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1),以CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst333258检测细胞氧化损伤引起的凋亡;比色法检测Caspase-3活性变化;电镜检测细胞及细胞器形态学改变。结果灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1)可减轻叔丁基氢过氧化物对HUVECs的氧化损伤,CCK-8检测灵芝多糖给药组,HUVEC细胞存活率增加。Hoechst33258检测给药组细胞凋亡数量较损伤组减少。比色法检测损伤组Caspase-3活性明显增高,给药组较损伤组减少。电镜可见灵芝多糖给药组减轻细胞器的氧化损伤,减少细胞凋亡。结论灵芝多糖肽(GLPP)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤具有保护作用。     

灵芝多糖肽对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响

目的　以膜电位方法进一步研究灵芝多糖肽(GLPP)对自由基损伤的巨噬细胞线粒体的影响。方法　以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂,建立小鼠巨噬细胞体外氧化损伤模型,以罗丹明1 2 3(Rh1 2 3 )为荧光染色剂,以激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位改变。结果　tBOOH氧化剂可损伤线粒体膜,使线粒体膜电位降低,GLPP体内( 1 0 0mg·kg- 1 ig 5d)及体外给药(GLPP 1 0mg·L- 1)均可对抗tBOOH自由基损伤,可使因自由基损伤而降低的巨噬细胞线粒体膜电位恢复。结论　GLPP体内体外给药可减轻自由基损伤,使损伤的线粒体膜电位恢复     

灵芝多糖肽对小鼠巨噬细胞自由基的清除作用

目的 :研究灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞自由基的清除作用。方法 :用四氧嘧啶、叔丁基氢过氧化物 (tBOOH)为氧化剂 ,分别在小鼠体内、体外损伤小鼠腹腔巨噬细胞 ,以DCHF DA为荧光指示剂 ,用共聚焦显微镜观察巨噬细胞的荧光变化 ,并用共聚焦显微镜作时间系列扫描 ,观察巨噬细胞荧光的动态变化。结果 :四氧嘧啶 (75mg·kg-1,iv)、叔丁基氢过氧化物 (7.76× 10 -5mol·L-1)可造成巨噬细胞的氧化损伤 ,使荧光密度增加 ,灵芝多糖肽可减轻其损伤 ,使荧光密度减少。时间系列扫描显示 :随时间改变 ,灵芝多糖肽可减少静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度 ,也可减少由PMA(5 0nmol·L-1)诱导的呼吸爆发状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度。结论 :灵芝多糖肽具有抗氧化作用 ,对小鼠腹腔巨噬细胞自由基有清除作用     

灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对ECV304氧化损伤的保护作用。方法培养ECV304细胞,以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1),以MTT法测细胞存活率;以光镜、电镜检测细胞形态学改变及线粒体损伤;用AnnexinV/PI双标记细胞,流式细胞检测细胞凋亡的百分率。结果灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1)可减少叔丁基氢过氧化物对ECV304的氧化损伤,MTT检测灵芝多糖给药组,ECV304细胞存活率增加。光镜下可见细胞损伤减少,电镜可见灵芝多糖(50mg.L-1,温育24h)减轻细胞器如线粒体氧化损伤,减少细胞凋亡。细胞流式检测表明:对照组、给药组、损伤组总凋亡百分率分别2.24%±0.43%、24%±6.4%(P<0.01)、82.1%±7.9%。结论灵芝多糖肽(GLPP)对ECV304细胞氧化损伤具有保护作用。     

灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的　研究灵芝多糖肽 (GLPP)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响并探讨其作用机制。方法　以Griess法 ,观察GLPP对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)产生的影响 ;以免疫组化法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ,观察GLPP对iNOS的影响。结果　GLPP(2 5～ 2 0 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (3 12 5～ 2 0 0mg·L-1)均可促进巨噬细胞NO释放 ,但对LPS刺激NO的释放影响不大 ;GLPP(10 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (10mg·L-1)均可使巨噬细胞iNOS含量增加。结论　GLPP可增加小鼠腹腔巨噬细胞NO产生 ,其机制可能与其促进巨噬细胞iNOS合成有关。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活性氧自由基的影响

为进一步探讨灵芝多糖 ( GLP)免疫调节作用机理 ,采用激光扫描共聚焦显微镜技术 ,动态监测灵芝多糖均一体 GLB7对小鼠腹腔巨噬细胞 ( M )活性氧自由基含量的影响 .以 GLB7( 2 0 mg· L-1)刺激 M ,发现探针 DCHF- DA的荧光强度明显下降 ,与静息水平相比 ,平均下降 ( 36± 6) % ( n=6,P<0 .0 5) ;同时还能拮抗 PMA引起的 M 呼吸爆发 ,荧光强度下降幅度为 ( 1 9± 4) % ( n=6,P<0 .0 5) .结果证明 :GLB7能减少 M 内活性氧自由基的生成 ,具有清除活性氧的作用 ,这也是 GLB7产生免疫增强和抗衰老作用的重要途径 .     

灵芝多糖肽的抗氧化作用

目的 研究灵芝多糖肽(GLPP)的抗氧化作用及其机制。 方法 Cu²⁺诱导人血清低密度脂蛋白(LDL)氧化及iv四氧嘧啶(75 mg·kg^-1)引发小鼠氧自由基损伤。结果GLPP使LDL氧化修饰减少,氧化产物REM降低。GLPP 50,100,200和400 mg·kg^-1 ip 20 d,使血清和心肌匀浆的丙二醛(MDA)水平下降, 谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)升高,超氧化物歧化酶(SOD)减少,过氧化氢酶(CAT)不变。结论GLPP具有体内外抗氧化作用,其抗氧化作用与清除氧自由基或提高GSHpx水平有关。     

灵芝多糖锗的抗肿瘤及免疫增强作用研究

目的 :研究灵芝多糖锗对实验性肉瘤和腹腔巨噬细胞活性的影响。方法 :利用接种肉瘤S180 腹水型诱导的小鼠肿瘤模型 ,检测对S180 肉瘤的抑制率 ;利用酸性磷酸酶测定法 ,检测对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响。结果 :灵芝多糖锗可抑制小鼠S180 肉瘤的生长 ,能增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性。结论 :灵芝多糖锗具有抗肿瘤及免疫增强活性。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞cGMP含量的影响

目的 :研究灵芝多糖 (GLB7)对巨噬细胞 (MΦ)内cGMP含量的影响 ,为其免疫增强作用机制提供依据。方法 :采用竞争性蛋白结合分析法测定培养的小鼠腹腔MΦ中cGMP含量。结果 :GLB7 能剂量依赖性引起小鼠腹腔中cGMP浓度快速升高 ,10min达峰值 ,之后缓慢下降 ,至30min时基本恢复至原来水平。结论 :GLB7 引起小鼠MΦ内cGMP浓度快速升高 ,可能与其增强小鼠免疫功能有关     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C活性的影响

目的　观察灵芝多糖在体外对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)蛋白激酶C(PKC)活性是否有影响。方法　采用反相离子对高效液相色谱法测定PKC活力。结果　灵芝多糖GLB7( 40mg·L-1)能引起小鼠腹腔MΦ中PKC活性明显升高 ,30min达峰值 ,2h恢复到基础水平 ;GLB7还可引起MΦ中PKC发生质膜转位 ,并拮抗Staurosporine对MΦ中PKC的抑制作用。结论　灵芝多糖的免疫增强作用与其增强PKC活性有关     

灵芝多糖对糖尿病大鼠心肌纤维化的保护作用

目的:研究灵芝多糖对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的保护作用。方法:SD大鼠高脂饮食4周后,注射STZ(30 mg.kg-1)复制2型糖尿病大鼠模型,造模成功后,将大鼠分为正常对照组、糖尿病组、灵芝多糖低、中、高剂量组(分别灌胃给予灵芝多糖200,400,800 mg.kg-1)及小檗碱对照组(灌胃小檗碱30 mg.kg-1)。治疗8周后,测量大鼠空腹血糖,VG染色观察心肌纤维化程度,荧光分光光度计法检测大鼠血清晚期糖基化终末产物(AGE)的含量,碱水解法测定心肌羟脯氨酸含量,胃蛋白酶限制性降解法测定胶原交联程度,并测量心肌和血清中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等氧化应激指标。结果:中高剂量灵芝多糖在降低2型糖尿病大鼠血糖水平的同时,可使VG染色血管周围和间质胶原明显减少,心肌组织中羟脯氨酸含量下降,心肌交联程度得到明显改善,血清中AGE含量降低,心肌和血清中CAT和GSH-PX活力得到显著增强。结论:灵芝多糖可降低2型糖尿病大鼠心肌胶原纤维总量和交联程度,其机制可能与灵芝多糖降低血清AGE含量,增强机体内CAT和GSH-PX活性有关。     

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P<0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P<0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。     

Antitumor and anti-angiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide

AIM: To investigate the antitumor and anti-angiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide (GLPP). METHODS: Antitumor effect of GLPP was observed in tumor-bearing mice in vivo. At the same time,the effects of GLPP on proliferation of tumor cells and human umbilical cord vascular endothelial cell (HUVEC) were detected by MTr assay in vitro. Subsequently, spleen lymphocytes proliferation of nude mice was stimulated by LPS or ConA. To investigate the anti-angiogenic effect of GLPP, GLPP 80 μg per disc and GLPP-treated serum 10μL per disc were added to the chick chorioallantoic membrane (CAM) respectively in vivo. RESULTS: GLPP 50, 100, and 200 mg/kg inhibited growth of Sarcoma 180 in BALB/c mice markedly by 35.2 %, 45.2 %, and 61.9 %,respectively. GLPP which was directly added to the cultured medium did not inhibit PG cell proliferation in vitro;but GLPP-treated serum 50, 100, 200 mg/kg potently inhibited PG cell proliferation by 22.5 %, 26.8 %, and 30.3 %,respectively; and reduced the xenograft (human lung carcinoma cell PG) in BALB/c nude mice greatly in vivo by 55.5 %, 46.0 %, and 46.8 %, respectively. Lymphocytes proliferation of nude mice could be stimulated by LPS 5 mg/L but not by ConA 2.5 mg/L, indicating that GLPP could not promote the T lymphocyte proliferation and neutral red phagocytosis of peritoneal macrophages of nude mice. The CAM assay showed that GLPP and GLPP-treated serum had anti-angiogenic effect. GLPP (1, 10, and 100 mg/L) inhibited HUVEC proliferation in vitro with the inhibitory rate of 9.4 %, 15.6 %, and 40.4 %, respectively. CONCLUSION: GLPP has antitumor and antiangiogenic activity. The anti-angiogenesis of GLPP may be a new mechanism underlying its anti-tumor effects.     

灵芝多糖对体外树突状细胞诱导细胞毒性T-淋巴细胞的调节作用(英文)

目的:研究灵芝多糖(Gl-PS)在抗原提呈阶段对体外培养树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T-淋巴细胞(CTL)功能的调节及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏,并与不同浓度Gl-PS(0.8,3.2,或12.8 mg/L)共培养。成熟DC与脾淋巴细胞共培养诱导P815特异性CTL生成。第5天收集各组悬浮细胞及培养上清,采用乳酸脱氢酶法比较CTL特异性杀伤活性;RT-PCR法测定T扰素γ(IFNγ)及颗粒酶B mRNA在CTL的表达;ELISA或Western blot法检测IFNγ或颗粒酶B蛋白的表达。结果:3种浓度的Gl-PS均可增高培养上清中释放的LDH活性(P<0.01);增加CTL表达IFN7及颗粒酶B mRNA(IFNγ:Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05;颗粒酶B:P<0.01);促进CTL培养上清中IFNγ蛋白生成(P<0.05)以及CTL表达颗粒酶B蛋白(Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05)。结论:Gl-PS可在抗原提呈阶段促进P815肿瘤冻融抗原冲击致敏DC所诱导的特异性CTL的杀伤活性,其机制可能是通过IFNγ及颗粒酶B途径的调节。     

Hypoglycemic effect of Ganoderma lucidum polysaccharides

AIM: To investigate the hypoglycemic effect of Ganoderma lucidum polysaccharides (Gl-PS) in the normal fasted mice and its possible mechanism. METHODS: Normal fasted mice were given a single dose of Gl-PS 25, 50, and 100mg/kg by ip and the serum glucose was measured at 0, 3, and 6h after administration. Gl-PS 100mg/kg were also given by ip and the serum glucose and insulin levels were measured at 0min, 30min, 1h, 3h, 6h, and 12h Pancreatic islets were isolated and incubated with glucose 5.6mmol/L and different concentration of Gl-PS, the insulin content of islets and insulin release were examined. The islets fluorescent intensity of [Ca^2 ]i was also studied with a confocal microscope. Verapamil and egtazic acid were used to testify whether the insulin-releasing effect of Gl-PS was mediated by its ability to raise the Ca^2 influx. RESULTS: Gl-PS dose-dependently lowered the serum glucose levels at 3h and 6h after administration. Gl-PS 100mg/kg raised the circulating insulin levels at 1h after administration. In vitro, Gl-PS had no effect on islets insulin content, but it stimulated the insulin release after incubation with glucose 5.6mmol/L. Confocal microscope showed that Gl-PS 100mg/L had the capacity toraise the [Ca^2 ]i. The insulin-releasing effect of Gl-PS was inhibited by verapamil/egtazic acid. CONCLUSION:Gl-PS possesses the hypoglycemic effect on normal mice; one mechanism is through its insulin-releasing activity due to a facilitation of Ca^2 inflow to the pancreatic β cells.     

微囊藻毒素-LR对小鼠巨噬细胞吞噬功能及活性氧水平的影响

目的观察微囊藻毒素LR(MC-LR)对原代和传代巨噬细胞功能的影响。方法取BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,体外培养液中分别加入终浓度为1,10,100和1000nmol.L-1的MC-LR,同时以巨噬细胞株RAW264.7为对照,分别采用中性红吞噬实验和二氢罗丹明123探针检测实验,测定细胞吞噬活性和细胞内活性氧(ROS)水平。结果MC-LR对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能有浓度依赖的抑制作用。当MC-LR浓度高于10nmol.L-1时,小鼠腹腔巨噬细胞的胞内ROS水平也明显降低。但MC-LR对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞噬功能和细胞内ROS水平均无明显影响。结论MC-LR可抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和ROS水平,原代巨噬细胞对MC-LR的敏感性高于传代细胞RAW264.7。