蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响

目的：研究蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响。方法：新生大鼠颅骨成骨细胞分离培养后，取第4代细胞，以5×10^4／mL接种于100cm^2培养瓶中，常规培养3d后，更换为无血清DMEM培养液，细胞饥饿过夜。然后每瓶分别加入含不同浓度蛇床子素的培养液，每浓度4瓶，连续给药48h和72h。每日通过相差显微镜观察细胞的形态、生长状况及治疗组和对照组之间的差别。提取和鉴定成骨细胞总RNA。结果：在培养液中加入不同浓度的蛇床子素培养48h后，1×10^-7mol／L组OPG、OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义；培养72h后，1×10^-6mol／L组OPG／RANKL、1×10^-7mol／L组OPGmRNA的相对表达量以及OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01，P〈0．05）。结论：蛇床子素能通过OPG—RANKL—RANK系统影响骨重建。     

依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的 研究依普拉芬对体外培养的原代大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响.方法 体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节.结果 与阴性对照组相比, 各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞数量(P＜0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成(P＜0.01),其中10-8～10-5 mol/L作用更为显著.结论 依普拉芬具有促进体外培养成骨细胞增殖、分化的作用.     

成骨生长肽对新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞影响的生化分析

为了研究成骨生长肽在体外对成骨细胞样细胞的保成骨作用。将新生大鼠颅盖骨成肾细胞样在体外培养，实验组在传第二代后加入成骨生长肽１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ），对照组不加。细胞传代两次后，于第四周起，分３、７、１０、１４和２１天收集两组合培养的细胞和细胞液，检测其中的碱性磷酸产、酸性磷酸酶胶原、蛋白糖及钙含量。结果实验组的细胞和培养液中第３、７、１０、１４、２１天碱性磷酸酶显著地高于对照组（Ｐ〈０．０１～０．     

蛇床子素对大鼠的降血脂作用

目的观察蛇床子素对大鼠血脂水平的影响。方法采用去卵巢大鼠和高脂血症模型大鼠，用比色法分别测定连续给予蛇床子素5～20mg／kg12周和20d后的血脂水平。结果在去卵巢大鼠模型上，蛇床子素10mg／kg和20mg／kg，可使血清TG和LDL-C／HDLC比值明显降低，但对血清LDL-C仅有一定的降低作用。在高脂血症大鼠模型上，蛇床子素5～20ing／kg可明显抑制高脂引发的血清TC和TG的升高，而且对血清LDL-C和LDL-C／HDL-C比值的降低作用具有剂量依赖趋势。结论蛇床子素具有明显的降血脂作用，尤其对高脂血症大鼠的作用更为明显。     

香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制.方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达. 结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mol·L-1作用最大(P=0.022);培养12h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24h达高峰,其中10-8mol·L-1有显著性差异(P=0.012),48h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24h 10-8mol·L-1浓度作用强度最大(P=0.038),10-5mol·L-1则呈现抑制作用.结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与.     

FAK-PI3K/AKT信号通路在新生大鼠颅盖骨生长发育过程中作用机制的研究

目的 通过对不同时期的SD大鼠颅盖骨进行检测,探究大鼠颅盖骨的生长特点。方法 选取同窝1、4、7、10、12周SD大鼠颅盖骨(每周3只),使用Real-time PCR和Western blot技术检测颅盖骨中局部粘着斑激酶(FAK)-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的表达情况,并通过相关性分析FAK-PI3K/AKT在颅盖骨生长发育过程中的作用情况。结果 大鼠脑容积的增长与颅盖骨厚度的变化是同步增长;FAK的表达变化与大鼠各经线的变化呈正相关;FAK的表达变化与PI3K/AKT的表达变化呈正相关。结论 FAK的表达变化与大鼠头颅的生长发育规律具有相关性,FAK通过激活PI3K/AKT信号通路在颅盖骨中发挥作用,FAK可能作为颅骨快速生长发育期的标志物,为临床上的颅骨缺损修复治疗中时机的选择提供基础理论依据。     

甲状旁腺激素对成人成骨细胞护骨素和护骨素配体及其相关因子的调节

目的：探讨甲状旁腺激素（PTH）调节骨吸收作用的途径和机制。方法：观察PTH对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子,如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的影响,用RT-PCR法检测OPG,OPGL,TRAIL及M-CSF基因表达情况,用Western blotting分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况。结果：PTH下调HOB细胞中OPG的表达,上调OPGL,M-CSF及TRAIL的表达。结论：PTH通过降低成骨细胞中OPG与OPGL的比值,增加M-CSF和TRAIL的表达,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

蛇床子素的局部麻醉作用

用多种局部麻醉方法，如豚鼠皮丘法、兔眼角膜法、脊蟾蜍足蹼法、蟾蜍椎管麻醉法及离体蟾蜍坐骨神经动作电位测定法证明，２％的蛇床子素溶液有浸润及传导麻醉作用，但无表面麻醉作用；它能显著增强阈下催眠剂量的戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用。其中，豚鼠润麻醉作用能被盐酸肾上腺素所增强；给蟾蜍椎管注射时，脊髓出现先兴奋后抑制现象，可恢复。     

颅盖骨线性骨折的CT表现分析

目的评价颅盖骨线性骨折的CT表现及其临床价值。方法对70例颅盖骨线性骨折患者进行多层螺旋CT检查,将数据在ADW4.1工作站行容积再现、多平面重建、最大密度投影等后处理技术并结合原始图像进行综合分析。结果 70例中颞骨骨折21例,顶骨骨折11例,枕骨骨折15例,额骨骨折23例。骨窗观察见颅盖骨锐利而清晰的线状低密度影,间接征象为窦腔积液与颅内积气,同时伴有硬膜外、硬膜下、脑室内血肿、蛛网膜下隙出血、等复合性损伤表现。42例作保守治疗,28例行手术治疗。结论多层螺旋CT及后处理技术能快速、准确诊断颅盖骨线性骨折及其范围、程度和并发症,为临床治疗提供重要依据。     

致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞功能的影响

目的 研究致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞增殖、分化的作用。方法 经酶消化法从新生兔颅骨中分离成骨细胞,进行成骨细胞的碱性磷酸酶染色及成骨能力的检测。从经铬（Cr^6 ）致敏的新西兰兔外周血分离淋巴细胞并提取其培养上清液（LCM）,并分别观察在无LCM、加未经抗原（Ｃr^6 )刺激的LCM和加经Ｃr^6 刺激的LCM等3种情况下成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌的情况。结果 从兔颅骨分离的细胞碱性磷酸酶染色阳性,在长期培养中能够形成钙化结节。致敏淋巴细胞培养介质抑制成骨细胞的增殖、促进碱性磷酸酶的分泌,抑制骨钙素的产生。经方差分析检验均具有明显的统计学差异。结论 致敏淋巴细胞能够抑制成骨细胞的功能,可导致骨形成障碍。     

新型多级孔生物玻璃对人成骨细胞增殖和分化的促进作用

目的：探讨一种新型的以地中海海绵为模板合成的多级孔生物玻璃（MBG）对人源性成骨样细胞系MG63增殖和分化的影响,阐明该生物活性玻璃的成骨分化作用。方法：扫描电镜观察MBG材料孔架结构;取对数生长期MG63细胞分别给予MBG浸提液（MBG组）、普通生物玻璃（NBG组）和空白培养基（空白对照组）,共培养1、3和5 d。MTT法检测各组MG63细胞的增殖率,酶联免疫法检测MG63细胞中碱性磷酸酶（ALP）的活性,实时定量PCR法检测培养24h时各组MG63细胞中成骨相关基因Sp7mRNA及Runx2mRNA的相对表达水平。结果：扫描电镜下观察,MBG为多孔支培养架结构;培养1、3和5d时MBG组MG63细胞增殖率高于空白对照组和NBG组（P<0.01）;1、3和5d时,MBG组MG63细胞中ALP活性高于空白对照组和NBG组（P<0.01）;培养24h后MBG组MG63细胞中Sp7 mRNA相对表达水平高于（P<0.01）,但Runx2 mRNA相对表达水平与空白对照组和NBG组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：与NBG比较,该新型MBG具有细胞毒性小和可促进成骨细胞分化的优势。     

大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用

【目的】研究大黄酸-雌酮（LC-1）对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞；采取MTT法测定细胞增殖，磷酸苯二钠法（pNPP）测定细胞内外碱性磷酸酶（ALP）活性，研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响，并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3d后，与空白对照组相比：10^-6mol／L LC-1组、10^-7mol／L LC-1组和10^-7mol／L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性（P〈0．05）；大黄酸抑制成骨细胞增殖，其中10^-6mol／L组有明显差异（P〈0．05），同时有增加细胞ALP活性的趋势，但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。     

重组人生长激素作用下成骨细胞细胞周期及细胞骨架改变的体外研究

目的:观察重组人生长激素(rh-gh )对体外成骨细胞(OB)细胞周期及细胞骨架F-actin的影响. 方法:用浓度为10和200 μg/L的重组人生长激素加入大鼠OB培养体系,观察对大鼠OB的细胞周期及细胞骨架的影响. 结果:定量分析表明,在rh-gh 作用下,成骨细胞S期、G2/M期细胞百分比增加,OB的绿色荧光强度、红色荧光强度无显著变化. F-actin纤维呈束状平行排列,荧光染色强,分布均匀. 结论:重组人生长激素对OB的合成代谢有直接影响,但对细胞骨架无显著影响.     

模拟失重对大鼠骨肉瘤成骨样细胞分化相关物质表达的作用

目的 :观察回转器模拟失重对大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS17/ 2 .8)分化相关物质表达的作用 .方法 :对培养的ROS17/ 2 .8细胞采用回转器模拟失重 72h ,同时设 1G对照组 .提取细胞总RNA ,进行反转录PCR ,检测I型胶原 (1链(collagenIα1)和碱性磷酸酶 (ALP)mRNA的表达情况 .同时采用ELISA法测定细胞内I型胶原蛋白的表达量 .结果 :模拟失重 72h后 ,ROS17/ 2 .8细胞内collagenIα1和ALP的基因表达量以及I型胶原蛋白的表达量显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 :回转器模拟失重 72h可使大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS17/ 2 .8)的分化功能降低     

蛇床子素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用研究

目的 探讨蛇床子素对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 经不同浓度蛇床子素处理体外培养的宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,半定量RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度的蛇床子素均可明显抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,增高细胞内ROS水平,降低Bcl-2/Bax的表达比例,且具有一定的剂量依赖性.结论 蛇床子素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并促进细胞凋亡,与升高细胞ROS水平、促进激活促凋亡因子Bax的表达和抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达有关.     

促甲状腺素受体在人成骨细胞上低表达

目的观察人成骨细胞上促甲状腺素受体(TSHR)的表达情况。方法对表达骨碱性磷酸酶(bALP)和骨钙素(OC)的人成骨细胞,用125I耦合促甲状腺素(TSH)和RT-PCR法测定其TSHR表达情况。结果随着传代,各代人成骨细胞较原代细胞分泌bALP和OC逐渐增多,但与125I-TSH亲和力以及TSHRmRNA表达却逐渐下降。结论TSHR在人成骨细胞上低表达,对于并发有骨质疏松症的老年性甲亢患者,血循环中TSH与成骨细胞上的TSHR作用不是调节骨代谢的主要机制。     

雌激素与流体剪切力对成骨细胞增殖和功能的间接影响

目的 :了解雌激素与流体剪切力对体外培养的成骨细胞增殖和功能的间接影响 .方法 :进行新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞原代培养 .选择恒定的雌激素浓度及合适的振荡频率分四种组合方式施加于成骨细胞 ,2 4h后用其培养液培养静止状态下的成骨细胞 ,观察不同时间段细胞增殖和碱性磷酸酶活性的变化 .结果 :经雌激素和机械力影响的条件培养液作用 12h后 ,可促进细胞增殖 (P <0 .0 1) ,该效果持续至 2 4h ,在 2 4h至 72h两因素表现为协同作用 (P <0 .0 1) ;对ALP的活性的影响在 12h之前两因素表现为拮抗作用及抑制作用 (P <0 .0 1) .2 4h后 ,机械力可促进ALP活性升高 ,并持续至 72h .结论 :雌激素和流体剪切力及两者复合作用均可通过旁分泌方式影响细胞的增殖和功能     

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的：观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene,Col2a1）的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素（6．25、12．5、25和50μmol／L）组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结果：第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论：蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。     

蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,首先在乳鼠心肌细胞上诱导出内向整流钾电流和瞬时外向钾电流,然后观察蛇床子素对这2种钾电流的影响。结果蛇床子素以浓度依赖的方式快速可逆地抑制心肌细胞瞬时外向钾电流,抑制的半有效浓度为(101.1±5.2)μmol.L-1,蛇床子素不改变瞬时外向钾通道的激活动力学。蛇床子素对内向整流钾电流有一定的抑制作用,在200μmol.L-1的浓度下抑制(68.2±7.5)%的内向钾电流。结论蛇床子素能够抑制乳鼠心肌细胞钾通道电流,并呈浓度依赖性。