大黄酸对肿瘤坏死因子-α诱导的脐静脉内皮细胞黏附作用影响的观察

目的 观察不同剂量的大黄酸(Rhein)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附作用的影响. 方法 将HUVECs分为单纯HUVECs组、单纯TNF-α 40 ng/ml(TNF-α)组、Rhein100 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein100)组、Rhein 50 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein50)组、Rhein 10 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml (Rhein10)组.采用Western blot和RT-PCR检测HUVECs细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的蛋白和mRNA的水平.采用人单核细胞株(THP-1)和HUVECs的黏附性实验检测内皮细胞的黏附功能. 结果 与TNF-α组比较,Rhein100、Rhein50、Rhein10组ICAM-1蛋白相对表达量下降[(2.88±0.04)vs(1.27±0.32),(1.28±0.17),(1.32±0.25),P＜0.05或P＜ 0.01];Rhein100和Rhein50组ICAM-1 mRNA的水平下降[(2.12±0.24)vs(1.19±0.17),(1.26±0.23),P＜0.05或P＜0.01];在黏附性实验中,Rhein100组HUVECs所黏附的单核细胞数目下降[(1.28±0.07)vs(1.07±0.14),P＜0.01]. 结论 Rhein能抑制TNF-α所诱导的HUVECs的ICAM-1的过度表达,可能是Rhein对HUVECs的保护机制之一.     

JNK信号介导TNF-α对内皮细胞VCAM-1的诱导表达

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α对内皮细胞血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达和分泌的影响,及其可能的细胞内信号途径.方法 用10ng/ml TNF-α与人主动脉内皮细胞(HAEC)共培养不同时间,蛋白印迹法检测细胞VCAM-1蛋白表达和丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2、INK的磷酸化水平,ELISA法测定条件培养液中可溶性VCAM-1(sVCAM-1)含量;分别用MEK-ERK1/2抑制剂PD98059和JNK抑制剂SP600125预处理HAEC 1h,观察TNF-α对VCAM-1表达和分泌的影响.结果 TNF-α以时问依赖方式诱导HAEC VCAM-1蛋白表达,4 h达最大诱导表达,为对照组的(5.80±0.44)倍,条件培养液中sVCAM-1的含量与其蛋白表达呈平行变化;SP600125(而非PD98059)显著抑制上述诱导效应.结论 TNF-α诱导HAEC VCAM-1的表达和分泌至少部分是通过JNK信号介导的.     

组织因子对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的通过观察不同浓度组织因子(TF)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨TF对MCP-1的作用及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,分为对照组及10、100、103、104 ng/L的TF处理组,对照组加入生理盐水,4个处理组分别加入相应浓度的组织因子,分别采用ELLSA法和RT-PCR法检测人脐静脉内皮细胞MCP-1和MCP-1 mRNA的表达。结果 ELLSA和RT-PCR的检测结果显示各组人脐静脉内皮细胞均有MCP-1、MCP-1 mRNA表达,MCP-1和MCP-1 mRNA的表达水平为对照组<10 ng/L组<100 ng/L组<103 ng/L组<104 ng/L组(均P<0.05)。结论 TF呈浓度依赖性的促进人脐静脉内皮细胞MCP-1的表达。     

人参皂甙抑制肿瘤坏死因子α介导的内皮细胞炎症反应

目的 探讨人参皂甙Rb1能否抑制人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子α引起的细胞炎症反应的发生.方法 将细胞分成四组:对照组(不经任何药物处理)、肿瘤坏死因子α组、人参皂甙Rb1组和肿瘤坏死因子α加人参皂甙Rb1组,分别培养16 h.提取各组细胞mRNA,用实时荧光定量PCR和流式细胞仪测定血管细胞黏附分子1的表达水平;用标记上Calcein-AM的人单核细胞检测人脐静脉内皮细胞单分子层的黏附性;用超氧化物阴离子荧光探针DHE在流式细胞仪上测定超氧阴离子产物,并用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化.结果 人参皂甙Rb1预处理能有效阻止肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞黏附分子1 mRNA增高,并减弱由其导致的单核细胞对人脐静脉内皮细胞的黏附性增加.人参皂甙Rb1还能减少肿瘤坏死因子α诱导的超氧阴离子产物增加,并抑制由其引起的线粒体膜电位衰减.结论 人参皂甙Rb1对炎症及心血管疾病有潜在的治疗作用.     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达和黏附功能的影响及其机制

目的探讨糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达和黏附功能的影响及其机制。方法以D-葡萄糖和牛血清白蛋白在37℃条件下制备AGEs。胶原酶法分离HUVECs并加以培养。用流式细胞术测定HUVECs受AGEs干预后VCAM-1表达水平。按Esposito’s法进行HUVECs外周血单核细胞（PBMCs）黏附试验，Chen氏法计算HUVECs—PBMCs黏附率。用[γ-32P]ATP液闪计数技术测定受AGEs干预后HUVECs PKC活性的变化。结果AGEs可明显诱导HUVECs VCAM-1表达，呈剂量、时效依赖关系。HU—VECs—PBMCs黏附率的变化与VCAM-1的表达水平平行。蛋白激酶C（PKC）抑制剂可明显降低AGEs所致的VCAM-1表达增加及HUVECs—PBMCs黏附率增加。HUVECs受AGEs干预后其PKC活性明显升高。结论AGEs能使人血管内皮细胞VCAM-1表达增加和黏附功能增强，其机制是部分通过增加细胞内PKC的活性来实现。     

p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用

目的观察p38信号通路（P38MAPK）在内皮细胞微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法将体外培养的HUVECs随机分组：①EMPs不同时点观察组：用EMPs（终浓度105／m1）分别刺激细胞0、3、6、12、24h;②EMPs不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10^2、10^3、10^4、10^5／ml的EMPs刺激细胞24h;③EMPs＋p38MAPK特异性抑制剂SB203580组：在EMPs（终浓度10^5／ml）刺激前,与终浓度为5μmol／L的SB203580共同孵育30min。用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM—1mRNA的表达。结果EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM—1mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性。p38MAPK特异性拈抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用。结论p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组:正常对照组(5.5mmol/L)、持续高糖组(25mmol/L)、波动高糖组(5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜)。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高(P0.05),呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高(P0.05),呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞细胞黏附分子-1及一氧化氮表达的影响

一氧化氮 (NO)作为一种作用广泛的信息分子 ,具有抑制血小板和单核巨噬细胞的黏附 ,内皮细胞和平滑肌细胞增殖的作用 ,与动脉粥样硬化 (AS)关系密切。已有众多实验表明白细胞和T淋巴细胞黏附到内皮细胞表面 ,接着迁移到内皮下层是AS最早的细胞事件之一 ,在这个过程中细胞间黏附分子 1(ICAM 1)起了很重要的作用。我们于2 0 0 1年 11月至 2 0 0 2年 6月采用脐静脉内皮细胞为实验 ,用氧化修饰低密度脂蛋白 (ox LDL)作用于该细胞 ,了解其对NO、一氧化氮合酶 (NOS)及ICAM 1表达的影响及ox LDL致AS的可能机制。　　一、材料与方法　…     

二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1和VCAM-1表达的影响

目的 观察何首乌二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞株单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1) mRNA表达的影响.方法 在人脐静脉内皮细胞的培养基中加入不同浓度的二苯乙烯苷处理2h再加入3.0 mmol/L同型半胱氨酸作用36 h.Hoechst33342核染色检测细胞核损伤;以RT-qPCR检测不同浓度二苯乙烯苷处理对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达的影响.结果 10 μmol/L浓度以内,二苯乙烯苷预孵育呈浓度依赖性降低3.0 mmol/L同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞核损伤加重,抑制同型半胱氨酸所致MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA的表达升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 二苯乙烯苷具有明显抑制同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达增加的作用.     

Ghrelin通过NF-κB抑制尼古丁诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达

将用于实验的人脐静脉内皮细胞随机分成4组:空白对照组(无血清DMEM培养基),尼古丁组(100nmol/L尼古丁,24 h),Ghrelin组(10 ng/ml Ghrelin 1 h后,加入100 nmol/L尼古丁),PlYTC组(100 ìmol/L PDTC和100 nmol/L尼古丁).Western blot法检测人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达;TransAM NF-êB p50试剂盒检测人脐静脉内皮细胞NF-êB的活化.发现尼古丁可明显诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达,这一作用可被NF-êB抑制剂PDTC阻断.Ghrelin可显著抑制尼古丁对VCAM-1的诱导作用;Ghrelin亦可抑制尼古丁诱导的NF-êB的活化.认为Ghrelin可通过抑制尼古丁诱导的NF-êB活化,抑制尼古丁引起的内皮功能紊乱,从而改善内皮细胞功能.     

ERK1/2信号通路在内皮微粒诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号通路在内皮微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法:体外培养HUVECs,选取生长良好的第4～5代细胞,分为EMPs不同浓度作用组、EMPs不同时间作用组及ERKl/2特异性抑制剂组。应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测ICAM-1和磷酸化ERK1/2蛋白的表达。用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ICAM-1 mRNA的表达。结果:EMPs作用HUVECs后,ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达显著高于对照组,且呈浓度和时间依赖性的关系（均P<0.01）;而ERKl/2特异性抑制剂PD98059对ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达,均有明显的抑制作用（均P<0.01）。结论:EMPs可诱导HUVECs中ICAM-1表达,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

核因子κB反义和诱骗寡核苷酸联合作用对培养人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子1表达的影响

为探讨在人脐静脉内皮细胞中，核因子κB的反义核酸及诱骗性寡核苷酸联合作用对肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞粘附分子1表达的影响，采用培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304，分别和联合应用反义核酸和诱骗性寡核苷酸干预．流式细胞仪检测寡核苷酸转染效率．并用逆转录一聚合酶链反应和流式细胞仪测定其对肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞粘附分子1的表达。结果发现．联合应用反义核酸及诱骗性寡核苷酸，可使肿瘤坏死因子α刺激的人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1的表达明显下调，且下调幅度显著大于反义核酸或诱骗性寡核苷酸的单独作用。由此提示．核因子κB的反义核酸及诱骗性寡核苷酸可显著下调核因子κB调控的与动脉粥样硬化相关的粘附分子的表达，且联合作用效果强于单独作用，可能为核酸干预防治动脉粥样硬化提供新的思路。     

肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察

目的:观察非肌肉肌球蛋白重链ⅡB(nonmuscle myosin heavy chainⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TN-FR1)转位的影响。方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染入HUVECs,筛选获得稳定克隆株。设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,si RNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFα诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR1蛋白含量的变化。结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB si RNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2)∶(0.454 0±0.041 1),P<0.01],也可以明显减少TNFα诱导前[(0.430 6±0.028 9)∶(0.324 8±0.016 7),P<0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]细胞质膜TNFR 1的含量。在转染NMHC-ⅡB si RNA的细胞,TNFα的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]。结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用,但是可能并不是惟一的或决定性的因素。     

P38信号通路对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨P38信号通路(P38MAPK)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的关系，以及P38MAPK在糖尿病(DM)动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法 分别以高葡萄糖(HG)、糖基化终产物(AGEs)、高胰岛素(HIns)和过氧化氢(H2O2)孵育人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，观察HUVECs P38MAPK的蛋白表达和MCP-1 mRNA表达；以P38MAPK特异抑制剂SB203580预处理，再用以上4种刺激因素孵育HUVECs，观察MCP-1 mRNA在HUVECs的表达。结果 HG、AGEs、HIns和H2O2均可独立激活P38MAPK，使磷酸化P38MAPK蛋白表达量及MCP-1 mRNA表达量增加；SB203580预处理后，MCP-1 mRNA表达被明显抑制。结论 P38MAPK调控MCP-1的表达，表明P38MAPK可能是DM致AS发生的始动信号之一。     

奇智方对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响

目的采用人脐静脉内皮细胞（HUVEC-304）进行细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其转录水平（ICAM-1mRNA）表达的离体实验研究,观察奇智方对血管内皮功能的作用。方法应用ELISA方法检测ICAM-1;用原位杂交的方法检测ICAM-1 mRNA。结果中药治疗组和阳性对照组与生理盐水组比较,ICAM-1蛋白分子表达均有统计学意义（P〈0．01）;中药治疗组和阳性对照组均能明显使缺氧／复氧后细胞ICAM-1 mRNA下调,与缺氧组比较有统计学意义（P〈0．01）。结论奇智方抑制缺氧／复氧后血管内皮细胞表达ICAM-1和ICAM-1 mRNA,从而保护血管内皮细胞的屏障完整和功能正常,可能是其免疫抑制机理的分子基础之一。     

氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞PECAM-1基因转录的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）对人血管内皮细胞血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用铜离子氧化24h制备Ox-LDL。取HUVEC以100mg／LOx-LDL分别孵育0．5、1、1．5、2h,另取HUVEC分别用100 mg／LLDL和0、50、100、200mg／LOx-LDL孵育1．5h．均采用RT-PCR技术检测细胞中PECAM-1基因的转录水平。结果Ox-LDL除正常LDL所含成分外．还含有胆固醇亚油酸酯的过氧化特异斑点X和甲基脂肪酸。Ox-LDL作用0．5h时PECAM-1 mRNA表达水平最低;随时间延长,表达水平逐渐升高,与0．5h时比较,P〈0．05;至2h时．PECAM-1表达水平有所回落,但与0．5h时比较,P-〈0．05。0、50、100、200mg／LOx-LDL作用1．5h,PECAM-1表达水平逐渐升高,以100mg／L时表达水平最高。100mg／LLDL作用1.5h时,PECAM-1表达水平无明显变化。结论Ox-LDL可在转录水平上调血管内皮细胞PECAM-1基因表达．从而促进血管内皮细胞高水平表达PECAM-1。     

硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 观察硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响方法分别用高葡萄糖、糖基化终末产物，高胰岛素和过氧化氢孵育人脐静脉内皮细胞ECV-304；在先加入100nmol／L硒后，再给予以上4种因素．分别检测人脐静脉内皮细胞ECV0304MCP-1mRNA的表达并比较。结果 4种因素均可作为独立因素，导致人脐静脉内皮细胞ECV304MCP-1mRNA表达量增加：硒能抑制4种因素所致的MCP-1mRNA表达。结论 硒抑制MCP-1 mRNA在人脐静脉内皮细胞ECV-304中的表达。     

益肾活血提取液对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40、MMP-9及VCAM-1表达的影响

目的 观察益肾活血提取液对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响.方法 原代培养HUVECs,取3～5代细胞用于试验,提取细胞RNA及蛋白.采用实时定量RT-PCR检测HUVECs VCAM-1 mRNA表达,采用Western印迹法观察HUVECs CD40及MMP-9的蛋白表达变化.结果 刺激组CD40、MMP-9及VCAM-1的表达较空白组明显升高(1.48±0.34 vs 0.45±0.16;1.54±0.16 vs 0.62±0.12, 12.82±0.16 vs 1.00±0.01,P均<0.001 ),大、中、小剂量的益肾活血提取液可以不同程度地抑制oxLDL诱导的HUVECs、CD40、MMP-9及VCAM-1的高表达.结论 益肾活血提取液具有改善内皮细胞功能的作用,其机制与抑制oxLDL诱导的HUVECs CD40、MMP-9及VCAM-1的高表达有关.     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道。目的探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制。方法将 HUVEC 随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α+PDTC 干预组(PI)TC 系核因子 kB 的特异性活性抑制剂),TNF-α+NS398干预组(NS398是 COX-2的特异性活性抑制剂)。TNF-α+阿司匹林0.02 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林0.2 mol/L,干预组,TNF-α+阿司匹林1 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林5 mol/L 干预组,共8组,每组3例。分别用 RT-PCR 法和 Western blot 法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子 kB p65(NF-kBp65)的 mRNA 水平和蛋白表达。结果 1)4μg/L TNF-α使 HUVEC 的分形趋化因子 mRNA 水平和蛋白表达明显增加(P<0.01)。2)阿司匹林浓度依赖性抑制 TNF-α诱导的 HUV...     

组织因子对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α的影响

目的探讨组织因子能否诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,分组加入不同浓度的组织因子,采用酶联免疫吸附测定法巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA的表达,并用单核细胞粘附率试验检测单核细胞粘附。结果组织因子呈剂量依赖性增加内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白,0.01、0.10、1.00及10.00 nmol/L组织因子分别使巨噬细胞炎性蛋白1α表达明显增加127%±14%、151%±11%、196%±13%及267%±43%。同时观察到组织因子促使单核细胞粘附率增加,并且粘附率与加入的组织因子浓度呈正相关。逆转录聚合酶链反应发现组织因子能促使巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA表达明显增加。结论组织因子能诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α增强,这可能与组织因子致动脉粥样硬化作用机制有关。