四种内生真菌对金线莲无菌苗生长及多糖含量的影响

 目的　研究离体培养时 4种菌根真菌对金线莲生长及多糖含量的影响。方法　纯培养的菌根真菌分别与金线莲无菌苗共生培养 ,观测对金线莲生长和多糖含量的影响。结果　与对照相比 ,接菌根真菌MF1 5菌可使每瓶金线莲干重提高29.3%(P <0.05) ,MF23可使其提高49.5 %(P <0.01);MF18显著增加了金线莲气生根数量达42.9%(P <0.01);4种真菌对金线莲基生根的数量均无显著影响 ;MF15,MF18,MF23和MF24种真菌均可提高金线莲的多糖含量,分别提高93.5%,100%,89.7%和55.1%。结论在离体培养条件下,选择适当的真菌与金线莲共生培养能促进金线莲的生长 ,提高多糖的含量。     

金钗石斛生物碱和水溶性多糖的累积规律

目的 探索金钗石斛体内生物碱和水溶性多糖累积规律.方法 生物碱、水溶性多糖分别采用氯仿、乙醇提取并测定其吸光度.结果 生物碱含量以思茅产最高,罗甸产最低,岩生基质高于树生基质,野外栽培和温室载培对金钗石斛生物碱含量无影响;水溶性多糖含量以赤水产最高,合江产最低,树生基质高于岩生基质,野外栽培高于温室栽培.结论 不同产地、不同生长条件下金钗石斛生物碱和水溶性多糖累积规律存在差异.     

自动电位滴定法测定金钗石斛药材中总生物碱的含量

目的:测定金钗石斛药材中总生物碱的含量。方法:药材以90%乙醇回流提取3次,醇提液浓缩至无醇味后以3%盐酸溶解,酸水溶液经强酸型阳离子交换树脂柱吸附,以去离子水洗脱至中性后,收集5%氨水-50%乙醇液洗脱流份(以生物碱的检识反应判定终点)并浓缩至干,即得含量测定用供试品。供试品在冰醋酸中以高氯酸滴定液(0.1mol/L)自动滴定,由此以石斛碱(C16H25NO2)为基准物计算金钗石斛中生物碱的含量(每1mL高氯酸滴定液相当于石斛碱26.3mg)。结果:三个批次金钗石斛药材的总生物碱含量测定结果分别为0.85%、0.63%、1.03%。结论:经方法学考察,该含量测定方法具有良好的专属性和灵敏度,检测结果稳定可靠,可用于金钗石斛药材中总生物碱的定量分析。     

铁皮石斛及金钗石斛菌根真菌的分离及其生物活性测定

目的 :对我国云南、四川等地采集的野生铁皮石斛Dendrobiumcandidum和金钗石斛D .nobile根中的内生真菌进行分离并测定其生物活性。方法 :采用平板分离法分离内生真菌 ;所获得真菌分别与铁皮石斛种子、铁皮石斛及金钗石斛无菌苗共培养测定其生物活性。结果 :分离获得内生真菌 2 5种 ,主要属于担子菌Basidiomy cotina和半知菌Deuteromycotina;生物活性测定结果表明 ,其中 5种真菌可促进铁皮石斛种子萌发 ;7种真菌可与铁皮石斛和金钗石斛幼苗形成共生关系 ,但仅有 3种真菌对幼菌有促生作用。结论 :分离和筛选促进石斛生长发育的适宜菌根真菌 ,是菌根技术应用于石斛生产的关键问题之一。     

不同产地金钗石斛多糖的含量比较研究

目的:测定不同产地金钗石斛样品中的多糖含量,为金钗石斛的应用提供科学依据.方法:以多糖含量为指标,采用葡萄糖作标准品,应用苯酚-硫酸比色法测定各产地金钗石斛中的多糖含量.结果:不同产地的金钗石斛多糖含量有一定的差异,其中以贵州习水样品的多糖含量最高,海南东方霸王岭样品的多糖含量最低.结论:各地区生长环境对金钗石斛多糖的积累可能有一定影响.苯酚-硫酸比色法可以用来测定金钗石斛中多糖的含量.     

金钗石斛多糖含量测定条件和提取工艺的优化

利用正交试验选取金钗石斛多糖含量测定的最优条件及金钗石斛多糖的最佳提取工艺。结果表明,金钗石斛多糖含量测定的最优条件是加入苯酚1.5mL,浓硫酸6mL,反应时间30m in。金钗石斛多糖最佳提取工艺的条件是提取温度为85℃,提取次数为3次,乙醇终浓度为75%。本研究为金钗石斛多糖的提取和含量测定的条件提供了参考,为金钗石斛的进一步研究提供了基础。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法 用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果 将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L-1（诱导子·培养基-1）的剂量（高剂量）加入培养基时, 铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5.63%）,与对照（3.16%）相比提高了78.2%。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5.92%）,与平均值（4.59%）相比提高了29.0%。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

金钗石斛中生物碱与多糖含量的测定

目的测定金钗石斛中生物碱与多糖的含有量。方法氨水、乙酸乙酯提取生物碱后,加水提取多糖。HPLC法测定石斛碱含有量,酸性染料比色法测定总生物碱含有量,苯酚-硫酸法测定多糖含有量。结果石斛碱在0.722 8~9.035 0μg范围内线性关系良好(r=1),平均加样回收率98.7%,RSD 0.99%。总生物碱在1.21~6.05μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率99.7%,RSD 1.2%。多糖在21.24~84.96μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均加样回收率98.9%,RSD 1.7%。结论该方法准确环保,重复性良好,可用于金钗石斛的质量控制。     

金钗石斛水溶性多糖与碱溶性多糖对Hela细胞增殖的影响

目的比较金钗石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖成分对Hela细胞增殖的抑制作用。方法应用总SOD活性检测试剂盒(WST法)对纯化金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖进行测定。结果金钗石斛水溶性多糖在质量浓度较高(≥0.40mg·mL-1)时,对Hela细胞的生长有抑制作用,此作用随着质量浓度的增高而增强。而碱溶性多糖在质量浓度较低(≤0.70mg·mL-1)时,对Hela细胞的生长有抑制作用,此作用在质量浓度为0.10mg·mL-1时达到最大。结论金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖在体外对Hela细胞有一定的抑制作用,而两种多糖的最强抑制质量浓度不同。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L^-1（诱导子·培养基。）的剂量（高剂量）加入培养基时,铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5．63％）,与对照（3．16％）相比提高了78．2％。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5．92％）,与平均值（4．59％）相比提高了29．0％。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

金钗石斛中的倍半萜类化合物

目的研究金钗石斛茎60%乙醇提取物的化学成分。方法运用多种色谱学方法对金钗石斛茎60%乙醇提取物的化学成分进行分离,并根据光谱数据鉴定化合物的结构。结果从该植物中分离得到8个倍半萜类化合物,分别鉴定为金钗石斛素J(dendronobilin J,Ⅰ)、dendrobane A(Ⅱ)、dendrodensiflorol(Ⅲ)、bullatantirol(Ⅳ)、dendrobiumaneA(Ⅴ)、6α,10,12-trihydroxypicrotoxane(Ⅵ)、10,12-dihydroxypicrotoxane(Ⅶ)和10β,13,14-trihy-droxyalloaromadendrane(Ⅷ)。结论化合物Ⅰ为新化合物,命名为金钗石斛素J。化合物Ⅳ为首次报道从石斛属植物中分离得到,化合物Ⅲ和Ⅴ为首次报道从金钗石斛中分离得到。     

内生真菌对铁皮石斛多糖和生物碱合成关键酶基因表达的影响

目的分析内生真菌菌株GXRz2、GXRz3和GXRz10对铁皮石斛多糖含量和多糖合成途径关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)基因表达以及生物碱含量和生物碱合成途径中关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,HMGR)、法尼基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthase,FPS)基因表达的影响。方法铁皮石斛幼苗施加内生真菌菌液,采用分光光度法测定铁皮石斛多糖和生物碱含量。以18 S rRNA为内参照基因,荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测多糖、生物碱关键酶基因表达的变化。结果铁皮石斛活性成分多糖含量较高,主要集中于茎,根中最低;而生物碱含量较低,主要存在于叶,根中最低,3株内生真菌处理均能在一定程度上促进铁皮石斛多糖及生物碱的积累。qRT-PCR技术检测UGPase、HMGR和FPS基因在不同内生真菌处理下的相对表达,结果显示,内生真菌GXRz3和GXRz10均可显著提高铁皮石斛UGPase、HMGR和FPS基因的表达量;其中,多糖合成途径中,UGPase基因在茎中的相对表达量最高,叶次之,根中最少;生物碱合成途径中,HMGR基因在茎中的相对表达量最高,叶次之,根中最少,而FPS基因在叶中的相对表达量最高,茎次之,根中最少。结论内生真菌可能通过调控UGPase的表达,影响多糖的合成,结合多糖积累情况,推测UGPase可能是铁皮石斛多糖合成途径中的关键酶;内生真菌可能通过调控HMGR、FPS的表达,影响生物碱的合成,而结合生物碱积累情况,推测FPS可能是生物碱合成途径中的关键酶。     

铁皮石斛内生真菌对宿主组培苗生长与代谢成分的影响

为揭示初筛所得7株活树附生铁皮石斛内生真菌对宿主生长及代谢成分的影响,该研究观察测量了接菌与未接菌铁皮石斛组培苗形态特征与农艺性状,采用苯酚-硫酸法与热浸法测定组培苗茎总多糖含量与浸出物含量,柱前衍生HPLC分析茎多糖中单糖组成,HPLC分析茎醇溶性成分。研究表明,供试7个菌株可改变铁皮石斛组培苗茎节变紫进程,并影响茎糖类及醇溶性成分组成及含量积累,除DO34外均能促进组培苗生长与提高多糖含量,除DO12外均能促进甘露糖含量积累,DO18,DO19,DO120可促进醇溶性浸出物含量积累,综合生长及代谢成分多项指标筛选出DO14,DO18,DO19与DO120 4个优良菌株,为铁皮石斛内生真菌和宿主相互作用机制研究与微生物工程研究提供了菌种材料与研究基础。     

不同内生真菌对齿瓣石斛幼苗生长的效应

石斛属植物根部存在大量功能未知的内生真菌,从中筛选获得生长阶段有效共生真菌是药用石斛仿生态栽培深入开展的关键。该研究利用单菌丝团分离法从齿瓣石斛植株根部分离得到的6株内生真菌,与齿瓣石斛无菌播种幼苗进行共生培养实验。培养90 d以后,与对照组相比,FDd S-1,FDd S-2,FDd S-4菌株处理对幼苗产生明显致死或致病作用,而接种FDd S-5,FDd S-9,FDd S-12菌株处理的齿瓣石斛幼苗则健康生长,并表现出不同的生长效应,其中,FDd S-5菌株对幼苗的株高、鲜重、干重、茎粗和根数都有显著的促进作用,FDd S-9菌株仅对幼苗的株高有显著促进作用,而FDd S-12菌株则对齿瓣石斛幼苗的生长产生抑制作用。显微观察发现FDd S-5菌株处理的幼苗根部皮层形成菌丝团共生结构,可以判定FDd S-5为齿瓣石斛的菌根真菌。经分子鉴定,菌株FDd S-5和FDd S-9分别和蜡壳菌属Sebacina的2种真菌相似度最高。将FDd S-5菌株应用于齿瓣石斛的仿生态栽培,可望能有效的促进齿瓣石斛幼苗生长和缩短幼苗生长周期,研究结果为齿瓣石斛的野外回归和人工栽培提供了技术支撑。     

温度对金钗石斛生长及代谢的影响

目的研究温度对一年生和两年生金钗石斛生长和生理代谢的影响。方法设置4、15、25、35、45℃5个温度梯度,人工气候箱培养,观察一年生和两年生金钗石斛生长及生理代谢指标的变化情况。结果 25℃培养下,金钗石斛株高增长量最大,其叶片和根系中丙二醛、可溶性糖和游离脯氨酸量均最低,且随处理时间的延长并无显著变化。结论 25℃是一年生和两年生金钗石斛生长的最佳温度。     

基于多糖和黄酮类成分的铁皮石斛优良内生真菌筛选

为了揭示铁皮石斛内生真菌与功效成分的关系,该研究利用HPLC和紫外分光光度法测定21种铁皮石斛内生真菌菌丝及发酵液提取物中糖类和黄酮类成分。结果表明:21个供试菌株发酵产物乙酸乙酯提取物中均可检测到黄酮类成分,对比色谱保留时间和紫外光谱特征,发现DO49可产柚皮素,DO23,DO81,DO83可产芦丁;21个供试菌株发酵产物水提取物中均检测到多糖,但不同菌株单糖的组成存在差异,参照单糖种类以及甘露糖/葡萄糖的峰面积比,筛选与铁皮石斛多糖相关的优良菌株DO23,DO26,DO81,DO54,DO55,DO83。综合糖类和黄酮类两类成分,筛选出优良菌株DO23,DO81,DO83,既能产生与铁皮石斛相同的黄酮成分,又能产生单糖组分与铁皮石斛相近的多糖。     

石斛对胃酸分泌及血清胃泌素、血浆生长抑素浓度的影响

选择慢性浅表性胃炎患者,经胃管注入石斛煎剂或蒸馏水后,观察胃排酸量及血中胃泌素、生长抑素的变化。结果表明:注入石斛后胃酸及血清胃泌素浓度明显升高(P<0.01),血浆生长抑素浓度无明显变化(P>0.05)。     

不同栽培模式铁皮石斛可培养内生真菌菌群结构、多样性及分布规律

目的 研究不同栽培模式下,铁皮石斛Dendrobium officinale可培养内生真菌的菌群结构、多样性差异及分布规律。方法 采用形态学和分子生物学技术,对3种栽培模式(石壁附生、断木附生、大棚种植)铁皮石斛内生真菌进行分离、纯化与鉴定,分析其菌群结构与分布规律。结果 共分离得到内生真菌2023株,划分为152个形态型,经分子鉴定后确定为29个分类单元,归属到真菌界2个门3个纲11个目15个科18个属;不同栽培模式铁皮石斛内生真菌菌群结构和多样性存在差异,其中刺盘孢属Colletotrichum、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis、耙齿菌属Irpex、隔孢伏革菌属Peniophora为3种栽培模式共有属;石壁附生铁皮石斛内生真菌多样性最高,断木附生次之,大棚种植最低。茎鲜质量、生物量与叶点霉属Phyllosticta sp.、刺盘孢属Colletotrichum sp.、镰刀菌属Fusarium sp.、隔孢伏革菌属Peniophora sp.之间存在显著正相关,与Hypoxylon sp.之间存在显著负相关。结论 丰富了铁皮石斛内生真菌资源,为内生真菌次生代谢产物及其活性研...     

铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究

目的分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株。方法利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测。结果从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属。抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和Hep G2细胞具有不同程度的抑制作用。结论铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础。