miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探究miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖、凋亡的作用及相关机制。方法取SDP级健康雄性SD大鼠作为实验对象,取血管平滑肌细胞(VSMC)消化离心后,转染50nmol/L miRNA-146a反义寡核苷酸、错义链和同等剂量磷酸盐缓冲液(PBS),进行对照比较。结果实验组细胞在转染后48h内VSMC的数目和吸光度值均低于其他两组,细胞凋亡率明显高于其他两组,核因子κBp65、PCNA的表达水平低于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论miRNA-146a可促进VSMC的增殖,抑制细胞凋亡的进行,这一作用机制与核因子κBp65、PCNA表达水平增高有关。     

血管平滑肌细胞增殖及分泌内皮素水平与氯沙坦和依拉普利的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ AT1受体阻滞剂氯沙坦及转换酶抑制剂依拉普利对培养的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及对血管平滑肌细胞分泌内皮素水平的影响。方法：实验于2004-03／11在华中科技大学生命学院生物物理与生物化学研究所实验室及武汉市七医院检验科完成。取大白鼠腹主动脉平滑肌细胞，用贴块法进行血管平滑肌细胞原代培养，进行消化传代后,取生长状态良好的3-6代血管平滑肌细胞，分别用含0．1，1．0，10，100μmol／l。不同浓度的氯沙坦（氯沙坦组）和依拉普利（依拉普利组）的培养液培养，测定细胞倍增时间（T1=t[log2／（logN1-logN0）]，TD：细胞倍增时间，t：培养时间，No：接种后的细胞数，M：培养t小时后的细胞数），进行细胞增殖核抗原免疫组织化学检测，并计算增殖指数（增殖指数=增殖细胞核抗原阳性细胞核个数／400）。用均相竞争放射免疫分析法测定血管平滑肌细胞上清液内皮素-1的含量。 结果：①培养的血管平滑肌细胞倍增时间：随氯沙坦和依拉普利浓度的逐渐增加，血管平滑肌细胞倍增时间逐渐延长（P〈0．01），两组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②增殖指数：氯沙坦组和依拉普利组增殖指数均显著降低（P〈0．05或P〈0．01），且呈剂量依赖性，两组间比较差异无显著性意义（P〉0．05）。③培养的血管平滑肌细胞上清液内皮素-1的含量：氯沙坦组和依拉普利组在一定剂量范围内（氯沙坦组0．1～100μmol／L，依拉普利组1．0～100μmol／L）内皮素水平显著降低（P〈0．05或P〈0．01），两组之间比较，氯沙坦组显著低于依拉普利组（P〈0．05）。 结论：血管紧张素ⅡAT1受体抑制氯沙坦与血管紧张素转换酶抑制剂依拉普利均能有效抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖，两者作用差异无显者性，氯沙坦和依拉普利均能有效降低血管平滑肌细胞分泌内皮素水平，前者作用更显著。     

川芎嗪干预钝性肺挫伤急性期大鼠肺组织细胞的凋亡

背景：急性胸部撞击后所致的肺挫伤（钝性肺挫伤）常引起呼吸功能异常和继发性炎性反应,并参与全身炎性反应综合征和多器官功能障碍综合征,其发病原因及致病机制亟待明确。目的：观察胸部撞击所致钝性肺挫伤急性期细胞凋亡的变化及其川芎嗪对其的影响。方法：健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、川芎嗪治疗组,后两组制备胸部撞击伤模型,川芎嗪治疗组建模后立即腹腔注射川芎嗪80mg／kg1次。在创伤发生后1,2,3h观察肺组织病理形态学及细胞凋亡的改变、检测肺水肿程度和肺血管通透性改变,免疫组织化学检测肺组织Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达及血液中肿瘤坏死因子α水平变化。结果与结论：模型组肿瘤坏死因子α水平在创伤后1h即显著增加,创伤后2h及3h间急剧增加（P〈0．05）;创伤后2h及3h肺组织细胞凋亡指数及肺组织损伤程度显著增高（均P〈0．05）;肺血管通透性及肺水肿程度增加（P〈0．05）;Caspase-3表达显著增高（P〈0．05）,Bcl-2／Bax比值显著降低（P〈0．05）。川芎嗪治疗组在相应时间点相对于模型组肿瘤坏死因子α水平显著降低（P〈0．05）,肺组织内细胞凋亡指数及肺组织损伤程度降低（P〈0．05）,肺血管通透性及肺水肿程度减轻（P〈0．05）;Caspase-3表达下降（P〈0．05）,Bcl-2／Bax比值增加（P〈0．01）。结果提示,川芎嗪可通过抑制肿瘤坏死因子CI表达,下调Caspase-3的表达并提高Bcl-2／Bax的比值,以降低胸部撞击所致肺组织急性期的异常凋亡并减轻胸部撞击所致急性期肺挫伤。     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）可抑制血管内皮细胞凋亡。目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组（转染pcDNA3.1）、过氧化氢组（转染pcDNA3.1＋H2O2）和bFGF转染＋过氧化氢组（转染pcDNA3.1-bFGF-GFP＋H2O2）,流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加（P〈0.01）,而bFGF转染＋过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低（P〈0.01）。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制

背景:微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道。目的:观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:采用脂质体2000将50nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照。结果与结论:微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P<0.01)、凋亡增多(P<0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P<0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P<0.05)。说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对移植人工血管内膜增生的作用

背景：平滑肌细胞增殖移行和血小板激活导致血栓形成是移植皿管再狭窄的主要原因，一氧化氮可以抑制上述生物反应，但内皮型一氧化氮合酶基因转染是否可以抑制种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生还未得到证实。 目的：拟进一步观察内皮型一氧化氮合酶基因转染对种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生的影响。 设计、时间及地点：重复观察测量，于2006-04／2007-05在西安交通大学医学院中心实验室及分子生物学实验室完成。 材料：1月龄新西兰大白兔1只，用来获取平滑肌细胞。成年新西兰大白兔18只．随机分成3组，正常对照组植入未转染的人工血管．LacZ转染组植入种植转染lacZ的平滑肌细胞的人工血管，内皮型一氧化氮合酶转染组植入种植内皮型一氧化氮合酶的平滑肌细胞的人工血管。6只/组。 方法：构建含有报道基因lacZ和内皮型一氧化氮合酶基因的假型反转录病毒载体小鼠白血病病毒/疱疹性口炎病毒G糖蛋白，并转染平滑肌细胞。将转染了基因的细胞种植在人工血管上，并用血管旁路移植的方法植入兔腹主动脉。 主要观察指标：瓜氨酸法检测细胞培养上清中一氧化氮含量。移植血管内膜X-gal染色观察，种植的平滑肌细胞为蓝色，而内源性细胞为红色。显微镜下测量血管内膜增生厚度。 结果：18只兔均进入结果分析。内皮型一氧化氮合酶转染组一氧化氮含量明显高于正常对照组（P〈0．05）。转染lacZ基因的平滑肌细胞经X-gal染色呈蓝色。血管平滑肌细胞植入30d，各组内膜厚度基本相似（P〉0．05）：植入100d．正常对照组与内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度基本相似（P〉0．05），两组明显均低于lacZ转染组（P〈0．05）。 结论：内皮型一氧化氮合酶基因转染可抑制种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生。     

siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的研究hTERT—siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达，应用细胞直接计数法和流式细胞术（FCM）检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使用浓度为50nm、Lipo转染浓度为3μl／2ml转染体积和hTERT沉默效率为100％的条件下，转染hTERT—siRNA24h后，细胞生长已明显减慢，抑制细胞增殖率为26．39％（P〈0．05），第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46．77％、70．61％、84．71％和85．99％（P〈0．001）。随着转染细胞按常规培养时间的延长，早期凋亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显；活性细胞明显减少（P〈0．001），而损伤细胞明显增多（P〈0．001），以6h后明显；死亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显。siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异（P〈0．001）。G0-G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），以24h后明显；G2～M期细胞明显减少（P〈0．01），以48h后明显；晚期凋亡细胞增多（P〈0．05），以48h后明显。结论hTERT—siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长，使较多的细胞停留在G0～G1期，而进入G2～M期和S期的细胞减少，可促进细胞凋亡。     

RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

锌指蛋白A20是近年来细胞内源性保护机制研究的新靶点,目前研究表明锌指蛋白A20抑制肿瘤坏死因子,脂多糖等多种炎性细胞因子诱导核因子κB信号通路激活所引起的血管平滑肌细胞增殖,但有关A20抗细胞氧化损伤方面的影响报道甚少。目的：观察锌指蛋白A20基因干扰对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞核中核因子κB表达的影响及可能的分子生物学机制。设计、时间及地点：随机对照实验,于2007—03／200806在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成。材料：体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞,构建针对Genbank中人A20的基因序列,采用脂质体Lipofectamine^TM2000介导80pmol siRNA,6μL转染。方法：将培养的第4代人脐动脉血管平滑肌细胞随机分6组,①空白组：培养基培养,未给与任何干预。②A20siRNA组：转染A20siRNA24h。③scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA24h。④H2O2组：H2O2持续刺激6h。⑤H2O2＋A20siRNA组：转染A20siRNA24h后H2O2持续刺激6h。⑥H2O2＋scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA24h后H2O2持续刺激6h。主要观察指标：以RT—PCR,Western-blotting检测A20基因表达变化,以四甲基偶氮唑蓝方法测定细胞增殖活性,以流式细胞技术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化,以Westem—blotting检测细胞核中核因子κBp65的蛋白含量表达。结果：H2O2组细胞增殖率明显高于空白组,但低于H202＋A2O2＋siRNA组（P〈0．05）。H2O2组S期、G2／M期构成百分比,增殖指数均较空白组明显升高,然而较H2O2＋A20siRNA组明显降低（P〈0．05）,空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少（P〈0.05）：H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2＋A20siRNA组（P〈0．05）干扰效率大约55％。细胞核中核因子KBp65有少量表达：A20siRNA干扰后核因子KBp65含量明显增加;H2O2刺激后核因子KBp65表达含量显著增加但明显低于H2O2＋A20siRNA组（P〈0．05）。结论：A20基因可抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞的增殖,其分子机制可能通过其负反馈抑制了核因子κB介导的信号转导途径。     

γ-射线诱导Jurkat细胞凋亡过程中催乳素对Bcl-2及Bax表达的调节

背景：国内外文献表明．催乳素可通过调节细胞内凋亡相关蛋白的表达促进免疫细胞增殖并抑制细胞凋亡。目的：拟验证催乳素是否能通过调节T细胞Bax和Bcl-2的表达来影响Jurkat细胞凋亡。设计、时间及地点：以细胞为对象的对比观察实验，于2006—07／2007—05在新乡医学院免疫学实验室完成。材料：人白血病T细胞株Jurkat细胞为上海生工产品，人催乳素为sigma公司产品。方法：以10Gyγ-射线照射Jurkat细胞建立细胞凋亡模型。在射线照射前30min内，于模型中分别加入20μg/L．300μg/L和1000μg／L的人催乳素进行干预，同时设不含人催乳素的对照组，以及不进行辐射处理且不加催乳素的正常组。于辐射后的0，24，48h收集细胞。主要观察指标：以四甲基偶氮唑盐法检测Jurkat细胞的增殖情况；以流式技术检测细胞凋亡情况；以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞凋亡DNA：以Western Blot法检测Jurkat细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果：①在γ射线处理后24和48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg/L催乳素组和正常组的细胞数量明显增多（P〈0．01）。②在细胞经Y-射线处理后48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg／L催乳素组和正常组细胞凋亡率显著降低（P〈0．05）。③在γ-射线处理后的24和48h，与对照组比较，各质量浓度催乳素组Bcl-2／β-actin灰度比值均明显升高（P〈0．01）；300μg/L和1000μg/L催乳素组Bax／β-actin灰度比值明显降低（P〈0．01）。结论：在γ-射线诱导的Jurkat细胞凋亡过程中，催乳素可通过提高Bcl-2的表达并下凋Bax的表达，来抑制Jurkat细胞凋亡。     

p27和p57蛋白在血小板源生长因子BB刺激下血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的：观察不同剂量的血小板源生长因子BB刺激对血管平滑肌细胞生长率的影响及血管平滑肌细胞不同增殖程度下p27和p57蛋白表达量的变化。方法：实验于1998-09／2000-05在南方医科大学附属南方医院心内科实验室完成。①选用七八周雄性SD大鼠80只，体外分离SD大鼠主动脉中层平滑肌，贴壁法培养平滑肌细胞，选用2～4代培养的细胞。②胰酶消化的血管平滑肌细胞，浓度为1&;#215;10^8L^-1，分别接种于6孔板上，无血清的培养基静止48h，分别加入血小板源生长因子BB10和20μg／L，无血清的培养基为对照组，分别在刺激1，3，5d后，计算不同剂量的血小板源生长因子BB刺激下的血管平滑肌细胞数量。每组重复4次，取平均值。③在用血小板源生长因子BB10和20μg/L刺激6，12，24h后收集细胞，用免疫印迹分析法检测细胞中p27和p57蛋宴表达量。结果：①血管平滑肌细胞数量：血小板源生长因子BB刺激1和3及5d后血小板源生长因子BB10和20μg／L组明显高于对照组（t=4．06-21．76，P〈0．05-0．01）。②血管平滑肌细胞中p27蛋白表达量（A值）：血小板源生长因子BB刺激12和24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L．几组明显低于对照组（P〈0．05，0．01），血小板源生长因子BB20μg/L组明显低于血小板源生长因子BB10μg/L组（P〈0．01）。p57蛋白表达量（A值）：血小板源生长因子BB刺激24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L组明显高于对照组（P〈0．01），血小板源生长因子BB20μg/L．几组明显高于血小板源生长因子BB10μg/L组（P〈0．01）。结论：①在血小板源生长因子BB刺激的血管平滑肌细胞增殖过程中，p27和p57蛋白表达量变化不同。②在增殖的血管平滑肌细胞中随刺激因子作用时间的延长，表达量逐渐下降，而p57蛋白表达水平随血管平滑肌细胞的增殖而增加，p27蛋白表达量的变化可能是决定血管平滑肌细胞增殖的关键因素。     

CGRP 在内皮祖细胞抑制 Ang Ⅱ所致 VSM Cs 增殖中的作用

【目的】探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在内皮祖细胞（EPCs）抑制血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖过程中的作用。【方法】采用ELISA检测EPCs表达CGRP ,对EPCs条件培养基采取CGRP抗体封闭和CGRP受体阻断后,观察EPCs条件培养基对 AngⅡ诱导的DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率及细胞周期的影响。【方法】EPCs能够表达并分泌高浓度的CGRP;CGRP阻断后,EPCs条件培养基对AngⅡ诱导的VSMCs DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率、细胞周期进程的抑制作用均较对照组明显降低（ P＜0．05）。【结论】EPCs通过旁分泌CGRP抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。     

高磷对血管平滑肌钙化的影响及骨保护素干预作用

目的研究高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响和骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,及骨保护素对高磷诱导RVSMC钙化的作用及其相关机制。方法用不同的试剂培养RVSMC,分别为正常磷组（Pi1.4mmol/L）、高磷组（Pi2.0mmol/L、Pi2.6mmol/L）、凋亡抑制组（Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK0.1μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK1.0μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK2.0μmol/L）、骨保护素组（Pi2.6mmol/L＋OPG1μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG10μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG100μg/ml）。全自动生化仪比色法测定钙含量,BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量。同时行VonKossa染色观察细胞钙化情况。用半定量PCR（RT-PCR）法检测RVSMCOPGmRNA的表达。流式细胞仪测定各组的细胞凋亡量。结果①培养3天,6天,9天时,高磷组（Pi2.0mmol/L,Pi2.6mmol/L）与Pi1.4mmol/L相比,RVSMC钙沉积较多（P＆lt;0.05）;②培养第6天时,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FNK0．1μmol／L组的钙沉积与Pi2．6mmol／L组相比无统计学差异,而Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK1．0μmol／L,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK2．0μmol／L组与Pi2．6μmol／L组相比,RVSMC钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG10μg／ml、Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组与Pi2．6mmol／L组相比,细胞钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比,细胞钙沉积明显降低（P〈0．01）;③Von Kossa染色显录Pi1．4mmol／L组钙化不明显．Pi2．6mmol／L组细胞有大量黑色颗粒沉积而Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组较少。培养第6天时,Pi2．6mmol／L组与Pi2．0mmol／L组;Pi2．0mmol／L,Pil．4mmol／L相比,OPG mRNA表达较多（P〈0．05）。培养第6天时,Pi2．6mmol／L与Pi1．4mmol／L相比,细胞凋亡量较多（P〈0．05）;Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比细胞凋亡量较少（P〈0．05）。结论高磷可能通过诱导RVSMC凋亡而导致钙化,骨保护素对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用与其降低RVSMC凋亡有关。     

apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖

背景：结合课题组以往研究成果,提出caveolae可能参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖的假设。目的：实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。方法：采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成。结果与结论：①caveolae结构破坏剂β-环糊精（5mmol/L,25h）可明显增强apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖。②apelin-13（0,1,2,4,8μmol/L）刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1的表达下调,在1μmol/L时下调明显。③β-环糊精（5mmol/L）破坏caveolae后,可使apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强。④对照组（体积分数为0.1%胎牛血清孵育）及处理组（apelin-13刺激）caveolin-1与PI3K及ERK1/2均有复合物形成,在apelin-13刺激的情况caveolin-1-PI3K复合物减少、caveolin-1-ERK1/2复合物减少,即apelin-13可能促进caveolin-1与PI3K及ERK1/2解离。结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景：成熟动脉中膜血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的：观察E1A激活基因阻遏子（cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG）抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法：应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用。结果与结论：Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加（P〈0.05）,而在hVSMCs-siCREG组中减少（P〈0.05）。刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑。相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加（P〈0.05）。Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加（P〈0.05）,同时JNK蛋白活化。进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制。结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移。     

靶向超声介导血管内皮生长因子基因转染对兔损伤动脉血管内皮功能的影响

目的研究超声造影剂SonoVue携带血管内皮生长因子(VEGF)基因靶向转染兔损伤动脉后血管内皮功能的恢复及程度。方法构建真核表达质粒pCDNA3.1(-)/hVEGF165。建立兔髂外动脉的球囊损伤模型,并随机分为两组:损伤后血管腔内注射携带VEGF基因质粒的造影剂并接受超声辐照的为实验组,损伤后无任何干预为对照组。2周后超声检测髂外动脉内皮依赖性舒张功能,完成后将兔处死取损伤处血管,HE染色计算血管内膜与中膜面积比值,免疫组化了解血管壁平滑肌细胞的增殖和VEGF的表达情况。结果实验组髂外动脉血管内皮依赖性舒张功能较对照组改善(P<0.05),但实验组的血管内膜面积与中膜面积比值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示实验组血管壁平滑肌细胞增殖核抗原表达明显减低,且见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒。结论靶向超声介导VEGF基因转染损伤的动脉管壁2周即可有效改善局部血管的内皮功能,有效增强VEGF的表达,并且抑制平滑肌细胞增殖,提示携基因靶向超声可以为早期改善介入治疗后血管内皮功能并由此防治再狭窄提供新途径。     

银杏叶提取物对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨银杏叶提取物对内皮细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将孵育好的人脐静脉内皮细胞分成5组:内皮细胞组(对照组);内皮细胞+游离脂肪酸(FFA)组(实验1组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物0.35mg/L组(实验2组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物3.5mg/L组(实验3组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物35mg/L组(实验4组)。分别测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-1)以及细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验1组内皮细胞上清液中SOD和GPX-1含量显著降低(P0.01),而MDA则显著升高(P0.01);与实验1组比较,实验2、3、4组内皮细胞上清液中SOD和GPX-1含量显著升高(P0.01),MDA显著降低(P0.01)。实验1组FFA诱导的内皮细胞凋亡率显著高于对照组(P0.01);经银杏叶提取物注射后,实验2、3、4组内皮细胞凋亡率显著低于实验1组(P0.01)。结论银杏叶提取物可通过改善血管内皮细胞的氧化应激水平而抑制其凋亡。     

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生

背景：应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。目的：观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法：构建Egr-1DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。结果与结论：转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少（P〈0.05）;在术后7,14,28d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少（P〈0.01）;转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高（P〈0.05）。结果表明Egr-1DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。