肾衰泄浊汤及其拆方对UUO大鼠中β-catenin、MMP7、PAI-1因子表达的影响

目的:研究中药复方肾衰泄浊汤及其拆方对Wnt/β-catenin信号通路中MMP7、PAI-1因子及该信号通路中β-catenin的表达影响,阐述肾衰泄浊汤抗肾间质纤维化的机理。方法:采用单侧输尿管梗阻动物模型,将SD雌性大鼠72只按体质量随机分为:假手术组、模型组、肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、盐酸贝那普利组,每组12只,各组大鼠分别于术后第7、14天处死,取肾脏组织行HE、Masson染色,光镜下观察肾脏组织病理改变,并测定肾小管间质纤维化指数;免疫组化法检测β-catenin、MMP7及PAI-1蛋白在肾间质的表达情况,另采用原位杂交法检测各组大鼠肾组织β—cateninmRNA的表达。结果:经HE、Masson染色后,从不同时间段观察模型组及各治疗组的病理表现,术后7 d相对以炎症和坏死病变为主,术后14 d以纤维化和炎症为主,特别是模型组更为明显,假手术组在各时期无明显病理改变。免疫组化结果显示,各治疗组大鼠肾组织MMP7蛋白阳性表达均高于模型组,以肾衰泄浊汤组更加明显(均P0.05);而PAI-1蛋白阳性表达均低于模型组,尤以肾衰泄浊汤组更佳(均P0.05)。原位杂交结果:模型组及各治疗组大鼠β-cateninmRNA表达明显高于假手术组(均P0.05),各治疗组β-cateninmRNA表达较同时期的模型组减少显著(均P0.05),尤以肾衰泄浊汤组更明显。结论:复方肾衰泄汤可通过调节UUO大鼠肾间质的MMP7、PAI-1蛋白及β-catenin的表达,减少细胞外基质的沉积,从而达到抗肾间质纤维化的作用。     

肾衰泄浊汤及其补虚、祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究肾衰泄浊汤及其补虚,祛邪组分对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法:通过结扎单侧输尿管建立UUO大鼠模型。SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,贝那普利组,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组;每组24只。手术后第3天,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组大鼠均按0. 8 g·mL-1肾衰泄浊汤浓缩剂给药,即给药剂量为8. 0 g·kg-1·d-1体质量灌胃;贝那普利组大鼠给贝那普利1. 5 mg·kg-1·d-1体质量灌胃,假手术组,模型组大鼠给等量生理盐水灌胃。术后第7,14,21天,分别用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中周细胞及相关信号通路标志物表达情况。结果:与模型组比较,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组在UUO后第14,21天的间质损伤评分和间质胶原的积累均显著降低(P0. 05)。除假手术组外,各组在第14,21天的肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),血小板衍生生长因子A(PDGFA),神经/胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2),血管内皮生长因子A(VEGFA),血管内皮生长因子受体1(VEGFR1),血小板源性生长因子β(PDGF-β),血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的蛋白表达均较第7天显著增加(P0. 05)。在手术后第21天,肾衰泄浊汤组的肾组织中NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-β蛋白表达均显著低于模型组(P0. 05)。与模型组比较,肾衰泄浊汤组在手术后第21天的肾组织中α-SMA,PDGFA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGF-β,PDGFR-βmRNA相对表达量均显著降低(P0. 05),并且肾衰泄浊汤组在手术后第21天α-SMA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-βmRNA相对表达量显著低于贝那普利组(P0. 05)。结论:肾衰泄浊汤复方及其补虚,祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化均具有拮抗作用,其作用机制与抑制周细胞及其相关细胞信号通路激活有关。     

肾衰泄浊汤及其拆方对UUO模型大鼠细胞外基质的影响

目的:基于补虚通腑泄浊法探讨中药复方肾衰泄浊汤及其拆方(补虚方、祛邪方)对UUO模型大鼠细胞外基质的影响。方法:将SD雌性大鼠72只按体重随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、贝那普利组,每组12只,各组大鼠分别于灌胃给药后第7、14d处死,检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平;取肾脏组织行HE、Masson染色,并对肾小管损伤程度、肾小管间质纤维化评分;免疫组化法检测肾脏组织中ɑ-SMA、FN、PAI-1的表达情况。结果:同期模型组与假手术组比较,大鼠24h尿蛋白明显升高(P0.05),各治疗组与模型组比较,各治疗组24h尿蛋白定量减少(P0.05);模型组与假手术组比较,血尿素氮、血清肌酐均升高(P0.05),经治疗后各组血尿素氮、血清肌酐均有所下降,肾衰泄浊汤组疗效最显著(P0.05)。经HE、Masson染色后,从不同时间段观察模型组及各治疗组的病理表现,术后7d以炎症和坏死病变为主,术后14d以纤维化和炎症为主,特别是模型组更为明显。免疫组化结果显示,各治疗组ɑ-SMA、FN、PAI-1蛋白阳性表达均低于模型组,同时期各蛋白阳性表达强弱在中药各治疗组中依次为:补虚方组祛邪方组肾衰泄浊汤组,且表达差异有统计学意义(P0.05)。结论:肾衰泄浊汤及其拆方均可改善UUO大鼠肾功能,这种改善作用可能是通过抑制ECM沉积实现的,ECM沉积的中医病机可能是本虚标实,补虚通腑泄浊法是治疗的基本大法。     

清化固肾排毒颗粒对肾纤维化大鼠Wnt通路Wnt1和β-catenin表达的影响

目的观察清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1、β连环蛋白(β-catenin)表达的影响,从而探讨清化固肾排毒颗粒对肾间质纤维化的作用机制。方法 108只SPF级SD大鼠随机分为假手术组和模型组,清化固肾排毒颗粒高、中、低剂量(3.00、1.50、0.75 g/kg)组,洛丁新(1.60 mg/kg)组,每组18只;除假手术组外,各组大鼠均以结扎左侧输尿管制备单侧输尿管梗阻肾纤维化模型。各组分别于造模第7、14、21天时随机处死6只大鼠,采血,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平;取手术侧肾脏组织进行相关病理检测,分别采用HE染色和Masson染色评价肾小管间质纤维化损伤程度,免疫组织化学染色检测肾脏组织Wnt1和β-catenin的表达情况。结果与假手术组比较,各造模组大鼠血清SCr、BUN水平升高(P0.05),间质纤维化程度加重(P0.05),肾组织β-catenin表达明显增多(P0.05),随着输尿管梗阻时间延长,各指标程度加重;与模型组比较,清化固肾排毒颗粒高、中、低剂量组和洛丁新组大鼠血清SCr、BUN水平下降(P0.05),间质纤维化程度有所缓解(P0.05),肾组织β-catenin表达降低(P0.05)。免疫组化结果显示:与假手术组比较,各造模组大鼠肾小管上皮细胞内Wnt1、β-catenin高表达(P0.05),在梗阻后第7天Wnt1表达量最高(P0.05),随后降低;与模型组比较,清化固肾排毒颗粒各剂量组、洛丁新组大鼠Wnt1、β-catenin表达降低(P0.05)。结论清化固肾排毒颗粒可以改善肾纤维化的发生发展,其作用机制可能是通过抑制Wnt1、β-catenin的表达,起到保护肾脏的作用。     

肾衰方及其拆方对肾间质纤维化VEGF、VEGFR2、a-SMA的影响

目的探讨肾衰方及其拆方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)及VEGF、VEGFR2、a-SMA的影响。方法采用单侧输尿管梗阻建立RIF大鼠模型。将108只无特定病原体(SPF)级健康成年SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只。UUO术后1 d起连续灌胃给药3周,肾衰方组、补虚方组、祛邪方组大鼠分别按19.5、9.5、11.0 g/(kg·d)进行灌胃,贝那普利组给予1.05 mg/(kg·d),假手术组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃。造模后各组分别在第7、14、21天各处死6只大鼠,检测其血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),同时计算左肾肾脏脏器指数;采用苏木精-伊红染色和马松染色进行肾脏组织病理检测,采用Western Blot检测VEGF、VEGFR2、a-SMA的表达,实时荧光定量RT-PCR检测VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA的表达。结果 (1)与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组血清BUN、Scr、左肾肾脏脏器指数均升高(P0.05)。与模型组相比,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组血BUN、Scr、肾脏脏器指数均降低(P0.05),与其他治疗组相比,肾衰方组在降低BUN、Scr、肾脏脏器指数更明显(P0.05)。(2)肾脏病理改变:与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积均增加(P0.05)。与UUO模型组比较,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积均降低(P0.05);与其他治疗组相比,肾衰方组在减轻肾小管间质损伤指数和胶原阳性面积更明显(P0.05)。(3)与假手术组比较,同时期模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组VEGF、VEGFR2、a-SMA蛋白和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达量均增加(P0.05);与模型组相比,同时期肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组VEGF、VEGFR2、a-SMA和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达均有不同程度降低(P0.05),与其他治疗组相比,肾衰方组降低VEGF、VEGFR2、a-SMA蛋白和VEGF、VEGFR2、a-SMAmRNA表达量更明显。结论肾衰方改善肾功能,减轻肾脏病理损害可能是通过抑制VEGF、VEGFR2、a-SAM蛋白和mRNA表达。     

肾衰方及其拆方对UUO模型大鼠周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路表达的影响

目的通过观察中药复方肾衰方及其拆方对周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路的表达影响,阐述肾衰方抗肾间质纤维化的机理。方法将108只SD雌性大鼠随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰方组、袪邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只,各组大鼠分别于术后第7、14、21天给药2h后各处死6只。检测大鼠肾功能;取肾脏组织行HE、Masson染色,并测定大鼠术侧肾脏肾小管损伤程度评分及肾小管间质纤维化指数;Western blot、RT-PCR法测定肾脏组织中α-SMA、PDGF、PDGFR-β的表达情况。结果同时期模型组与假手术组相比,模型组大鼠血尿素氮、血清肌酐均比模型组升高(P0.05);同时期各治疗组与模型组相比,各治疗组大鼠血尿素氮、血清肌酐均较模型组下降,且以肾衰方组下降更明显(P0.05)。通过HE、Masson染色,从不同时间段观察各组大鼠肾脏病理组织的变化,发现术后7d多以炎症和坏死病变为主,术后14d多以纤维化和炎症病变为主,21d纤维化程度更加明显,模型组病理表现最为明显。经Western blot法测定发现,各治疗组的α-SMA、PDGF、PDGFR-β蛋白阳性表达均低于同时期模型组,以肾衰方组降低更明显(P均0.05);RT-PCR法检测结果显示,模型组及各治疗组大鼠α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达量均高于假手术组(P均0.05),各治疗组α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达较同时期的模型组降低明显(P均0.05),以肾衰方组降低更明显。结论中药复方肾衰方可通过调节周细胞上PDGF/PDGFR-β信号通路的传导,同时下调α-SMA蛋白的表达,达到抗肾间质纤维化的作用。     

基于Wnt 通路探讨生地黄水提物对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化 的作用机制

目的观察生地黄水提物对单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾纤维化的影响,并基于Wnt 通路探讨其 延缓肾纤维化进程的可能机制。方法通过结扎左侧输尿管建立UUO 大鼠模型。将SD 大鼠随机分为假手术 组、模型组和生地黄低、中、高剂量组（0.8、1.6、3.2 g·kg-1）,术后连续灌胃给药14 d。采用HE 染色法及 Masson 染色法观察生地黄水提物对梗阻侧肾脏病理损伤和纤维化的改善作用;采用免疫组化法检测肾脏纤维 化相关蛋白CollagenⅠ、α-SMA、Vimentin 的表达和分布;免疫荧光法检测上皮间质转化标志蛋白α-SMA、 E-cadherin 的表达;Western Blot 法检测Wnt 通路关键蛋白Wnt5a、GSK-3β 和β-catenin 的表达。结果与假 手术组比较,模型组大鼠肾脏病理损伤和间质胶原纤维沉积严重,E-cadherin 表达和分布减少,CollagenⅠ、 α-SMA、Vimentin 以及Wnt5a、GSK-3β、β-catenin 蛋白表达明显上调（P＜0.01）。与模型组比较,生地黄各 剂量组能够改善UUO 大鼠的肾小管扩张、小管上皮细胞空泡变性以及坏死等病理学改变和间质胶原沉积,增 加E-cadherin 表达和分布,并明显下调CollagenⅠ、α-SMA、Vimentin、Wnt5a、GSK-3β 和β-catenin 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）。结论生地黄水提物能够改善UUO 模型大鼠肾脏病理损伤和纤维化程度,其机制可 能与抑制Wnt 通路活化,阻抑上皮间质转化,从而减少细胞外基质沉积,延缓纤维化进程有关。     

桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织中Wnt系列因子影响的研究

目的通过桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠Wnt/β-catenin信号通路中的Wnt系列因子影响的动物实验观察,探讨该方治疗CRF的作用机理。方法 Wistar大鼠100只,7周龄,随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组,每组各25只。模型组与治疗组采用5/6肾切除手术的方法建立实验动物模型,空白组不予处理,假手术组仅做双肾被膜剥离。造模成功后,治疗组予桃核承气汤灌胃,其余各组予等量生理盐水灌胃,连续用药8周。Western blot技术检测大鼠肾组织中Wnt3a、Wnt5a、Wnt5b、Wnt8b、Wnt9b、β-catenin、E-cadherin的蛋白含量,HE染色光镜观察各组大鼠肾组织的病理变化。结果治疗组与模型组对比,肾组织中Wnt3a、Wnt5a、β-catenin蛋白含量显著降低(P0.05),Wnt5b、E-cadherin的蛋白含量显著升高(P0.05),Wnt8b、Wnt9b的蛋白含量无显著差异(P0.05),光镜下肾纤维化程度较模型组减轻。结论桃核承气汤可以延缓肾组织纤维化进程,该方治疗CRF的机制可能是调节Wnt系列因子抑制Wnt3a、Wnt5a、β-catenin蛋白和促进Wnt5b、E-cadherin蛋白的表达而实现。     

肾病Ⅰ号方对单侧输尿管梗阻大鼠Wnt通路Wnt4和β-catenin表达的影响

目的研究肾病Ⅰ号方对Wnt通路中Wnt4和β-catenin表达的影响及肾病Ⅰ号方抗肾纤维化的机理。方法雄性SPF级SD大鼠108只,随机分为假手术组、模型组、西药组(盐酸贝那普利)、肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组,每组18只。假手术组仅游离左侧输尿管,其余5组行左侧输尿管结扎术,于术后第2天灌胃。各组分别于灌胃后第7、14、21天随机选取6只大鼠留取24 h尿液,检测24 h尿蛋白(24 h UP);心脏取血,检测血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN);处死大鼠,取肾脏组织行Masson染色,光学显微镜下观察肾脏组织病理改变;免疫组化方法观察Wnt4和β-catenin在肾间质的阳性表达情况。结果模型组和给药组大鼠血Scr和BUN较假手术组显著升高(P0.05),24 h UP无统计学差异(P0.05),Masson染色示蓝色胶原组织增多,Wnt4和β-catenin表达增加(P0.05)。西药组和肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠血Scr和BUN较模型组显著降低(P0.05),24 h UP差异无统计学意义(P0.05),Masson染色示蓝色胶原组织减少,Wnt4和β-catenin表达降低(P0.05)。与西药组比较,肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠各检测指标无统计学差异(P0.05)。结论肾病Ⅰ号方可保护肾小管,并可能通过降低肾小管上皮细胞中Wnt4和β-catenin的表达,减少细胞外基质堆积,从而达到抗肾纤维化的作用。     

益肾活血软坚泄浊法对UUO大鼠肾脏TGF-β1和HGF蛋白的影响

目的：观察益肾活血软坚泄浊法组方对肾间质纤维化大鼠成纤维细胞转化生长因子（TGF-β1）和肝细胞生长因子（HGF）表达的影响,为肾间质纤维化的防治提供依据.方法：将大鼠随机分为4组,假手术组、模型组、贝那普利对照组、内服组,采用手术结扎单侧（左侧）输尿管大鼠模型（UUO大鼠）,治疗后取肾脏组织,在光镜下观察肾脏组织病理改变,应用免疫组化技术检测大鼠肾组织TGF-β1和HGF的表达情况.结果：（1）假手术组大鼠体重增长明显,精神状况良好;模型组大鼠体重减轻,活动减少;内服组大鼠较模型组症状相对较轻.（2）肾脏病理改变.肉眼观：假手术组大鼠肾脏呈红褐色,为正常组织;模型组肾脏体积较正常明显增大,表面皮质变薄,水肿明显;内服组和贝那普利对照组较模型组减轻.镜下观：假手术组大鼠肾组织结构正常,无局灶性纤维化,无肾小管扩张;模型组大鼠肾小管扩张,1肾间质可见棕褐色颜色改变;内服组肾组织肾间质纤维化.（3）与模型组比较,内服组、贝那普利组大鼠肾组织中TGF-β1明显降低（P＜0.01）、HGF的表达明显升高（P＜0.01）.结论：益肾活血软坚泄浊法可降低TGF-β1在肾纤维化大鼠肾组织中的表达,升高HGF在肾纤维化大鼠肾组织中的表达,从而减轻肾脏纤维化的损伤,达到保护肾功能的目的.     

通腑泄浊汤对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响

目的:研究通腑泄浊汤(黄芪、大黄、石菖蒲、牵牛子、附子、人参、白术、丹参、王不留行、橘皮)对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型,以依那普利为阳性对照,将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,通腑泄浊汤高剂量组,中剂量组,低剂量组。术后第12天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平、免疫组化半定量检测各组大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、层连接蛋白(LN)的表达。肾组织用HE、VG染色评定肾小管间质损伤及胶原沉积程度。结果:模型组α-SMA、LN、ColⅢ表达、BUN、Scr及肾小管间质损伤指数、胶原沉积程度高于假手术组(P<0.01),通腑泄浊汤与依那普利组比较α-SMA、LN、ColⅢ、BUN、Scr的表达均明显降低(P<0.05),肾小管间质损伤指数及胶原纤维沉积减轻。结论:通腑泄浊汤可能是通过下调α-SMA、LN、ColⅢ的表达而减轻肾间质纤维化。     

化瘀泻浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad2/3的影响

目的:观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad 2/3的影响。方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[给予缬沙坦5.3mg/(kg.d)经口灌服]、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg.d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[给予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg.d)]与模型组[给予同等量生理盐水经口灌服],并设假手术组,每组10只大鼠。行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察实验大鼠梗阻侧肾脏转化生长因子-β1(TGFβ1)及p-Smad 2/3在蛋白水平的表达。结果:模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质TGFβ1、p-Smad 2/3蛋白的表达也增加(P0.05)。各治疗组与模型组比较,TGFβ1、p-Smad 2/3表达明显减少(P0.05)。治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P0.05),其他各组间均无明显差异(P0.05)。结论:输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与TGFβ1、p-Smad 2/3表达增加有关,化瘀泄浊方对其有一定的抑制作用。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction UUO）模型大鼠肾脏病理的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控。方法：48只健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组（12.5g·kg-1/天）、保元排毒丸低、中、高剂量组（1.25g·kg-1/天、2.5g·kg-1/天、5.0g·kg-1/天）,每组8只;除假手术组只分离输尿管不结扎外其余均制备右侧输尿管梗阻肾纤维化模型,造模第二天开始予相应的药物灌胃,假手术组和UUO组给予自由进食和生理盐水灌胃,共灌14天。末次灌胃24小时后取右肾进行HE 染色观察肾脏病理改变,Masson 染色观察肾组织胶原沉积情况;Western Blot 法测肾组织E-cadherin、Collagen I、β-Catenin表达水平;Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果：与假手术组比较,UUO组和各给药组肾小管、肾间质病变重、肾纤维化重（P＜0.01）;与UUO组比较,保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组肾小管、肾间质病变明显减轻、肾纤维化减轻（P＜0.01）;UUO组E-cadherin表达较保元排毒丸各剂量组、厄贝沙坦组和假手术组明显减少（P＜0.01）;保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Collagen I、β-Catenin表达明显少于UUO组（P＜0.01）;UUO组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显高于假手术组（P＜0.01）,保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显低于UUO组（P＜0.01）。结论：保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制

【目的】 探讨加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制。【方法】 将120只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组等4组,4组组内再按7、14、28 d 3个时间点分组,每组10只。除假手术组,其他组别大鼠均采用结扎输尿管法构建单侧输尿管梗阻模型。假手术组除不结扎输尿管外其他手术步骤均与上述造模方法相同。成功造模后,中药组术后24 h给予加味六味地黄汤2.376 g·kg-1·d-1灌胃,缬沙坦组术后24 h给予缬沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃,假手术组和模型组均在术后 24 h 给予等体积生理盐水灌胃,每日 1 次,直至相应实验时间点处死。采用免疫组织化学法检测肾组织c-myc、纤维连接蛋白（Fn）的表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测肾组织Wnt4、β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化糖原合成激酶 3β（p-GSK-3β）、磷酸化T细胞因子/淋巴增强因子（p-TCF/LEF）的表达。【结果】 与假手术组相同时间点比较,模型组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-TCF/LEF、Fn和c-myc蛋白表达水平显著上调,差异均有统计学意义（P <0.01）;与模型组相同时间点比较,中药组和缬沙坦组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-LEF/TCF、Fn和c-myc蛋白的表达水平下调,差异均有统计学意义（P < 0.05 或 P < 0.01）,且 2 个治疗组组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。【结论】 加味六味地黄汤具有抗肾间质纤维化作用,其机制可能与阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调Fn和c-myc蛋白的表达有关。     

肾衰泄浊汤对BMP_7、TGFβ_1调节作用的探讨

目的:观察肾衰泄浊汤对肾间质纤维化大鼠肾组织骨形态蛋白-7(BMP7)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白的调节作用。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,将72只大鼠分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组及苯那普利组,观察术后第7d、第14d梗阻侧大鼠肾组织病理改变及BMP7、TGFβ1蛋白表达。结果:第7d、第14d中药各组和苯那普利组大鼠BMP7较假手术组减弱,但较模型组增强;而TGFβ1则相反,且BMP7与TGFβ1呈明显负相关。结论:该方可能是通过诱导BMP7表达,抑制TGFβ1表达,减轻肾间质纤维化。     

从Wnt/β-catenin信号通路研究地黄饮子汤剂对去卵巢骨质疏松模型大鼠的防治作用

目的:观察地黄饮子汤剂对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨微结构和Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白表达的影响,探讨其防治骨质疏松形成的机制。方法:采用双侧手术切除卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,戊酸雌二醇组,地黄饮子汤剂高、中、低剂量组,另设假手术组,每组10只。戊酸雌二醇组大鼠给予戊酸雌二醇(剂量为0.09μg/g)灌胃,地黄饮子汤剂治疗组大鼠给予地黄饮子汤剂(剂量为32,16,8g/kg)灌胃,模型对照组和假手术组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃。干预4周后,计算各组大鼠的子宫指数,HE染色法观察各组大鼠骨组织病理形态的改变,Western-Blot法检测骨组织Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5蛋白的表达。结果:与假手术组对比,模型对照组大鼠子宫指数明显降低,股骨Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白的表达均明显升高(P0.05);模型对照组大鼠骨小梁结构紊乱、出现丢失和断裂。与模型对照组对比,地黄饮子汤剂中、高剂量组大鼠子宫指数明显升高(P0.05),骨小梁结构紊乱较模型对照组有所恢复;地黄饮子汤剂各剂量组大鼠股骨Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5等蛋白的表达均显著降低(P0.05)。结论 :地黄饮子可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt、Wnt1、β-catenin、LRP5的蛋白表达来改善骨质疏松模型鼠的骨组织形态,进而发挥对骨质疏松的防治作用。     

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的:观察复肾功方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号途径的影响,探讨其减少细胞外基质(ECM)的沉积,抗肾小管间质纤维化(TIF)及延缓CRF进展的作用机制。方法:将55只雄性SD大鼠随机将分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠则用腺嘌呤含量为0.5%的饲料建立CRF模型,连续喂养21 d。造模成功后所有大鼠改用常规饲料,正常组和模型组大鼠给予20 mL·kg~(-1)生理盐水灌胃;复肾功方低、中、高剂量组大鼠则按体质量分别灌胃4,8,16 g·kg~(-1)复肾功方水煎剂,1次/d,连续灌胃30 d。实验结束后,马松(Masson)染色观察大鼠肾组织病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织Wnt4,β-catenin mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织Wnt4,β-catenin,基质金属蛋白酶-7(MMP-7)蛋白的表达,免疫组化检测肾组织Wnt4,β-catenin蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾小管间质纤维化明显增多,肾组织Wnt4,β-catenin mRNA及Wnt4,β-catenin,MMP-7蛋白的表达均显著升高(P0.01);与模型组比较,复肾功方各组大鼠肾组织Wnt4,β-catenin mRNA及Wnt4,β-catenin,MMP-7蛋白表达均明显降低(P0.05)。结论:复肾功方减少ECM的沉积、抗肾小管间质纤维化、延缓CRF进展可能与抑制Wnt/β-catenin信号途径的激活有关。     

芪参颗粒对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨芪参颗粒治疗心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的可能作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组15只、模型组12只、芪参颗粒组12只、非诺贝特组11只。除假手术组外,其余各组大鼠采用左心冠状动脉结扎诱导心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。芪参颗粒组给予芪参颗粒18.66 g/(kg·d)灌胃,非诺贝特组给予非诺贝特胶囊10 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予同体积生理盐水灌胃,连续给药28天。检测各组大鼠心功能,分别观察各组大鼠心肌组织病理变化,并采用Western blot法检测大鼠心肌组织中转化生长因子β(TGF-β)、Smad3、Wnt1a、β-catenin、Wnt1诱导的分泌蛋白1 (WISP-1)、Wnt5a蛋白含量。结果与假手术组比较,模型组左室射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)均显著降低,左室舒张末内径(LVIDd)、左室收缩末内径(LVIDs)均显著增高(P0.01);与模型组比较,芪参颗粒组EF、FS显著升高,LVIDd、LVIDs显著降低,非诺贝特组EF、FS显著升高,LVIDs显著降低(P0.05或P0.01)。HE染色显示,模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,心肌间质出现大量炎性细胞浸润,胶原过度沉积,纤维明显增生,丧失正常结构;芪参颗粒组与假手术组细胞排列整齐,细胞形态基本无变化,仅表现少量胶原沉积,心肌纤维化得以改善。与假手术组比较,模型组TGF-β、Smad3、Wnt1a、β-catenin、WISP-1、Wnt5a蛋白表达增高(P0.05或P0.01);与模型组比较,芪参颗粒组和非诺贝特组TGF-β、Smad3、Wnt1a、β-catenin、WISP-1、Wnt5a蛋白降低(P0.05或P0.01),芪参颗粒组与非诺贝特组各指标比较差异均无统计学意义(P 0.05)。结论芪参颗粒能够显著改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化,且与非诺贝特胶囊效果相当,其机制可能与抑制心肌组织TGF-β与Wnt通路有关。     

肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠HGF、TGF β1的调节作用

目的:观察中药复方肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达的调节作用,探讨其抗肾间质纤维化的机制。方法:将60只小鼠随机分为假手术组,模型组,中药低、高剂量组,苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后7天观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织HGF、TGFβ1蛋白,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果:中药高剂量组和苯那普利组较模型组小鼠肾组织HGF蛋白表达增强,TGFβ1蛋白表达减弱,而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN生成减少,两组无显著差异,而HGF表达与TGFβ1表达呈明显负相关。结论:肾衰泄浊汤可能是通过诱导HGF蛋白表达,抑制TGFβ1表达,抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN等ECM的过度沉积,加强肾保护作用,对抗肾间质纤维化。