羌活提取物对热敏通道TRPV1的影响

目的:探讨羌活水提物和醇提物对热敏通道TRPV1的影响。方法:在瞬转人源TRPV1的HEK293细胞上,运用膜片钳技术测量羌活提取物对细胞跨膜电流的影响。结果:羌活提取物可激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;羌活水提物在生药1 g/ml时稀释10倍左右,对跨膜电流的影响达到最大,并可以被TRPV1竞争性抑制剂辣椒素完全阻断。结论:羌活提取物中含TRPV1激动剂,该通道活化后产生的系列效应可能是羌活解表、止痛的重要分子机制。     

基于热敏通道TRPV1探讨中药甘遂止痛机理

目的探讨中药甘遂对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1(TRPV1)的影响。方法以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药甘遂的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(hTRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流,运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平,观察其是否可以抑制中药甘遂诱导产生的跨膜电流,使用C57BL/6小鼠30只,观察在(0±2)℃冷板和(55±1)℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。结果全细胞膜片钳实验显示在hTRPV1/HEK293细胞上甘遂75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;量效实验显示10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物能够激活hTRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(P0.001)。10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物产生的跨膜电流3 mg·mL~(-1),差异具有极显著统计学意义(P0.001)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 mg·mL~(-1)甘遂醇提物诱导产生的跨膜电流;小鼠冷板和热板实验中,甘遂延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期与剂量呈现一定的量效关系。与空白组小鼠对比,甘遂中、高剂量组和布洛芬阳性对照组小鼠冷痛行为潜伏期明显延长,差异具有统计学意义(P0.05,P0.001,P0.05)。甘遂中、高剂量组和布洛芬阳性对照组的热痛行为潜伏期明显延长(P0.05,P0.01,P0.05)。结论中药甘遂的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂,甘遂所具备的止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。     

从热敏通道TRPV1探讨蛇床子提取物的作用机制

目的:从热敏通道TRPV1探讨蛇床子提取物的作用机制。方法:本研究以蛇床子水提物和醇提物为研究对象,采用全细胞膜片钳技术,在转染了人TRPV1的HEK293细胞上测试、观察蛇床子辛温作用的分子靶点。结果:蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道,产生跨膜电流。结论:蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果,其部分药效可能是通过TRPV1通道发挥,TRPV1是蛇床子产生温肾壮阳、杀虫止痒作用的分子靶点之一。     

芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响

目的:通过电生理全细胞膜片钳技术和动物行为学实验观察芫花对热敏通道瞬时变体电位香草素受体1(TRPV1)的影响,并探讨其机制。方法:以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药芫花的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(h TRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流,运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平,观察其是否可以抑制中药芫花诱导产生的跨膜电流;行为学检测使用雄性C57BL/6小鼠30只,将其分为空白组6只,芫花高剂量组6只,芫花中剂量组6只和芫花低剂量组6只,布洛芬组6只。芫花治疗组以低、中、高(0. 195,0. 39,0. 78 g·kg~(-1)·d~(-1)) 3个剂量进行灌胃,1 h后,观察在(0±2)℃冷板和(55±1)℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。结果:全细胞膜片钳实验显示在h TRPV1/HEK293细胞上芫花75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;量效实验显示,与细胞外液对比,10 g·L~(-1)芫花醇提物能够激活h TRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(P 0. 01)。10 g·L~(-1)芫花醇提物产生的跨膜电流 3 g·L~(-1)(P 0. 01)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 g·L~(-1)芫花醇提物诱导产生的跨膜电流;小鼠冷热板实验中,芫花延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期,与剂量呈现一定的量效关系。冷板实验中,与空白组小鼠比较,芫花中剂量组小鼠冷痛行为潜伏期延长(P 0. 01),与空白组比较,芫花高剂量组冷痛时间也显著延长(P 0. 01),布洛芬组小鼠冷痛行为潜伏期较空白组延长(P 0. 01)。在热板实验中,与空白组比较,芫花高剂量组热痛行为潜伏期显著延长(P 0. 01),布洛芬组的热痛行为潜伏期明显延长(P 0. 05)。结论:芫花的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂,芫花所具备的温性、止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。     

香薷醇提物对热敏通道瞬时受体电位香草酸亚型1的影响

目的:探讨中药香薷75％乙醇提取物对小鼠内脏痛行为的影响及在体外对瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道的影响.方法:在福尔马林诱导的急性内脏痛模型小鼠上进行行为学实验,观察香薷醇提物干预后小鼠疼痛行为变化;运用全细胞膜片钳技术检测不同浓度的香薷醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(TRPVl/HEK29...     

蒙药槟榔十三味丸（高尤-13）止痛作用网络药理学机制研究

目的：应用网络药理学、体外实验技术,预测以及验证蒙药槟榔十三味丸的止痛作用机制。方法：TCMSP数据库及文献挖掘获取槟榔十三味丸的化学成分,SwissTargetPrediction及Uniprot数据库预测成分相关靶点信息,检索OMIM等疾病靶点数据库,收集疼痛、炎症疼痛、抑郁疼痛及神经疼痛的靶点,映射至槟榔十三味丸活性成分靶点基因,构建“活性成分-靶点”网络,STRING数据库获取蛋白相互作用关系网络信息,DAVID数据库进行GO生物过程富集分析和KEGG信号通路富集分析。HEK293细胞转染TRPV1、TRPA1质粒,制备hTRPV1/HEK293细胞和hTRPA1/HEK293细胞模型,采用全细胞膜片钳技术检测槟榔十三味丸水提取物干预转染细胞后对细胞跨膜电流的影响。结果：从槟榔十三味丸的13味药材中共得86个化学成分,筛选出805个复方治疗疼痛靶点、732个治疗炎症疼痛靶点、713个治疗抑郁疼痛靶点及793个治疗神经疼痛靶点,与热敏通道（TRPA1、TRPV1及TRPV2等）相关化合物21个,共涉及135条信号通路。体外实验结果表明,槟榔十三味丸水提取物能够激活TRPA1/HE...     

延胡索叔胺碱和季胺碱对豚鼠心室肌细胞动作电位和HERG通道电流的影响

目的:观察延胡索叔胺碱和季胺碱对动作电位和HERG通道的影响,探讨2种生物碱抗心律失常的作用机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的豚鼠心室肌细胞动作电位和培养的稳定转染HERG通道蛋白的HEK293细胞的HERG通道电流。结果:叔胺碱(30,100 mg/L)可延长APD90(90%复极化时程);1 mg/L和3 mg/L季胺碱可缩短APD90,加深静息电位;30 mg/L和100 mg/L季胺碱可延长APD90;叔胺碱(3~300 mg/L)可浓度依赖性抑制HERG尾电流幅度,IC50为55μmol/L;1 mg/L和3 mg/L季胺碱可明显升高HERG尾电流电流幅度,而30 mg/L和100 mg/L季胺碱可明显降低尾电流幅度。结论:延胡索叔胺碱可浓度依赖性延长动作电位时程和抑制HERG通道电流,而季胺碱高浓度与叔胺碱作用相同,低浓度则能够缩短动作电位时程和兴奋HERG通道电流,呈现双相性。     

艾叶不同提取物对小鼠原发性痛经的影响

目的:通过观察艾叶不同提取物(水提液、95％醇提液、先水提后95％醇提混合液)对痛经模型小鼠的影响,初步探讨艾叶治疗原发性痛经的作用机制.方法:ICR雌性小鼠随机分为9组,分别是正常组、模型组、阳性药西乐葆45.0 mg·kg -1组、艾叶不同提取物的高、低剂量组(1.65,0.55 g·kg-1).除正常组外,其余各组以10 mg·kg-1的剂量给小鼠sc苯甲酸雌二醇连续7d,第8天给予ip缩宫素10 mL·kg-1制造原发性痛经模型.各组均在造模第5天起,每天ig给予不同药物连续4d,观察艾叶不同提取物对原发性痛经模型小鼠的扭体次数以及对子宫组织匀浆中一氧化氮(NO)和钙离子(Ca2+)水平的影 响.结果:与模型组相比,艾叶醇提物高剂量、先水提后醇提混合液的高、低剂最对原发性痛经小鼠的痛阈有极显著的提高,扭体反应抑制率分别为36.9％,52.5％,42.2％(P＜0.01),且相同剂量下先水提后醇提混合液的作用优于水提液(P＜0.05);此外艾叶醇提物高剂量、先水提后醇提混合液的高、低剂量组能显著增加子宫组织内NO含量,降低Ca2+含量(P＜0.01).结论:艾叶提取物制法不同,对原发性痛经模型小鼠的镇痛作用强度不同.在3种不同提取物中,先水提后醇提混合液药效最强,醇提液次之,水提液最弱,这可能与其溶出的效应物质不同有关.     

龙芽楤木皂苷对培养心肌细胞钠通道电流的影响

目的:在新生鼠心肌细胞培养液中加入龙芽楤木皂苷(Aralosides As)后,对细胞膜上钠离子流产生的效应进行观察。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的As(1μg/ml,10μg/ml,100μg/ml)对培养大鼠心室肌细胞钠电流(INa)幅值的影响。结果:1)As使培养心室肌细胞的INa电流-电压(I-V)曲线明显下移,原有的(I-V)依赖特征不变。2)As在10μg/ml,100μg/ml浓度时,均明显剂量依赖性增加INa的峰值,分别使峰值增加29%和41%。结论:As增加培养心肌细胞INa幅值,可能是实现其正性肌力的作用机制之一。     

六味地黄醇提物联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞凋亡和肿瘤血管生成因子的影响

目的:探讨六味地黄醇提物联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及肿瘤血管生成的影响。方法:体外培养BEL-7402细胞,以不同质量浓度的六味地黄醇提物作用于细胞,CCK-8法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将BEL-7402细胞分为正常对照组、六味地黄醇提物100 mg/ml组、顺铂1 mg/ml组、六味地黄醇提物100 mg/ml+顺铂1 mg/ml组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率,细胞成像分析系统观察BEL-7402细胞形态学变化,Hoechst染色法观察细胞凋亡现象,免疫荧光法检测肿瘤血管生成相关因子:血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素-2(Ang-2)、血小板反应素(TSP)、金属蛋白酶-2组织抑制因子(TIMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:六味地黄丸醇提物能呈剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞活性,选择100 mg/ml用于后续实验。与正常对照组比较,各用药组细胞抑制率均明显升高;细胞胞质回缩,漂浮的死细胞增多;胞核偏于一侧,染色质浓染,呈马蹄形或月牙状的典型凋亡特征;细胞内VEGF、Ang-2蛋白表达明显降低,而TSP、TIMP-2蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。与顺铂1 mg/ml组和六味地黄醇提物100 mg/kg组比较,顺铂1 mg/ml+六味地黄醇提物100 mg/ml组更能明显抑制BEL-7402细胞增殖;细胞内VEGF、Ang-2蛋白表达明显降低,而TSP、TIMP-2蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:六味地黄醇提物及其联合顺铂能诱导BEL-7402细胞凋亡,并可能通过下调细胞内肿瘤血管相关VEGF、Ang-2蛋白表达、上调TSP、TIMP-2蛋白表达增强对BEL-7402细胞的抑制作用。     

调脉饮颗粒抗心律失常的多种离子通道靶点作用研究

目的 通过研究调脉饮颗粒对心肌细胞动作电位和多种心肌离子/通道的作用/,探讨调脉饮颗粒抗心律失常的作用靶点。方法 采用全细胞膜片钳技术检测0.1 mg     

南赤瓟对Caski细胞的影响以及Survivin与Bcl-2蛋白家族基因表达关系研究

目的:研究南赤瓟醇提物对Caski细胞抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟醇提物(0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00mg/ml)作用Caski细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟醇提物对Caski细胞增殖率的影响;用0.25、0.50和1.00mg/ml的南赤瓟醇提物和紫杉醇4×10-5mg/ml作用Caski细胞24h后,MTT法检测其对细胞活力的影响,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测其对细胞凋亡的影响,实时定量PCR和Western blot检测Survivin、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00mg/ml)和紫杉醇(4×10-5mg/ml)处理能显著抑制Caski细胞增殖,促进其凋亡;上调Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值。结论:南赤瓟醇提物可显著抑制Caski细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Caski细胞Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值有关。     

疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元TRPV1电流通道及p-TRPV1、SP、CGRP受体表达的影响

目的探讨疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元香草酸受体亚型1(the transient receptor potential vanilloiol type 1,TRPV1)电流通道及p-TRPV1、物质P(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)受体表达的影响。方法参照血清药理学方法,正常组及疏肝健脾方低、中、高剂量组含药血清;分离并原代培养C57小鼠脊神经后角神经节(Dorsal root ganglion,DRG)细胞,通过免疫荧光法进行细胞鉴定,DRG细胞经辣椒素(Capsaicin,CAP)干预后分组(即低、中、高剂量组)予含药血清干预,利用全细胞膜片钳技术记录的DRG细胞TRPV1通道电流;采用RT-PCR及Western-blot检测小鼠DRG神经元中p-TRPV1、SP、CGRP表达变化。结果经细胞鉴定,证实成功分离小鼠DRG细胞;DRG细胞形态呈圆形,胞体较小,突起较长;结肠平滑肌细胞形态细胞形状椭圆形,束状排列,密集与稀疏处相互交错呈"峰谷"状。疏肝健脾方无法直接激活DRG神经元中的p-TRPV1通道,却可正向调控辣椒素激动的p-TRPV1电流;低、中、高剂量组DRG细胞内p-TRPV1、CGRP的mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步下降(P<0.05),SP表达mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步上升(P<0.05)。结论疏肝健脾方可通过下调p-TRPV1表达,从而抑制CGRP的表达,上调SP表达,发挥防治肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)的效用。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

去头水蛭醇提物抗血栓作用的研究

目的 :研究去头水蛭醇提物的抗血栓作用及可能机理。方法 :采用胶原蛋白 肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动 静脉旁路血栓形成的方法 ,观察去头水蛭醇提物的抗血栓作用 ;采用荧光偏振技术观察去头水蛭醇提物对红细细胞膜脂和血小板膜脂流动性的影响。结果 :去头水蛭醇提物对胶原蛋白 肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动 静脉旁路血栓形成有显著抑制作用 ,并能提高红细胞膜和血小板膜流动性。结论 :去头水蛭醇提物有抗血栓作用 ,其机理可能与其提高红细胞膜脂和血小板膜脂流动性有关。去头水蛭体部存在抗血栓成分。     

灯台叶醇提物体外抗肿瘤作用研究

目的研究灯台叶醇提物对体外肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测灯台叶醇提物对体外培养肿瘤细胞(人卵巢癌细胞C200、人乳腺癌细胞MNK-7、人肝癌细胞SNU-398)的抗肿瘤作用;以PI/Annexin-V染色检测灯台叶醇提物对人乳腺癌细胞MNK-7凋亡的影响;以鸡胚尿囊膜血管生成(CAM)实验,研究灯台叶醇提物对新生血管生成的抑制作用。结果灯台叶醇提物在0.1～2.0 mg/mL对各肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用,2.0 mg/mL灯台叶醇提物对人乳腺癌细胞增殖抑制率达到83.6%;2.0 mg/mL灯台叶醇提物作用后人乳腺癌细胞凋亡率达到62.5%;灯台叶醇提物在1～1000μg/mL对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用,给药鸡胚的新生血管数减少,其中10μg/mL抑制率最高,一级血管抑制率为52.1%,二级血管抑制率为48.3%。结论在实验给药浓度下,灯台叶醇提物对受试肿瘤细胞的增殖具有较强抑制作用,对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用。     

野木瓜注射液镇痛作用的药理机制研究

目的研究野木瓜注射液对背根神经节细胞电压门控性钠通道电流的影响,分析野木瓜注射液阻滞神经传导、产生镇痛作用的药理机制。方法在急性分离的大鼠背根神经节细胞膜上,进行全细胞膜片钳记录,观察10%、25%和50%的野木瓜注射液对电压门控性钠通道电流的影响。结果野木瓜注射液浓度依赖地抑制背根神经节细胞钠通道电流峰值,并影响通道的激活和失活过程。结论野木瓜注射液除影响髓鞘和轴突膜结构外还通过调制初级感觉神经元电压门控性钠通道,影响痛觉信息中枢传入产生镇痛作用。     

中草药凤尾草两种提取物的抑菌活性研究

目的 研究中草药凤尾草两种提取物的抑菌活性.方法 以蒸馏水和70％乙醇为溶剂,制备中草药凤尾草水提物和醇提物,进一步制备药液培养基,接种大肠杆菌和金黄葡萄球菌,37℃恒温振荡培养,不同培养时间下测定培养液的OD值.结果 中草药凤尾草水提物和醇提物质量浓度分别≥62.5 mg/ml和≥31.25 mg/ml时对大肠杆菌有抑制作用,水提物和醇提物质量浓度≥31.25 mg/ml时对金黄葡萄球菌均有抑制作用.结论 中草药凤尾草两种提取物对两种致病菌均有抑制作用,对金黄葡萄球菌的抑制效果更明显,醇提物抑菌效果优于水提物.     

细辛含药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响

目的研究中药细辛舍药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响,在离子通道水平揭示细辛抗缓慢型心律失常作用的可能机制。方法用原代培养的方法获得单个心肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞钠通道电流加入含药血清前后的变化。结果25％细辛舍药血清对钠通道的激活曲线、1-V曲线均有影响。结论细辛含药血清对心肌细胞钠通道电流有增强作用。     

阿魏酸钠联合人参皂苷Rg1镇痛作用及其机制

目的:观察阿魏酸钠(SF)联合人参皂苷Rg1(Rg1)镇痛作用并探讨其作用机制。方法:采用小鼠和大鼠两种动物,将动物分为SF低、中、高剂量组(2.5,5,10 mg·kg-1),Rg1低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),复方(SF和Rg1联合用药)低、中、高剂量组(2.5+5,5+10,10+20)mg·kg-1并设置对照组,ig给药5 d后采用小鼠热板法,小鼠醋酸扭体法,大鼠福尔马林法观察SF和Rg1单用及联合应用的镇痛作用;采用全细胞膜片钳技术观察SF和Rg1单用及联合应用对瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)的影响。结果:55℃热板,0.6%醋酸溶液0.02 mL·g-1,5%福尔马林溶液0.1 mL可致动物出现明显疼痛反应,SF中、高剂量组,Rg1高剂量组,复方低、中、高剂量组对3种疼痛模型均有较好的镇痛作用(P<0.05,P<0.01),且复方效果明显优于SF或Rg1单用(P<0.05,P<0.01);1μmol·L-1辣椒素(CAP)可激活TRPV1产生特异性内向电流,SF,Rg1及复方组对该电流均具有一定的抑制作用,且复方组抑制作用强于SF和Rg1组(P<0.05,P<0.01)。SF,Rg1,复方的IC50及95%置信区间分别为32.4(27.5~38.7),82.6(71.0~98.4),30.6(20.2~41.0)mg·L-1,等效应曲线图显示,SF和Rg1对CAP诱导的TRPV1电流的抑制具有协同效应。结论:SF和Rg1合用具有较好的镇痛作用,对TRPV1的协同抑制作用可能是其机制之一。