“固本健脑法”防治老年性痴呆理论探源

老年性痴呆（AD）正日益成为世人关注的问题。临床研究证实,根据对AD主要病机为＂先后天之本脾肾亏虚、脑髓失养,兼有痰瘀＂的认识而创立的＂固本健脑法＂确有疗效。对该治法理论进行系统梳理和阐述,认为学习记忆与脑（髓）直接相关,但其根本在于五脏;＂固本健脑＂之＂本＂即＂先后天之本＂,且蕴＂以人为本＂。     

固本健脑法对Alzheimer病模型大鼠海马区树突棘及P-tau的影响

目的：本课题在成功建立AD大鼠模型基础上,观察固本健脑法治疗AD的作用及机制。方法：12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ1-42,制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,高尔基染色法观察大鼠海马区神经元树突棘形态及密度;Western Blot法检测大鼠海马区Caveolin-1、P-tau（Thr231、Ser396位点）蛋白表达改变。结果：高尔基染色法结果显示：固本健脑液高、低剂量组神经元细胞及树突棘形态明显改善,数目及密度显著增加（P<0.01）。Western Blot法检测结果显示：固本健脑液高、低剂量组可使Caveolin-1的表达不同程度的升高,而tau磷酸化水平下降,差异有显著性（P<0.01）。结论：固本健脑法能显著改善AD大鼠海马神经元树突棘形态及密度,显著提高AD模型大鼠海马区Caveolin-1的表达,抑制tau蛋白过度磷酸化。     

固本健脑液对阿尔兹海默症大鼠生物钟基因Clock、Bmal1及海马Aβ的影响

目的:通过观察固本健脑液对AD大鼠学习记忆、生物钟基因及海马Aβ含量的影响,探索该方改善学习记忆和睡眠障碍的可能机制。方法:实验大鼠随机分为正常组、模型组、药物高、中、低剂量组。自主活动分析仪检测各组大鼠的自主活动情况;Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;ELISA检测大鼠海马Aβ1-40和Aβ1-42含量;免疫组化检测SCN中Bmal1和Clock的蛋白表达水平。结果:自主活动结果显示模型组大鼠活动时间较空白组呈现出显著的增加(P<0.01);各给药组出现活动时间减少(P<0.05)。Morris水迷宫结果显示,模型组大鼠较空白组逃避潜伏期显著延长,目标象限游泳时间百分比显著下降(P<0.01);各观察组逃避潜伏期显著缩短,目标象限游泳时间百分比显著上升(P<0.01,P<0.05);ELISA结果显示,模型组大鼠海马Aβ1-40和Aβ1-42含量较空白组显著增多(P<0.01),固本健脑液中、高剂量组海马Aβ1-40和Aβ1-42含量显著下降(P<0.01)。免疫组化结果:模型组大鼠SCN中Bmal1和Clock表达水平较空白组下降(P<0.01),给药后,各组大鼠SCN中Bmal1和Clock表达上升(P<0.05)。结论:结果显示AD大鼠存在一定程度的昼夜节律紊乱且生物钟节律基因表达降低,固本健脑液干预后可改善痴呆大鼠的昼夜节律紊乱及海马Aβ的异常表达,其机制则可能与固本健脑液上调Bmal1、Clock表达有关。     

固本健脑法对老年健忘模型动物海马脑区NR2A基因表达的影响

1材料与方法1．1实验动物清洁级健康雄性Wistar大鼠,雌雄各半,3月龄,体重200±20g,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供,批号：0016152。适应性饲养1周后,用跳台法初筛,选成绩相似者,完全随机法分为正常对照组（15只）,模型组（60只）。参考文献¨‘稍加改变。模型组大鼠腹腔注射D-半乳糖120mg·kg·d-1。（生理盐水配制成240mg·ml-1）和NaN0290mg·kg-1·d-1。（双蒸水配制成180mg·m1-1,连续40天,正常组大鼠腹腔注射2ml的生理盐水溶液。     

固本健脑法对老年健忘大鼠模型海马组织中Aβ/RAGE信号通路的影响

目的:比较固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法对健忘大鼠海马组织中Aβ/RAGE信号通路的影响,初步揭示固本健脑法改善记忆的部分分子机制。方法:腹腔注射D-半乳糖及Na NO2建立老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、归脾丸、六味地黄丸和石杉碱甲;并设空白组和模型组,灌以生理盐水。给药结束后,取大鼠海马组织,采用Western blot检测晚期糖化终产物受体(RAGE)、核转录因子p65(NF-κB p65)的表达,ELISA检测β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)、白介素-1β(IL-1β)的含量。结果:与空白组比较,模型组、西药组、补脾组、补肾组上述指标的表达均上调,固本组RAGE、NF-κBp65、IL-1β的表达上调,Aβ1-42则差异无统计学意义。西药组、补脾组、补肾组与模型组比较,上述指标的表达均下调,与固本组比较则上调;补脾组、补肾组、西药组组间比较,差异无统计学意义。结论:固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法均能在一定程度上改善记忆功能,但固本健脑法作用最佳,固本健脑法改善记忆功能的分子机制与Aβ/RAGE信号通路密切相关。     

固本健脑法对老年健忘模型大鼠海马脑区HSP70、NGF和NT-3表达的影响

目的：探讨固本健脑法改善模型大鼠学习记忆功能的作用机制。方法：腹腔注射D-半乳糖和NaNO2制造老年健忘大鼠模型,分别运用固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方进行治疗,检测各组动物海马脑区HSP70、NGF和NT-3的表达。结果：固本法可增加模型大鼠海马CA,区NGF和NT-3表达水平。结论：固本法可致通过减轻神经元损伤,改善模型大鼠学习记忆功能。     

固本健脑方对记忆障碍模型小鼠脑组织中神经递质的影响

课题组曾以小白鼠为模型动物,采用程控穿梭箱、跳台仪、Y型水迷宫等方法,对固本健脑方的疗效进行了实验研究。结果显示,本方可以明显改善模型动物的行为学指标[1],为了明确其产生疗效的机理,笔者又对模型动物脑组织中的乙酰胆碱酯酶(AchE)、单胺氧化酶(MAO)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)等神经递质及其相关酶进行了检测,现将结果报道如下。1材料与方法1.1药品制备固本健脑方所有药品均来自湖北中医学院专家门诊部中药房,经药品检验部门检验均为正品。按人与动物体表面积折算法算得小鼠等效剂量为每公斤体重25g生药,定为低剂量,每公斤…     

健脑通胶囊对老年性痴呆大鼠多巴胺和去甲肾上腺素的影响

目的 观察健脑通胶囊对老年性痴呆(AD)大鼠多巴胺和去甲肾上腺素的影响;方法 84只大鼠,随机挑出12只,作为正常对照组,剩余72只给予AD模型复制,造模成功后死亡3只,剩余69只随机分成5组:AD模型组(12只)、脑复康组(12只)、健脑通胶囊小剂量组(15只)、健脑通胶囊中剂量组(15只)、健脑通胶囊大剂量组(15只).健脑通大剂量组,中剂量组,小剂量组分别以剂量0.94 g/kg·d,0.47 g/kg·d,0.235 g/kg·d灌胃;西药组给予脑复康组予以50 mg/mL混悬液灌胃,正常对照组予以等量生理盐水,每天上午给药1次,给药30 d.结果 健脑通各组与脑复康组DA和NE高于模型组(P＜0.05),且中药大中剂量组较小剂量组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05),中药中剂量组较小剂量组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05),中药大剂量组较中剂量组之间相比差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 健脑通胶囊能增加AD模型大鼠DA和NE质量浓度,延缓老年痴呆的发展,有效保护脑功能.     

固本健脑法对老年健忘大鼠海马组织中AGEs/RAGE信号通路的影响

目的:比较固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法对老年健忘大鼠海马组织中AGEs/RAGE信号通路的影响。方法:腹腔注射D-半乳糖及Na NO2建立老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、归脾丸、六味地黄丸和石杉碱甲;并设空白组和模型组,灌以生理盐水。给药结束后,取大鼠海马组织,采用免疫组化法检测AGEs的含量,Western blot检测RAGE、NF-κB p65的表达,ELISA检测IL-1β、TNF-α的含量。结果:与空白组比较,模型组、西药组、补脾组、补肾组、固本组上述指标的表达均上调;与模型组比较,西药组、补脾组、补肾组、固本组上述指标的表达均下调;与固本组比较,西药组、补脾组、补肾组上述指标的表达下调;补脾组、补肾组、西药组组间比较,差异无统计学意义。结论:固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法均能在一定程度上改善老年健忘大鼠的记忆功能,但固本健脑法作用最佳,固本健脑法改善记忆功能的分子机制与AGEs/RAGE信号通路密切相关。     

固本健脑法对老年健忘模型动物海马脑区c-fos基因表达的影响

目的:观察补脾、补肾、固本3种治法对老年健忘模型动物海马脑区c-fos基因表达的影响。方法:连续40天腹腔注射D-半乳糖和NaNO2复制老年健忘大鼠模型;分别以补脾健脑方、补肾健脑方、固本健脑方作用于模型动物,连续20天;给药结束后,采用RT-PCR法对动物海马脑区c-fosmRNA水平进行半定量分析。结果:正常组c-fosmRNA表达低于模型组(P<0.01),说明造模因素造成了c-fos表达增强,产生下游基因表达,保护神经细胞。3个治疗组均高于模型组(P<0.01),说明补脾、补肾、固本3种治法都有上调c-fosmRNA表达的作用。结论:补脾、补肾、固本3种治法减轻神经细胞损伤、改善学习记忆功能,与其促进c-fos基因的表达有关。c-fosmRNA的表达对记忆能力的影响似乎具有双向性,在一定范围内表达能提高学习记忆能力,在另一范围内表达则降低学习记忆能力。     

固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na~+-K~+-ATP酶、血清SOD活性和MDA含量的影响

目的:固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na+-K+-ATP酶、血清SOD活性和MDA含量的影响。方法:腹腔注射D-半乳糖和NaNO2,制造老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方水煎液,并设正常对照组和模型对照组,均灌胃生理盐水,连续20d。灌胃结束后分别检测各组动物大脑皮层组织Na+-K+-ATP酶活性、血清SOD活性、血清MDA含量等指标。结果:模型组动物大脑皮层Na+-K+-ATP酶活性显著低于正常组、补脾组和固本组;模型组动物血清SOD活性明显低于正常组、补脾组和补肾组;模型组动物血清MDA含量明显高于正常组和各给药组。结论:固本法改善老年记忆的作用机制之一是调节大脑皮层Na+-K+-ATP酶活性,提高血清SOD活性,减低MDA含量。     

固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na^＋-K^＋-ATP酶、血清SOD活性和MDA含量的影响

目的：固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na^＋-K^＋-ATP酶、血清SOD活性和MDA含量的影响。方法：腹腔注射D-半乳糖和NaNO2,制造老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方水煎液,并设正常对照组和模型对照组,均灌胃生理盐水,连续20d。灌胃结束后分别检测各组动物大脑皮层组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性、血清SOD活性、血清MDA含量等指标。结果：模型组动物大脑皮层Na^＋-K^＋-ATP酶活性显著低于正常组、补脾组和固本组;模型组动物血清SOD活性明显低于正常组、补脾组和补肾组;模型组动物血清MDA含量明显高于正常组和各给药组。结论：固本法改善老年记忆的作用机制之一是调节大脑皮层Na^＋-K^＋-ATP酶活性,提高血清SOD活性,减低MDA含量。     

地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响

目的探讨地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响。方法模型组以D-半乳糖腹腔注射合并Aβ注射海马制备AD动物模型,各治疗组分别在造模的同时灌胃地黄饮子和抗脑衰胶囊、哈伯因。运用MORRIS水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力及采用免疫组化方法观察各组大鼠海马神经元TNF-α,IL-1α蛋白的变化。结果治疗组能缩短潜伏期、增加过台次数,第四象限与其它象限游泳距离之间比较也有差异,说明地黄饮子能改善痴呆大鼠空间探索记忆能力,低剂量组已经显效,高剂量组效果更为明显。地黄饮子治疗组IL-1α,TNF-α含量显著下降,且具有剂量差别。结论地黄饮子对痴呆模型大鼠学习记忆空间探索能力有改善作用及能有效抑制海马神经元炎性反应,其作用机理可能与地黄饮子抑制海马神经元TNF-α,IL-1α蛋白,抑制小胶质细胞活性进而减轻海马神经元的炎症损伤有关。     

固本健脑液对MCI大鼠血清胆固醇水平和IL-6含量的影响

以腹腔注射D-半乳糖和NaNO2的方法建立MCI大鼠模型,予固本健脑液于模型动物,并设立正常对照组、脑复康对照组,观察固本健脑液对MCI大鼠行为学、血清胆固醇水平、血清IL-6含量等的影响。结果表明固本健脑液能降低血脂水平和血清中IL-6水平、较好改善脑微环境从而显著改善MCI大鼠的学习记忆功能障碍,促进其学习记忆能力。     

基于“肠-脑轴”理论探讨固本健脑复方对AD模型大鼠肠道菌群、TLR4/NF-κB通路的影响

目的 基于“肠-脑轴”理论探讨固本健脑复方对阿尔茨海默症(alzheimer’s disease, AD)模型大鼠肠道菌群、TLR4/NF-κB通路的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机数字表法分为正常对照组(Control)、模型组(Model)、固本健脑复方低剂量组(TCM-low, TL)、高剂量组(TCM-high, TH)、阳性对照组(Psoitive control, PC),每组10只。采用双侧海马注射Aβ25-35建立AD模型,低剂量组、高剂量组分别给予1.035 g/kg/d、2.070 g/kg/d固本健脑复方水煎液灌胃,阳性对照组灌胃113.4g/kg/d双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊水溶液,正常对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,持续8w。Morris水迷宫检测动物学习记忆和能力,western blot检测海马Aβ、BACE1、TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,16SrRNA测序技术检测肠道菌群丰度,免疫组化检测大脑皮质大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)含量。结果 与正常对照组相比,模型组动物逃避潜伏期延长,穿越平台次数下降(P<0...     

固本健脑液对APP/PS1小鼠肠道菌群与肠道ZO-1、occludin及海马Aβ与形态学的影响

目的 基于“肠-脑轴”途径探讨固本健脑液调控Aβ沉积防治AD的作用机制。方法 6月龄APP/PS1小鼠70只,其中40只APP/PS1小鼠与C57BL/6J小鼠10只随机分为5组,每组10只,分别给予各药物干预组相应的固本健脑液灌胃,Control组和Model组给予等容积的纯水灌胃,持续12周,同时制备每组粪菌混悬液;另取30只APP/PS1小鼠先进行肠道脱菌处理(GF组),C57BL/6J为空白对照组(Control组),10只,后进行粪菌移植,给予GF组实验第一部分的粪菌混悬液灌胃,Control组给予等容积的纯水灌胃,持续8周。行Morris水迷宫评价各组小鼠学习记忆能力;16SrRNA技术检测各组小鼠肠道菌群差异;HE染色观察各组小鼠海马组织形态;Western Blot检测Zo-1、occludin、Aβ_1-42的表达。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著增加,穿越原平台次数和在目标象限停留时间都明显减少;与模型组比较,各治疗组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著减少,穿越原平台次数和在目标象限...     

固本健脑液对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及睡眠时相的影响

目的：通过观察固本健脑液对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆、睡眠持续时间、行为次数以及睡眠-觉醒时相的影响,探索固本健脑液可能的调节机制。方法：将实验大鼠随机分成空白组、模型组、固本健脑液组以及褪黑素(MT)组4组,每组10只。HomecageScan3.0实时监测系统检测各组模型大鼠在笼内的行为活动情况并进行24 h分析,采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习及空间记忆能力;使用Sleepsign3.0进行24 h脑电肌电描记。结果：Morris水迷宫结果显示,模型组较空白组大鼠逃避潜伏期延长,找到目标平台区域的游泳时间百分比下降(P<0.05);固本健脑液组以及MT组逃避潜伏期明显减少,找到目标平台区域的游泳时间百分比显著上升(P<0.05);HomeCage监测显示,与空白组比较,模型组觉醒次数多且昼夜节律颠倒,睡眠持续时间降低(P<0.05),干预后,固本健脑液组觉醒次数减少且昼夜节律正常,睡眠持续时间延长;Sleepsign脑电肌电描记结果显示：模型组较空白组快速眼球运动(REM)睡眠累积量降低(P<0.05),非快速眼球运动(NREM)睡眠降低(...     

桑椹首乌补脑颗粒对老年性痴呆模型大鼠血清SOD、MDA含量及脑组织β淀粉样蛋白表达的影响

目的:研究桑椹首乌补脑颗粒防治老年性痴呆的作用机制,为指导临床用药提供实验依据。方法:观察服用桑椹首乌补脑颗粒后,老年性痴呆模型Wistar大鼠学习记忆功能、血管活性物质(SOD、MDA)及脑组织β淀粉样蛋白含量的变化。结果:桑椹首乌补脑颗粒能够促进学习记忆功能的恢复,升高SOD、降低MDA含量,降低海马区β淀粉样蛋白的表达。结论:桑椹首乌补脑颗粒防治老年性痴呆可能是通过下调脑组织β淀粉样蛋白的表达,升高SOD水平、降低MDA含量,减少脑组织损伤有关。     

参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠模型海马CGRP表达的影响

目的探讨参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠脑组织海马区降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法用结扎双侧颈总动脉制备缺血性脑损伤大鼠模型,造模成功后随机分为假手术组、模型组、脑复康组及参龙脑胶囊高、低剂量组。灌胃28d后,应用免疫组织化学染色法观察CGRP在缺血脑损伤大鼠海马区的表达。结果与模型组相比,参龙健脑胶囊组大鼠海马区CGRP表达增加。结论参龙健脑胶囊对缺血性脑损伤的保护作用与其促进脑组织CGRP表达密切相关。     

益脑灵对老年性痴呆模型大鼠脑组织bcl-2、bax影响的研究

雄性Wistar大鼠连续腹腔内注射D-半乳糖6W后,双侧海马内注射Aβ25-35造成老年性痴呆(AD)模型。通过检测益脑灵对AD模型大鼠学习、记忆能力及脑组织细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响,探讨益脑灵防治AD的作用机理。结果显示,益脑灵可改善AD模型大鼠行为学障碍,可提高bcl-2蛋白的表达、降低bax蛋白的表达。结论:益脑灵改善AD学习、记忆能力,防治老年性痴呆的机理可能与抑制细胞凋亡有关。