补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中Twistl表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中Twistl表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤最佳浓度含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、空白血清+TGF-β1组、以及补中益气汤最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测Twistl在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中Twistl蛋白表达下降,mRNA表达水平降低。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中Twistl表达。     

补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中拓扑异构酶Ⅱα表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中耐药标志物TopoⅡα表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组、以及空白血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测TopoⅡα在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中TopoⅡα蛋白表达增加,mRNA表达水平升高。结论:补中益气汤含药血清能增加TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中TopoⅡα表达。     

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞中整合素β1蛋白表达的影响

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中整合素β1的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌侵袭和转移过程中的作用。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,按照随机对照方法将40只SD大鼠随机分为4组,分别为补中益气汤高剂量含药血清组(11.34 g·kg-1)、补中益气汤中剂量含药血清组(5.67 g·kg-1)、补中益气汤低剂量含药血清组(2.84 g·kg-1)和空白血清组(10 m L·kg-1),每日给药一次,连续灌胃三天后提取大鼠血清,用于后续实验。将A549细胞分为空白血清组(10%大鼠空白血清)、TGF-β+空白血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠空白血清)、TGF-β+补中益气汤高剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠高剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤中剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠中剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤低剂量含药血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠低剂量含药血清)。MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞的抑制率。细胞划痕实验检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞迁移能力的影响。细胞免疫荧光技术、western blot方法检测整合素β1在蛋白水平上的表达。结果:与A549细胞空白血清组、TGF-β+空白血清组分别比较,补中益气汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清可提高对TGF-β介导的A549细胞的抑制率(IR)(P0.01),分别具有抑制TGF-β介导的A549细胞的迁移作用(P0.01),且能减少整合素β1在蛋白水平上的表达(P0.01)。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β介导的A549细胞的生长及迁移,以及能降低整合素β1在蛋白水平上的表达。     

补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的A549细胞MMP-9表达影响的研究

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中MMP-9的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌EMT中侵袭和转移过程中的作用。方法:体外培养A549细胞,用TGF-β进行干预,MTT法检测补中益气汤含药血清对A549细胞的抑制率,免疫细胞化学方法、Western blot和实时荧光定量PCR等方法检测MMP-9在蛋白及基因水平上的表达。结果:TGF-β干预后,MMP-9的表达量上调(P<0.05),与TGF-β诱导组相比,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组可提高对A549细胞的抑制率(IR)(P<0.01),且能减少MMP-9在mRNA和蛋白水平上的表达(P<0.05)。结论:MMP-9能作为肺癌EMT过程中有无侵袭转移的良好预测指标,且补中益气汤能够有效降低MMP-9在蛋白及基因水平上的表达,进而抑制A549细胞的侵袭转移,从而逆转EMT。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

新型抗癌复方蟾山护金方干扰肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:观察新型抗癌复方蟾山护金方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响,并探讨其能否诱导A549细胞凋亡。方法:将30只SD大鼠随机分成3组,分别为含药血清组、消癌平组、阴性血清组,每组10只,各组依次灌胃蟾山护金方煎剂、消癌平片水溶剂和生理盐水,制备含药血清,利用含药血清做A549细胞增殖抑制实验(MTT实验)、细胞凋亡实验和检测"死亡蛋白酶"caspase-3的表达变化。结果:通过MTT实验,发现蟾山护金方含药血清能够抑制A549细胞的增殖,且呈剂量相关性,与阴性血清组比较,差异有统计学意义(P 0. 05);与消癌平组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。通过流式细胞仪检测细胞凋亡,发现蟾山护金方含药血清中浓度组和高浓度组诱导A549细胞早期凋亡,与阴性血清组比较,差异有统计学意义(P 0. 05; P 0. 05)。通过Western-Blot实验发现A549细胞caspase-3激活上调。结论:新型抗癌复方蟾山护金方含药血清能抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,且呈剂量正相关性。     

化毒补虚方含药血清对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度、不同时间化毒补虚方诱导肺腺癌细胞A549的抑制增殖作用及促进凋亡作用。方法:应用四氮唑蓝比色法(MTT法)检测化毒补虚方对人肺腺癌细胞增殖的影响,同时筛选出起有效抑制作用的浓度;并应用倒置显微镜观察细胞形态的变化及荧光显微镜、透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的变化。结果:MTT实验显示化毒补虚方抑制肺腺癌细胞增殖,其中50%浓度含药血清组对A549细胞抑制作用明显,在48 h达作用高峰;观察细胞形态及超微结构发现A549细胞形态发生明显改变,并可见凋亡小体。结论:化毒补虚方通过杀伤肺腺癌细胞、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

益气除痰方调控JNK/SAPK信号通路干预A549细胞的试验研究

目的:研究益气除痰方含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及对JNK、p-JNK等表达的影响。方法:采用MTT法检测益气除痰方含药血清对A549细胞增殖的影响,流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染色法)测定细胞凋亡率,Western blotting检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果:MTT结果显示益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的时间-浓度依赖性;流式细胞术结果显示益气除痰方含药血清可诱导A549细胞凋亡;Western blotting结果显示益气除痰方含药血清干预A549细胞后可减少p-JNK的蛋白表达,但对JNK蛋白表达无明显影响。结论:益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路有关。