益气解毒活络中药有效成分对高糖刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及ColIV、MCP-1 mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖刺激下人肾小球系膜细增殖分化及Col IV、MCP-1 mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:以体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平分为正常对照组,高糖模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72 h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h Col IV、MCP-1 mRNA表达;以ELISA法检测48 h Col IV、MCP-1蛋白活性表达。结果:(1)高糖环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48 h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分药防治DN作用机制与通过下调高糖作用下HMCs Col IV、MCP-1 mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效,最佳配伍为黄芪甲苷低剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

益气解毒活络中药有效成分对高糖高脂刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及FN、TGF-β mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖高脂刺激下人肾小球系膜细胞增殖分化及FN、TGF-β mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平正交设计方案分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h FN、TGF-βmRNA表达;以ELISA法检测48 h FN、TGF-β蛋白活性表达。结果与结论:(1)高糖高脂环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分防治DN作用机制与通过下调高糖高脂作用下HMCs TGF-β、FN mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖高脂刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效成分最佳配伍为黄芪甲苷中剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

凉血解毒利湿方对小鼠银屑病样皮损中过氧化物酶体增殖激活受体的影响

目的探讨凉血解毒利湿方治疗银屑病的可能作用机制。方法 50只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组及中药高、低剂量组。除空白对照组外,其余各组连续6日外涂5%咪喹莫特乳膏建立银屑病模型,除模型组外,中药高、低剂量组分别给予凉血解毒利湿方42、21 g/(kg·d)灌胃,甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤片1 mg/(kg·d)灌胃,模型组和空白对照组给予0.4 ml蒸馏水,每日1次,共6天。第7天观察小鼠皮损变化情况;HE染色观察皮损组织形态学变化,光镜下测量表皮厚度;免疫荧光法检测小鼠皮损中增殖细胞核抗原(PCNA)有丝分裂细胞核数、有丝分裂细胞率、外皮蛋白、过氧化物酶体增殖激活受体α(PPAR-α)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPAR-γ)、过氧化物酶体增殖激活受体β/δ(PPAR-β/δ)表达情况;Real-Time PCR、Western blot法分别检测小鼠皮肤中PPAR-α、PPAR-γ、PPAR-β/δmRNA、蛋白表达。结果模型组小鼠皮损鳞屑叠起、红斑色深、浸润较厚;与模型组相比,各给药组皮损症状均有明显改善。与空白对照组比较,模型组小鼠表皮细胞层增厚,有丝分裂细胞核数量均明显增多,有丝分裂细胞率显著升高。与模型组比较,甲氨蝶呤组及中药高、低剂量组PPAR-α、PPAR-γ蛋白表达升高,PPAR-β/δ蛋白表达降低,甲氨蝶呤组PPAR-γ、PPAR-β/δmRNA及中药高、低剂量组PPAR-β/δmRNA均明显降低(P0.05或P0.01)。与中药高剂量组比较,中药低剂量组PPAR-β/δmRNA表达降低(P0.01)。结论凉血解毒利湿方可调控银屑病小鼠皮损中PPARs表达,从而抑制表皮细胞过度增殖和分化,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。     

益气解毒活络中药对高糖高脂诱导的人肾小球系膜细胞增殖及TNF-α、IL-6表达的作用影响

目的观察高糖高脂因素诱导的HBZY-1细胞增殖分化及MMP-9、TNF-α、IL-6基因及蛋白活性表达的变化,探讨益气解毒活络中药防治DN的分子机制。方法体外培养HBZY-1,并根据不同干预因素分为正常组,高糖高脂模型组,第一组,第二组以及第三组(前期实验中效果最佳的两组和理论最佳的一组)共5组。分别以MMT法检测24、48、72 h 3个时间点HBZY-1细胞增殖分化情况;qRT-PCR法检测48 h各组MMP-9、TNF-α及IL-6基因表达;ELISA法检测48 h各组MMP-9、TNF-α及IL-6蛋白活性表达。结果与正常组比较,模型组HBZY-1细胞增殖显著(P0.01),且在48 h到达峰值,MMP-9基因及蛋白活性表达明显下降(P0.01)而TNF-α、IL-6表达明显升高(P0.01);与模型组比较,各用药组能显著抑制细胞增殖(P0.01),上调MMP-9基因及蛋白活性表达(P0.01),抑制TNF-α、IL-6表达(P0.01),以第三组效果最佳(理论最佳组)。结论益气解毒活络中药防治DN的机制与上调MMP-9表达,下调TNF-α、IL-6表达有关。     

颐年降压饮含药血清对自发性高血压大鼠内皮细胞增殖及PPAR-γ mRNA表达的影响

目的观察颐年降压饮含药血清对体外原代培养的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensiverats,SHR)内皮细胞增殖及PPAR-γmRNA表达的影响。方法取SHR主动脉内皮细胞进行原代培养,取3代后内皮细胞用于实验,SD大鼠40只随机分为正常血清对照组和颐年降压饮高、中、低剂量组,给与高脂饮食喂养,分别灌服生理盐水和高、中、低剂量颐年降压饮(分别含生药5.2 g/mL、2.6 g/mL、1.3 g/mL),给药20天麻醉后开始收集血清,经灭活后作用各组内皮细胞。MTT法检测不同浓度血清作用各组2、4、8、16、24、48 h细胞活性;RT-PCR法检测作用4、8、16、24 h内皮细胞PPAR-γmRNA表达情况。结果MTT检测OD值发现,4、8 h颐年降压饮高、中、低剂量组OD值均高于正常血清对照组,差异有统计学意义(P0.05),而颐年降压饮3剂量组间差异无统计学意义(P0.05);16 h颐年降压饮中剂量组OD值上升低于其他组,差异有统计学意义(P0.05);24 h各组OD值均下降,但颐年降压饮高、中剂量组下降比低剂量、正常血清对照组明显,差异有统计学意义(P0.05);48 h各组OD值继续下降,颐年降压饮高剂量组比正常血清对照组下降更明显(P0.05)。RT-PCR检测不同血清作用内皮细胞4 h时,各组PPAR-γmRNA表达差异无统计学意义(P0.05);8 h时颐年降压饮高剂量组PPARγmRNA表达明显低于其他各组(P0.05);16 h颐年降压饮各剂量组PPAR-γmR NA表达比正常血清对照组高(P0.05),其中颐年降压饮高剂量组PPARγmR NA表达最高,与其他组比较,差异有统计学意义(P0.01);24 h各组PPAR-γmR NA表达有所下降,但颐年降压饮低剂量组PPAR-γmRNA表达仍高于正常血清对照组(P0.05)。结论颐年降压饮对内皮细胞增殖呈双向调节作用,或许与调节PPAR-γmR NA表达有关。颐年降压饮所具有的上调及维持PPAR-γmRNA表达作用,可能是该方药具有保护血管内皮功能,降低血压的机制之一。     

麝香配伍冰片对缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的损伤及麝香配伍冰片对血脑屏障的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血2 h再灌注24 h、48 h模型,比较各组神经功能评分,用实时荧光定量PCR方法 检测各组脑组织情况.结果:再灌注24 h时麝香配伍冰片组、麝香组、尼莫同组积分下降明显,再灌注48h时麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组积分较相应模型组积分下降明显(均P ＜0.01);麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组可显著降低脑组织中ICAM-1 mRNA、LFA-1 mRNA的表达(P ＜0.01),冰片组ICAM-1 mRNA和再灌注48h时LFA-1mRNA也有明显降低(P ＜0.05);麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组、冰片组脑组织MMP-9 mRNA表达均受到明显抑制;三组TIMP-1 mRNA表达明显升高,再灌注24h时麝香组也有相同变化趋势;麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组、冰片组脑组织AQP-4 mRNA的表达受到明显抑制.结论麝香配伍冰片可以通过抑制ICAM-1 mRNA、LFA-1 mRNA、MMP-9 mRNA和AQP-4 mRNA 的表达,提高TIMP-1 mRNA的表达来减轻血脑屏障损伤,这可能是芳香开窍药醒脑开窍的机理.     

益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球细系膜细胞NF-κB蛋白表达影响

目的:观察益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球细系膜细胞NF-κB蛋白表达影响,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株,分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药组(第1组、第2组、第3组);Western Blot法检测0、15、30、60、90 min高糖高脂模型组NF-κB蛋白表达;Western Blot法检测60、90 min 5组NF-κB蛋白表达;免疫荧光染色检测NF-κB核转运。结果:(1)模型组第90 min NF-κB蛋白表达达到峰值。(2)各中药配伍组中第3组下调60 min NF-κB蛋白表达效果最佳;第1组下调90 min NF-κB蛋白表达效果最佳。(3)各组60、90 min NF-κB核转运比较发现:细胞免疫荧光显示,正常对照组p65主要分布在细胞质部分,模型对照组p65主要分布在细胞核部分,各中药配伍组p65明显分布在细胞质内,提示各中药配伍组60、90 min的NF-κB核转运作用被抑制。结论:益气解毒活络中药组分配伍可能是通过抑制NF-κB信号途径来保护受损的肾小球系膜细胞,从而起到减缓DN病程进展,保护受损肾脏的作用。     

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠PPARγ2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)脂肪组织PPARγ2蛋白和PPARγ2mRNA表达的影响。方法:24周龄自发性高血压大鼠(SHR),雄性,50只,模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组10只,同源雄性WKY大鼠10只作为对照组,灌胃给药5周后,Western Blot方法测定脂肪组织PPARγ2蛋白表达,用Real-Time RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)方法测定大鼠PPARγ2 mRNA基因表达。结果:各组与模型组比较,PPARγ2蛋白表达明显降低(P<0.01);各组与模型组比较,PPARγ2 mRNA表达明显降低(P<0.05);结论:镇肝熄风汤能减少脂肪组织PPARγ2蛋白表达和PPARγ2mRNA表达,从而减少成脂和保护心肌细胞功能。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78 mRNA及JNK mRNA表达的影响

目的探讨通络益肾方治疗糖尿病肾病的可能作用机制。方法 35只SD大鼠随机分为空白组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组7只。中药大、中、小剂量组小鼠每日分别给予6.20、3.10、1.55 g/ml的通络益肾方2 ml灌胃;西药组小鼠每日灌胃洛汀新(0.09 mg/ml)、糖适平(0.27 mg/ml)混合液2ml。每日1次,连续给药10天。于末次灌胃2 h后制备含药血清。大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1细胞分正常组、模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,同步化24 h后,正常组加5.6 mmol/L低糖+10%的胎牛血清100μl,模型组加30 mmol/L高糖+10%的空白血清100μl,中药大、中、小剂量组加30 mmol/L高糖及10%的中药大、中、小剂量含药血清100μl,西药组加30 mmol/L高糖+10%的西药血清100μl。分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用流式细胞术检测系膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组系膜细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA的表达水平。结果与正常组同时间点比较,模型组系膜细胞在24 h、48 h和72 h凋亡率持续增加(P0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组24 h、48 h和72 h时系膜细胞凋亡率均明显下降(P0.01);中药大、中、小剂量组在各时间点系膜细胞凋亡率随着药物剂量升高而降低,呈剂量依赖性(P0.01)。与正常组同时间点比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降,JNK mRNA表达在48、72 h时明显增加(P0.05或P0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组系膜细胞GRP78 mRNA、JNK mRNA在48 h、72 h时明显减低,且以中药大剂量组最低(P0.05或P0.01)。结论通络益肾方可抑制肾小球系膜细胞凋亡,其作用机制可能与延缓GRP78 mRNA增幅、下调JNK mRNA表达有关。     

肾衰Ⅲ号方对阿霉素诱导损伤足细胞nephrin、desmin表达的影响

目的:探讨肾衰Ⅲ号方对阿霉素诱导的足细胞损伤的保护作用。方法:分离大鼠肾组织足细胞以阿霉素0.5 mg/L培养24 h复制足细胞损伤模型,再分别以低、中、高剂量肾衰Ⅲ号含药血清(3.8%、7.5%、15%)干预24 h后,MTT检测细胞增殖活性,分别检测各组细胞nephrin、desmin mRNA(RT-PCR法)和蛋白(Western Blot法)表达。结果:MTT结果显示7.5%肾衰Ⅲ号含药血清干预24 h为效果最佳。RT-PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组nephrin mRNA表达显著降低(P0.01)、desmin mRNA表达显著增高(P0.01);与模型组比较,高剂量组nephrin mRNA表达显著增高(P0.05)、desmin mRNA表达显著降低(P0.05)。Western Blot结果显示,与正常对照组比较,模型组nephrin蛋白表达显著降低(P0.01),desmin蛋白表达显著增高(P0.01);与模型组比较,中、高剂量组nephrin蛋白表达显著增高(P0.01)、desmin蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:肾衰Ⅲ号含药血清能减轻阿霉素引起的原代培养的足细胞损伤。     

葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型PPAR-α及PGC-1表达的影响

目的:观察葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型中PPAR-α及PGC-1表达的影响,探讨其防治脂肪肝的作用机制。方法:建立游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型。用不同浓度葱白提取物进行干预24h后,MTT检测的细胞活性;油红O染色观察细胞内的脂滴;生化细胞内TG、ALT、AST含量;RT-PCR和Western Blotting分别检测细胞内PPAR-α、PGC-1基因的mRNA和蛋白表达。结果:游离脂肪酸诱导24h后,油红O染色显示脂肪变性;模型组TG含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);各组转氨酶没有明显变化;同时胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达降低。而葱白提取物各剂量组胞内的TG较模型组显著降低,差异有统计学意(P<0.05,P<0.01),并且胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:葱白提取物对脂肪变性肝细胞有明显的保护作用,其机制可能与PPAR-α、PGC-1基因表达上调有关。     

通解口服液对MODS模型大鼠回肠PPAR-γ、AP-1、NF-κB表达的影响

目的:观察通解口服液对多器官功能障碍综合征(MODS)模型大鼠回肠过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)、激活蛋白-1(AP-1)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法 :大鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性药物组(氨苄西林组)和通解口服液低、中、高剂量组,分别给予药物或生理盐水灌胃5次。最后1次给药后立即静脉注射8mg/kg脂多糖(LPS)复制MODS大鼠模型,6h后麻醉,免疫组化法检测回肠PPAR-γ、AP-1、NF-κB蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠回肠PPAR-γ表达显著降低,AP-1表达显著升高。通解口服液各剂量可显著降低MODS模型大鼠回肠NF-κB、AP-1的表达(P0.05,P0.01),中、高剂量可显著增加回肠PPAR-γ的表达(P0.05,P0.01)。结论:通解口服液对MODS大鼠炎症反应具有明显的抑制作用,其对回肠PPAR-γ、NF-κB和AP-1蛋白表达的调控是其缓解MODS胃肠损伤的机制之一。     

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（RMCs）增殖及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝（MTT）法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果 处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高（P<0.01, P<0.01）;FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高（P<0.01）;与高糖组比较, 24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降（P<0.01, P<0.01）。结论 高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN 蛋白及mRNA 的表达。     

益气解毒活络中药对早期糖尿病肾病大鼠单核细胞趋化蛋白-1和肿瘤坏死因子-α mRNA的影响

目的:通过观察益气解毒活络中药复方对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响,以探讨益气解毒活络中药复方防治早期糖尿病肾病的效果及其作用机制,并深入探讨早期糖尿病肾病发生发展的病理机制。方法:将实验用大鼠分为正常对照组、模型组、中药复方预防组、中药低剂量治疗组、中药高剂量治疗组及阳性西药对照组,采用高糖高脂饲料喂养结合一次尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)的造模方法复制出糖尿病肾病模型,各药物组干预4周后取肾脏,用Real-time PCR法测试各组MCP-1 mRNA和TNF-αmRNA的表达情况,最后进行组间比较。结果:模型组大鼠MCP-1mRNA和TNF-αmRNA含量均比正常对照组明显上升(P0.01),经药物干预后,各组大鼠上述两项指标的mRNA含量均比模型组显著降低(P0.01)。结论:益气解毒活络中药复方防治DN发生发展的药理机制可能是通过降低MCP-1 mRNA和TNF-αmRNA的高表达来实现;DN的发病机制可能与肾组织中MCP-1 mRNA和TNF-αmRNA的异常表达密切相关。     

辛润苦泄法对胰岛素抵抗大鼠TNF-α和PPAR-γ表达的影响

目的:研究辛润苦泄法对胰岛素抵抗大鼠肝脏和脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)表达的影响。方法:采用高糖高脂饲料喂养制作胰岛素抵抗大鼠模型,将成功造模的30只大鼠随机分为模型组、唐旨宁组和文迪雅组,每组10只。药物干预6周后,用ELISA方法定量测定血清中TNF-α水平;免疫组织化学方法检测肝脏和脂肪组织中PPAR-γ蛋白表达;RT-PCR法检测肝脏和脂肪组织中TNF-αmRNA及PPAR-γmRNA的表达。结果:高糖高脂饲料喂养6周后,模型组大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和血清胰岛素(FIN)s均明显高于对照组(P<0.01),胰岛素敏感性指数(ISI)明显低于对照组(P<0.01);药物干预6周后,与模型组比较,唐旨宁组和文迪雅组大鼠血清TNF-α显著降低(P<0.01),肝脏和脂肪组织中PPAR-γ蛋白的表达均显著增高(P<0.01,P<0.05),TNF-αmRNA表达明显减少(P<0.05,P<0.01),PPAR-γmRNA表达显著增加(P<0.01)。结论:唐旨宁能明显改善胰岛素抵抗大鼠的糖脂毒性,其作用机制可能是通过下调TNF-α、上调PPAR-γ的表达而实现的。     

止血化瘀利水方对缺氧诱导ARPE-19细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl_2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、缺氧模型组、空白对照组、阳性对照组、中药组,以CCK-8法检测细胞增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白浓度,应用荧光定量PCR检测HIF-1α和VEGF的mRNA表达水平。结果 200μmol/LCoCl_2对RPE细胞吸光度值(OD值)影响最大,设立为缺氧细胞模型浓度。与正常组比较,缺氧模型组细胞增殖活性增强,VEGF蛋白浓度增高,HIF-1α及VEGF的m RNA表达水平上调。与缺氧模型组比较,中药组、阳性对照组在24 h、48 h、72 h细胞VEGF蛋白均含量减少,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=4.242,P_(24 h)0.001;t_(48 h)=3.430,P_(48 h)0.001;t72 h=2.501,P72 h=0.006;阳性对照组:t_(24 h)=2.897,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=2.308,P_(48 h)=0.013;t72 h=4.748,P72 h0.001),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在48 h细胞HIF-1αmRNA表达下调,与缺氧模型组比较,差异有统计学意义(中药组:t=15.358,P0.001;阳性对照组:t=14.918,P0.001),24 h、72 h差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在24 h、48 h细胞VEGF m RNA表达受到抑制,与缺氧模型组比较,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=3.084,P_(24 h)=0.003;t_(48 h)=14.837,P_(48 h)0.001;阳性对照组:t_(24 h)=3.437,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=13.554,P_(48 h)0.001)。结论缺氧损伤可诱导ARPE-19细胞增殖,VEGF蛋白表达量增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达水平上调;止血化瘀利水方对缺氧RPE细胞的增殖及VEGF蛋白、HIF-1α和VEGF mRNA的表达有抑制作用。与对照组复方血栓通胶囊比较,止血化瘀利水方对RPE细胞增殖的抑制作用更持久,在24 h、48 h控制VEGF蛋白表达水平更接近正常组;而二者在抑制VEGF和HIF-1αmRNA表达方面作用相似。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度。方法:应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P0.01)和益气组(P0.05),而3组之间无显著差异(P0.05),益气组与对照组也无显著差异(P0.05)。含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P0.05),且4组之间无明显差别(P0.05)。(2)Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P0.05),且4组间差异不明显(P0.05)。各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P=0.0080.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同。     

针刺对骨骼肌钝挫伤模型大鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的:观察针刺对大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中肝细胞生长因子(HGF)蛋白表达的影响,探讨针刺治疗骨骼肌损伤的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺治疗组、针刺对照组,后3组每组再分为即刻、24h、48h3个亚组,每组各8只。采用重物自由落体打击法造成急性骨骼肌钝挫伤模型,模型组和针刺治疗组进行造模。针刺治疗组和针刺对照组采用毫针透刺损伤腓肠肌全肌束的方法干预,并于针刺后的即刻、24h、48h分别进行腓肠肌损伤部位取材。模型组于相应时间点取材,空白组同48h组时间点取材。HE染色光镜观察大鼠腓肠肌形态学改变,Western blot方法检测各组HGF蛋白表达量。结果:HE染色光镜下,模型组及针刺治疗组各时间点可见不同程度的肌纤维损害,针刺治疗组肌纤维损害程度较模型组轻,以针刺后24h和48h显著;针刺对照组各时间点仅出现轻度损伤,48h后已基本恢复正常。与空白组相比,模型组各时间点腓肠肌HGF蛋白表达均显著升高(P0.05,P0.01),针刺对照48h组HGF蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组各时间点相比,针刺治疗24h、48h组HGF蛋白表达显著下降(P0.01,P0.05);模型组、针刺治疗组和针刺对照组HGF蛋白表达随时间的推移呈现上升趋势。结论:骨骼肌钝挫伤可使大鼠骨骼肌HGF蛋白表达升高;针刺干预可下调急性期骨骼肌损伤局部HGF蛋白表达。     

3种中药复方对脑缺血再灌注大鼠脑组织MPO与ICAM-1表达影响的比较研究

目的 比较益气活血方、镇肝熄风汤与星蒌承气汤3种中药复方对脑缺血再灌注大鼠脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达的动态影响.方法 采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、镇肝熄风汤组和星萎承气汤组,采用比色法测定MPO活性、免疫组织化学染色SABC法检测I-CAM-1表达.结果 模型组再灌注各时间点脑组织MPO活性显著增高,ICAM-1蛋白表达阳性细胞数显著增加(P＜0.05或P＜0.01);24h和48h时各治疗组MPO活性显著降低,72h时益气活血方与镇肝熄风汤MPO活性显著降低(P＜0.05或P＜0.01),且24h时星萎承气汤优于其它治疗组(P＜0.01);24h和72h时各治疗组ICAM-1蛋白表达阳性细胞数显著减少(P＜0.05或P＜0.01),48h时星蒌承气汤组显著减少(P＜0.01),且24h以镇肝熄风汤组优于其它治疗组,48h星蒌承气汤组优于其它治疗组(P＜0.05或P＜0.01).结论 3种中药复方可以通过降低MPO活性,抑制ICAM-1蛋白表达,抗脑缺血再灌注损伤,24h(MPO)、48h(ICAM-1)星萎承气汤作用效果最佳,24h(ICAM-1)镇肝熄风汤组作用效果最佳.     

黄芪注射液对高糖腹透液作用下人腹膜间皮细胞AQP-1表达的影响

目的:探讨高糖腹透液对人腹膜间皮细胞(HPMC)水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响及黄芪注射液的干预作用。方法:采用HPMC体外培养模型,将HPMC分为5组:空白组、模型组、黄芪高、中、低剂量组。分别培养6、24、48h。Western blot法测定AQP-1蛋白的表达;RT-PCR检测24h时间段AQP-1 mRNA的表达。结果:Western Blot结果显示:给药6h后各组AQP-1蛋白表达无明显差异;24h后发现黄芪高、中剂量组能明显上调AQP-1蛋白表达,48h后发现仅黄芪高剂量组能上调AQP-1蛋白表达。RT-PCR结果显示:与模型组相比黄芪高、中、低剂量组AQP-1 mRNA的表达均明显上调(P<0.01),黄芪高剂量组作用更显著。结论:黄芪注射液能上调高糖环境下HPMC AQP-1的表达。