替莫唑胺-尼莫地平-O6-苄基鸟嘌呤联用对胶质瘤细胞株U251抑制作用的研究

目的观察替莫唑胺（TMZ）、尼莫地平（NIM）、O6-苄基鸟嘌呤（O6-BG）联用对脑胶质瘤细胞株的抑制作用。探讨胶质瘤耐药发生的机制,寻找有效的多药耐药逆转剂,克服耐药性的产生,提高化疗效果,增加肢质瘤细胞对化疗药物的敏感性,最大限度地抑制胶质瘤细胞增殖,延缓肿瘤复发。方法用免疫细胞化学法检测胶质瘤细胞中MGMT蛋白表达,观察比较MGMT在用O6-BG处理前后表达的差异。分别以尼莫地平和O6-BG作为耐药逆转剂,与替莫唑胺单独或联合应用于体外培养的脑胶质瘤细胞U251。用MTT法检测细胞抑制率;观察TMZ、NIM、O6-BG联用对脑胶质瘤细胞的抑制作用。结果与对照组相比,MGMT在用O6-BG处理后表达明显减少。MTT比色法分别检测TMZ、TMZ＋NIM、TMZ＋O6-BG组及TMZ＋NIM＋O6-BG组对胶质瘤细胞U251的抑制作用,结果显示各组对胶质瘤细胞的抑制作用为TMZ＋NIM＋O6-BG联合组〉TMZ＋O6-BG〉TMZ＋NIM〉TMZ。与TMZ组比较,TMZ＋NIM组、TMZ＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;同样,与TMZ组比较,TMZ＋NIM＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率也显著升高,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论O6-BG能够有效抑制MGMT表达,从而能逆转人脑胶质瘤细胞株U251对替莫唑胺的耐药性。尼莫地平、O6-BG二者均可增强替莫唑胺时脑胶质瘤细胞株U251的细胞毒作用,对于替莫唑胺的耐药有较好的逆转效果,因而可望作为临床化疗增敏剂与替莫唑胺联合使用。替莫唑胺、尼莫地平、O6-BG三者联用对肢质瘤细胞株U251有更好的抑制作用,其效果优于二者联合应用,强于单独应用替莫唑胺。     

大剂量冲击法建立胶质瘤耐替莫唑胺细胞株及生物学鉴定

目的:体外构建胶质瘤耐替莫唑胺细胞株,并探讨其生物学特征。方法:采用大剂量冲击法诱导构建人脑胶质瘤耐替莫唑胺(TMZ)U251细胞株(命名为U251/TMZ);采用MTT法检测亲代细胞(U251)和U251/TMZ对TMZ的敏感性;绘制细胞增殖倍增曲线,比较两种细胞生长情况;采用免疫荧光技术检测两者CD133的表达;蛋白质印迹法检测两种细胞ABCG2的表达。结果:成功构建胶质瘤耐替莫唑胺细胞株,其耐药指数为亲代的8.1倍(t=-63.28,P=0.00);U251/TMZ增殖倍增较亲代细胞延长;U251/TMZ细胞表达CD133较亲代细胞明显增加(t=45.35,P=0.00),U251/TMZ细胞ABCG2表达较亲代明显增高(t=6.19,P=0.00)。结论:通过大剂量冲击法构建的U251/TMZ细胞产生一定的耐药性,具有明显的胶质瘤干细胞生物学特性。     

CCND1表达沉默促进胶质母细胞瘤细胞株对替莫唑胺的敏感性

目的 利用已构建的CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44,筛选能够与CCND1协同抑制胶质母细胞瘤细胞增殖的化学治疗药物.方法 用蛋白质印迹法检测CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44中多药耐药基因MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp)及凋亡因子Bcl-2、Caspase-3的表达.使用卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、替莫唑胺(TMZ)3种化学治疗药物分别处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞,筛选能够与CCND1表达沉默协同抑制肿瘤细胞生长的化学治疗药物,并在人源性胶质母细胞瘤细胞株系U251中进一步验证.结果 蛋白质印迹结果示CCND1表达沉默能够下调P-gp、Bcl-2的表达,上调Caspase-3的表达(P均＜0.01).BCNU (0.05、0.25 μg/mL)、CCNU(20、80 μg/mL)处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞的第2、3、4、5天时,细胞生长曲线的差异均无统计学意义;而在药物处理后细胞培养的第4、5天,CCND1表达沉默SHG-44细胞的生长受到TMZ(9.1μg/mL)的抑制作用较亲代SHG-44细胞强(P＜0.05).U251细胞实验证实CCND1表达沉默促进TMZ的化学治疗敏感性.结论 CCND1表达沉默联合TMZ较两者单独作用能更有效地抑制人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44的增殖,提示CCND1可能参与TMZ化学治疗耐药机制.     

PDT通过氧化应激增加TMZ对胶质瘤U251细胞的抑制

目的 多重耐药性(multiple drug resistance,MDR)仍在替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗胶质瘤过程中不可避免的出现,成为胶质瘤预后不佳和局部侵袭复发的重要原因。本研究旨在观察光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是否能增加人胶质瘤细胞U251对TMZ的化疗敏感度,并深入探讨其增敏机制。方法 人源胶质瘤细胞U251进行常规体外培养,根据处理方法分为5组,即对照 (control) 组、TMZ组、PDT组、TMZ+激光(TMZ+Laser)组和PDT+TMZ组,应用CCK-8观察U251细胞活性、Transwell小室观察细胞侵袭能力、免疫荧光观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,结果数据用GraphPad Prism软件统计分析。结果 CCK-8实验表明在TMZ处理后8h,即产生了U251细胞对TMZ的治疗抵抗。PDT协同应用于TMZ处理8h的U251细胞后,PDT+TMZ组光密度(OD)值、侵袭细胞数量、MMP水平与control组和TMZ组比较均降低,而ROS 升高,进一步分析表明,ROS 和MMP水平呈负相关(r=-0.559,P<0.05)。结论 PDT通过提高TMZ作用后的胶质瘤U251细胞内的ROS总量,加强了对U251细胞增殖和侵袭能力的抑制,延缓了MDR的发生。     

土木香内酯增效替莫唑胺抑制胶质瘤干细胞增殖的分子机制

目的:研究土木香内酯(ALT)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤干细胞增殖的作用及其机制。方法:取人胶质瘤细胞U87MG、U251MG进行培养,ALT、TMZ单独或联合干预。使用MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡通路蛋白Cleaved-caspase-9、Caspase-9、Bcl-2和Bcl-xl等表达量。结果:ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞生存率明显低于单独用药组差异有统计学意义(P<0.05);ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞凋亡比例明显高于单独用药组,差异有统计学意义(P<0.05);与单独使用TMZ相比,ALT与TMZ联合使用后,促凋亡蛋白Cleaved-caspase-9明显增强,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)结论:ALT可增加TMZ抑制胶质瘤干细胞增殖的效果,且其主要通过上调促凋亡蛋白,下调抑凋亡蛋白实现。     

土木香内酯增效替莫唑胺抑制胶质瘤干细胞增殖的分子机制

目的:研究土木香内酯(ALT)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤干细胞增殖的作用及其机制。方法:取人胶质瘤细胞U87MG、U251MG进行培养,ALT、TMZ单独或联合干预。使用MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡通路蛋白Cleaved-caspase-9、Caspase-9、Bcl-2和Bcl-xl等表达量。结果:ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞生存率明显低于单独用药组差异有统计学意义(P0.05);ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞凋亡比例明显高于单独用药组,差异有统计学意义(P0.05);与单独使用TMZ相比,ALT与TMZ联合使用后,促凋亡蛋白Cleaved-caspase-9明显增强,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl明显降低,差异有统计学意义(P0.05)结论:ALT可增加TMZ抑制胶质瘤干细胞增殖的效果,且其主要通过上调促凋亡蛋白,下调抑凋亡蛋白实现。     

3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)体外趋化组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的实验研究

目的 观察胶质瘤细胞株U87(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)、U251(人神经胶质细胞瘤细胞)及T98G(人胶质母细胞瘤细胞)对U937(组织细胞淋巴瘤细胞)的趋化活性.方法 体外传代培养U87、U251、T98G及U937细胞,应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)对U937细胞的趋化活性.结果 Transwell小室下孔细胞离心浓缩后白血球计数板计数;3种胶质瘤细胞株对于U937细胞趋化活性明显高于正常对照组(P＜0.05);U87对于U937细胞趋化活性明显高于U251及T98G (P＜0.05);U251及T98G对于U937细胞趋化活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)可促进U937细胞的趋化迁移,U87趋化活性更为明显.     

胶质瘤细胞株U251,SHG-44,BT325中β-catenin的表达及其成瘤性分析

目的：探讨β-catenin在人神经胶质细胞株（HA）、人神经胶质瘤细胞株U251,SHG-44,BT325中的表达及其与恶性程度的相关性.方法：运用实时荧光定量PCR检测β-catenin在HA,U251,SHG-44,BT325细胞内的表达水平,并通过免疫荧光辅助分析β-catenin的表达及细胞内定位情况.建立裸鼠胶质瘤模型,观察肿瘤的生长.结果：β-catenin基因在人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株内的表达均高于HA细胞株,其中U251细胞表达最高,SHG-44细胞次之,而BT325细胞表达最低.在HA细胞株中,β-catenin蛋白主要在细胞膜表达,而在人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株中β-catenin蛋白表达出现了明显的胞质和胞核的易位表达.通过对荷瘤鼠模型的观察发现U251细胞所造肿瘤生长速度最快,SHG-44细胞次之,而BT325细胞的肿瘤生长速度最慢.结论：β-catenin基因表达与人神经胶质瘤U251,SHG-44,BT325细胞株恶性程度呈正相关.U251细胞表达β-catenin最高,更适合神经胶质细胞瘤Wnt/β-catenin信号传导通路相关研究.     

不同浓度七氟醚对人脑胶质瘤细胞U251替莫唑胺抵抗的影响及机制初探

目的 探究不同浓度七氟醚对人脑胶质瘤细胞U251替莫唑胺(TMZ)抵抗的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 培养对数生长期的人脑胶质瘤细胞U251,传代后将细胞分为3组:对照组、低七氟醚组及高七氟醚组.对照组在5%CO2气体条件下培养,低七氟醚组在5%CO2+1%七氟醚气体条件下培养,高七氟醚组在5%CO2+2.5%七氟醚气体条件下培养,总气流量为2 L/min.MTT法检测3组细胞TMZ半抑制浓度(IC50)的变化,荧光定量链式聚合酶反应(qPCR)检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达水平的变化,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测HIF-1α蛋白表达水平的变化.结果 MTT结果显示对照组细胞TMZ IC50值显著高于高七氟醚组IC50值(P<0.05),而与低七氟醚组IC50值差异无统计学意义(P>0.05).qPCR结果显示对照组HIF-1αmRNA相对表达水平显著高于低七氟醚组及高七氟醚组(P<0.05),且低七氟醚组HIF-1αmRNA相对表达水平显著高于高七氟醚组(P<0.05),Western blotting结果显示对照组HIF-1α蛋白表达水平明显高于低七氟醚组及高七氟醚组,且低七氟醚组HIF-1α蛋白表达水平明显高于高七氟醚组.结论 七氟醚促进人脑胶质瘤细胞U251对TMZ的敏感性,可能与下调HIF-1α有关.     

CD82/KAI1在神经胶质瘤细胞株中的表达及对细胞迁移能力的影响

目的 研究CD82/KAI1在胶质瘤CHG-5及U251细胞株的表达及意义.方法 RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光检测CHG-5及U251细胞中CD82/KAI1的表达;分别设立1∶100、1∶200 CD82/KAI1抗体干预组和空白对照组,通过划痕实验对CD82/KAI1对细胞迁移能力的影响进行分析.结果 ①U251细胞中CD82/KAI1的mRNA表达高于CHG-5细胞(P<0.01);U251细胞中CD82/KAI1的蛋白水平表达高于CHG-5细胞(P＜0.01).②CD82/KAI1抗体干预组迁移细胞数量均显著高于对照组(P<0.05),且迁移细胞数量随抗体浓度升高而增加(P<0.05).结论 CD82/KAI1在恶性胶质瘤细胞株中表达,且在U251细胞中表达较CHG-5细胞高.CD82/KAI1可抑制胶质瘤U251细胞的迁移.     

抑制OGG1增加替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的敏感性及机制探讨

目的探讨8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺(temozolomide,TMZ化疗敏感性的影响。方法采用光镜、CCK-8、活性氧（ROS）检测试剂盒DCFH-DA探针、Western blot观察及检测替莫唑胺处理后神经胶质瘤细胞的形态、细胞活力、细胞内活性氧水平及OGG1蛋白的表达水平; Real time-PCR技术检测OGG1m RNA干扰率; OGG1下调后,U251的细胞存活率及OGG1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,替莫唑胺处理后,U251细胞的生存能力显著下降（P<0.05）,ROS水平显著增加（P<0.05）,OGG1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺剂量为100μmol/L时,对U251细胞的损伤最大（P<0.01）。当OGG1 si RNA干扰U251细胞OGG1后,OGG1 m RNA及OGG1蛋白的表达水平降低（P<0.05）,而利用低剂量的替莫唑胺对U251细胞处理时,细胞存活率显著降低（P <0.05）。结论 OGG1通过ROS通路,介导替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的氧化损伤,OGG1抑制可增强神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性。     

TKTL-1基因对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响

目的:研究人转酮醇酶样蛋白1(TKTL-1)表达对神经胶质瘤细胞凋亡和迁徙的影响。方法:分别在神经胶质瘤组织、U87和U251神经胶质瘤细胞株中检测TKTL-1和mRNA表达水平。用RNA干扰方法(SiRNA)特异性抑制TKTL-1在U87和U251细胞株的表达。细胞增殖实验用于评估TKTL-1的迁徙侵袭能力,Annexin V/PI双染色法和流式细胞仪用于评估细胞的凋亡。结果:正常脑组织、低级别和高级别神经胶质瘤中TKTL-1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.28、21.46±3.17和41.58±3.06。神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于正常脑组织(P<0.01)。高级别神经胶质瘤组织中TKTL-1 mRNA的表达水平高于低级别神经胶质瘤组织(P<0.05)。在高、低级别神经胶质瘤中,TKTL-1蛋白的阳性表达率分别为97.67%(42/43)和63.64%(14/22),高于正常脑组织(P<0.05)。流式细胞术分析显示,TKTL-1基因干扰可诱导U87和U251细胞系发生早期凋亡(P<0.05)。通过SiRNA特异性干扰TKTL-1表达后,U87和U251细胞的增殖活性降低(P<0.01)。克隆形成实验表明,通过抑制TKTL-1的表达降低了U251和U87细胞中肿瘤细胞克隆的形成(P<0.01)。蛋白质印迹分析显示SiRNA后神经胶质瘤细胞株(U251/U87)HIF-1α蛋白表达降低(P<0.01)。结论:TKTL-1在神经胶质瘤组织和细胞株中表达明显上升。特异性干扰TKTL-1的表达可减少细胞的迁徙,促进细胞凋亡。TKTL-1可作为神经胶质瘤基因治疗的潜在分子靶点,其表达水平可作为神经胶质瘤的预后指标。     

替莫唑胺诱导的人脑胶质瘤耐药细胞系的建立及其耐药性逆转

目的建立对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药的胶质瘤细胞系并探讨其逆转方式。方法通过体外分步诱导法使人脑胶质瘤U251细胞对TMZ产生耐药性;利用细胞集落形成实验检测U251/TR的耐药指数;采用MTT法检测O6-BG对TMZ的细胞毒反转效应。结果历经6个月建立了对TMZ耐药的U251/TR,在0.25~16μg/mlTMZ培养液中,其细胞形成相对率是未诱导组U251细胞的4~11倍;U251/TR对TMZ的耐药指数约为4;MGMT抑制剂O6-BG可明显增加TMZ对耐药系的细胞毒作用。结论通过分步诱导法在体外建立了一株对TMZ耐药的细胞系,其耐药性可被O6-BG成功地逆转成药敏细胞。     

p53靶向小分子RITA联合替莫唑胺对胶质瘤细胞体外生长的影响

目的:研究p53靶向小分子肿瘤凋亡和p53再生化合物(RITA)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞体外生长的影响。方法:培养人胶质瘤细胞株U87并随机分为RITA+TMZ组(5μmol/L RITA和10μmol/L TMZ处理)、TMZ组(10μmol/L TMZ处理)、对照组(不含药物的DMEM处理)。处理后24h,测定细胞中p53下游细胞周期分子、凋亡分子及侵袭分子的表达量。结果:RITA+TMZ组、TMZ组细胞中p21~(cip1)、Per2、ATM、E-cadherin的蛋白表达量显著高于对照组,CDK4、CDK6、p-Rb、E2F、MDM2、c-myc、ILK、Snail、Slug的蛋白表达量显著低于对照组;RITA+TMZ组细胞中p21~(cip1)、Per2、ATM、E-cadherin的蛋白表达量显著高于TMZ组,CDK4、CDK6、p-Rb、E2F、MDM2、c-myc、ILK、Snail、Slug的蛋白表达量显著低于TMZ组。结论:p53靶向小分子RITA联合替莫唑胺处理胶质瘤细胞能够诱导p53所介导的细胞周期阻滞、细胞凋亡激活以及细胞侵袭抑制。     

蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱（DAS）对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺（TMZ组）和空白对照（对照组）处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低（P <0.05）,DAS组细胞活力低于TMZ组（P <0.05）。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少（P <0.05）。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加（P <0.05）。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、L...     

青蒿琥酯增加人脑胶质瘤细胞CHG-5对β射线的敏感性

目的从青蒿素及其衍生物中筛选出对人脑胶质瘤细胞CHG-5及U87具有较好放射增敏效果的药物,并初步探讨其放射增敏机制。方法①采用MTT法测定上述青蒿素衍生物对2株胶质瘤细胞的IC50,观察以20%IC50浓度的青蒿素衍生物联合β射线对CHG-5及U87的放射增敏效果,从中筛选出放射增敏效果最好的药物;②通过克隆形成法计算目标药物的放射增敏比;③划痕法观察它对β射线照射后CHG-5细胞迁移的影响;④检测胞内还原型GSH水平;⑤流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。结果青蒿素(artemisinin,ART)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)、青蒿琥酯(artesunate,AS)对CHG-5的IC50分别为:1.47、0.20、0.29mmol/L;对U87,则分别为1.61、0.25、0.46mmol/L。以20%IC50为β射线的协同给药浓度,仅有AS可以同时抑制经β射线照射后的CHG-5及U87细胞的增殖。且0.06mmol/L的AS对CHG-5细胞的放射增敏比为1.25,该浓度的AS可以明显地抑制CHG-5细胞的迁移。GSH结果表明0.06mmol/LAS处理组较未处理组细...     

LINC00467调控miR-363促进胶质瘤替莫唑胺耐药的机制研究

目的 探讨LINC00467调控miR-363促进胶质瘤(GBM)替莫唑胺(TMZ)耐药的作用机制.方法 亲本GBM细胞系 A172和 U373构建TMZ抗性细胞株 A172TR 和 U373TR,通过 CCK-8、Western Blot 以及 AnnexinV-FITC/PI法验证耐TMZ细胞模型.实时荧光定量PC...     

盐酸氟桂利嗪联合尼莫地平治疗偏头痛近期疗效观察

目的 观察盐酸氟桂利嗪联合尼莫地平治疗偏头痛的短期疗效.方法 选取2011年3月—2013年8月在我院治疗的90例偏头痛患者,按来诊时间分为3组,分别给予盐酸氟桂利嗪、尼莫地平、以及盐酸氟桂利嗪联合尼莫地平治疗,氟桂利嗪每晚5 mg,尼莫地平40 mg,3次/d,均为饭后半个小时吃药,4周为1个疗程,观察4周后疗效.结果 治疗4周后,通过HIT-6评分显示,盐酸氟桂利嗪组由治疗前(64.3±3.9)分变成治疗后(45.7±3.7)分,尼莫地平组由治疗前(66.7±4.2)分变成治疗后(43.9±4.2)分,而联合治疗组由治疗前(65.9±5.1)分变为治疗后(36.5±4.9)分.结论 盐酸氟桂利嗪联合尼莫地平治疗偏头痛效果显著、安全性高,值得在临床上推广使用.     

干扰素-α/β体外增敏替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞作用

【目的】探讨干扰素是否能增加替莫唑胺(TMZ)对O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)阳性胶质瘤干细胞的抗肿瘤作用及其可能机制。【方法】采用"悬浮克隆球形成法"对常规培养条件下MGMT阴性表达的胶质瘤细胞株U251、SKMG-4进行诱导,获得MGMT阳性的胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G;应用CCK-8法检测干扰素-α和干扰素-β联合替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞的杀伤效应;分别应用逆转录PCR(RT-PCR)、Western-blot检测干扰素-α/β作用后,MGMT阳性胶质瘤干细胞MGMT、NF-κB表达的变化。【结果】应用悬浮克隆球形成法,成功将U251、SKMG-4诱导为具有干细胞特征的胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G,Western-blot检测显示胶质瘤干细胞中MGMT蛋白表达明显增高。对MGMT阳性胶质瘤干细胞生长抑制实验显示,干扰素-α/β作用后提高了替莫唑胺的化疗敏感性,杀伤效应显著增强;RT-PCR、Western-blot检测结果表明,干扰素-α/β作用后,MGMT阳性胶质瘤干细胞NF-κB、MGMT在mRNA及蛋白水平表达均明显降低。【结论】对于MGMT阳性的胶质瘤干细胞,干扰素-α/β能够显著增加替莫唑胺的抗肿瘤效应,其机制可能是干扰素-α/β干预后,下调NF-KB的表达,从而降低了MGMT的转录表达,逆转替莫唑胺的化疗耐药。     

三种胶质瘤细胞株U87、U251及T98G体外趋化血液单核细胞的实验研究

目的观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化作用,探讨胶质瘤组织相关巨噬细胞的来源及其临床病理意义.方法应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化作用.结果 3种胶质瘤细胞株(U87、U251、T98G)对血液单核细胞的趋化活性高于空白对照组(无血清培养液)(P<0.01);其中U87细胞株对血液单核细胞的趋化活性高于U251、T98G细胞株(P<0.01),U251细胞株对血液单核细胞的趋化活性高于T98G细胞株(P<0.05).结论 3种胶质瘤细胞株均具有趋化血液单核细胞能力,提示血液中单核细胞是胶质瘤相关巨噬细胞的重要来源,在胶质瘤发生、发展中起到重要作用.