杠柳苷对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究杠柳苷对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其影响细胞迁移的机制。方法:通过CCK-8法检测CNE2细胞在24、48、72 h的增殖抑制情况并计算细胞抑制率;细胞平板克隆形成实验观察CNE2细胞的克隆形成能力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测CNE2细胞凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测CNE2细胞的迁移情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测与迁移相关基因MMP2、MMP7、MMP9 mRNA的表达情况。结果:杠柳苷呈浓度和时间依赖性抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖;与对照组比较,不同浓度的杠柳苷作用CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并显著降低了细胞的迁移能力,与迁移相关基因MMP2、MMP7、MMP9 mRNA表达水平显著降低。结论:杠柳苷可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,诱导CNE2细胞凋亡,并通过下调MMP2、MMP7、MMP9 mRNA的表达抑制CNE2细胞的迁移。     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

华蟾酥毒基对U2OS细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞系U2OS增殖和凋亡的影响,从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞系U2OS,CCK-8法检测不同浓度华蟾酥毒基对骨肉瘤细胞系U2OS增殖的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色,显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化,应用逆转录荧光定量PCR法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关mRNA表达的影响。结果:CCK-8检测显示华蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤U2OS细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性,在华蟾酥毒基浓度为20 nmol·L~(-1)时,对细胞增殖的抑制作用明显增强;流式细胞术检测显示华蟾酥毒基可明显诱导骨肉瘤细胞凋亡;Hoechst 33258染色可见凋亡小体;逆转录荧光定量PCR分析显示经华蟾酥毒基处理后的骨肉瘤细胞系U2OS表达Caspase-3,8,9较用药前明显增高。结论:华蟾酥毒基对骨肉瘤细胞系U2OS的增殖有显著抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用机制可能与激活Caspase依赖的凋亡途径有关。     

朝天罐提取物体外抗肿瘤活性研究

目的:研究朝天罐(Osbeckia opipara,CTG)水提取物体外抗肿瘤活性。方法:采用CCK-8法和细胞克隆形成实验,研究不同浓度CTG水提取物对人肝癌细胞7721、人鼻咽癌细胞CNE-2增殖抑制作用;通过Hoechst33342荧光染色法检测细胞核染色质的变化来评价CTG对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:CCK8和细胞克隆形成实验显示,CTG水提取物体外显著性抑制SSMG-7721和CNE-2细胞增殖; Hoechst 33342检测发现细胞核染色质发生明显改变。结论:CTG水提取物具有一定的抗肿瘤活性。     

铁皮石斛诱导人鼻咽癌细胞CNE2凋亡及其可能的分子机制

目的探讨铁皮石斛抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制。方法分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪与Western blot检测新鲜铁皮石斛提取物抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-xL,mcl-1、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达,了解铁皮石斛对鼻咽癌细胞的作用及机理。结果经MTT法检测显示铁皮石斛提取物对CNE2有明显抑制作用;经流式细胞仪检测显示,与对照组相比石斛提取物对CNE2细胞株有明显促进细胞凋亡作用(P0.01),而且有明显的时间依赖性及浓度依赖性。Western blot结果显示:Bcl-xL和Mcl-1表达均下降,Caspase-8、Caspase-9有明显的表达;而Caspase-3也有表达。提示石斛能抑制Bcl-xL和Mcl-1的表达,并可能与线粒体通路的细胞凋亡及死亡通路的细胞凋亡有关。结论铁皮石斛具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-xL,Mcl-1蛋白下调、促进Caspase-3的活化等有关,并可能与死亡受体通路的细胞凋亡和线粒体通路的细胞凋亡均有关。     

无患子皂苷诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨无患子皂苷对人肺癌A549细胞的影响及其可能的分子机制。方法:采用MTT法检测无患子皂苷溶液对A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258荧光染色和流式细胞术观察和检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR法检测凋亡基因bcl-2 m RNA的表达。结果:无患子皂苷能显著抑制A549细胞的增殖,且呈浓度依赖性;Hoechst 33258荧光染色和流式细胞术结果显示无患子皂苷可以诱导A549细胞凋亡,实时荧光定量PCR法表明不同浓度的无患子皂苷均能明显降低bcl-2的表达。结论:无患子皂苷可通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,其作用可能与下调细胞凋亡相关基因bcl-2的表达有关。     

来源于海洋真菌的Oxalicumone A诱导肝细胞L-02凋亡的毒性作用机制研究

目的评价来源于海洋真菌Penicillium sp.的新药候选化合物Oxalicumone A(POA)对人正常肝细胞L-02的细胞毒性作用,初步探讨POA诱导其凋亡的作用机制。方法以体外培养的L-02为实验对象,CCK-8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率和增殖周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Fas、Bax以及Bcl-2的表达。结果 CCK-8检测结果表明,POA对L-02细胞有一定的时间、浓度依赖性的抑制作用;Hoechst 33258染色可见细胞出现核固缩、碎裂、浓染等典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞仪检测显示细胞早期凋亡率和Sub-G1、S、G2/M期出现了相应比例的增加;Western blot法表明POA显著增加了凋亡蛋白Fas、Bax表达(P0.05),降低了抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P0.05)。结论 POA体外诱导L-02细胞毒活性,产生凋亡并经过线粒体信号通路,其作用机制与Bcl-2表达下调以及Fas、Bax表达上调有关。     

木瓜总三萜诱导人胃癌细胞HGC-27凋亡的作用及机制研究

目的:探讨木瓜总三萜诱导的胃癌细胞HGC-27凋亡作用与PI3K/Akt/NAG-1信号通路的关系。方法:MTT法及平板克隆检测木瓜总三萜对HGC-27细胞增殖的影响;显微镜下观察木瓜总三萜处理后细胞形态变化;Hoechst 33258染色检测木瓜总三萜对HGC-27细胞凋亡形态变化的影响;Western blot检测HGC-27细胞中PI3K/Akt/NAG-1信号通路相关蛋白表达。结果:MTT及平板克隆实验结果表明木瓜总三萜对HGC-27细胞增殖具有抑制作用,其抑制作用随浓度升高及时间延长而增强;木瓜总三萜处理后胃癌细胞其圆梭形态明显变圆漂浮且出现细胞碎片,随着浓度升高越加明显;Hoechst 33258染色结果表明木瓜总三萜可诱导HGC-27细胞凋亡;Western blot检测表明木瓜总三萜各组除Akt蛋白水平无明显变化外,PI3K、p-Akt、NAG-1蛋白表达均显著低于空白对照组(P0.05)。结论:木瓜总三萜能抑制胃癌细胞HGC-27的增殖,可诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/NAG-1信号通路表达有关。     

复方天仙胶囊体外对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨复方天仙胶囊对体外培养的鼻咽癌细胞株细胞增殖和凋亡的影响.方法 将复方天仙胶囊作用于体外培养的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2 TWO3、C666-1,运用MTT法检测药物作用后细胞增殖的改变,并用流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡的改变,同时结合倒置显微镜观察其诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.结果 复方天仙胶囊可抑制CNE1、CNE2 、TWO3 、C666-1细胞的增殖,其作用具有时间和浓度依赖性,同时可诱导鼻咽癌细胞凋亡.结论 复方天仙胶囊可诱导鼻咽癌细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡

目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人鼻咽癌CNE作用及其可能作用机制.方法:通过细胞形态学观察、生长曲线绘制、MTT检测以及克隆实验观察TanⅡA对CNE细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察TanⅡA对CNE细胞凋亡的影响;采用荧光分光光度计检测TanⅡA对CNE细胞细胞内钙及线粒体膜电位的影响;RT-PCR检测TanⅡA对CNE细胞Bad,MT-1A mRNA表达的影响.结果:TanⅡA能抑制CNE细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用CNE细胞24,48,72 h的IC5o分别为45.7,24.8,3.3 mg· L-1.TanⅡA作用CNE细胞24h后,CNE细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,CNE细胞凋亡百分率逐渐增大.TanⅡA作用后,CNE细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达上调.结论:TanⅡA具有抗CNE作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达上调有关.     

青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:通过青藤碱(Sinomeine,SIN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制。方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖。     

毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移及侵袭的影响

目的:探讨毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移、侵袭的影响及机制.方法:细胞活性与增殖检测(CCK-8)法检测细胞增殖活性,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),p53 mRNA表达,划痕实验检测...     

山楂酸通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌CNE2细胞自噬研究

目的研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强(P<0.05);山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

芹菜素诱导膀胱癌5637细胞凋亡研究

目的:研究芹菜素对人膀胱癌5637细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用20~80μmol/L芹菜素处理5637细胞,MTT法检测膀胱癌5637细胞增殖抑制率;细胞软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤能力的抑制效率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变。结果:芹菜素呈浓度依赖的抑制5637细胞的增殖;80μmol/L芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;5637细胞的克隆形成能力随着芹菜素浓度增加而显著降低。结论:芹菜素能够抑制人膀胱癌5637细胞的增殖,抑制5637的克隆形成,并诱导细胞凋亡。     

四君子汤提取物对人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的抑制作用

目的探究四君子汤提取物(Sijunzi Decoction extract,SDE)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的作用。方法采用不同质量浓度SDE作用于MDA-MB-468细胞,CCK-8实验和细胞划痕实验检测SDE对细胞增殖和迁移能力的影响;克隆形成实验检测SDE对细胞集落形成能力的影响;Hoechst33342染色技术和流式细胞术(FCM)检测SDE对细胞凋亡和周期的影响;Western blotting技术检测SDE对信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的影响。结果与对照组比较,SDE对MDA-MB-468细胞有一定的抑制作用(P0.05),且呈质量浓度和时间依赖性。克隆形成实验结果表明SDE能够抑制细胞克隆形成。细胞迁移实验结果显示,SDE中、高质量浓度能够明显减弱细胞划痕愈合能力(P0.001)。FCM检测凋亡结果显示,SDE各质量浓度组细胞早期凋亡率和总凋亡率逐渐上升,呈质量浓度依赖性,且中、高质量浓度的SDE能显著诱导细胞凋亡(P0.01、0.001)。SDE能够影响细胞周期,使G2期细胞显著减少(P0.01)。Westernblotting结果显示,SDE处理细胞后,STAT3蛋白表达水平显著降低。结论 SDE能够抑制MDA-MB-468细胞的增殖和克隆形成,促进其凋亡,使G2期细胞减少。其机制可能与调控STAT3通路有关。     

蛇床子素对低分化鼻咽癌CNE2干细胞增殖、放疗敏感性的影响

目的探讨蛇床子素对低分化鼻咽癌CNE2干细胞增殖、放疗敏感性的影响及其机制。方法采用无血清培养基分离培养低分化鼻咽癌CNE2细胞的干细胞;流式细胞仪检测干细胞表面标记物CD44+/CD24-low的表达和乙醛脱氢酶(ALDH)活性;MTT检测不同质量浓度(0、20、40、80μg/m L)蛇床子素处理后,CNE2干细胞增殖能力的差异;克隆形成实验检测蛇床子素(40μg/m L)联合放疗后(0、2、5 Gy),CNE2干细胞克隆形成能力的差异;Western blotting法检测不同质量浓度蛇床子素处理、蛇床子素联合不同放射剂量放疗后,鼻咽癌CNE2干细胞中p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达水平。结果在无血清培养基中可分离培养稳定传代的低分化鼻咽癌CNE2干性细胞。细胞CD44+/CD24-low、ALDH+的表达高于亲本细胞(P0.05);MTT结果显示,与对照组相比,不同质量浓度的蛇床子素作用不同时间后,干细胞增殖抑制率明显增加(P0.05),且随着蛇床子素质量浓度的增加及作用时间的延长,其抑制作用增强(P0.05);克隆形成实验结果显示,与对照组相比,各给药组干细胞克隆形成率均明显降低,蛇床子素+放疗组显著低于蛇床子素组及放疗组(P0.05);Western blotting检测结果显示,随着蛇床子素质量浓度的增加,放射剂量的增加,与对照组相比,干细胞p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1的蛋白表达水平均明显降低,蛇床子素+放疗组显著低于蛇床子素组及放疗组(P0.05);结论蛇床子素能有效抑制低分化鼻咽癌CNE2干细胞的增殖并促进其放疗敏感性,其机制可能是蛇床子素抑制肿瘤干细胞p-GSK-3、β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达,从而抑制了干细胞增殖,促进了放疗敏感性。     

Piscidinol A诱导人白血病K562细胞凋亡及其作用机制

目的:初步研究Piscidinol A对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖抑制作用及抗肿瘤分子作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Piscidinol A对细胞中凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Piscidinol A对K562细胞具有增殖抑制作用且呈浓度和时间依赖关系,24 h时IC_(50)为27.36 mg/L;细胞凋亡染色示有典型的细胞凋亡形态出现;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测发现Piscidinol A可诱导K562细胞凋亡,其凋亡率呈浓度依赖性;Western blot法检测到Piscidinol A能上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:Piscidinol A能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白表达量变化有关。     

澳洲茄边碱对大肠癌RKO细胞增殖和凋亡作用

目的观察澳洲茄边碱对人大肠癌RKO细胞增殖及凋亡作用。方法不同浓度澳洲茄边碱作用RKO细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性。结果澳洲茄边碱可抑制RKO细胞增殖,呈剂量与时间依赖性。澳洲茄边碱可抑制RKO细胞克隆形成,呈剂量依赖性。澳洲茄边碱可促RKO细胞凋亡。澳洲茄边碱同时可增强RKO细胞Caspase-3活性。结论澳洲茄边碱可以抑制RKO细胞增殖和克隆形成,促RKO细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关。     

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的：观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法：倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC／PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果：苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变：细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0／G1期比例明显增高,S期、G0／M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论：苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。     

龙葵单体澳洲茄边碱对大肠癌HCT116细胞增殖和凋亡作用

目的:观察龙葵单体澳洲茄边碱对人大肠癌HCT116细胞增殖及凋亡作用。方法:不同浓度澳洲茄边碱作用HCT116细胞。CCK-8法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性。结果:澳洲茄边碱可抑制HCT116细胞增殖,呈剂量与时间依赖性。澳洲茄边碱可抑制HCT116细胞克隆形成,呈剂量依赖性。澳洲茄边碱可促HCT116细胞凋亡。澳洲茄边碱同时可增强HCT116细胞Caspase-3活性。结论:澳洲茄边碱可以抑制HCT116细胞增殖和克隆形成,促HCT116细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关。