补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞connexin43影响机制的研究

目的:探讨补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的影响机制。方法:运用线栓法建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,补阳还五汤治疗1 d后ELISA法检测细胞因子[白细胞介素-1 beta,(IL-1β)和白细胞介素-10,(IL-10)]的表达,通过使用NF-κB激动剂增强炎症反应后,比较海马CA1区Cx43的表达,同时,使用HE染色观察细胞形态学改变。在补阳还五汤治疗7 d后,免疫组织化学染色法观察b FGF的表达情况,联合使用b FGF中和抗体后比较各组海马CA1区Cx43的表达同时HE染色观察细胞形态学改变。结果:同模型组相比,补阳还五汤组脑缺血再灌注1天后,IL-1β减少IL-10增加(P0.05);联合使用NF-κB激动剂后补阳还五汤对海马CA1区Cx43的下调作用被抑制(P0.05),HE染色显示联合组较补阳还五汤组神经元损伤加重。脑缺血7 d时补阳还五汤增强b FGF和Cx43的表达;联合使用b FGF中和抗体后海马CA1区Cx43的表达较补阳还五汤组降低(P0.05),HE染色显示同补阳还五汤组比,联合组神经元状态更差。结论:补阳还五汤在脑缺血后1 d可能是通过抑制炎症下调Cx43发挥保护作用,而在脑缺血后7 d可能通过上调b FGF增强Cx43促进修复。     

2型糖尿病大鼠前额叶皮质及海马神经元形态的改变研究

目的探讨2型糖尿病大鼠前额叶皮质及海马神经元形态的改变及其意义。方法利用链脲佐菌素加高脂喂养制作2型糖尿病大鼠模型,利用Golgi-cox染色观察模型大鼠前额叶皮质及海马CA1区神经元树突形态及树突棘密度。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠额叶皮质及海马CA1区神经元出现树突减少,树突棘密度降低。结论额叶皮质及海马神经元形态的改变是导致糖尿病患者出现神经系统功能障碍的形态学基础。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠恢复期突触可塑性的影响

目的:探讨补阳还五汤在脑缺血再灌注大鼠恢复期提高突触可塑性的机制研究。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤联合缝隙连接蛋白43(Cx43)抑制剂(Gap26)组,补阳还五汤每天灌胃2次(16 g·kg^-1),Gap26于术后第3天腹腔注射,每天1次(25μg·kg^-1);7 d后取材,采用透射电镜观察缺血侧海马突触和缝隙连接超微结构的改变,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测缺血侧海马突触素(SYN),生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达。结果:电镜下观察到假手术组突触结构完整、清晰,突触数量多,缝隙连接结构清晰;模型组缺血侧海马突触结构溶解,突触数量减少,缝隙连接消失,存在较大间隙,与假手术组比较,SYN,GAP-43的表达明显增高(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤组缺血侧海马突触结构较清晰,突触数量增多,缝隙连接结构较完整,与模型组比较,SYN,GAP-43的表达明显增强(P<0.05,P<0.01);而联合使用Gap26后缺血侧海马突触数量较补阳还五汤组减少,仅可见少量结构完整的缝隙连接,补阳还五汤增强SYN,GAP-43的作用被明显抑制(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可提高脑缺血再灌注恢复期缺血侧海马突触可塑性,其机制可能与增加Cx43的表达促进对SYN,GAP-43的干预有关。     

智三针电针治疗对血管性痴呆小鼠工作记忆改善及作用机制的研究

目的：观察智三针电针对血管性痴呆（VD） 模型小鼠认知行为学、前额叶和海马CA1 区γ-氨基丁酸（GABA） 能神经元数量、树突棘密度的影响。方法：从45 只雄性C57BL6J 小鼠中随机选出10 只分入假手术组,余为造模组,采用改良的双侧颈总动脉反复夹闭法制作VD 模型。将造模成功的小鼠随机分为智三针组、非穴组和模型组,每组11 只。通过Y 迷宫实验、新物体识别实验观察4 组小鼠的认知行为学变化;制作脑组织切片,观察小鼠海马CA1 区锥体神经元损伤情况,前额叶及海马CA1 区GABA 能神经元［小清蛋白神经元、神经肽Y 神经元数量、生长激素抑制素神经元］数量及树突棘密度的变化。结果：行为学结果显示,智三针组、假手术组的自发交替率均高于模型组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组小鼠的A''物体分辨比比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。24 h 后,模型组的B 物体分辨比低于假手术组及智三针组（P＜0.05）。尼氏染色结果显示,智三针组海马CA1 区锥体神经元数量多于模型组,有部分神经元坏死,排列较紧密。免疫荧光结果显示,模型组前额叶、海马CA1 区的小清蛋白神经元、神经肽Y 神经元及生长激素抑制素神经元数量均少于假手术组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。智三针组的前额叶、海马CA1 区的小清蛋白神经元、神经肽Y 神经元数量均多于模型组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,生长激素抑制素神经元数量虽多于模型组,但组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。高尔基染色结果显示,智三针组、假手术组前额叶、海马CA1 区的树突棘密度均高于模型组（P＜0.05）。结论：智三针电针治疗可以保护VD 模型小鼠的海马CA1区锥体神经元,有效改善小鼠的工作记忆能力。     

脑通汤对VD大鼠海马区神经血管单元微血管新生的影响

目的观察脑通汤对血管性痴呆大鼠学习记忆能力以及海马CA1区脑微血管密度(MVD)及血管场面积的影响。方法采用改良的4-VO法制备大鼠模型,脑通汤灌胃治疗后Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测海马区CA1区微血管密度(MVD)及血管场面积。结果与模型组比较,脑通汤大、中剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数增加,微血管密度(MVD)及血管场面积明显增高(P0.01)。与多奈哌齐组比较,脑通汤大、中剂量组MVD及血管场面积均显著增高,有统计学差异(P0.01)。结论脑通汤可促进微血管新生,增加缺血区血液灌流,保护海马区NVU整体功能,从而改善VD大鼠学习记忆能力。     

补阳还五汤对慢性不可预知性温和应激抑郁模型小鼠行为及脑海马CA3区病理形态学影响

目的:探讨补阳还五汤神经保护作用及抗抑郁机制。方法:清洁级昆明小鼠随机分为正常组,模型组,氟西汀组(3.0 mg·kg-1,ig),补阳还五汤低、中、高剂量组(9.0,18.0,27.0 g·kg-1,ig),每组10只。各给药组于每日应激前1 h ig给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21 d。采用慢性不可预知性温和应激法(CUMS)建立小鼠抑郁症模型,采用旷场实验(OFT),悬尾实验(TST)及体重测试(BWM)观察动物抑郁样行为;采用尼氏体染色检测海马CA3区神经元形态学变化;采用透射电镜观察海马区超微结构变化;采用TUNEL法检测海马CA3区神经元凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠出现抑郁样行为,表现为体重减少,OFT水平及垂直运动得分减少及TST不动时间延长(P0.05,P0.01);尼氏染色及透射电镜显示海马CA3区神经元损伤及早期凋亡变化;TUNEL法显示海马CA3区神经元凋亡数量增加(P0.01)。与模型组比较,氟西汀组及补阳还五汤各剂量组小鼠抑郁样行为均有改善,表现为体重增加,OFT水平及垂直运动得分增加,TST不动时间减少(P0.05,P0.01);尼氏染色及透射电镜显示海马CA3区神经元细胞损伤减轻;TUNEL法显示海马CA3区神经元凋亡数量减少,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补阳还五汤可能通过减轻海马CA3区神经元损伤及抑制神经元凋亡而改善小鼠抑郁样行为,具有神经保护及抗抑郁症作用。     

补阳还五汤通过缝隙连接蛋白43抗脑缺血损伤

目的:探讨缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)在补阳还五汤抗脑缺血损伤中的作用。方法:采用大脑中动脉栓塞制备脑缺血模型,缺血2 h后拔出线栓进行再灌注。补阳还五汤灌胃,24 h后取材通过免疫蛋白印迹检测Cx43,苏木精-伊红染色(hematoxyli-eosin,HE)观察脑组织神经元损伤,以及相关试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)。结果:免疫蛋白印迹结果表明,补阳还五汤可下调缺血后Cx43的表达。另外,联合使用Cx43激动剂(GAP-134)后神经元损伤较补阳还五汤组加重,提示Cx43参与了补阳还五汤的抗脑缺血损伤。进一步通过试剂盒检测发现,同模型组相比,补阳还五汤可降低脑缺血后NO和MDA的含量,上调SOD含量。而使用Cx43激动剂后,补阳还五汤对NO的下调和对SOD的上调作用均被抑制。结论:这些结果提示Cx43可能是通过减少NO以及增加SOD介导补阳还五汤对脑缺血损伤的保护作用。     

Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复中的调节作用

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠不同时期海马CA4区Hes1和Hes5表达的影响,阐明Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复作用中的调节作用。方法:清洁级SD大鼠63只随机分为补阳还五汤组(Group BYHWT)、脑缺血再灌注损伤模型组(Group CIRI)、假手术组(Group Sham)。采用大脑中动脉阻塞线拴法(MCAO法)建立BYHWT组和CIRI组的局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。脑缺血2 h,分别再灌注10 d、19 d和28 d,采用免疫组化SP法检测海马CA4区Hes1和Hes5表达的阳性细胞数目,并进行单因素方差分析(one way ANOVA),两组间均数差异性比较采用t检验。结果:术后10 d和19 d,CIRI组大鼠海马CA4区的Hes1和Hes5阳性细胞密度较Sham组大(P0.01)。BYHWT组大鼠海马CA4区Hes1和Hes5阳性细胞密度较CIRI组及Sham组都大(P0.01);而在术后28 d,则显著低于CIRI组与Sham组(P0.01)。CIRI组和BYHWT组术后19 d大鼠海马CA4区阳性细胞密度分别较术后10天增加(P0.01);而术后28天阳性细胞密度较术后19天降低(P0.01)。结论:补阳还五汤在脑缺血再灌注损伤早中期通过上调大鼠海马CA4区Hes1和Hes5的表达,而在晚期通过下调其表达,而对局灶性脑缺血再灌注损伤产生神经修复作用,该作用的发挥可能是通过控制Hes1和Hes5的表达水平来调控Notch信号传导系统,进而调节NSCs的增殖与分化。     

柴胡越鞠汤对CUMS诱导的抑郁症模型大鼠治疗作用及其机制

目的:根据柴胡越鞠汤对慢性不可预测轻度应激(CUMS)诱导的抑郁症模型大鼠具有治疗作用,探讨其作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴胡越鞠汤低、中、高剂量(0.3,0.6,1.2 g·kg~(-1))组及盐酸氟西汀组(0.2 mg·kg~(-1))。通过CUMS造模5周,再以柴胡越鞠汤和盐酸氟西汀连续灌胃给药3周。灌胃最后1周时行水迷宫训练及测试,最后1 d灌胃后检测糖水偏好及其他行为学实验;糖水偏好实验检测大鼠用药前后快感缺乏程度;旷场试验检测大鼠用药前后抑郁情况;水迷宫测试大鼠用药前后空间学习记忆能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),5-羟色胺受体1A(5-HT1A),细胞外信号调节激酶(ERK)及突触相关蛋白表达情况;高尔基和尼氏染色观察海马CA3区神经元中树突棘和尼氏小体变化情况。结果:与正常组比较,模型组体质量、糖水偏好率、水平运动和垂直运动得分明显下降(P0.05),不动时间明显延长(P0.05),学习记忆能力明显下降(P0.05);Western blot结果显示其海马组织中TNF-α蛋白明显增高(P0.05),5-HT1A,p-ERK,环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB),p-CREB,突触素-1(Synapsin~(-1)),突触囊泡蛋白(Synaptophysin),谷氨酸受体亚型-1(GluR-1)和突触后膜蛋白-95(PSD-95)蛋白相对表达量明显降低(P0.05),高尔基染色显示其树突棘密度降低,其尼氏体着色变浅,神经元受损明显;与模型组比较,盐酸氟西汀组、柴胡越鞠汤中、高剂量组大鼠体质量、糖水偏好率、水平运动和垂直运动得分明显增加(P0.05),不动时间明显缩短(P0.05),海马组织中Synaptophysin,GluR-1和PSD-95蛋白表达明显升高(P0.05),柴胡越鞠汤高剂量组大鼠脑海马组织中TNF-α降低更明显(P0.05),5-HT1A,p-ERK,CREB,p-CREB,Synapsin~(-1)蛋白表达升高更加明显(P0.05),且树突棘密度明显增高(P0.05),尼氏小体数量明显增多(P0.05),着色变深,并呈剂量依赖性。结论:柴胡越鞠汤能增加抑郁症模型大鼠体质量,改善其抑郁样绝望程度以及自主活动和学习记忆能力,其作用机制与该方能降低脑海马炎症反应,提高5-HT1A,ERK和突触相关蛋白表达水平,最终激活5-HT/CREB和ERK/CREB信号通路,增加海马神经元树突棘数量,修复受损神经元有关。     

星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元损伤的影响

目的:通过观察和比较星萎承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元的保护作用,明确两方治疗脑缺血的时相性特点.方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、星蒌承气汤和补阳还五汤组;线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞;大鼠给药剂量为尼莫地平10.8 mg·kg-1、星蒌承气汤5.0 g·kg-1、补阳还五汤13.0 g·kg-1,造模前4d灌胃用药,脑缺血术后每天用药1次;大鼠分别于1,3,7d进行神经功能评分后取脑,测定脑组织含水量和脑梗死面积,观察海马神经元密度和病理损伤.结果:模型组大鼠神经功能明显降低(18.00±0.00 vs 7.43±1.27,8.86±1.34,10.25±1.03)、脑组织含水量增多(71.00±1.33)％ vs (79.85±1.73)％,( so.84±0.98)％,(82.86±1.15)％、脑梗死面积增大(0.00±0.00)％vs(16.73±1.13)％,(17.89±1.54)％,(19.32±1.21)％、海马神经元密度减小(153.57±15.62,118.71±9.98,79.38±6.02)、脑组织病理损伤加重;各用药组的神经功能、脑含水量、神经元密度和脑组织病理损伤均较模型组改善,尼莫地平组3d和7d、各中药组的脑梗死面积较模型组减小;与尼莫地平组比较,补阳还五汤各组的神经评分增高,7d的脑含水量减少、病理损伤减轻,两方药组的海马神经元密度增大;补阳还五汤组7d的神经功能(13.29±1.11)、脑含水量(77.94±2.00)％、海马神经元密度(124.29±11.64)、脑组织病理损伤均较星蒌承气汤改善明显.结论:星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血海马神经元受损均具有保护作用,二者在缺血早期(1d和3d)的作用未见明显差异,但随着缺血时间的延长(7 d),补阳还五汤方显示出更为全面和显著的神经保护和功能修复作用.