骨碎补治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

目的：观察骨碎补对去卵巢后骨质疏松大鼠骨密度、微结构和生物力学性能的影响,研究骨碎补对治疗骨质疏松的作用。方法：30只6月龄SD大鼠随机分为3组：去卵巢组（OVX）、假手术组（SHAM）和骨碎补治疗组（OVX＋D）。骨碎补治疗3个月后,检测各组大鼠的骨密度、微结构、生物力学性能的变化,并比较各组间差异。结果：OVX＋D组的的骨密度、微结构、生物力学指标与OVX组比较差异有统计学意义,与SHAM组比较差异无统计学意义。结论：骨碎补可以增加去卵巢后骨质疏松大鼠的骨密度,改善微结构,提高生物力学性能,对实验动物的骨质疏松有治疗作用。     

不同补肾方对卵巢摘除术后骨质疏松大鼠Wnt信号表达的影响

目的：比较3种补肾方对卵巢摘除骨质疏松大鼠Wnt通路β-Catenin mRNA表达的影响。方法：雌性SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组、龟鹿二仙胶组、二仙汤组、补肾活血组、雌二醇组、仙灵骨葆组,每组10只。双侧卵巢摘除术复制骨质疏松模型,术后30天进行相应的给药实验,假手术组和模型组给予灌服等量的生理盐水。12周后测定各组大鼠血清中I型胶原羧基端肽（β-Crosslaps）、I型前胶原氨基端延长肽（P1NP）含量;以双能X线骨密度测定仪测定大鼠股骨的骨密度;用RT-PCR检测右侧股骨髓LRP5、Wnt2、β-Catenin mRNA表达,用Western blot方法检测LRP5、Wnt2、β-Catenin蛋白表达。结果：与sham组比较,模型组股骨骨密度、血液PINP浓度、β-Catenin mRNA、LRP5 mRNA、Wnt2 mRNA表达均显著降低（P<0.01）,β-Crosslaps 浓度显著增高（P<0.01）。与模型组比较,3组中药组骨密度、血液PINP浓度、LRP5 mRNA、β-Catenin mRNA、Wnt2 mRNA及蛋白表达显著增高（P<0.05）,血液β-Crosslaps浓度显著降低（P<0.01）,补肾活血组骨密度及β-Catenin mRNA及蛋白表达高于其他两补肾方剂组。结论：补肾方通过Wnt信号通路促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖而改善骨质疏松症,补肾活血组方效果更为明显。     

骨碎补总黄酮促进骨质疏松性骨折愈合中参与Wnt/β-catenin信号通路的初步研究

目的:从细胞分子水平观察骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨或成脂分化中的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法、消化控制法培养取自SD大鼠的骨髓间充质干细胞,后将其分别置于成骨培养基培养,运用流式细胞仪鉴定所分化细胞。选取Wnt/β-catenin信号通路中的"活化枢纽":β-catenin,BMSCs成骨分化特异性转录因子:核心结合因子(Core binding factorα1,cbfα1,又名RunX2)、BMSCs向成脂分化中的重要转录因子:过氧化物酶体增生激活受体γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG),通过RT-PCR法检测不同浓度TFRD诱导后细胞因子的mRNA表达。实验均采用第3代细胞。结果:骨碎补总黄酮药物浓度在0.010μmol/L时,显著提高了BMSCs中的β-catenin和RunX2 mRNA表达水平(与对照组比较,P0.05)。与对照组相比,各实验组对PPARG mRNA表达未表现出明显的下调作用(P0.05)。结论:骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞的成骨分化有一定促进作用,其机制可能与上调Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达有关,暂未发现其对BMSCs成脂分化有直接作用。     

左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞破骨分化的影响

目的 基于AMPK/mTOR信号通路研究左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage, BMMs)破骨分化的作用及机制。方法 将60只雌性大鼠随机分为6组,分别为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、右归丸组(YGW)和左归丸组(ZGW)。KB组不做处置,SHAM组模拟卵巢切除手术过程,后4组均将双侧卵巢切除。各组分别灌胃蒸馏水(SHAM、OVX)、补佳乐(BJL)、右归丸(YGW)和左归丸(ZGW)。12周后取大鼠股骨和胫骨骨髓,用差时贴壁法获得大鼠BMMs并进行破骨分化诱导。用抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测TRAP活性;qrt-PCR法检测TRAP基因的表达;Western blotting法检测TRAP、RANKL、AMPKɑ、p-AMPKɑ、mTORC1、p-mTORC1蛋白的表达。结果 左、右归丸能显著降低去卵巢大鼠BMMs破骨诱导后TRAP活性,降低TRAP基因和蛋白的表达,降低与RANK结合的RANKL蛋白的表达。与KB组比较,OVX组AMPKɑ蛋白磷酸化水平降低,mTO...     

中西药物干预对骨质疏松大鼠骨密度和生物力学性能影响的实验研究

目的：探讨中西药物干预对骨质疏松大鼠骨密度和生物力学性能的影响。方法：60只3月龄Wistar雌性未孕大鼠随机分为正常对照组（SHAM）、去卵巢手术组（OVX）、鲑鱼降钙素干预组（C）、替勃龙片干预组（T）、替勃龙片和鲑鱼降钙素联用干预组（CT）及仙灵骨葆胶囊干预组（XL）,每组10只。正常对照组不摘除卵巢,其余5组均摘除双侧卵巢。术后3个月,测定SHAM组、OVX组大鼠的骨密度。OVX、SHAM组不予任何药物干预,其余4组给予相应的药物干预。药物连续干预3个月后,全麻下处死动物,取第5腰椎和右侧股骨,进行骨密度扫描和生物力学性能的检测。结果：OVX组大鼠的腰椎和股骨骨密度显著低于SHAM组（P〈0.05）,提示骨质疏松模型成功建立。药物干预3个月后,与OVX组相比,除了C组大鼠第5腰椎和右侧股骨的骨密度无明显变化外（P〉0.05）,其余各干预组均有提高（P〈0.05）;各干预组大鼠第5腰椎最大抗压载荷和右侧股骨中段最大载荷均高于OVX组（P〈0.05）;CT组大鼠的第5腰椎骨密度和最大抗压载荷高于C组、T组和XL组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：替勃龙片、鲑鱼降钙素以及仙灵骨葆胶囊对骨质疏松症均有一定程度的治疗作用,且鲑鱼降钙素和替勃龙片联用的效果更好。     

中药骨疏康联合运动早期干预大鼠去卵巢后骨质疏松的研究

目的：评价中药骨疏康联合运动早期预防骨质疏松疗效。方法：三月龄去卵巢大鼠为模型,分为单纯运动组（OVX＋ET）、中药治疗组（OVX＋GSK）、运动加中药组（OVX＋GSK＋ET）、假去势组（SHAM）、倍关力组（OVX＋ES）、去势组（OVX）,治疗时间3月。治疗结束时测各组大鼠骨密度;检测骨生物力学性能。结果：①大鼠股骨灰重／干重和股骨、腰椎体骨密度在OVX＋GSK＋ET组显著高于OVX＋ET、OVX＋GSK、OVX,但达不到SHAM组和OVX＋ES水平,有统计学差异;②L5腰椎压缩试验最大承载应力在去卵巢各组之间无显著差异。股骨三点弯曲试验在OVX＋GSK＋ET和OVX＋ET负荷能力最强。结论：①运动联合中药早期干预能对抗去卵巢引起的大鼠骨量丢失,有协同作用,能改善骨生物力学性能;②跑步运动能改善股骨生物力学性能,减少骨折发生。     

加味身痛逐瘀汤调控Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨质疏松症的防治作用

目的:探讨加味身痛逐瘀汤防治去卵巢大鼠骨质疏松症(OP)的疗效及其可能作用机制。方法:将60只SD大鼠,体重(245±25)g,随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组,每组10只。利用双侧卵巢切除法制备大鼠骨质疏松模型,手术模型制备成功后,戊酸雌二醇组大鼠给予戊酸雌二醇(剂量为 0.09 μg/g)灌胃; 加味身痛逐瘀汤治疗组大鼠给予加味身痛逐瘀汤(剂量为 32、16、8 g/kg)灌胃; 假手术组和模型对照组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃给药2个月。利用双能 X 线骨密度检测仪、HE染色法及Western blot分别测定骨密度,观察骨组织病理形态变化,分析大鼠股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型对照组骨密度明显降低(P<0.05),骨微结构遭到严重破坏,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。与模型对照组相比,戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组骨密度显著升高(P<0.05),骨微结构明显改善,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著升高(P<0.05),且加味身痛逐瘀汤高剂量组和戊酸雌二醇组对骨密度及蛋白表达量的影响最为显著。结论:加味身痛逐瘀汤可能通过调节 Wnt/β-catenin 信号通路提高骨质疏松症大鼠的骨密度以及改善骨组织形态,从而发挥抗骨质疏松的作用。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPG mRNA的表达,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制.将雌性3月龄SD大鼠48只,随机分为卵巢切除 补肾中药防治(HDP),卵巢切除 雌激素(倍美力)防治(ER),骨质疏松(卵巢切除)(OVX)及正常对照组(SHAM)4组,每组12只.术后12周处死大鼠,取L3椎体,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,嵌套式反转录聚合酶链反应(NRT-PCR),扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达.同时取L4椎体,行骨组织形态计量学检测.结果显示HDP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率分别为75.0%和66.7%;EP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均为83.3%;OVX组各例ER mRNA均无表达,2例OPG mRNA呈弱阳性表达(阳性率为16.7%);SHAM组呈ER mRNA及OPG mRNA阳性表达.χ2检验,HDP组与ER组比较ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05);该两组与OVX组比较,ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均有高度显著性差异(P＜0.01);而与SHAM组比较,HDP组ERmRNA,ER组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率无显著性差异(P＞0.05),但HDP组OPG mRNA阳性表达率有显著性差异(0.01＜P＜0.05).骨组织形态计量学检测,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少,而骨小梁间隔显著增大.同EP组相似,HDP组骨体积、骨小梁厚度显著增加,虽也使骨小梁间隔稍有减少,但与OVX组比较无统计学差异.表明补肾中药通过直接作用于骨组织中ER,增强ER mRNA的表达,并刺激OPG的分泌,从而有望替代雌激素,对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的防治作用.     

骨碎补总黄酮对血管内皮细胞功能和去卵巢大鼠血管形成的影响

目的:分析骨碎补总黄酮对大鼠血管内皮细胞功能和血管形成的影响。方法:体外培养大鼠血管内皮细胞,用不同浓度(1,10,100mg/L)的骨碎补总黄酮干预后,MTT法检测细胞增殖,ELISA法检测内皮素(ET)和血管内皮生长因子(VEGF),Griess法检测NO的表达;利用去卵巢骨质疏松大鼠模型(36只,随机分为去卵巢组、假手术组和骨碎补治疗组),骨碎补总黄酮治疗3个月后,检测大鼠血清中ET,VEGF和NO的表达,骨密度和股骨远端微血管密度变化。结果:各浓度的骨碎补总黄酮均能促进血管内皮细胞的增殖,而中、高浓度促增殖效果较好;中、高浓度的骨碎补总黄酮在体内外均可以抑制ET,同时增强NO的表达;股骨远端血管计数结果显示骨碎补治疗组明显多于去卵巢组,并且与骨密度呈正相关;骨碎补总黄酮在体外可以增强内皮细胞VEGF的表达,但对去卵巢大鼠血清中VEGF的表达无影响。结论:骨碎补总黄酮可促进血管内皮细胞增殖,同时可以调节内皮细胞功能,促进血管形成,从而发挥抗骨质疏松作用。     

从OPG-RANKL破骨细胞调控通路和Wnt成骨细胞调控通路探讨“肾主骨”的性别差异及其机制

目的:从OPG-RANKL破骨细胞调控通路和Wnt成骨细胞调控通路的角度,部分揭示"肾主骨"的性别差异及其机制。方法:选用同龄雌、雄SD大鼠160只,雌雄各半,共分为雌雄空白对照组、雌雄假手术组、OVX组、ORX组、E2组、T组、雌雄左归丸组、雌雄右归丸组12组,并采用卵巢切除和睾丸切除的方法制作肾虚OP动物模型。在去势后10 d,各给药组开始灌胃给予相应的药物,每天1次,连续6 d,休息1d后再连续给药6 d,如此给药3个月。给药结束后,将各组大鼠处死取双侧胫骨进行各项指标的检测。结果:左归丸对OVX大鼠OP具有明显疗效,而对ORX大鼠OP没有疗效;右归丸对OVX大鼠和ORX大鼠OP虽均有明显疗效,但对OVX大鼠的疗效要明显优于ORX大鼠。左归丸能使OVX大鼠骨髓中RANKL蛋白表达显著下调,而使OPG蛋白表达显著上调;同时使Wnt1和β-catenin蛋白表达显著下调,而左归丸对ORX大鼠的以上指标无明显影响。右归丸对OVX大鼠骨髓中OPG、RANKL以及Wnt1、β-catenin蛋白表达的作用与左归丸的相同,只是右归丸的作用强度要明显大于左归丸。右归丸能使ORX大鼠骨髓中RANKL以及Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著下调,但对OPG蛋白表达无明显影响,并对RANKL、Wnt1和β-catenin的作用要明显弱于对OVX大鼠的作用。结论:"肾主骨"存在性别差异,OPG-RANKL破骨细胞调控通路和Wnt成骨细胞调控通路发生不同改变,是造成这种差异的机制之一。     

中药干预骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化及其机制的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是来源于中胚层并具备多向分化潜力的多功能干细胞,是骨髓内成骨细胞和脂肪细胞的共同来源,且在成骨分化与成脂分化间维持着动态平衡。近年来的研究表明大量中药能够通过Wnt/β-catenin信号通路、Runx-2、ALP等相关成骨因子和PPAR-γ途径有效调控BMSCs的成骨分化和成脂分化。本文就中药对BMSCs成骨及成脂分化的影响效应和机制进行简要概括。     

补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的:观察补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力的影响。方法:大鼠随机分为正常组、悬吊组、补肾健脾方高、中、低剂量组共5组。除正常组外,其余各组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,后3组大鼠从实验第1天开始分别按剂量11.4,5.7,2.8 g·kg-1·d-1给予补肾健脾方ig 21 d,其余各组大鼠ig等容积的生理盐水。全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行成脂分化诱导,油红O染色法检测脂滴形成情况,Real Time PCR法和Western bolt法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达,在成脂诱导分化的第7,14,21天分别检测细胞内甘油三酯(TG)含量。结果:较正常组,悬吊组大鼠BMSCs经成脂诱导后7,14,21 d TG含量均明显升高(P0.01),成脂诱导21 d成脂能力,PPARγmRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);较悬吊组,补肾健脾高、中、低剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导7,14,21 d后TG含量降低(P0.01,P0.05),经成脂诱导21 d后成脂能力均明显减弱(P0.01),PPARγmRNA和蛋白表达减少(P0.01,P0.05);较补肾健脾中剂量组,补肾健脾高剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导14,21 d后TG含量降低(P0.05),经成脂诱导21 d后补肾健脾高剂量组成脂能力均减弱(P0.05),PPARγmRNA和蛋白表达均减少(P0.05,P0.01),补肾健脾低剂量组PPARγ蛋白表达增多(P0.05)。结论:补肾健脾方具有抑制尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用,以补肾健脾方高剂量作用为优,其机制可能与下调PPARγ表达有关。     

淫羊藿素通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成软骨分化

该文研究GDF-5联合淫羊藿素(ICT)诱导BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt信号通路在其中的作用。采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞分成6组:BMSCs组,ICT组,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组,GDF-5+ICT+XAV-939组,连续诱导培养14 d。倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;Alcian Blue染色检测蛋白聚糖变化;RT-PCR检测aggrecan,Col2,Sox9,Dvl1,Gsk3β,β-catenin mRNA表达水平;Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达水平。结果提示,与BMSCs组相比,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组蛋白聚糖Alcian blue染色均明显较深;成软骨分化标记基因aggrecan,Col2,Sox9 mRNA表达水平及Ⅱ型胶原蛋白表达水平,Wnt信号通路相关基因β-catenin mRNA及蛋白表达均逐渐增加,Gsk3βmRNA表达量逐渐减少。相反,相对于GDF-5+ICT组,添加XAV-939组则表现为成软骨分化及Wnt信号通路相关基因Dvl1,β-catenin表达下调,Gsk3βmRNA表达增加,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达水平均下降,上述差异均有统计学意义。GDF-5联合淫羊藿素能够诱导大鼠BMSCs成软骨分化,其中ICT起促进作用。ICT可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠BMSCs体外成软骨分化。     

左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的研究

目的:研究体外左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞经地塞米松诱导后凋亡的影响。方法:将60只SPF级2月龄SD雌性未生育大鼠随机分为6组,分别是空白对照组(CON)、模型组(OVX)、假手术组(SHAM)、左归丸组(ZGP)、右归丸组(YGP)和补佳乐组(BJL)组。采用双侧去卵巢法建立绝经后骨质疏松症模型,术后3 d灌胃饲养,按每千克体重大鼠的给药量为人的6.3倍计算,每日灌胃1次,给药12周后,利用全骨髓贴壁法获取去卵巢大鼠BMSCs,进行体外培养。对去卵巢大鼠BMSCs进行干预,采用流式细胞仪通过表面抗原CD29、CD90、CD11b/c鉴定BMSCs,模型组分别加入10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、5×10~(-5)mol/L地塞米松,分别作用24、48、72 h后通过流式细胞仪检测凋亡率。并用流式细胞仪检测比较以上6组BMSCs以10~(-6)mol/L地塞米松诱导48 h后的凋亡率。结果:流式鉴定CD29、CD90均显示为阳性,CD11b/c为阴性;10~(-6)mol/L地塞米松作用48 h时与其他组比较,去卵巢大鼠BMSCs的凋亡率明显升高(P0.05),并以此时间、浓度作为诱导条件。与OVX组相比,SHAM组、ZGP组、YGP组和BJL组凋亡率降低,有显著性差异(P0.05);与ZGW组比较,YGW组凋亡率较高(P0.05)。结论:左、右归丸均能抑制去卵巢大鼠BMSCs的凋亡,且左归丸的效果优于右归丸。     

续断皂苷VI调控Wnt/β-Catenin通路对骨质疏松的影响机制＊

目的 探讨续断皂苷VI调控Wnt/β-Catenin通路对骨质疏松的影响并分析其作用机制。方法 构建SPF级Wistar大鼠骨质疏松症模型与健康大鼠共同饲养形成对照组，将50只雌性大鼠随机分为4组。依次设置为：续断皂苷VI治疗组，模型对照组，假手术组，空白对照组。使用不同双侧卵巢摘除手术法处理实验组大鼠。除空白对照组外，模型对照组与假手术组以及续断皂苷VI处理组的大鼠均制成骨质疏松症大鼠模型，将续断皂苷VI组的大鼠连续给药12周。使用X线骨密度仪骨密度（BMD， bone mineral density）测定法检测各组大鼠BMD，观察给药前后大鼠BMD变化情况；使用生物力学测定仪测定各组大鼠后肢股骨的最大载荷差异；使用RT-PCR实验和Western Blotting实验以检测不同组Wnt3a、β-catenin、LRP5、Runx2、SOST和Osx转录组与蛋白组表达各自发生的差异。结果 续断皂苷VI治疗12周可显著提高骨质疏松症大鼠模型股骨的BMD，并提高椎体在最大负荷和弹性模量下的生物力学能力，降低了骨质疏松症在骨组织中造成的致病性。对于组织形态学方面的考察发现，续断皂苷VI治疗组在治疗持续12周后，小梁排列整齐，小梁稍变薄，股骨没有明显的轻微骨折。在进行续断皂苷VI治疗处理的情况下，经典Wnt /β-catenin信号通路中涉及的LRP5、β-catenin、Runx2和Osx的表达显著上调，而在该通路中SOST的表达下调（P <0. 05）。结论 续断皂苷VI可显著提高骨质疏松模型大鼠的骨密度，其保护机制与激活Wnt/β-catenin 信号通路，上调骨质疏松大鼠骨中β-catenin、LRP5的mRNA表达有相关。     

二至丸对绝经后骨质疏松鼠的作用观察及可能机制研究

目的:观察二至丸对绝经后骨质疏松模型鼠的治疗作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将100只雌性SD鼠随机分为空白组(n＝20)和造模组(n＝80),造模组大鼠均接受双侧卵巢切除术致骨质疏松模型,将成模大鼠随机分为模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组20只,造模12 h低剂量组、中剂量组及高剂量组分别予3、6、12 g/kg二至丸灌胃,1次/d。模型组与空白组均予1 mL生理盐水灌胃,连续干预8周,比较各组骨组织病理学、组织形态计量学、骨密度生物力、血脂代谢、组织Wnt/β-catenin通路标志性因子的改变。结果:与空白组比较,模型组脂肪细胞明显增大,脂肪细胞密度、面积、FLAW、PPARγ显著增加,外周血TC、TG和LDL-C含量上调(P<0.01)。与模型组比较,二至丸中剂量组和高剂量大鼠上述指标表达下调(P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠BV/TV、Tb.Th,Joint、骨密度、弹性模量、最大载荷、Wnt3a、β-catenin、LRP5表达均减少(P<0.05);与模型组比较,二至丸中剂量组和高剂量组上述指标表达均显著增加(P<0.05)。结论:二至丸可明显改善骨质疏松症,其作用机制可能与激活Wnt/LRP5/β-catenin通路有关。     

生髓健骨胶囊对酒精性骨质疏松大鼠Wnt信号通路的影响

目的研究生髓健骨胶囊对大鼠Wnt信号通路及PPARγ2-mRNA表达的影响。方法 120只SD大鼠,随机分为空白对照组,模型组,西药对照组,中药干预组。通过灌胃法造模,然后通过酶联免疫法检测各组骨组织中Wnt/β-Catenin信号通路β-Catenin和LRP 5的表达情况,以及RT-PCR检测PPARγ2-mRNA的表达量。结果大鼠股骨组织中β-Catenin和LRP 5含量,西药对照组、中药干预组与模型组相比,结果均明显升高(P0.01);西药对照组与中药干预组相比较(P0.05),说明西药对照组结果低于中药干预组;大鼠股骨组织中PPARγ2 mRNA的表达,与空白对照组比较,模型组大鼠PPARγ2的mRNA表达均明显升高;中药干预组及西药对照组与模型组比较,均有不同程度下调PPARγ2的mRNA表达,其中以中药干预组下调水平最为明显。结论中药生髓健骨胶囊可以通过激活Wnt信号通路来干预脂质转录基因PPARγ2表达来实现防治酒精性骨质疏松。     

双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用

目的探讨双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用。方法采用Lewis肺癌荷瘤鼠腹腔注射环磷酰(cyclophosphamide,CTX)胺造成化疗骨髓抑制模型,用双黄升白颗粒干预治疗,常规计数白细胞、红细胞、血小板数量和肿瘤质量,流式细胞法检测骨髓造血干细胞比例(Sca、CD34双阳性细胞),实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测Wnt信号通路主要基因(Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH、GSK3)mRNA的表达。结果治疗组白细胞数量、造血干细胞比例均高于模型组(P0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH、GSK3 mRNA在骨髓中的表达高于模型组(P0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH mRNA在肿瘤中的表达则低于模型组(P0.05);各组红细胞、血小板、肿瘤质量、GSK3 mRNA在肿瘤中的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论双黄升白颗粒治疗骨髓抑制的作用机制与调控Wnt信号通路有关,且该调控作用具有双重特性,即在上调骨髓Wnt信号通路主要基因表达同时抑制肿瘤中部分基因表达。     

淫羊藿对骨质疏松MSCs成脂分化PPARγ mRNA表达的影响

目的 探讨淫羊藿含药血清在骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂分化过程中对过氧化物酶体增殖物激活受体亚型PPARγ mRNA表达的的影响。方法 分离、培养骨质疏松大鼠MSCs,传至3代。将所获细胞随机分为模型组,成脂诱导组,西药组,成脂诱导西药组,中药组,成脂诱导中药高、中、低剂量组。采用淫羊藿含药血清对MSCs进行干预,并与尼尔雌醇含药血清进行对照,观察各组PPARγ mRNA表达的变化。结果 与模型组比较,西药组、中药组PPARγ mRNA表达明显降低(P ＜ 0.01,P ＜ 0.05);与成脂诱导组比较,成脂诱导西药组、成脂诱导中药高、中、低剂量组PPARγ mRNA表达明显降低(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01)。结论 淫羊藿含药血清可抑制绝经后骨质疏松症大鼠MSCs及其在成脂分化过程中PPARγmRNA的表达,从而抑制MSCs成脂分化,以防治骨质疏松症。     

健脾化痰方对肥胖胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的作用

目的观察健脾化痰方对肥胖胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的作用。方法 60只大鼠中随机取10只作为空白组,采用普通饲料喂养,另外50只采用高脂饲料喂养以建立肥胖胰岛素抵抗模型,8周后造模大鼠随机均分为模型组和健脾化痰方低、中、高剂量组(5.4、10.8、21.6 g/kg),除了空白组给予标准饲料外,其余各组继续给予高脂饲料,干预时间为8周。16周后,观察空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数,内脏脂肪组织HE染色后采用real-time PCR、Western blot法测定Wnt10b、β-catenin、PPARγ、ap2、LPL、FAS mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组TG、TC、LDL-C水平均显著升高(P0.05);与模型组比较,健脾化痰方组能显著降低三者水平(P0.05)。模型组大鼠内脏脂肪组织以大脂肪细胞为主,经健脾化痰方处理后以小脂肪细胞为主。与模型组比较,健脾化痰方中、高剂量组均能明显降低大鼠内脏脂肪颗粒面积;与空白组比较,模型组大鼠Wnt10b、β-catenin mRNA表达下降,蛋白水平下调,PARγ、ap2、LPL、FAS mRNA及蛋白表达水平升高,经健脾化痰方处理后有所改善。结论健脾化痰方可改善肥胖胰岛素抵抗大鼠脂肪组织的胰岛素敏感性,明显减轻大鼠体质量(以减少内脏脂肪为主),其作用机制可能与激活经典wnt信号通路有关。