恐伤孕鼠对其仔鼠长骨早期发育影响的研究

目的:根据肾主骨生长发育理论,研究先天肾虚影响长骨早期发育的情况,论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。动态检测出生后仔鼠20 d内平均身长、5周内股骨平均长度、Micro CT检测股骨皮质骨及松质骨微结构参数、第5周股骨钙、磷、羟脯氨酸含量。结果:模型组仔鼠平均身长、股骨平均长度显著降低(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组皮质骨厚度、外径周长、皮质骨面积、皮质骨密度减少;股骨矿物质、基质胶原含量减少。上述指标与另两组比较差异显著(P<0.05)。结论:先天肾虚可以影响长骨早期生长发育,出现骨量减少,成骨活性降低,皮质骨发育不良。中药补肾填精治疗,可有效改善先天肾虚仔鼠长骨早期发育不良。     

恐伤孕鼠对其仔鼠颅骨培养成骨细胞Cx43、BGP表达的影响

目的:从先天肾虚影响颅骨培养成骨细胞Cx43、BGP表达情况入手,研究其影响骨早期发育的机制,并论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。取各组新生仔鼠颅盖骨制取培养成骨细胞,观察细胞生长形态、ALP活性测定、RT-PCR检测第7、14、21天Cx43和BGPmRNA表达情况、免疫荧光染色检测第21天Cx43蛋白表达。结果:模型组仔鼠成骨细胞培养第5、7天ALP活性降低;第14、21天Cx43、BGPmRNA表达减少;第21天免疫荧光检测Cx43蛋白表达减少。上述指标与另两组比较差异显著(P<0.05)。结论:先天肾虚导致仔鼠颅骨成骨细胞分化成熟过程中Cx43、BGP表达减少,这是其影响骨早期发育的重要机制之一。左归丸补肾填精治疗可提高Cx43、BGP表达,保证成骨细胞正常功能,促进骨发育。     

恐伤孕鼠所产80日龄仔鼠情志与母鼠促肾上腺皮质激素、糖皮质激素的相关性研究

目的:考察恐伤孕鼠所产80日龄仔鼠情志与母鼠促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic Hormone,ACTH)、糖皮质激素(Glucocorticoids,GC)的相关性。方法:应用旁观电击法建立恐伤肾孕鼠模型,通过对80日龄仔鼠进行旷场试验、糖水偏好实验和悬尾实验,观察其情志改变;采用酶联免疫法(ELISA),检测孕鼠和80日龄仔鼠血浆中ACTH、GC的含量。结果:与对照组比较,模型组80日龄仔鼠垂直得分、水平得分、糖水消耗量和糖水偏好值均降低,空中停止挣扎时间增长,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,模型组恐伤孕鼠血浆ACTH、GC水平均升高,差异具有统计学意义(P0.05);旷场试验中,80日龄仔鼠垂直得分与母鼠GC存在负相关,水平得分与母鼠ACTH、GC均存在负相关,差异有统计学意义(P0.05);糖水偏好实验中,80日龄仔鼠糖水偏好值与母鼠ACTH、GC均存在负相关,差异有统计学意义(P0.05);悬尾试验中,80日龄仔鼠停止挣扎的时间与母鼠ACTH、GC存在正相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论:恐伤孕鼠所产80日龄仔鼠的情志改变与母鼠ACTH、GC的变化密切相关。     

滋补肾精方对“恐伤孕鼠”孕仔数及红细胞免疫功能影响的研究

目的：观察滋补肾精方对恐伤孕鼠孕仔数及红细胞免疫功能的响。方法：采用猫恐吓孕鼠的方法建立肾精不足模型,观察孕鼠每胎孕仔数、仔鼠体重、翻身能力及红细胞免疫功能。结果：滋补肾精方能显著提高恐伤肾孕鼠的孕仔数（P〈0.01）,增加仔鼠平均体重,提高仔鼠翻身能力（P〈0.01）,增加母子两代红细胞免疫功能（P〈0.05～0.01）。结论：中药滋补肾精方具有预防恐伤孕鼠肾精不足的功效。     

恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区细胞凋亡的影响

目的：观察恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区细胞凋亡的影响。方法：采用恐伤孕鼠的方法造模,受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组,造模时间为整个妊娠期间。仔鼠出生后14天,取其大脑海马区组织用流式细胞术检测其细胞凋亡率;用免疫组化ABC法观察Bcl-2、Bax在大脑海马区的蛋白表达。结果：模型组仔鼠海马区脑组织细胞凋亡率较正常组和补肾组增加（P〈0．05）。同时,模型组仔鼠海马区脑组织Bcl．2阳性表达数下降、Bax阳性表达数升高,与正常组和补肾组比较均有极显著性差异（P〈0．01）。结论：恐伤孕鼠通过凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达增加共同作用引起其仔鼠海马区脑细胞凋亡增加,从而影响到仔鼠脑的发育,而补肾治疗可逆转此效应。     

神昌滴丸对孕鼠致畸性的研究

目的:评价神昌滴丸在妊娠期的毒性。方法:用80只孕鼠,分为3个不同的剂量(0.25、0.5、1.0g/kg)实验组,同时设阴性对照组(采用玉米油作为溶剂),每组19~21只孕鼠。实验组和对照组给药容量为1mL/100g体重,均采用灌胃给药,给药时间为GD6-15。于妊娠第20天处死孕鼠,检查母体妊娠与胎鼠畸形情况。结果:神昌滴丸在1.0g/kg剂量出现母鼠增重下降,与对照组比较差异有统计学意义;各剂量组出现活胎率下降和死胎率增加,但与对照组比较有差异有统计学意义,不存在剂量反应关系;各剂量组的每窝平均活胎数和吸收胎率及致畸率与对照组比较差异无统计学意义。受试剂量下各组的平均胎盘重、胎儿体重、身长、尾长与对照组比较无统计学差异。低剂量组胸骨节数、骶椎数,高剂量组掌骨数与对照组相比差异具有统计学意义外(P<0.05),其它骨骼发育与对照组比较差异无统计学意义。各实验组均未观察到母鼠和胎鼠明显的外观、脏器以及骨骼的畸形。结论:神昌滴丸在1.0g/kg剂量时对孕期SD大鼠存在一定的母体毒性,在受试剂量下无明显的胚胎毒性、胎儿毒性和致畸作用。     

复方宁神精油对失眠大鼠行为学及下丘脑GABA、GLU含量的影响＊

目的 研究复方宁神精油治疗对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠大鼠行为学及下丘脑伽马氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（GLU）含量的影响。方法 50只SD大鼠随机分为：空白组、模型组、复方宁神精油高浓度组、复方宁神精油中浓度组、复方宁神精油低浓度组。除空白组外，其余各组大鼠均采用腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型。造模后，各复方精油组分别采用1%、0.5%、0.25% 3种不同浓度精油香熏治疗，空白组和模型组采用蒸馏水香薰。连续7天每天于上午10：00熏治1 h。第7天给药结束后，观察并记录各组大鼠一般状况，通过翻正实验、旷场和高价十字迷宫实验对比各组给药后的差异；采用酶联免疫吸附法（Elisa）测定各组大鼠下丘脑中GABA、Glu含量并统计其比值差异，通过气相色相质谱分析（GC—MS）探究复方宁神精油的化合物活性成分。结果 复方宁神精油高浓度组的睡眠潜伏期减少最明显、睡眠持续时间增高最显著（P < 0.01，P < 0.01）；旷场实验中，复方宁神精油高浓度组可明显增多失眠大鼠总活动距离和总穿格数（P < 0.01，P < 0.01），显著减少修饰次数及中央格停留时间（P < 0.01，P < 0.05）；高架十字迷宫实验中，复方宁神精油高浓度组的开放臂停留次数和停留时间百分比数据增量最明显（P < 0.01，P < 0.01）；各复方宁神精油组下丘脑GLU含量差异无统计学意义，复方宁神精油高浓度组的下丘脑GABA含量增多（P < 0.01）。各复方精油组GLU/GABA均极著性降低（P < 0.01），其中复方宁神精油高浓度组其比值降低最明显。结论 复方宁神精油高浓度组能明显缩短失眠大鼠睡眠潜伏期并延长睡眠持续时间，有效缓解失眠所致的紧张焦虑情绪，激发大鼠自发活动能力和探究能力。其作用靶点可考虑为调节失眠大鼠下丘脑中GABA和GLU含量，从而平衡中枢神经系统功能，精油中的有效活性成分或可考虑为改善失眠调节情绪的主要成分。这为临床推广使用复方宁神精油治疗失眠提供了参考。     

恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区乙酰胆碱代谢的影响

目的：观察恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育关键期大脑海马区乙酰胆碱代谢相关酶的影响。方法：采用恐伤孕鼠的方法造模,造模时间为整个妊娠期间。雌鼠分娩后,在仔鼠出生后14d取右侧大脑海马组织匀浆,检测乙酰胆碱代谢相关酶的活力。结果：模型组仔鼠海马区脑组织乙酰胆碱酯酶（AchE）和乙酰胆碱转移酶（CHAT）的活力均明显升高,与正常组和补肾组样本比较,有极显著性差异（P〈0.01）。结论：恐伤孕鼠可以影响仔鼠脑发育关键期大脑海马区乙酰胆碱代谢。     

参知健脑胶囊对拟血管性痴呆大鼠模型皮层和海马中Glu和GABA的影响

目的:观察参知健脑胶囊对拟血管性痴呆大鼠皮层和海马中Glu和GABA的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安理申组、金纳多组以及参知健脑胶囊低、中、高剂量组,每组10只,采用2VO法建立拟血管性痴呆大鼠模型。除假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃外,其余各组分别给予安理申1 mg/kg、金纳多20mg/kg以及参知健脑胶囊40 mg/kg、120 mg/kg、360 mg/kg灌胃。各组于造模后7 d开始给药,每日1次,连续灌胃8周。本别在术后第5、8周以Morris水迷宫检测其学习记忆能力;给药8周后大鼠统一处死后取皮层、海马,用HE、Nissl's染色法观察皮层海马的组织形态学改变和神经元存活状况,用高效液相色谱法分别检测其内Glu、GABA的含量。结果:与假手术组相比:模型组大鼠皮层Glu和GABA均升高,其中GABA更为显著(P0.01);其余各组皮层的Glu、GABA则均略有降低,但均无统计学差异(P0.05)。与模型组相比:安理申组、金纳多组以及参知健脑胶囊低、中、高剂量组鼠脑皮层Glu、GABA均有降低,其中参知健脑胶囊高剂量组的Glu和GABA、安理申组的GABA降低幅度更为明显(P0.05)。参知健脑胶囊高剂量组大鼠皮层GABA降低较安理申组明显,但组间比较无统计学差异(P0.05)。与假手术组相比:双侧颈总动脉永久结扎大鼠海马Glu和GABA略有升高或降低,但均无统计学差异(P0.05)。与模型组比较:5个给药组2VO大鼠8周后海马Glu和GABA略有降低,但均无明显差异(P0.05)。结论:参知健脑胶囊改善拟VD大鼠的学习记忆功能可能与降低皮层中的神经递质Glu和GABA的含量有关,但其具体作用机制尚需深入探讨。     

中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的影响

目的研究中药补脑止痫散对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨补脑止痫散的抗痫机制。方法 80只大鼠随机分为空白组、模型组、补脑止痫散低、中、高剂量10 d组和低、中、高剂量21 d组。除空白组外,其余各组腹腔注射戊四氮制作癫痫大鼠模型,分别用低、中、高剂量的补脑止痫散灌胃。在预定时间点处死大鼠,取海马切片,用免疫组化法检测海马Glu和GABA的含量变化情况。结果与模型组相比,补脑止痫散中、高剂量组和低剂量21 d组海马神经元Glu含量均显著或极显著地降低,GABA含量均极显著地升高;治疗时间相同而灌胃剂量不同的各组间比较:高剂量组和中剂量组Glu含量均显著低于低剂量组,高剂量组和中剂量组GABA含量均显著高于低剂量组,而中、高剂量组之间比较则均无显著差异;灌胃剂量相同而治疗时间不同的各组间比较:低剂量10 d和21 d组之间有显著差异,中剂量10 d和21 d组、高剂量10 d和21 d组之间无显著差异。结论补脑止痫散能明显降低癫痫大鼠海马Glu含量,提高GABA含量,调节二者之间的平衡;中、高剂量组效果更明显。     

缬草挥发油对戊四氮致癫痫大鼠海马内γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的影响

目的:研究缬草挥发油对戊四氮致癫痫大鼠海马内兴奋性与抑制性氨基酸含量的影响,探讨其抗癫痫的可能机制。方法:采用腹腔注射戊四氮建立大鼠癫痫模型,观察经缬草挥发油治疗后的癫痫大鼠与对照组大鼠海马内γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)含量的变化。结果:经缬草挥发油治疗后的癫痫大鼠与对照组大鼠海马内的γ-氨基丁酸含量明显升高,谷氨酸显著降低(P<0.05)。结论:缬草可调节癫痫大鼠脑内的兴奋性与抑制性氨基酸的平衡,从而起到抗癫痫的作用。     

恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育的影响及其机制研究

目的:观察恐伤孕鼠对其仔鼠大脑海马区组织形态学和血清甲状腺激素含量的影响,以探求肾虚对脑发育的影响及其机制.方法:采用恐伤孕鼠的方法造模,造模时间为整个妊娠期间.孕鼠分娩后,在仔鼠生后14天观察大脑海马区的组织结构;另断头取血,采用化学发光法检测血清FT3、FT4、TSH的含量.结果:光学显微镜下可见模型纽仔鼠大脑皮质包括海马区脑组织有散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少,细胞较松散,部分组织结构模糊,神经细胞树突减少.另外,模型组与正常组和补肾组比较,血清丌4的含量显著降低(P＜0.05).结论:恐伤孕鼠可以导致仔鼠肾虚,脑组织结构的异常,引起脑发育障碍,其可能机制为血清甲状腺激素含量下降.     

电针神庭百会对脑缺血再灌注后认知障碍大鼠海马区自噬的影响

目的:通过对比电针治疗前后对脑缺血再灌注后认知障碍大鼠海马区神经细胞自噬的变化,从而探讨电针神庭、百会对海马区神经细胞自噬的影响。方法:清洁级健康SD雄性大鼠50只,按照随机数字表分为电针组20只,模型组20只,假手术组10只。电针组和模型组采用改良Zea Longa线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,假手术组仅分离左侧的颈动脉,选用神经功能缺损症状评分标准,筛选出造模成功的大鼠。造模后2 h电针其神庭、百会穴,每次30 min,1次/d,电针治疗后3～5 d,通过Morris水迷宫实验完成对大鼠学习记忆能力的检测,造模后第7天断头取大鼠海马组织。选用神经功能缺损症状评分标准观察电针治疗前后大鼠神经功能情况,通过透电镜完成对海马神经细胞中自噬情况的观察,通过Western Blot、激光共聚焦显微镜完成对大鼠海马组织中LC3蛋白表达的定量分析。结果:(1)Morris水迷宫实验:与模型组相比较,电针组大鼠的逃避潜伏期缩短明显,穿越平台期的次数增多,路程缩短(P0.05);(2)神经功能障碍评分:与假手术组大鼠相比,模型组及电针组大鼠均可见不同程度神经功能缺损;与模型组大鼠相比,电针组大鼠神经功能缺损症状明显减轻(P0.05);(3)LC3蛋白:与假手术组大鼠相比,模型组及电针组大鼠LC3表达不同程度增多。与模型组相比,电针组大鼠LC3表达不同程度增加(P0.05);(4)假手术组大鼠神经细胞未发生自噬。模型组可见自噬及凋亡形态结构。电针组大鼠与模型组大鼠相比,神经细胞自噬发生程度增高。结论:电针神庭、百会穴可明显改善大鼠神经功能缺损评分;能够有效的激活缺血区自噬,减轻大鼠海马神经细胞的损害,能提高自噬相关蛋白的表达水平,对神经细胞具有保护作用。     

孕鼠优裕环境胎教对子鼠海马体Cdk5、Fos、Gat1基因表达的影响

目的:研究母鼠优裕环境胎教子鼠行为表征与海马体神经发育相关基因表达的影响。方法:将23只受孕SD母鼠按照随机分为2组:优裕胎教组(优裕组)、空白对照组(对照组),每组随机选取10只子鼠进行矿场试验与海马体Cdk5、Fos、Gat1表达水平检测。结果:①在空格试验中优裕组数大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);②优裕组的Cdk5与Fos mRNA水平显著高于对照组(P<0.05);而EEG的Gat 1 mRNA水平显著低于于对照组(P<0.05)。结论:优裕环境母鼠胎教促进子鼠的生长发育,Cdk5、Fos、Gat1可能参与其分子机制。