亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损害不同脑区p16和Bcl-2表达的影响研究

【目的】 探讨亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后脑灰质、室周白质的保护作用。 【方法】 建立新生大鼠HIBD模型,31 ℃、34 ℃亚低温全身干预3 h,观察缺氧缺血(hypoxic-ischemic, HI)后24 h、72 h、7 d脑皮质、海马、室周白质细胞凋亡、p16、bcl-2表达。 【结果】 1)p16灰度:模型组表达高于假手术组,HI后24 h达高峰,31 ℃组表达减少,34 ℃组总表达不减少,但在HI后24 h表达减少,高峰延迟;2)凋亡细胞灰度:与p16结果一致;3)bcl-2灰度:也与p16结果一致,34 ℃组术后24 h、HI后72 h表达均减少;4)相关关系:p16、凋亡细胞、bcl-2灰度在各脑区表达一致,两两比较,有相关关系(P<0.01)。 【结论】 新生大鼠HIBD后亚低温干预通过降低p16、bcl-2的表达、减少细胞凋亡或延缓其高峰对脑灰质、室周白质组织起到保护作用。     

亚低温对新生大鼠缺血脑凋亡细胞数和bcl—2表达的影响

目的 明确缺氧缺血性脑损害（HIBD）后亚低温干预对脑组织bcl-2和凋亡细胞数的影响其及相关性。方法 建立新生大鼠HIBD模型,31℃亚低温干预,采用原位末端标记技术观察脑组织凋亡细胞数,免疫组化法观察脑bcl-2表达水平,作统计分析。结果 新生HIBD大鼠8日龄时凋亡细胞大量出现（P＜0．01）,并达高峰,亚低温干预使8日龄凋亡细胞数减少（P＜0．01）,高峰后移;新生HIBD大鼠8日龄开始有bcl-2大量表达（P＜0．01）,8－10日龄其水平最高,亚低温干预使bcl-2表达水平下降（P＜0．01）;8日龄时bcl-2水平与8日龄脑海马及皮质凋亡细胞数呈等级正相关,相关系数分别为0．88及0．71（均为P＜0．05）;10日龄bcl-2水平与10日龄海马凋亡细胞数等级正相关,相关系数0．75（P＜0．05）,与皮质凋亡细胞数无相关意义。结论 新生大鼠HIBD后早期发生凋亡过程,bcl-2水平与凋亡数一致;亚低温干预使凋亡过程延缓,高峰时间的调亡细胞数及bcl-2水平降低,从而保护脑组织。     

新生鼠缺血再灌注脑损伤神经节苷脂的保护作用

【目的】探讨神经节苷脂(GM1)对细胞凋亡的影响和脑保护作用。【方法】采用栓线法建立新生大鼠的大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。腹腔注射GM1,采用原位缺口末端标记法进行细胞凋亡染色,测定血清内皮素水平和NO水平。【结果】假手术偶见神经细胞凋亡,缺血再灌注组可见大量的神经细胞凋亡现象,GM1治疗组新生大鼠与缺血再灌注组相比,凋亡细胞明显减少;假手术组\缺血再灌注组和GM1治疗组新生大鼠血浆的内皮素含量(ng/L)分别为:41.6±4.06,63.45±6.91和50.67±5.20;NO2-/NO3-含量分别是44.67±8.6、63.65±9.9和47.7±9.8.【结论】GM1对新生大鼠脑缺氧缺血的保护作用可能通过抑制缺血缺氧性脑损伤后血浆内皮素和NO的生成,而抑制神经细胞的凋亡过程。     

局部亚低温脑保护作用的临床研究及应用现状

1 低温技术的研究历史 人类应用低温治疗疾病的历史源远流长,早在2000多年前古埃及人就发现应用冷敷方法可获得良好的止痛效果.早期的低温医学多侧重于研究冻伤救治,1817年拿破仑军队医生Carrey指出肢体手术时采用冷冻可使疼痛减轻;1849年,Bennet报道冷冻可使癌症的发展减慢、疼痛减轻;1928年,Giraudeau首次提出"Cryotherapie"(冷冻疗法)一词.     

局部亚低温脑保护作用的临床研究及应用现状

1低温技术的研究历史人类应用低温治疗疾病的历史源远流长,早在2000多年前古埃及人就发现应用冷敷方法可获得良好的止痛效果。早期的低温医学多侧重于研究冻伤救治,1817年拿破仑军队医生Carrey指出肢体手术时采用冷冻可使疼痛减轻;1849年,Bennet报道冷冻可使癌症的发展减慢、疼痛减轻;1928年,Giraudeau首次提出Cryotherapie(冷冻疗法)一词。1950年,美国Duke大学Sealy教授首先开展了应用低温进行心脏灌注手术;Bigelow等著文指出,将患者体表温度降至28～     

促红细胞生成素对新生鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用的研究

[目的]探讨促红细胞生成素对缺血缺氧新生鼠脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）的保护作用.[方法]7日龄Wistar大鼠102只,随机分成3组,①假手术组（n=18）;②观察组（n=42）：HIBD模型后即刻给促红细胞生成素3 000 U/kg腹腔注射;③对照组（n=42）：HIBD模型后即刻腹腔注射等体积的生理盐水.于处置后2、6、12、24、48 h检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;并于处置后48 h作HE和TUNEL染色光镜下检测脑细胞凋亡数,以及测定脑组织水含量.[结果]观察组脑组织SOD升高、MDA降低、脑细胞凋亡数及脑组织水含量减少,与对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）.[结论]促红细胞生成素可通过拮抗氧自由基、减轻脑水肿和阻止神经细胞凋亡,发挥对新生鼠HIBD时脑的保护作用.     

亚低温对脑保护的治疗与护理

目的：研究与分析亚低温对脑保护的治疗与护理。方法：选取本院近2年来,脑部受伤需要进行脑保护患者70例,通过亚低温治疗仪进行治疗,并进行严密的护理。结果：70例患者治疗后预后较好27例,中度残疾16例,重度残疾9例,植物存活4例,死亡14例,无一例患者由于护理不当而并发其他疾病。结论：亚低温治疗进行脑保护,临床效果较好,安全可靠,提高患者的存活率。     

神经节苷脂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

[目的]探讨神经节苷脂(gangliosides,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)的保护作用及其机制,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供依据。[方法]建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、DNA原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色与医学图像分析相结合方法观察正常对照组、假手术组、生理盐水组及GM1干预组海马CA1区在缺氧缺血后6、24、72h、7d病理变化、神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达。[结果]①缺氧缺血后生理盐水组海马CA1区病理变化明显,GM1干预组上述变化减轻;②正常对照组及假手术组海马CA1区Bcl-2表达较弱,HI后该区Bcl-2表达仍弱,Bax表达增强,出现凋亡细胞,以3d最明显;GM1干预组Bcl-2表达较盐水组增强,Bax表达较盐水处理组减弱(P<0.01),凋亡细胞减少。[结论]HIBD后Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加。GM1可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,这可能是GM1治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

头部亚低温不同治疗时间对新生儿中重度缺氧缺血性脑病的疗效研究

目的：探讨头部亚低温不同治疗时间对新生儿中重度缺氧缺血性脑病（HIE）的影响。方法：选取2008年7月-2012年11月本院确诊治疗的中重度HIE患儿123例,按随机数字表法分为早期组、中期组、晚期组,三组均给予头部亚低温治疗,早期组为出生后4 h内,中期组为出生后4-8 h内,晚期组为出生后8 h后。对患儿采用神经行为测定（NBNA）、标准化贝利婴儿（MDI、PDI）进行评估,分析对比各组患儿的疗效和预后情况。结果：早期组、中期组、晚期组患儿身高、体重增量基本一致,差异均无统计学意义（P〉0.05）;中期组患儿NBNA、MDI、PDI评分均高于早期组,早期组NBNA、MDI,PDI评分均高于晚期组,差异有统计学意义（P〈0.05）;中期组患儿伤残率、死亡率均低于早期组,早期组患儿伤残率、死亡率均低于晚期组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：头部亚低温不同治疗时机对中重度缺氧缺血性脑病新生儿机体发育无不良影响,中期治疗可有效提高患儿疗效,值得临床作进一步推广。     

亚低温在临床脑保护方面的应用现状及进展

亚低温的脑保护作用早在八十年代末就引起了国外学者关注.江基尧等人于1993年率先于国内发表了关于亚低温脑保护的研究进展.目前亚低温治疗已被一些诊疗指南收录,但近些年却出现了一些负面报道,甚至有反对临床应用亚低温的声音.     

亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA的表达变化

目的探讨亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA的表达变化及其与损伤神经细胞凋亡的关系。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，大脑中动脉阻塞2h，再灌注损伤12h，用流式细胞仪(FCM)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测假手术组、对照组和亚低温组的DNA断裂百分率和Caspase-3mRNA表达水平。结果亚低温组和假手术组DNA断裂百分率和Caspase-3mRNA表达水平均明显低于对照组。结论亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA表达水平明显降低可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关。     

N-乙酰半胱氨酸对缺氧缺血新生大鼠脑细胞间黏附分子-1及细胞凋亡的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠脑细胞间黏附分子-1及细胞凋亡的影响。方法7d龄SD大鼠，90只，随机分成3组，(1)假手术组(Sham)(n=30)；(2)HIBD模型组(Control)(n=30)：HIBD模型后即刻腹腔注射等量生理盐水；(3)HIBD药物组(NAC)(n=30)：HIBD模型后即刻腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(NAC)，200mg/kg。各组大鼠于处置后6h、12h、24h、48h、7d分别采用免疫组化法和Tunel法检测脑组织中细胞间黏附分子-1(ICAM—1)和细胞凋亡数目。结果HIBD模型组脑组织中ICAM—1的表达和细胞凋亡数与假手术组和HIBD药物组相比均升高，有显著性差异。结论NAC可抑制HIBD脑细胞ICAM-1的表达及脑细胞的细胞凋亡程度，NAC对缺氧缺血新生大鼠脑损伤有保护作用。     

亚低温对心肺复苏脑缺血再灌注损伤后血浆TNF-α的影响

目的　探讨亚低温对心肺复苏 (CPR)脑缺血再灌注损伤后患者血浆肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)的影响。方法　把 2 2例CPR病人基础生命支持 (BLS)后随机分常规组与亚低温组各 11例 ,用放免法测定各自CPR后 2h、6h、12h、1d、3d、5d血浆TNF -α的变化。结果　①亚低温组各时点血浆TNF -α含量显著低于常规组 (P <0 0 5 ) ;②常规组血浆TNF -α含量在各时点呈先升后降 ,1d出现峰值 ,亚低温组没有出现峰值。结论　①亚低温有显著抑制心肺复苏 (CPR)脑缺血再灌注损伤后血浆TNF -α释放作用 ,减轻心肺复苏(CPR)脑缺血再灌注损伤后的急性炎症反应 ,有利于提高脑复苏成功率 ;②TNF -α参与了心肺复苏后脑缺血再灌注损伤的发生和发展过程。     

TCD联合局部亚低温辅助动脉溶栓治疗对急性缺血性卒中血管再通率的影响

目的评价经颅多普勒超声(TCD)联合局部亚低温辅助尿激酶动脉溶栓治疗急性脑梗死患者闭塞血管的再通率。方法 60例急性脑梗死患者随机分为尿激酶对照组、TCD+尿激酶动脉溶栓组(TCD组)、亚低温+TCD+尿激酶组(亚低温组),每组各20例。根据TCD血流速度及频谱形态判断血管再通情况,并采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行神经功能缺损评分。结果亚低温组血管再通率为100%,TCD组血管再通率为89%,均高于单纯尿激酶组67%,其中亚低温组与单纯尿激酶组的差异有统计学意义(P=0.047)。结论 TCD联合尿激酶可增强尿激酶溶栓作用,提高血管再通率。     

大鼠全脑缺血缺氧损伤后血液中S-100、CK—BB、NSE水平变化的研究

目的探讨大鼠全脑缺血缺氧损伤后血液中S-100蛋白（S-100）、磷酸肌酸激酶脑型同工酶（CK—BB）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的水平变化。方法采用成年SD大鼠全脑缺血缺氧损伤模型：戊巴比妥腹腔注射麻醉后．用4．0双线结扎右侧颈总动脉,恢复4小时后,在37℃恒温低氧箱内,给予吸入8％氧气和92％氮气混合气体2小时。用放射免疫法和琼脂糖凝胶电泳法对对照组、缺氧缺血后6、12、24、48、72小时进行动态观测全脑缺血后血液中S-100、CK—BB、NSE水平的变化。结果在全脑缺血后,与对照组比较,血液和脑脊液中S-100、CK—BB、NSE在24～48小时都有明显增加（P〈0．05）。结论在全脑缺血损伤时血液和脑脊液中S-100、CK—BB、NSE水平都在早期明显升高．提示这三种指标可作为评价大鼠全脑缺血缺氧损伤的早期诊断指标。     

不同低温麻醉下体外循环对脑氧代谢的影响

目的　观察不同低温麻醉下体外循环 (CPB)对脑氧代谢的影响。方法　心脏瓣膜置换手术患者 2 0例 ,随机分为浅低温组 (30℃ )和中低温组 (2 6℃ )。在α稳态下 ,通过桡动脉和颈内静脉球部血液的动态血气分析及乳酸浓度测定 ,计算全身动脉及颈内静脉的血氧含量、动 -颈内静脉血氧含量差、脑氧摄取率和动 -颈内静脉乳酸浓度差。结果　CPB开始后 ,两组的动脉血氧含量、动 -颈内静脉血氧含量差和脑氧摄取率迅速下降 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,随着复温又迅速升高。在最低温度点时 ,组Ⅰ的动 -颈内静脉血氧含量差、脑氧摄取率高于组Ⅱ (P <0 0 5 ;P <0 0 1)。两组的乳酸浓度进行性升高 ,但各温度点的动 -颈内静脉血的乳酸浓度差无明显变化 (P >0 0 5 ) ,始终接近零值。停CPB时 ,两组的动 -颈内静脉血氧含量差仍明显低于转流前水平 (P <0 0 1)。结论　浅、中低温麻醉下的体外循环 ,均可满足CPB过程中的脑氧供需平衡 ,进一步的体温下降并未取得更好的保护效果。CPB结束后 ,脑氧代谢可能会继续升高 ,是否发生脑氧供需失衡值得进一步研究。     

K_(ATP)开放剂克罗卡林对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的:探讨ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂克罗卡林(cromakalim)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hy-poxic-ischemic brain damage,HIBD)细胞凋亡的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供依据。方法:建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、DNA原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色方法观察正常对照组、假手术组、HIBD组,克罗卡林用药组(用药1组),克罗卡林+格列苯脲用药组(用药2组)病理变化、细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达情况。结果:①HIBD组大脑皮质区病理变化明显,用药1组病理变化减轻,用药2组病理变化加重;②对照组及假手术组见少量凋亡细胞;HIBD组凋亡细胞明显增多,与对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0·01);用药1组凋亡细胞明显减少,与HIBD组比较差异有显著性(P<0·01);用药2组凋亡细胞与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05);③正常对照组及假手术组大脑皮质区Bcl-2有一定量的表达,Bax几乎无表达,HI后该区Bcl-2表达减弱,Bax表达增强,用药1组Bcl-2表达较HIBD组明显增强(P<0·01),Bax表达明显减弱(P<0·01),而用药2组Bcl-2表达及Bax表达与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05)。结论:HIBD后Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加;克罗卡林可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,而KATP阻断剂格列苯脲可拮抗克罗卡林以上作用,这可能是克罗卡林治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

院前亚低温治疗重型颅脑损伤的应用研究

目的 研究院前亚低温对重型颅脑损伤患者的脑保护作用.方法 将由急救车送至本院的86名重型颅脑损伤患者采用随机数字表法随机分成两组:院前亚低温组和晚期亚低温组.院前亚低温组患者入院前保持患者鼻咽部温度33℃～35℃,入院或手术后改为亚低温治疗仪(降温毯)进行亚低温治疗4天后自然复温.晚期亚低温组患者在入院或手术后开始使用亚低温治疗仪进行同样的亚低温治疗作为对照.同时监测两组的脑温、生命体征、颅内压力、并发症和GOS评分.结果 院前亚低温组在治疗后24、48和72 h的颅内压分别为(17.38±4.88mmHg,18.40±4.50 mmHg,16.40±4.13 mmHg)均较晚期亚低温组(20.63±3.00 mmHg,21.80±6.00 mmHg 18.81±4.50 mmHg)明显降低(P＜0.05);院前亚低温组恢复良好率、病死率与晚期亚低温组相比较有显著差异(P ＜0.05),预后(GOS评分4～5分)明显好于晚期亚低温组(P＜0.05);院前亚低温组未发生与亚低温治疗相关的严重并发症.结论 院前亚低温用于重型颅脑损伤患者的治疗,具有降低颅内压、改善预后的作用.     

不同肠缺血时间对大鼠小肠黏膜的损伤作用

目的探讨大鼠肠缺血最适缺血时间,筛选适用于研究肠缺血再灌注(II/R)损伤机制的大鼠肠缺血再灌注模型。方法将60只SD大鼠随机分为5组,A组为假手术组,B至E组肠缺血时间分别为45 min、60 min、75 min、90 min,每组12只。肠缺血模型采用肠系膜上动脉夹闭法。夹闭相应时间后取出动脉夹恢复血供,3 h后断头处死小鼠,取出肠组织,观察小肠黏膜的损伤并检测凋亡及Bcl-2的蛋白表达。结果 90 min组再灌注3 h后有2只大鼠死亡;再灌注30 min后各组大鼠MAP均明显下降,至3 h时降至最低;随着缺血时间的延长,肠含水率和Chui's评分均明显增大(P<0.05);随着肠缺血时间的增加,细胞凋亡随之增加,在缺血时间为75 min时细胞凋亡达到高峰;肠缺血显著降低Bcl-2蛋白表达水平,且肠缺血时间延长,蛋白水平随之呈降低趋势(P<0.05),肠缺血75 min时蛋白水平最低。结论随着缺血时间的延长小肠黏膜的损伤越严重,但凋亡在缺血75 min达到最高,是最适合研究II/R损伤凋亡相关机制的SD大鼠模型。