CCl_4肝纤维化大鼠功能性瘦素受体表达的动态变化

目的明确瘦素受体(OB-R)在正常和CCl4肝纤维化大鼠肝组织的表达,观察功能性瘦素受体(OB-Rb)表达在肝纤维化进程中的动态变化,以探讨瘦素在肝纤维化形成中的作用机制。方法建立大鼠CCl4肝纤维化模型,采用免疫组织化学方法观察瘦素受体在大鼠肝组织的表达及变化;采用RT-PCR方法观察大鼠肝组织OB-Rb mRNA表达的动态变化。结果正常肝组织可见OB-R在汇管区和血管周围间质细胞的胞质和胞膜有少量表达;OB-R在模型大鼠汇管区、小叶内窦周及纤维间隔的表达明显增加。正常肝组织表达OB-Rb mRNA,不同时间点其表达量差异无统计学意义;模型组造模4 d后,OB-Rb mRNA表达水平即开始增加,随着肝纤维化的形成,OB-Rb mRNA表达逐渐增强,其表达水平与肝纤维化分期呈正相关性(rs=0.804,P=0.000)。结论在大鼠CCl4肝纤维化形成过程中,功能性瘦素受体的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肝脏纤维化的发生。     

阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因表达的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因的作用机制。方法将不同浓度的阿仑膦酸钠作用于小鼠破骨细胞,采用Western blot检测小鼠破骨细胞分化中c—fos基因的表达情况。结果阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和c—fbs基因的表达显著低于空白对照组;且加入10^-4mol／L、10^-6mol／L、10^-8mol／L浓度阿仑膦酸钠后,c—fos表达受抑制程度依次增强;而在10^-8mol／L、10^-10mol／L、10^-12mol／L浓度中,c—fos表达受抑制程度依次减弱。结论阿仑膦酸钠可使破骨细胞分化中的c—fos基因受到抑制,其抑制程度与阿仑膦酸钠的浓度有关,10^-8mol／L浓度时抑制作用最强。     

感觉神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子与成纤维细胞生长因子-2及受体的调控作用

目的 从基因水平探讨感觉神经肽SP对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）及受体的调控作用。方法 由在体和离体实验两部分组成。在体实验采用Wistar大鼠50只,随机分为辣椒素组和对照组。辣椒素组大鼠皮下注射辣椒素50mg/kg毁损感觉神经,1周后行皮肤全层切割伤,采用免疫组化结合图像分析,观察伤后3-12d伤口肉芽组织内神经肽P物质（SP）含量。采用原位杂交方法观察EGF、表皮生长因子受体（EGFR）、FGF-2、成纤维细胞生长因子受体-1（FGFR-1）的基因表达,对照组除不化学毁损感觉神经外,余处理同辣椒素组。离体实验采用RT-CPR技术观察不同浓度（10^-9～10^-5mol/L)SP作用于培养肉芽组织成纤维细胞后,上述生长因子及受体的表达。结果 在体实验示,肉芽组织SP免疫阳性染色与EGF、FGF-2及其受体表达有关,化学毁损感觉神经,肉芽组织SP免疫阳性染色减弱,上述因子及受体的表达也明显抑制。离体实验发现,上调培养肉芽组织成纤维细胞内源性EGF和EGFR mRNA表达的SP浓度为10^-8～10^-6mol/L和10^-6～10^-5mol/L,上调FGF-2和FGFR-1 mRNA表达的SP浓度分别为10^-9～10^-5mol/L和10^-6～10^-5mol/L。结论 伤口愈合中,感觉神经释放的SP参与肉芽组织成纤维细胞表达EGF、FGF-2及受体mRNA的调控。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

血管紧张素Ⅱ对外周血内皮祖细胞KDR mRNA表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对外周血内皮祖细胞（EPCs）血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2／KDR）mRNA表达的影响。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞（MNCs）,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度AngⅡ（10^-5mol／L,10^-7mol／L,10^-9mol／L）干预一定时间（6h,12h,24h和48h）。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。然后,收集贴壁细胞,Trizol法提取总RNA,以RT-PCR法对EPCs的KDR mRNA表达进行半定量测定,并观察缬沙坦（valsartan）对此的影响。结果AngⅡ呈浓度依赖方式诱导KDR mRNA的表达增加;10^-5mol／L的AngⅡ作用6h,EPCs的KDR mRNA表达即有显著增加（P〈0．01）,随着时间延长,KDR mRNA表达逐渐增加,至48h达最高峰。而缬沙坦可显著抑制AngⅡ诱导的KDR mRNA的表达增加,使之接近于正常水平。结论AngⅡ可显著增加EPCs的KDR mRNA表达,并呈浓度和时间依赖性。此作用可被ATI受体拮抗剂缬沙坦所阻断,提示AngⅡ通过AT1受体介导上调EPCs的KDR mRNA的表达。     

瘦素受体在肾上腺皮髓质及其肿瘤中的表达及与血浆瘦素的关系

目的 观察长型瘦素受体(Ob-Rb)在正常肾上腺皮、髓质及其肿瘤中的mRNA和蛋白表达;并观察原发性醛固酮增多症(PA)、皮质醇分泌瘤(CS)和嗜铬细胞瘤(PHEO)患者的血浆瘦素水平.方法 提取6名健康者肾上腺皮质和髓质和10例CS、14例醛固酮分泌瘤(APA)、20例PHEO患者的组织总RNA和蛋白,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测不同组织中Ob-Rb mRNA和蛋白表达.ELISA方法测定29例PA、11例CS、15例PHEO患者和20名年龄匹配的血压健康者血浆瘦素水平.结果 在肾上腺皮、髓质及其肿瘤中存在Ob-Rb的mRNA和蛋白表达.在正常肾上腺皮质中,Ob-Rb mRNA(0.32±0.12)和蛋白(1.31±0.26)表达明显均高于其余各组(均P＜0.05).Ob-Rb mRNA在APA(0.15±0.10)中的表达明显高于CS(0.05±0.02,P＜0.05).APA中Ob-Rb mRNA表达与立位血浆醛固酮水平正相关(r=0.670,P=0.024),而CS患者瘤内Ob-RbmRNA水平与其24 h尿UFC水平正相关(r=0.870,P=0.005).CS患者血浆瘦素水平明显高于非皮质醇瘤患者(P=0.001).结论 肾上腺皮髓质及其肿瘤广泛表达长型瘦素受体,且其表达之间存在差异,瘦素与肾上腺间的关系还需进一步研究.     

地塞米松和福莫特罗对THP-1细胞分化的巨噬细胞表面TLR4表达的影响

目的通过体外实验测定地塞米松和福莫特罗对人单核细胞系（THP一1）分化的巨噬细胞表面Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法用不同浓度地塞米松和（或）福莫特罗刺激THP．1细胞系分化的巨噬细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质印迹法（Westernblotting）测定细胞在有或没有脂多糖刺激时TLR4mRNA和蛋白表达水平。结果脂多糖浓度依赖性上调TLR4mRNA和蛋白表达水平。单用地塞米松（10^-10～10^-6mol／L）下调TLR4表达,单用福莫特罗（10^-7和10^-6moL／L）上调TLR4水平。联合刺激时,福莫特罗（10^-6mol／L）能部分逆转地塞米松（10^6mol／L）对TLR4表达的下调作用。结论福莫特罗和（或）地塞米松对TLR4的影响可能是联合作用的机制之一,对治疗革兰阴性细菌引起的气道炎症有重要意义。     

奥曲肽对实验性肝纤维化大鼠瘦素及功能性瘦素受体表达的影响

目的探讨奥曲肽(OCT)对实验性肝纤维化大鼠瘦素及功能性瘦素受体(OB-Rb)表达的影响。方法雄性SD大鼠54只,随机分为3组:正常组、模型组、OCT组。采用四氯化碳(CCl4)复合因素建立肝纤维化模型,实验开始后分别于第2、4、6周随机采集标本,测定血清肝功能、瘦素及转化生长因子β1(TGF-β1)水平,观察肝脏病理形态学改变,检测肝纤维化大鼠肝组织瘦素及OB-Rb的表达情况。结果与正常组比较,模型组和OCT组大鼠血清肝功能下降,瘦素及TGF-β1水平增高,肝组织瘦素及OB-Rb表达增强,且随着时间的增加表现明显;OCT组与模型组同时相比较,OCT组肝功能下降程度、瘦素及TGF-β1水平增高程度较小,病理改变较轻,肝组织瘦素及OB-Rb的表达水平较低。结论 OCT可在一定程度上改善肝功能,延缓肝纤维化的进展,其机制可能是OCT通过抑制瘦素及OB-Rb的表达而影响TGF-β1水平,进而延缓肝纤维化的进展。     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ调控人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX－1）基因转录和蛋白表达的影响。方法：将不同浓AngⅡ(10^-5mol/L－10^－5mol/L）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育24h，将10^-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间（0、3、6、12、24、36、48h）后，用细胞酶联免疫法和半定量RT－PCR分别检测LOX－1蛋白和mRNA表达。结果：10^-5mol/L－－10^-10mol/LAngⅡ作用24h，使内皮细胞LOX－1蛋白一达的OD值与对照组相比显著增加（P＜0．001），其中AngⅡ浓度为10^-5mol/L－10^-9mol/L时，LOX－1表达增加呈浓度依赖性。10^-10mol/LAngⅡ的作用结果与10^-9mol/LAngⅡ的作用结果差异无显著性；10^-5mol/L－10^-8mol/LAngⅡ可以使内皮细胞LOX－1mRNA的表达增加，分别为对照组的4．43、4．25、2．71和1．84倍。10^-9mol/L,10^-10mol/AngⅡ作用24h,LOX－1mRNA表达与对照组相比无显著变化（P＞0．05）。用 10^-6mol/LAngⅡ作用HUVECs不同时间，发现共孵育3h后，内皮细胞LOX－1mRNA的表达和LOX－1蛋白表达的OD值与对照组相比都有显著增加（P＜0．001），随着时间延长，LOX－1mRNA的表达至24h左右达最高峰；LOX－1蛋白表达至24－36h达到最高峰之后表达量逐渐减低，结论：AngⅡ能明显增加强HUVECs表达LOX－1，并随着AngⅡ浓度的增加和作用时间的延长，LOX－1表达增加。     

Regulation of leptin on insulin secretion and sulfonulurea receptor 1 transcription level in isolated rats pancreatic islets

Objective To investigate the regulation of leptin on insulin secretion and expression of ATP-sensitive potassium channel subunit sulfonulurea receptor 1 (SUR1) mRNA, and to determine whether the effects of leptin are mediated through known intracellular signaling transduction.Methods Pancreatic islets were isolated by the collagenase method from male SD rats. The purified islets were incubated with different concentrations of leptin for 2 h in the presence of different concentrations of glucose. Insulin release was measured using radioimmunoassay. Expression of SUR1 mRNA was detected by RT-PCR.Results In the presence of leptin 2 nmol/L, insulin release was significantly inhibited at either 11.1 or 16.7 mmol/L glucose concentration (both P<0.05), but insulin release was not altered at glucose of 5. 6 mmol/L physiological concentration. The dose-response experiment showed that the maximal effect of leptin on insulin secretion achieved at 2 nmol/L. Exposure of islets to 2 nmol/L leptin induced a significan     

血管紧张素Ⅱ对肝癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ对肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制.方法:采用CCK-8法测定不同浓度血管紧张素Ⅱ作用24、48 h对HepG2细胞增殖的影响.通过蛋白质免疫印迹法测定血管紧张素Ⅱ处理后HepG2细胞内细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)蛋白表达水平.结果:作用24 h,10...     

胰岛素、地塞米松、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对3T3-L1脂肪细胞脂肪水孔蛋白表达的调节作用

目的通过细胞培养研究胰岛素样生长因子-1(IGF鄄1)、地塞米松对成熟脂肪细胞水孔蛋白(Aquaporinadipose,AQPap)基因表达的影响,并与胰岛素的作用相比较,以此了解AQPap基因表达的影响因素,探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用。方法用不同浓度(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)的胰岛素、IGF鄄1(10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)及地塞米松刺激液(10-6、10-7、10-8mol/L)刺激诱导分化第9天的3T3鄄L1细胞6h;提取细胞RNA,运用半定量RT鄄PCR技术,检测AQPapmRNA表达量的变化。结果与对照组相比,10-9mol/L胰岛素刺激细胞6h可使AQPap基因表达下降16%,10-6mol/L胰岛素使之下降超过50%。IGF鄄1也降低AQPap的基因表达,但相同浓度(10-7mol/L)刺激下,IGF鄄1的作用要弱于胰岛素(P<0.05)。地塞米松对AQPapmRNA的表达量无明显影响,不过,同时给予10-6mol/L的地塞米松和胰岛素与单用10-6mol/L胰岛素相比,AQPapmRNA的表达量有所上升(P<0.05)。结论胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap的表达起抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。IGF鄄1也有抑制作用,但较胰岛素弱。地塞米松能够拮抗胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap基因表达的下调作用。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测不同浓度(10-10,10-8,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于Ishikawa细胞系不同时间(0 min,15 rmin,30 min和24 h)后ERRα mRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)作用于Ishikawa细胞系24 h后ERRα mRNA的变化.结果:10-10mol/L 17β-E2作用于Ishikawa细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA水平与未加E2相比均稍有增加,而10-8,10-6mol/L 17β-E2作用于细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA明显减小,以10-8mol/L作用后减少最明显.同时加入E2和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRα mRNA的减小作用被阻断.10-8mol/L孕酮作用于细胞系24 h后,ERRα mRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7,10-6和10-5mol/L孕酮后,ERRα mRNA表达均出现明显增加.结论:17β-E2可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRα mRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的.孕酮可增加ERRα mRNA的表达.     

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法以葡萄糖刺激浓度为2.8mmol/L和16.7mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10μmol/LDHEAS干预10min和24h(不同浓度DHEAS组),以5μmol/LDHEAS或与10μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24h(DHEAS和DHEAS+RU486组),设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-TimePCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果干预后10min和24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05);干预后24h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于空白对照组(P<0.05)。干预后24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素...     

外源性硫化氢通过调控瘦素/瘦素受体通路抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨外源性硫化氢（H2S）能否通过调控瘦素/瘦素受体（LEPR）通路抑制高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损 伤。方法CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相检测凋亡细胞的形态学和数量改变;双氯荧光素 （DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相法检测线粒体 膜电位（MMP）水平;Western blotting法测定瘦素及瘦素受体蛋白的表达水平。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3~ 24 h可以明显上调瘦素、瘦素受体的表达水平,在高糖处理9 h时瘦素、瘦素受体的表达水平达到峰值;在高糖处理HUVECs前, 400 μmol/L 硫氢化钠（NaHS,为H2S 的供体）预处理30 min 能明显抑制高糖对瘦素及瘦素受体表达的上调作用;400 μmol/L NaHS预处理HUVECs 30 min、50 ng/mL瘦素拮抗剂（LA）预处理HUVECs 1 h均可明显抑制高糖引起的HUVECs损伤,使细胞 存活率升高,细胞凋亡数量减少,胞内活性氧（ROS）堆积及MMP降低（P<0.01）。结论外源性H2S通过抑制瘦素/瘦素受体通 路对抗高糖引起的HUVECs损伤。     

调节食欲-生殖的信号肽在雄激素致不孕大鼠中的表达及滋肾阴药的作用

目的探讨雄激素不孕大鼠(ASR)肥胖及无排卵的中枢机制及滋肾阴药的作用。方法给出生9日龄SD雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮,建立ASR模型。用原位杂交、双标原位杂交的方法检测与肥胖发生有关的几种信号肽/激素如神经肽Y(NPY)、瘦素(leptin)受体长体(OB-Rb)、前阿黑皮素原(POMC)mRNA在ASR下丘脑弓状核(ARC)的表达含量和其关系,以及灌服滋肾阴药后上述指标的变化。结果ASR呈肥胖、无排卵状态。ASR的ARC中NPYmRNA神经元上有OB-RbmRNA表达,NPYmRNA神经元与POMCmRNA神经元有突触联系。NPY和POMC基因表达水平明显增加(P<0.01),OB-Rb基因表达水平明显降低(P<0.01)。中药治疗ASR后,大鼠出现减肥和排卵现象,ARC中NPY、POMC基因表达下降,OB-Rb基因表达上升至正常大鼠水平(P>0.05)。结论ASR肥胖及无排卵可能与NPY、POMC基因过表达、OB-RbmRNA数目减少有关,中药可能有调控这些信号肽的表达而发挥减肥及促排卵作用。     

硫酸脱氢表雄酮刺激MIN6细胞胰岛素分泌的机制研究

目的 初步探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)促进MIN6细胞胰岛素分泌的机制.方法 选用小鼠胰岛B细胞株MIN6作为实验对象,在葡萄糖浓度为2.8 mmol/L和16.7 mmol/L的条件下,分别以0.1、1、5、10、50μmol/L的DHEAS干预10 min和24h,采用ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素的含量,应用相关试剂盒检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)和二磷酸腺苷(ADP)的生物发光水平及比率(ATP/ADP);采用Real-Time PCR法检测不同浓度DHEAS干预24 h的细胞内葡萄糖激酶(GCK) mRNA的表达.结果 两种葡萄糖浓度条件下,以5、10、50 μmol/L DHEAS干预10 min和24 h的MIN6的细胞培养上清液中胰岛素含量和细胞内ATP/ADP比率显著高于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,1、5、10、50 μmol/L DHEAS干预24 h的MIN6细胞内GCK mRNA表达显著上调(p＜0.05).结论 DHEAS可能通过增加ATP/ADP的比率,促进MIN6细胞胰岛素的分泌;干预24 h的效应可能与上调GCK mRNA的表达、促进葡萄糖酵解有关.     

IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用

目的探讨IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5～500)mg/mL、胰岛素样生长因子(IGF)(2.5～250)μmol/L及其抑制剂aIR3(2.5～250)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察IGF与aIR3对西妥昔单抗抗HepG2增殖的影响。结果细胞培养72 h后,单药西妥昔单抗对HepG2细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,西妥昔单抗联合aIR3组增殖抑制率在相应浓度下均显著高于同浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01),IGF(10～250)μmol/L与西妥昔单抗(20～500)mg/mL联合组增殖抑制率均显著低于相应浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01)。结论 IGF-ⅠR通路可影响西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖的作用,可能是肝癌细胞株对西妥昔单抗耐药的机制之一。     

胰岛素抵抗大鼠 Orexin/leptin系统变化及其影响因素的研究

目的研究IR大鼠下丘脑及脂肪组织中orexin和leptin系统的变化,分析其可能的调控因素.方法IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实;RT-PCR技术检测orexin/leptin及其受体(OX1R、OX2R、LR)mRNA的表达;生化比色法测定血清FFA、放免法测定血清TNF-α.结果该模型大鼠下丘脑中Prepro-orexin表达减少约80%,OX1R、OX2R分别增加3.4及3.2倍,leptin mRNA增加约8倍;LR减少78%;血清FFA和TNF-α均升高;钳夹技术中葡萄糖输注率(GIR60-120)明显低于对照组.结论高脂肪膳食可诱导大鼠体内IR;并导致orexin/leptin系统平衡状态的破坏;orexin与leptin相互作用共同维持机体能量代谢的稳定:FFA和TNF-α可能参与该系统的调控.