碱性成纤维细胞生长因子影响成骨细胞黏附与增殖的实验

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性与成骨细胞DNA合成的影响。方法:实验于2004-08/12在广州军区广州总医院中心实验室完成。取2只健康新西兰大白兔骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外培养。①光镜下观察成骨细胞形态。②进行不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(0.1,1,10,100mg/L)诱导成骨细胞,设空白对照,于1,2,4,8h共4个时间点采用体视学计量黏附细胞数量。③流式细胞仪进行细胞DNA含量分析。结果:①成骨细胞特性观察:光镜下成骨细胞呈多角形或梭形表达出高碱性磷酸酶活性。②碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附性的影响:碱性成纤维细胞生长因子浓度为1.0～10mg/L时细胞黏附数呈剂量依赖性,达到100mg/L时,细胞黏附数反而下降,时间到8h后,与对照组间无明显差异。③碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞DNA合成的影响:增殖指数显示碱性成纤维细胞生长因子浓度为1.0～10mg/L时呈剂量依赖性,到100mg/L时,指数略有下降,但仍显著高于对照组。结论:①碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0～10mg/L时可提高成骨细胞的黏附性。②碱性成纤维细胞生长因子浓度在1.0～10mg/L时可促进成骨细胞DNA合成,到100mg/L作用减弱。③碱性成纤维细胞生长因子可调节成骨细胞的黏附与增殖。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞与多孔生物材料黏附特性的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(BasicFibroblastGrowthFactor,bFGF)对成骨细胞与多孔生物材料粘附特性的影响.方法分别用0.1、1、10、100、1000ng/ml系列浓度的bFGF诱导培养基诱导培养成骨细胞24h后,接种成骨细胞于多孔生物材料上,测定接种后1h的粘附细胞率.结果bFGF在0～10ng/ml范围内能促进细胞在材料上的粘附,并在10ng/ml浓度下达到最大粘附率(P<0.05),当bFGF浓度进一步增加时,细胞粘附率不再增加,在1000ng/ml时细胞粘附率与对照组无明显差异.结论10ng/ml的bFGF诱导可明显促进成骨细胞与多孔生物材料间的粘附.     

碱性成纤维细胞生长因子的成骨细胞增殖和分化的影响

目的：明确外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对成同细胞生长的影响。方法：用体外培养的SD大鼠的成骨细胞，加入不同浓度的bFGF（10－100ng/ml)，培养24h后，通过MTT检测法，增殖细胞核抗原免疫组化分析及细胞碱性磷酸酶量的测定观察bFGF对成骨细胞的增殖和分化的影响。结果：bFGF在此浓度范围内能明显促进成骨细胞生长，细胞内ALP含量下降，结论：bFGF可以明显刺激成骨细胞的增殖，对细胞的分化无促进作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞增殖和分化的影响

目的 :明确外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对成骨细胞生长的影响。方法 :用体外培养的SD大鼠的成骨细胞 ,加入不同浓度的bFGF( 10～ 10 0ng/ml) ,培养 2 4h后 ,通过MTT检测法、增殖细胞核抗原免疫组化分析及细胞碱性磷酸酶量的测定观察bFGF对成骨细胞的增殖和分化的影响。结果 :bFGF在此浓度范围内能明显促进成骨细胞生长 ,细胞内ALP含量下降。结论 :bFGF可以明显刺激成骨细胞的增殖 ,对细胞的分化无促进作用     

碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响

目的:碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨组织的损伤有修复作用,许多体内外实验均表明外源性植入碱性成纤维细胞生长因子能明显促进骨形成过程。观察碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响。方法:实验于2003-01/07在解放军广州军区总医院医学实验科完成。成年雄性新西兰白兔,体质量1.5～2.5kg,采用聚乙烯亚胺(jetPEITM)介导真核分泌表达载体pcDNA3.1-bFGF及非分泌表达载体pEGFP-C3-bFGF转染原代培养的成骨细胞,消化收集转染成骨细胞以及未经转染的成骨细胞,利用血细胞计数器进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,同时测定DNA浓度、碱性磷酸酶及骨钙素含量的变化。结果:①未转染的细胞在第8天进入稳定期,而经转染的细胞在第10天才进入稳定期。未转染细胞最终达到的细胞数量为(1.70±0.02)×109L-1,而经转染的细胞数量为(2.10±0.03)×109L-1,差异显著(P<0.05)。②经pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞的DNA量最高,约为(255±20)mg/L,而经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞的总DNA量约为(225±20)mg/L,未经转染的成骨细胞的总DNA量为(100±10)mg/L。③pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞培养至第9天后,碱性磷酸酶分泌量为(8.0±0.22)IU/mL;而未转染的成骨细胞碱性磷酸酶分泌量为(13.12±0.18)IU/mL。经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞所分泌的碱性磷酸酶与未经转染的细胞的分泌量相当,约为(12.56±0.24)IU/mL。④随着培养时间的延长,骨钙素分泌量的变化趋势与碱性磷酸酶相同,但重组质粒转染成骨细胞与未转染细胞最终分泌的骨钙素量差异无显著性(P>0.05)。结论:①经pcDNA3.1-bFGF及pEGFP-C3-bFGF重组质粒转染后,成骨细胞的生长特性有一定的变化,与添加外源碱性成纤维细胞生长因子的影响基本相同。②pcDNA3.1-bFGF转染的细胞分泌的碱性成纤维细胞生长因子能够促进细胞分裂增殖,降低碱性磷酸酶的表达,而pEGFP-C3-bFGF转染的细胞不能分泌表达蛋白,难以发挥其生物学功能。     

成骨细胞和碱性成纤维细胞生长因子植入促进骨再生过程研究

目的研究成骨细胞和碱性成纤维因子(bFGF)于凝胶载体中植入促进骨再生的效果。方法将同种异体胎兔成骨细胞按不同浓度植入成年新西兰兔桡骨1cm缺损区域,观察骨缺损修复过程;结果植入但骨缺损桥接率随着植入浓度手术后时间的增加而上升。扫描电镜观察成骨细胞植入3周时有骨陷窝形成。植入5周时骨陷窝壁完全钙化。临床应用于10例骨不连患者,均愈合。结论成骨细胞于三维凝胶中植入的最佳细胞浓度为106/ml。胎儿成骨细胞和bFGF植入可临床应用于骨折、骨折延迟愈合、骨不连、骨坏死等的治疗。     

碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜成骨细胞中的表达

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜．成骨细胞中的表达情况，以为其基因转移在骨组织工程中的应用奠定基础。方法：实验于2003-09在广州军区总医院医学实验科完成。采用聚乙烯亚胺介导重组真核表达载体pcDNA3．1-碱性成纤维细胞生长因子经转染至原代培养的成骨细胞中，培养36h后，采用细胞免疫组化、免疫印迹杂交、酶联免疫吸附法、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色等方法检测碱性成纤维细胞生长因子在成骨细胞中的表达情况以及其生物学活性。结果：①pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子转染的成骨细胞能分泌表达碱性成纤维细胞生长因子至细胞培养液中，表达量约为（1．56&;#177;0．08）ng／mL，高于未经转染的细胞培养液[（0．53&;#177;0．048）ng／ml，（P〈0．01）]。②经转染的成骨细胞的培养上清可以明显促进3T3细胞的增殖，表明成骨细胞所分泌表达的碱性成纤维细胞生长因子具有一定的生物学活性。结论：碱性成纤维细胞生长因子基因能够转移至骨膜成骨细胞中，经转染的细胞能够超表达碱性成纤维细胞生长因子。     

碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜成骨细胞中的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜.成骨细胞中的表达情况,以为其基因转移在骨组织工程中的应用奠定基础。方法:实验于2003-09在广州军区总医院医学实验科完成。采用聚乙烯亚胺介导重组真核表达载体pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子经转染至原代培养的成骨细胞中,培养36h后,采用细胞免疫组化、免疫印迹杂交、酶联免疫吸附法、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色等方法检测碱性成纤维细胞生长因子在成骨细胞中的表达情况以及其生物学活性。结果:①pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子转染的成骨细胞能分泌表达碱性成纤维细胞生长因子至细胞培养液中,表达量约为(1.56±0.08)ng/mL,高于未经转染的细胞培养液[(0.53±0.048)ng/ml,(P<0.01)]。②经转染的成骨细胞的培养上清可以明显促进3T3细胞的增殖,表明成骨细胞所分泌表达的碱性成纤维细胞生长因子具有一定的生物学活性。结论:碱性成纤维细胞生长因子基因能够转移至骨膜成骨细胞中,经转染的细胞能够超表达碱性成纤维细胞生长因子。     

碱性成纤维细胞生长因子促神经再生的实验研究

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对神经再生的影响。方法:用硅胶管桥接大鼠坐骨神经6mm长的缺损,管内注入生理盐水稀释的bFGF,对照组注入等量的生理盐水,分别于术后1、3、5周作神经电生理检查及组织形态学检查。结果:bFGF组运动神经传导速度、复合肌肉动作电位振幅、神经纤维密度、轴突直径、髓鞘厚度均优于对照组。结论:bFGF能促进神经再生。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对犬牙龈成纤维细胞的影响

背景:研究发现,局部应用外源性碱性成纤维细胞生长因子可明显促进体外培养牙龈成纤维细胞的增殖,口内局部应用可加速牙龈组织伤口的愈合.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染对Beagle犬牙龈成纤维细胞生物学特性的影响.设计、时间、地点:观察对比体外细胞学实验,于2008-04/09在福建医科大学细胞与发育工程中心及解放军南京军区福州总医院比较医学科完成.材料:Beagle犬4只,12月龄,体质量10～13 kg,雄性;含有人全长碱性成纤维细胞生长因子cDNA的pIRES2-EGFP-bFGF质粒为白行构建.方法:切取Beagle犬左上颌第2,3,4前磨牙的游离龈.无菌磷酸盐缓冲液冲洗4遍,将组织块剪碎后用2.5 g/L的胰酶37℃消化2 h,离心后弃上清,加入含体积分数为10%胎生血清的DMEM,接种于6孔板并覆盖玻片,置于37℃、体积分数为5%CO<,2>的培养箱培养,取对数生长期细胞消化传代.利用脂质体介导法将pIRES2-EGFP-bFGF质粒转染Beagle犬牙龈成纤维细胞,以空质粒转染组及未转染组作为对照.主要观察指标:MTT法检测牙龈成纤维细胞增殖状况;AO/EB双染色检测牙龈成纤维细胞凋亡;化学比色法检测牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性.结果:3组细胞均在转染后第3天开始进入对数生长期.MTT检测结果显示,转染后随着时间改变,与空质粒转染组及未转染组相比,实验组牙龈成纤维细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),而空质粒转染组及未转染组差异无显著性意义(P>0.05).AO/EB双染色结果显示,实验组牙龈成纤维细胞凋亡率低于空质粒转染组及未转染组(P<0.05).转染碱性成纤维细胞生长因子基因后,牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性未见明显改变,与未转染细胞差异无显著性意义.结论:碱性成纤维细胞生长因子基因转染可以加速牙龈成纤维细胞的增殖,抑制其凋亡,无促使牙龈成纤维细胞骨向分化的作用.     

人骨髓间充质干细胞生长特性及碱性成纤维细胞生长因子对其增殖的影响

目的:观察人骨髓间充质干细胞的生长特性及表面标记,探讨碱性成纤维细胞生长因子对其增殖的影响。方法:实验于2003-02/2005-10在大连医科大学附属第一医院中心实验室、苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成。①骨髓组织均取自单纯性骨囊肿行自体骨髓注射治疗的患者,年龄10～16岁,全部在患者家属的同意下,于后方髂嵴骨髓穿刺,一次性采集骨髓20mL。Percoll梯度离心,附壁筛选人骨髓间充质干细胞进行原代培养。②原代接种后48h换液,待贴壁细胞即将铺满瓶底时用胰酶消化分离,按3×103/cm2密度接种于6孔培养板,记为P1;传代培养过程中贴壁细胞彼此融合,铺满整个培养板的底面时,再重复以上操作,记为P2,以此类推,传代培养直至细胞出现衰老征相。③取第2代间充质干细胞,消化后计数2×105细胞与抗CD34,CD44抗体室温反应30min,流式细胞仪分析细胞表型。④将生长良好的第2代人骨髓间充质干细胞以500个/孔种植在96孔培养板中,加入完全培养液的同时,再加入碱性成纤维细胞生长因子,使其成为浓度分别为0,1,5,10,25,50,100μg/L的条件培养基,每个浓度重复5孔。培养2d后,于各小孔内加入5g/L噻唑蓝20μL,继续培养4h后每孔加入二甲基亚砜200μL,用酶标仪在492nm波长下检测人骨髓间充质干细胞增殖情况。⑤实验分组同上,各培养孔加入TritonX-100100μL,4℃过夜,每孔加入碱性磷酸酶底物液150μL,酶联免疫监测仪测定410nm波长下人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶的活性。结果:①人骨髓间充质干细胞原代和传代培养的生长曲线分析:原代接种后5～9d为细胞生长潜伏期,11～16d为对数增殖期,18～20d为生长平台期。传代培养细胞生长潜伏期为12～24h,对数增殖期为7～10d,11～13d进入细胞生长平台期。②人骨髓间充质干细胞的表型:人骨髓间充质干细胞均一表达CD44,不表达CD45。③碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓间充质干细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响:与空白对照比较,较低浓度的10μg/L碱性成纤维细胞生长因子即可显著促进人骨髓间充质干细胞增殖(t=2.852,P<0.05),且与其浓度成正性量效关系。25～100μg/L碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶的活性均可产生显著抑制作用(t=3.248,P均<0.05)。结论:人骨髓间充质干细胞可在体外迅速扩增,碱性成纤维细胞生长因子对其增殖作用与浓度成正性剂量-效应关系。     

人骨髓间充质干多细胞生长特性及碱性成纤维细胞生长因子对其增殖的影响

目的观察人骨髓间充质干细胞的生长特性及表面标记,探讨碱性成纤维细胞生长因子对其增殖的影响.方法实验于2003-02/2005-10在大连医科大学附属第一医院中心实验室、苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成.①骨髓组织均取自单纯性骨囊肿行自体骨髓注射治疗的患者,年龄10～16岁,全部在患者家属的同意下,于后方髂嵴骨髓穿刺,一次性采集骨髓20 mL.Percoll梯度离心,附壁筛选人骨髓间充质干细胞进行原代培养.②原代接种后48 h换液,待贴壁细胞即将铺满瓶底时用胰酶消化分离,按3×103/cm2密度接种于6孔培养板,记为P1;传代培养过程中贴壁细胞彼此融合,铺满整个培养板的底面时,再重复以上操作,记为P2,以此类推,传代培养直至细胞出现衰老征相.③取第2代间充质干细胞,消化后计数2×105细胞与抗CD34,CD44抗体室温反应30 min,流式细胞仪分析细胞表型.④将生长良好的第2代人骨髓间充质干细胞以500个/孔种植在96孔培养板中,加入完全培养液的同时,再加入碱性成纤维细胞生长因子,使其成为浓度分别为0,1,5,10,25,50,100μg/L的条件培养基,每个浓度重复5孔.培养2 d后,于各小孔内加入5 g/L噻唑蓝20μL,继续培养4 h后每孔加入二甲基亚砜200μL,用酶标仪在492 nm波长下检测人骨髓间充质干细胞增殖情况.⑤实验分组同上,各培养孔加入Triton X-100 100μL,4 ℃过夜,每孔加入碱性磷酸酶底物液150μL,酶联免疫监测仪测定410nm波长下人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶的活性.结果①人骨髓间充质干细胞原代和传代培养的生长曲线分析原代接种后5～9 d为细胞生长潜伏期,11～16 d为对数增殖期,18～20 d为生长平台期.传代培养细胞生长潜伏期为12～24 h,对数增殖期为7～10 d,11～13 d进入细胞生长平台期.②人骨髓间充质干细胞的表型人骨髓间充质干细胞均一表达CD44,不表达CD45.③碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓间充质干细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响与空白对照比较,较低浓度的10μg/L碱性成纤维细胞生长因子即可显著促进人骨髓间充质干细胞增殖(t=2.852,P＜0.05),且与其浓度成正性量效关系.25～100μg/L碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶的活性均可产生显著抑制作用(t=3.248,P均＜0.05).结论人骨髓间充质干细胞可在体外迅速扩增,碱性成纤维细胞生长因子对其增殖作用与浓度成正性剂量-效应关系.     

碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响

背景：体外培养软骨细胞经历多次传代后，其增殖能力将逐渐退化。实验表明，碱性成纤维细胞生长因子可促进软骨细胞增殖，并可能影响软骨细胞的表型与分化。目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖和分化的影响，并筛选其用于体外软骨细胞培养的最佳剂量。设计、时间及地点：以细胞为观察对象的观察对比实验，于2004—10／2005—02在暨南大学医学院生化教研室组织工程实验室完成。材料：选用12只新西兰白兔用于分离软骨细胞，碱性成纤维细胞生长因子由英国PeproTech公司生产。方法：分离并在低血清条件下培养兔生长板软骨细胞。根据实验需要加入0，1，2．5，5，10，25，50及100μg／L8个剂量的碱性成纤维细胞生长因子，进行各项指标观察。主要观察指标：应用改良四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖倍数；应用羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量：应用酶动力学方法测定碱性磷酸酶活性。结果：①碱性成纤维细胞生长因子剂量在5～100μg／L范围内可以促进软骨细胞增殖，并以25μg／L时刺激效果最为显著。②当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于25μg／L时，软骨细胞的胶原合成被抑制。③当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于1ug／L时，软骨细胞的碱性磷酸酶活性被抑制。结论：碱性成纤维细胞生长因子可以刺激生长板软骨细胞增殖，并在剂量高于25μg／L时抑制生长板软骨细胞的分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对人前脂肪细胞增殖和分化的影响

背景:以前的观点认为碱性成纤维细胞生长因子通过促进移植脂肪内的血管再生来提高脂肪的存活率,但其对脂肪细胞的影响没有明确的定论.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对人前脂肪细胞增殖和诱导分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外培养,对比观察,于2006-03/2007-12在武警医学院完成.材料:获取腹部吸脂术患者的脂肪组织标本10例,男1例,女9例,年龄21～45岁.方法:通过分离、培养和自然纯化过程,获取人前脂肪细胞.实验随机分为碱性成纤维细胞生长因子组和对照组,对照组细胞单纯应用DMEM培养基进行培养传代,碱性成纤维细胞生长因子组使用稀释质量浓度为100 ng/L的碱性成纤维细胞生长因子DMEM培养基对细胞生长进行干预.主要观察指标:①倒置相差显微镜观察培养后0,3,6,9,12,15 d细胞形态,并进行细胞计数,测定细胞生长曲线.②应用油红O染色,观察细胞内脂肪聚集情况,酶联免疫检测仪上测定吸光度值.结果:接种后第1～15天,可见梭形的前脂肪细胞分裂增殖,局部融合成细胞单层,部分细胞分化,细胞内脂滴聚集增多.已有细胞变为单泡细胞,接近发育成熟.碱性成纤维细胞生长因子组和对照组细胞形态无明显差异,但碱性成纤维细胞生长因子组细胞数比对照组细胞数多44%.油红O染色后人前脂肪细胞内逐渐出现脂滴,呈暗红色,在培养后15 d细胞内脂滴浓度达到顶峰.碱性成纤维细胞生长因子组吸光度值比对照组增加300%,差异具有显著性意义(P＜0.05).结论:碱性成纤维细胞生长因子可以促进人前脂肪细胞的增殖及向脂肪细胞分化.     

碱性成纤维细胞生长因子与表皮生长因子对神经干细胞增殖与分化的影响

目的:如何促进神经干细胞的增殖并诱导其向目的细胞类型分化是神经科学界研究的热点。本文就碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子在神经干细胞增殖、分化中的调节作用进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1998-01/2006-03期间的相关文章,检索词为“bFGF,EGF,nerve stem cells”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库2000-01/2006-03期间的相关文章,检索词为“碱性成纤维细胞生长因子,表皮生长因子,神经干细胞”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与碱性成纤维细胞生长因子/表皮生长因子在神经干细胞增殖、分化中的调节作用研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到78篇相关文献,32篇文献符合纳入标准,排除的46篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的32篇文献中,8篇涉及神经干细胞的研究现状,10篇涉及碱性成纤维细胞生长因子对神经干细胞增殖、分化的作用及其机制,4篇涉及表皮生长因子对神经干细胞增殖、分化的作用及其机制,8篇涉及碱性成纤维细胞生长因子与表皮生长因子合用对神经干细胞增值、分化的影响,5篇涉及碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对神经干细胞作用的比较。资料综合:①神经干细胞具有自我更新能力,在不同微环境中可增殖、分化为不同干细胞以及不同类型的成熟组织细胞,微环境中的多种细胞因子对其分化方向起着决定性的作用。②碱性成纤维细胞生长因子具有强大的促神经干细胞增殖作用,可激活中枢神经系统不同区域的神经元前体细胞潜在的再生能力,细胞增殖或分化呈碱性成纤维细胞生长因子浓度依赖性。③表皮生长因子既能促进神经干细胞的生长,也可促进其分化为神经元及神经胶质细胞。表皮生长因子促细胞增殖作用也呈浓度依赖性。④大多神经干细胞培养中都联合应用碱性成纤维细胞生长因子与表皮生长因子,从而提高神经干细胞增殖和分化的效率。⑤目前对表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的作用差异认识不统一。结论:碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子都具有较强的促进神经干细胞增殖和分化的作用,均属于神经干细胞培养中重要的神经促生长因子,其促细胞增殖和分化作用呈浓度依赖性。     

牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin影响嗅鞘细胞增殖的量效关系

背景: 生长因子参与调节嗅鞘细胞增殖、分化及代谢功能,因此有望通过应用其合理的序贯刺激形式,达到细胞数量地大量扩增.目的: 观察牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及剂量-效应关系.方法: 采用原代培养技术,从新生大鼠的嗅球分离培养嗅鞘细胞,并用差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法纯化培养嗅鞘细胞,添加牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin 3种促增殖因子及其组合.MTT法检测各组嗅鞘细胞生长的情况.根据NGFRp75抗体的免疫细胞化学染色统计嗅鞘细胞的纯度和计算嗅鞘细胞的增殖率.结果与结论: 在嗅鞘细胞原代培养和纯化后,添加牛垂体提取物具有促进嗅鞘细胞增殖的效应,但未见典型的剂量-效应关系;添加碱性成纤维细胞生长因子具有促进嗅鞘细胞增殖的效应,且呈现典型的剂量-效应关系;添加Forskolin并不具有促进嗅鞘细胞增殖的效应.说明合理应用不同质量浓度的碱性成纤维细胞生长因子与Forskolin进行联合刺激,能有效促进细胞的增殖.结果表明序贯的使用合适浓度的生长因子组合,将是有效促进嗅鞘细胞增殖的合理策略,有助于解决脊髓损伤治疗中种子细胞来源不足这一问题.