变活霉素诱导人红白血病细胞K—562向红系方向分化作用的研究

新蒽环类抗生素变活霉素由五种组分组成：变活霉素A、B、C、D和7－脱氧变活霉酮A。变活霉素各组分体外抑制人红白血病K－562细胞生长和诱导其分化活性各不相同，经联苯胺染色，变活霉素C诱导后K－562细胞血红蛋白表达百分率为86%。联苯胺染色阳性细胞最大值出现在第五或第六天；去除药物后，分化细胞为部分可逆性；诱导细胞失去在软琼脂上克隆生长的能力。与其它已知蒽环类抗生素比较，变活霉素C的促分化动力学变化与阿霉素、表阿霉素和柔红霉素相似，但变活霉素C较阿克拉霉素A促分化活性要强。构效关系研究表明，蒽环类抗生素的促分化活性与蒽环上C3、C11或C9或C10位的取代基以及C7位的取代糖有很大关系。     

一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０分别为７．６ｍｇｇ－１和９．１ｍｇｇ－１，在４ｍｇＬ－１时即明显抑制ＨＬ－６０细胞的对数生长；对３Ｈ－ＴｄＲ参入作用在培养４８ｈ后有一定抑制作用；透视电镜显示肿瘤细胞有损伤表现；细胞周期分析显示Ｇ２＋Ｍ期细胞增多；ＮＢＴ还原反应试验阴性。结论Ｆ－Ａ明显抑制ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞生长，抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示Ｍ期阻滞，研究初步提示Ｆ－Ａ不具细胞诱导分化作用。     

反义BCR-ABL寡核苷酸对化疗药物体外净化白血病细胞的增强效应

目的研究反义寡核苷酸对化疗药物阿霉素（ＡＤＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）及阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）体外抑制Ｋ５６２细胞克隆形成的影响，并探讨其可能的作用机制。方法体外甲基纤维素半固体培养观察各处理组Ｋ５６２细胞的克隆形成，流式细胞仪评价细胞的凋亡状况。结果实验浓度下单独应用ＡＤＭ、ＶＰ－１６或Ａｒａ－Ｃ，Ｋ５６２细胞集落存活率分别为４１．４１％、５０．２８％及５２．０８％，先用反义寡核苷酸ＡＳ－ｂ３ａ２处理，再用上述３种化疗药物，集落存活率则分别为１５．２０％、１９．７７％及２１．３２％（Ｐ＜０．０１）；单独应用ＡＳ－ｂ３ａ２，Ｋ５６２集落存活率为３９．３１％，流式细胞仪检测到ＡＳ－ｂ３ａ２处理后的Ｋ５６２凋亡细胞比例为２７．２％，联用ＡＤＭ后凋亡细胞比例为４６．２０％，而未处理组仅为７．４％。结论实验结果提示，反义ＢＣＲ－ＡＢＬ寡核苷酸ＡＳ－ｂ３ａ２能增强化疗药物ＡＤＭ、ＶＰ－１６或Ａｒａ－Ｃ对Ｋ５６２细胞克隆形成的抑制作用，其作用可能在于增强化疗药物体外诱导Ｋ５６２细胞的凋亡。     

α-Anordrin- induced apoptosis of leukemia K562 cells is not prevented by cicloheximide

研究蛋白质合成抑制剂环己米特（ｃｉｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ，Ｃｉｃ）对α双炔失碳酯（αａｎｏｒｄｒｉｎ，Ａｎｏ）诱导的白血病Ｋ５６２细胞凋亡的影响．方法：荧光显微镜观察形态学变化；流式细胞仪检测ＤＮＡ含量；琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ断裂．结果：Ａｎｏ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理Ｋ５６２细胞２４小时诱导细胞凋亡．Ｃｉｃ１μｍｏｌ·Ｌ－１共同处理不能减弱或延缓Ａｎｏ的这一作用．相反，Ｃｉｃ明显增强Ａｎｏ诱导的细胞凋亡．Ｃｉｃ１００μｍｏｌ·Ｌ－１本身诱导２５％Ｋ５６２细胞凋亡．结论：Ａｎｏ诱导的Ｋ５６２细胞凋亡不依赖于新的蛋白质合成．     

原发性肝癌患者对自体肝癌细胞株的细胞免疫学反应

应用体外培养的自体肝癌细胞ＨＣＣ－Ａ１作靶细胞，研究自体的ＮＫ细胞，ＬＡＫ细胞，ＣＴＬ细胞对体外自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果表明：ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞对自体ＨＣＣ－Ａ１细胞的敏感性与异种肿瘤细胞株Ｋ５６２，Ｒａｊｉ及异体肝癌细胞株Ｈ７７０４，Ｈ７７２１无明显差异，用体外ＭＬＴＣ诱导的初级ＣＴＬ作效应细胞，其细胞毒活性有显著性产加，但对自体ＨＣＣ－Ａ１与其他靶细胞间无特异性，经体外连志５轮ＭＬＴＣ     

MTX—右旋糖酐偶联物的合成及其对K562细胞的敏感性初探

用溴化氰活化右旋糖酐（Ｔ－７７）后,通过６－氨基己酸间隔桥,用水溶性碳二亚胺（ＥＤＣ）法将抗癌药甲胺喋呤（ＭＴＸ）与糖基相偶联,合成ＭＴＸ－右旋糖酐偶联物（ＭＴＸ－Ｄ）。细胞凋 灾光染色（ＡＦＳ）法检测该偶联物ＭＴＸ－Ｄ对人白血病Ｋ５６２细胞的敏感性,结果该偶联物对Ｋ５６２细胞凋亡有诱导作用和影响其生长周期的作用。     

用重组白细胞介素－2诱导LAK活性

用重组白细胞介素－２（ｒＩＬ－２）诱导了小鼠脾淋巴细胞和人外周血淋巴细胞的ＬＡＫ活性。结果表明ｒＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞对ＮＫ敏感的肿瘤细胞（Ｋ５６２）和不敏感的肿瘤细胞（Ｐ８１５、Ｒａｊｉ）均有显著的杀伤活性，而且呈剂量依赖关系。ＬＡＫ细胞经过长期培养可大量扩增，并保持其高水平的杀伤活性。     

放线菌素D不能抑制α-双炔失碳酯诱导的白血病K562细胞凋亡

目的：研究放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）对α－双炔失碳酯（α－ａｎｏｒｄｒｉｎ，ＡＮＯ）诱导的人白血病Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用光学显微镜观察细胞形态学变化；用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测ＤＮＡ含量和ＤＮＡ断裂。结果：ＡＮＯ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理人白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ引起大约１０％Ｋ５６２细胞产生凋亡。同时加入ＲＮＡ合成抑制剂ＡｃｔＤ０．００５μｍｏｌ·Ｌ－１不能抑制ＡＮＯ诱导的凋亡，相反地，ＡｃｔＤ加强ＡＮＯ的这一作用，使凋亡细胞从１０％上升到２０％。ＡｃｔＤ０．５μｍｏｌ·Ｌ－１本身可诱导约３２％的Ｋ５６２细胞凋亡。Ｓ期细胞对ＡＮＯ诱导的凋亡较敏感，而ＡｃｔＤ则较易诱导Ｓ期和Ｇ２－Ｍ期细胞凋亡。结论：ＡＮＯ诱导的Ｋ５６２细胞凋亡不依赖于新的ＲＮＡ合成。     

LDL—ACM复合物对白血病细胞株K562的抑制效应

以低密度脂蛋白（ＬＤＬ）为化疗药物阿克拉霉素（ＡＣＭ）的载体，用游离ＡＣＭ为对照，体外观察ＬＤＬ－ＡＣＭ复合物对慢性急变细胞株Ｋ５６２的细胞毒作用及影响因素。结果显示：１．Ｋ５６２细胞对ＬＤＬ－ＡＣＭ复合物在开始３０ｍｉｎ摄取较快，以后速度逐渐减慢；２；细胞对复合物的摄取较游离ＡＣＭ明显增多，３。过量的天然ＬＤＬ、肝素及低温均可使细胞对复合物的摄取明显减少，而过量ＨＤＬ则无影响，去脂蛋白血清予刺激     

α－双炔失碳酯诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究α双炔失碳酯（Ａｎｏ）的抗肿瘤作用．方法：形态学研究分别应用光学显微镜和电子显微镜．细胞膜完整性检测用台盼蓝排除法．用流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂．结果：Ａｎｏ２５－５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理Ｋ５６２细胞４８ｈ，细胞生长被明显抑制，５０μｍｏｌ·Ｌ－１时抑制率达６７％．细胞主要阻滞在Ｇ１期．处理后的细胞染色质凝缩，核断裂，体积缩小，呈典型的凋亡改变．Ｋ５６２细胞经Ａｎｏ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理２４－４８ｈ后，提取细胞ＤＮＡ进行电泳，呈现典型的“ｌａｄｄｅｒ”带型．流式细胞仪检测约有７０％细胞发生凋亡，Ｓ期细胞比较敏感．此时，虽然发生广泛的ＤＮＡ断裂，但细胞膜仍然完整，排除台盼蓝．Ａｎｏ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理Ｋ５６２细胞８ｈ即能诱导部分细胞发生凋亡．结论：Ａｎｏ能诱导Ｋ５６２细胞凋亡．     

新蒽环类抗生素变活霉素小组分的分离和结构测定

从无活性链霉菌1254经诱变所获变株113的发酵液中,除变活霉素A外,还分离得到四种小组分,变活霉素B、C、D及7—脱氧变活霉酮A。基于光谱及质谱证据,它们的结构阐明如式(1)所示。它们均对某些革兰氏阳性菌有抑制作用,其中变活霉素C还对小鼠红细胞白血病的生长有诱导分化和抑制作用。 通过变活霉素B、C、D的CD谱与柔红霉素,柔红霉酮、变活霉索A及变活霉酮A_2的CD谱比较以及NOE差谱的研究确定变活霉素B、C、D的“A”环与变活霉素A的“A”环立体化学相同,亦为7S、9R。“A”环呈半椅式构象,C_9在蒽醌环平面上方。     

Mutactimycin PR, a new anthracycline antibiotic from Saccharothrix sp. SA 103. II. Physico-chemical properties and structure elucidation

A new antibiotic termed mutactimycin PR (1) was isolated along with the known mutactimycin C (2) from the fermentation broth of Saccharothrix sp. SA 103. The two compounds belong to the anthracycline group. The structure of these antibiotics was elucidated with the aid of NMR and mass spectrometric investigations. The novel compound mutactimycin PR was characterized as 5,12 Naphtacenedione, 7-[(6-deoxy-3-O-methyl-alpha-L-mannopyranosyl)oxy]-4-[(6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)oxy]-7,8,9,10-tetrahydro-6,9,11-trihydroxy-9 methyl.     

A new inhibitor of protein kinase C, RK-1409 (7-oxostaurosporine). I. Taxonomy and biological activity.

A novel inhibitor of protein kinase C was found in the fermentation of a soil actinomycete, strain RK-1409. According to the taxonomic studies, the producing strain was designated as Streptomyces platensis subsp. malvinus RK-1409. The protein kinase C inhibitor, RK-1409 (7-oxostaurosporine) inhibited the morphological change of a human chronic erythroleukemia cell, K-562, induced by phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu) at the concentration of 10 ng/ml. The concentration of 3 ng/ml inhibited the activity of protein kinase C in vitro. RK-1409 inhibited the cell cycle progression at G2 phase of K-562 cells.     

RPL15在K562细胞向红系分化过程中的功能和机制研究

目的　研究RPL15基因在K562细胞向红系诱导分化过程中的表达变化,并确定其对珠蛋白表达及红系分化的影响。方法　用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,采用实时荧光定量PCR（qPCR）及Western blot法检测RPL15在K562红系分化过程中的表达情况。利用RNA干扰（RNAi）技术抑制K562细胞中RPL15的表达,进而通过四甲基联苯胺染色、qPCR及流式细胞技术检测K562细胞中血红蛋白、红系分化相关基因以及CD235a和CD71表达的变化。结果　在K562细胞向红系分化过程中,RPL15的mRNA及蛋白水平均呈先升高后下降趋势。与对照组相比,干扰RPL15表达后,向红系分化24、48和72 h的K562细胞血红蛋白染色阳性率均明显下降;向红系分化的K562细胞中α-、β-、ε-、γ-珠蛋白及红系分化相关基因GATA1和HSP70相对表达量均明显下调（均P＜0.05）;而抑癌基因P53的mRNA表达水平显著上调（P＜0.01）。同时CD235a+CD71+ K562细胞比例在RPL15干扰后显著降低（P＜0.01）。结论　抑制RPL15表达可抑制K562细胞向红系分化,提示RPL15正调控红系分化过程。同时P53相关通路、GATA1及HSP70可能参与了RPL15对红系分化的调控过程。     

氨基葡糖及其盐酸盐诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化

目的　研究氨基葡萄糖及其盐酸盐对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果。方法　利用hexamethylenebisac etamide (HMBA)、氨基葡萄糖及其盐酸盐 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察和流式细胞仪证实其分化方向。结果　氨基葡萄糖及其盐酸盐对K5 6 2细胞在 0 5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化并能使K5 6 2细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,与HMBA相比 ,氨基葡萄糖和盐酸盐在作用浓度和作用时间上都有明显优势。结论　氨基葡萄糖及其盐酸盐都可能成为新的高效、低毒的治疗髓系白血病的候选药物     

Mutactimycin PR, a new anthracycline antibiotic from Saccharothrix sp. SA 103. I. Taxonomy, fermentation, isolation and biological activities

In the course of screening for new antibacterial agents, a new isolate collected from a soil sample of an arid area in south Algeria, produced a red pigment which was shown an antagonistic action against a gram-positive bacterium Bacillus subtilis. The isolate was identified as Saccharothrix sp. and named SA 103. The red pigment, eluted by HPLC on reverse phase C18 column, contained two compounds of an anthracycline antibiotics group. The structure of the major product (2) was characterized as mutactimycin C, and PR (1) was a new member of this group, designated as mutactimycin PR. These compounds showed an antibiotic activity against certain gram-positive bacteria in vitro. This is the first report of mutactimycins production by the genus Saccharothrix.     

Schedule-dependent cytotoxicity of etoposide (VP-16) and cyclophosphamide in leukemia cell line K-562

In allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT) in patients with leukemia, the combination of VP-16 and cyclophosphamide (CY) is commonly used for the conditioning regimen. In the present study, we demonstrated schedule-dependent cytotoxicity of VP-16 and CY in K-562 cells. K-562 cells were pretreated with low concentrations (2.5 and 5?μg/mL) of 4-hydroperoxycyclophosphamide (40487S), which is a preactivated analog of CY. It was confirmed that these concentrations did not influence cell viability. Cells subsequently exposed to 0.5-100?μg/mL of VP-16 showed reduced the viability compared to that of control cells not treated with 40487S. In contrast, there was no change in the viability of K-562 cells pretreated with low concentrations (0.5 and 1?μg/mL) of VP-16. It was confirmed that these concentrations did not influence cell viability. Viability of subsequently exposed to 1-20?μg/mL was not different from that of control cells not treated with VP-16. VP-16 caused cell cycle arrest at G?/M phase. On the other hand, 40487S arrested the cell cycle at S phase. Thymidine-synchronized cells, VP-16 showed cell cycle specificity for cell killing from early-S to mid-S phase. On the other hand, 40487S showed cell cycle-independent cytotoxicity. Exposure of cells to VP-16 after 40487S induced a greater cytotoxic effect on K-562 cells. The findings may lead to improvements in clinical combination chemotherapy.     

丁酸钠和氯高铁血红素诱导K562细胞分化的信号转导机制

目的　探讨丁酸钠和氯高铁血红素 (hemin ,Hm)诱导K5 6 2细胞向红系分化的信号转导机制。方法　采用台盼蓝拒染法观察丁酸钠和Hemin对K5 6 2细胞生长曲线的影响 ;流式细胞仪进行细胞周期分析 ;联苯胺染色检测药物诱导K5 6 2细胞向红系分化作用。结果　丁酸钠和Hemin呈时间和剂量依赖方式诱导K5 6 2细胞向红系分化 ;ERK抑制剂PD980 5 9增加丁酸钠、降低Hemin诱导的联苯胺阳性率JNK抑制剂SP6 0 0 12 5未影响丁酸钠却降低Hemin的诱导分化作用。结论　在K5 6 2细胞向红系分化过程中 ,ERK正性调节Hemin、负性调节丁酸钠的诱导分化作用 ;同时Hemin而不是丁酸钠的诱导分化过程还需要JNK的活性