B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

 目的　了解B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。 方法　利用RT PCR方法扩增 13例初发未治B ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果　 13例B ALL病人分别表达 2～ 18个Vβ亚家族。 13例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞 ,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。Vβ2 1和Vβ2 3亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。结论　B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ谱系呈现优势利用的特点 ,并存在克隆性增殖的T细胞 ,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应 ;Vβ2 1和Vβ2 3亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显 ,可能与B ALL相关抗原刺激有关     

APL患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和增殖特点

目的:了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法:利用RT-PCR扩增9例APL患者和10例正常人外周血单个核细胞中29个TCRVα亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCRVα亚家族T细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例患者外周血T细胞所能检测到的Vα亚家族T细胞分别为1~9个亚家族,以Vα3和Vα19出现频率较高;克隆性增殖T细胞可在8例患者中检测到,以Vα3、Vα26和Vα27出现克隆性T细胞频率较高(3/8)。正常人外周血T细胞中表达绝大多数Vα亚家族,呈多克隆性增殖特点。结论:APL患者外周血Vα亚家族T细胞存在明显的倾斜性分布和克隆性增殖特点,后者可能是对APL细胞抗原的反应性增殖,是否具有特异性杀伤作用,有待进一步检测。     

CML相关TCRVα亚家族T细胞的克隆性分布特点

 目的 了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法 采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论 CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。     

AML-M6患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞限制性增殖情况

 引言多数肿瘤和白血病患者存在细胞免疫缺陷情况 ,通过T细胞受体基因分析各家族基因的表达情况 ,可以进一步明确患者外周血中所缺失的T细胞亚家族的情况 ,而通过T细胞克隆性分析 ,可以了解患者体内是否存在白血病抗原相关的克隆性增殖T细胞 ,从而为白血病特异性免疫治疗提供依据。1　材料与方法1.1　样本　收集经细胞形态学和组织化学按FAB诊断标准确诊的急性髓性白血病M 6型 (AML M 6 )病人 3例 (编号C1 C3) ,10例正常人作为对照。外周血单个核细胞的分离 ,RNA提取和cDNA合成均按常规方法进行。1.2　RT PCR和T细胞克隆性分析　按我们以往研究报道的方法进行操作[1] 。首先利用 2 4个Vβ引物和一Cβ引物分别进行 2 4个PCR反应 ,了解样本中各TCRVβ亚家族的表达情况 ,然后利用 5’端荧光素标记的Cβ fam引物标记PCR产物 ,并进一步经 6 %聚丙酰胺凝胶中电泳 ,经 377ADNA序列仪 (ABI ,PerkinElmer)的基因扫描 6 72分析软件分析产物的长度和荧光素强度 ,从而了解所扩增PCR产物的特点 ,而确定所属Vβ亚家族T细胞的克隆性[1] 。2　结果R...     

CML细胞和K562细胞诱导TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖和杀伤性的研究

目的：了解CML细胞和K562细胞体外诱导CML细胞特异性T细胞的TCRVβ亚家族利用、克隆性培殖和杀伤性情况。方法：采用混合淋巴细胞／白血病细胞培养法(MLTC)体外将CML细胞和K562细胞与脐血和成人外周血MNC混合培养和扩增，运用RT—PCR—基因扫描技术分析其TCRVβ亚家族的利用和克隆性特点，以及应用间接荧光单抗标记技术和LDH法分析诱导增殖的T细胞免疫表型和杀伤性。结果：CML细胞和K562细胞可以诱导出呈寡克隆或寡克隆趋势生长的Vβ亚家族T细胞，并具有识别和杀伤CML细胞的功能。结论：CML细胞和K562细胞可在体外诱导出异体CML细胞特异性CTL，该CTL可能为优势表达的Vβ亚家族克隆性T细胞。     

APL患者外周血TCR VβT细胞克隆性增生特点

目的了解急性早幼粒细胞白血病（APL）患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法利用RT—PCR和基因扫描技术分析21例APL患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3长度,10例正常人作为对照。结果21例患者外周血T细胞所表达的Vβ亚家族数量差别很大,2～21个Vβ家族不等,其中,以Vβ2（71．4％）,Vβ15（61．9％）和Vβ5（57．1％）出现频率较高,而Vβ10,和Vβ14出现频率最低（14．3％）。除2例外,患者外周血均可检测到某些Vβ亚家族的克隆性T细胞,主要为Vβ12,Vβ21和Vβ23克隆性T细胞。结论APL患者外周血Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布特点,并存在克隆性增生的T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性免疫反应。     

非小细胞肺癌患者T细胞受体Vβ表达和克隆性研究

目的　了解非小细胞肺癌 (non small celllungcancer ,NSCLC)患者外周血淋巴细胞 (PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)及非癌肺组织淋巴细胞中T细胞受体 (TCR)Vβ优势表达情况及优势亚家族的克隆性分布。方法　收集 2 4例NSCLC患者外周血、肺癌组织和非癌肺组织 ,提取RNA ,经反转录多聚酶链反应 (RT PCR) ,扩增TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经基因扫描分析 ,以 10例正常人外周血结果作对照 ,比较不同来源T细胞TCRVβ亚家族的表达情况。 结果　NSCLC患者仅存在部分亚家族的T细胞 ,其中TCRVβ5的表达率在TIL中 (6/18,33.3% )明显高于PBL(1/2 4,4.2 % )和非癌肺组织(0 /12 ) ,P值均 <0 .0 5 ,而且 6例表达Vβ5的TIL中 2例为寡克隆增殖 ,4例为多克隆增殖。 结论　NSCLC患者TCRVβ 2 4个亚家族呈倾斜性分布和克隆性增殖 ,提示NSCLC的TIL中可能存在肿瘤相关抗原 (TAA)刺激引起的特异性T细胞免疫反应     

AML-M_5细胞诱导TCR Vβ T细胞克隆性增殖研究

目的　了解急性髓细胞白血病 (AML)M5亚型细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法　采用混合淋巴细胞 /肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,用AML M5细胞体外诱导供者外周血和脐血的T细胞增殖 ,用RT PCR扩增经MLTC前后获得细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。并经基因扫描分析确定M5细胞诱导的T细胞克隆性特点。结果　脐血和供者外周血分别表达 13和 5个TCRVβ亚家族T细胞 ,经MLTC培养初期 ,则表达全部 2 4个Vβ亚家族 ,随着诱导时间的增加 ,诱导T细胞所表达的Vβ亚家族逐渐减少。基因扫描显示AML M5细胞诱导后的T细胞出现寡克隆和双克隆增殖改变 ,主要为Vβ2 1的克隆性增殖T细胞。结论　AML M5细胞可诱导TCRVβT细胞克隆性增殖 ,这可能是对AML M5细胞相关抗原的特异细胞免疫应答的结果。     

外周T细胞淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析

 目的　分析外周T细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法　应用RT-PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物测序分析其CDR3序列。结果　4例淋巴瘤患者TCR表达受到明显抑制,仅表达1～4个Vβ亚家族。所有患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增生T细胞,增生形式包括单克隆、双克隆及寡克隆增生趋势。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论　外周T细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生,其TCR Vβ呈限制性取用,不同克隆T细胞具有不同的CDR3谱型。     

AML-M_5细胞诱导TCR Vβ T细胞克隆性增殖研究

目的　了解急性髓细胞白血病 (AML)M5亚型细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法　采用混合淋巴细胞 /肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,用AML M5细胞体外诱导供者外周血和脐血的T细胞增殖 ,用RT PCR扩增经MLTC前后获得细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。并经基因扫描分析确定M5细胞诱导的T细胞克隆性特点。结果　脐血和供者外周血分别表达 13和 5个TCRVβ亚家族T细胞 ,经MLTC培养初期 ,则表达全部 2 4个Vβ亚家族 ,随着诱导时间的增加 ,诱导T细胞所表达的Vβ亚家族逐渐减少。基因扫描显示AML M5细胞诱导后的T细胞出现寡克隆和双克隆增殖改变 ,主要为Vβ2 1的克隆性增殖T细胞。结论　AML M5细胞可诱导TCRVβT细胞克隆性增殖 ,这可能是对AML M5细胞相关抗原的特异细胞免疫应答的结果。     

ANALYSIS OF T CELL CLONALITY BY CDR3 SIZE OF T-CELL ANTIGEN RECEPTOR Vβ REPERTOIRE IN HCL AND c-ALL

DuringTcelldevelopment,theVDandJregionofTCRcompletelyrearrangedt0comp0seafuncti0nalTCRgene.Inadditi0n,inthisprocessthenucleotides(Nregion)wererandomlyaddedbetweenV-DandD-Jandcomp0seahighvariableVNDNJregion,whichiscalledcomplementaritydeterminingregi0n3(CDR3).TheCDR3lengthandsequencewouldbedifferent,iftheTCRrearrangementoccursatdifferentclonalTcells.Thus,thedetectionofCDR3lengthandsequencecouldbeaspecificmethodforidentificationofTcellclonality.IthasbeenidentifiedthatTCR6geneconta…     

Analysis of the Clonal Expansion of TCR VβT Cells in Patients

Objective To investigate the clonal expansion of T cell receptor(TCR)Vβ subfamily T cells which were considered as GVL effective cells after donor lymphocytes infusion(DLI)in patients with relapse chronic myelogenous leukemia(CML)after allogeneic bone marrow transplantation(allo-BMT).Methods The CDR3 of TCR Vβ24 subfamily genes were amplified in samples of peripheral blood mononuclear cells at different time points before and after DLI,which were drawn from 2 cases of relapse CML treated by allo-BMT,to observe the usage of TCR Vβrepertoire.The PCR products were further labeled with fluorescent and analyzed by genescan technique for identification of the CDR3 size,to evaluate the clonality of the detectable TCR VβT cells.Results Only 4-11 VβT subfamily T cells could be identified in CML cases before DLI,and 12-21 Vβ subfamily T cells could be deected in samples from CML which display remission after DLI.Genescan analysis showed that new clonal expansion TCR Vβ subfamily T cells could be found in samples after DLI.Conclusion The skew distribution of TCR Vβ subfamily T cells could be found on patients with relapse CML after allo-BMT,and this skewing pattern may stage to stage to normal pattern during the complete remission.The GVL effect may exert through some clonal expansion TCR Vβ subfamily T cells during the treatment of DLI in relapse CML.     

APL患者外周血TCR V α亚家族T细胞分布和增殖特点

Objective： To investigate the distribution and clonality of TCR Va subfamily T cells in patients with acute promyelocytic leukemia （APL）. Methods： The complementary determining region 3 （CDR3） of TCR Va 29 subfamily genes in peripheral blood mononuclear cells from 9 APL patients were amplified using RT-PCR. The positive products were further analyzed to identity the clonality of T cells by GeneScan technique. Results： One to seven of TCR Va subfamilies could be detected in peripheral blood T cells from 9 cases with APL, the frequent expression of Va subfamilies predominated in Vα3 and Va19. Clonal expanded T cells could be detected in 8 APL patients, which predominant used Va3, Va26 or Va27 （3 out of 8 cases）. However, almost all Va subfamilies with polyclonal expansion could be detected in peripheral blood T cells from 10 cases of normal individuals. Conclusion： Remarkable skew distribution and clonal expansion of TCR Va subfamilies T cells is the common feature in patients with APL. Clonal expansion of T cells might reflect a response in host to APL cell associated antigen, whether these expanded T cells have the ability for specific cytotoxicity against APL cells, remains an open question.     

乳腺癌淋巴结微转移患者克隆性T细胞TCRα链CDR3谱型分析

目的 分析乳腺癌微转移淋巴结T细胞克隆性增生及TCR α链谱型偏移情况,了解抗肿瘤T细胞克隆的分子特征。方法 利用RT-PCR扩增10例乳腺癌微转移淋巴结T细胞32个TCR可变区（AV）亚家族的基因,基因扫描检测T细胞克隆性及TCR AV亚家族取用情况,对单克隆家族行PCR扩增TCR α链全长序列,构建重组质粒后测序,分析互补决定区（CDR3）序列。结果 乳腺癌淋巴结微转移患者T细胞呈单、寡克隆、寡克隆趋势和多克隆增生,不同患者表达1～4个TCR AV亚家族。克隆性T细胞的CDR3氨基酸序列不同,但是病例4和病例8含有相同的CDR3氨基酸基序：AM和DDKII。结论 乳腺癌TCR AV基因表达具有多样性特点,TCR AV家族的取用可能与乳腺癌肿瘤抗原的多样性和不同个体的免疫应答反应有关。相同CDR3氨基酸基序的发现可能对乳腺癌的T细胞介导免疫治疗提供帮助。     

PML-RARα多肽诱导脐血TCR Vβ T细胞增殖研究

 目的 了解PMLRARd多肽诱导脐血T细胞的T细胞受体（TCR）V8谱系表达和克隆性情况。方法 以不同浓度（16．7μg／mL，33．3μg／mL或50μg／mL）的PML-RARα多肽联合IL-2、抗CD3单抗以及抗CD28单抗诱导脐血T细胞增殖，利用RT-PCR-基因扫描技术分析诱导后第3、6、9、12天后的脐血TCRV8亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果 限制性表达和克隆性增殖TCR Vβ亚家族T细胞可见于PML-RARα多肽诱导后脐血T细胞。结论 PML-RARα多肽可在体外诱导脐血T细胞呈克隆性增殖，此优势增殖的克隆性T细胞可能具有特异性细胞毒作用。     

B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析

 目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞中TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在情况,从而了解胸腺近期输出各TCRVβ亚家族naveT细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ~Dβ1sjTRECs,10例正常人作为对照。结果TCRVβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到,与正常人比较,B-ALL病人的Vβ24~Dβ1sjTRECs出现频率比正常人高,且有统计学意义(80%∶30%,P=0.0285),另有18个家族的Vβ~Dβ1sjTRECs比正常人低,其中在Vβ1(30%,P=0.0285)、Vβ12(20%,P=0.0285)、Vβ13(40%,P=0.0043)、Vβ15(20%,P=0.0022)和Vβ18(20%,P=0.0089)5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族naveT细胞功能低于正常人