S311抗癌菌苗对腹水癌小鼠单核巨噬细胞抗腹水癌作用的影响

目的：探讨Ｓ３１１抗癌菌苗能否增强腹水癌小鼠腹腔巨噬细胞和其他几种单核巨噬细胞的得水癌作用，以及Ｓ３１１抗癌菌苗与ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２在抗肿瘤增殖上是否具有协同作用，为Ｓ３１１抗癌菌苗免疫治疗胸腹水癌提供依据。方法：对腹水癌小康习腹腔内注射Ｓ３１１抗癌菌苗、Ｓ３１１抗癌菌苗和细胞因子，连续３周，分别珩第１、２、３周从小鼠体内分离腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、肺巨噬细胞、血液单核细胞，并分别与鼠腹水癌细     

重组鼠IFN-γ腺病毒诱发细胞因子释放综合征小鼠模型的建立和观察

目的：通过向C57Bl/6J小鼠腹腔注射IFN-γ腺病毒（Ad-mIFN-γ）建立细胞因子释放综合征（CRS）的动物模型。方法：构建Ad-mIFN-γ及对照Ad-lacZ腺病毒载体,分别以MOI=100体外转染小鼠腹腔巨噬细胞,流式细胞术检测其对细胞mIFN-γ分泌的影响。将40只雌性C57Bl/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、载体对照组、病毒低、中、高剂量组（每组8只）,分别向各组小鼠腹腔注射PBS(200μL)、Ad-lacZ(2×107 PFU/只)、Ad-mIFN-γ(5×106PFU/只)、Ad-mIFN-γ(1.5×107 PFU/只)和Ad-mIFN-γ(2×107 PFU/只)。每日观测小鼠的体质量及生存情况;第3天时采用流式细胞术检测小鼠外周血和脾内单核细胞（CD11b+）、巨噬细胞（CD11b+/CD86+）比例,免疫荧光染色法检测脾内CD11b+的单核细胞比例;第9天时采用流式细胞术检测小鼠血清中细胞因子的分泌水平;第14天,采用颈椎脱臼法处死小鼠,H-E染色法观察小鼠肝、脾、肺和肾的病理和组织学变化。结果：Ad-mIFN-γ体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,在第3天检...     

强化移植排斥免疫抗肿瘤作用的实验研究

 抑制移植排斥免疫是为了使移植器官能够在受者体内长期存活，而本文试图用强化移植排斥免疫的方法来达到抗肿瘤的目的。结果表明：在实验1中用人k562细胞强化免疫的小鼠，其存活期为45.4±17.6天，显著长于对照组的22.0±10.1天和BCG组的25.0±14.0天，在实验2中用人Raji细胞或异种肿瘤RA759肺癌细胞、大鼠脾细胞加BCG强化免疫的昆明系小鼠，在十天后接种H22肝癌细胞，其存活期分别为：40.0±7.6天，41.9±5.4天，39.3±7.5天及45.0天，均显著长于对照组的25.3±6.6天（P＜0.04），尤以大鼠脾细胞加BCG强化免疫的昆明系小鼠预防肿瘤的效果为好，在45天内无1只死亡，且有5/10的小鼠出现肿瘤消退或局限的现象。在接种H22肝癌细胞后第45天处死荷瘤鼠，取肝、脾及胸腺称重，各组间肝、脾及胸腺重量无统计学差别（P＞0.05）。提示强化移植排斥免疫不影响荷瘤鼠的主要免疫器官。     

加温联合冬凌草甲素抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长及其机制探讨

目的:探讨加温联合冬凌草甲素是否具有协同抗肝癌作用,以及二者最佳联合作用模式及其可能的相关作用机制,为临床热化疗治疗肝癌提供实验依据。方法:(1)MTT检测加温与冬凌草甲素合用时对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制作用,并且评判二者联用是否有协同作用;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)免疫酶联吸附法定量检测肝癌细胞培养液中AFP;(4)全自动生化仪检测培养液中ALB、ALK。结果:加温与冬凌草甲素单用及合用时均能明显抑制肝癌细胞生长,引起肝癌细胞凋亡,明显降低细胞培养液中AFP值;二者联合作用强度大于单独应用组,并且不同的联合模式产生不同的作用(P<0.05)。结论:(1)加温与冬凌草甲素联合能产生明显协同抑制肝癌细胞生长的作用,作用大小与联合的模式有关。(2)二者抑制肝癌细胞生长的机制与细胞凋亡密切相关。(3)在肝癌的临床治疗中二者联合运用可能产生明显的抑制作用。     

化疗药物体内外对免疫活性细胞的影响

目的：通过化疗对机体免疫细胞影响的研究。探讨肿瘤化疗后衔接生物治疗的最佳时效。方法：采用细胞培养技术，观察化疗药物对培养的肿瘤细胞，小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的毒性作用；同时还观察化疗药物作用小鼠体内不同时间后，其对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞代谢和激活功能的影响；运用细胞计数的方法，观察化疗对小鼠腹腔巨噬细胞时间后，其小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞代谢和激活功能的影响；运用细胞计数的方法，观察化疗对小鼠腹腔巨噬细胞和外周血免疫细胞的动力学影响；另外对经化疗药物注射2d后的小鼠进行H22肝癌细胞接种，14d后解剖小鼠观察肿瘤生长。结果：化疗药物体外对免疫细胞有很强毒性作用。体外使免疫细胞代谢降低。活化受阻，并使免疫细胞动力学发生改变，在化疗后第3天免疫细胞数降至最低，约10d左右恢复正常；化疗药物注射小鼠体内2d后，再接种瘤细胞，肿瘤生长明显加快。结论：化疗既降低机体免疫细胞数量，又抑制其功能，且在其杀瘤作用消失后还具有间接促瘤生长的作用。因此，化疗后立即实施以肿瘤免疫治疗为主的生物治疗是不恰当的，在化疗后间隔较长时间再给予生物治疗也是不恰当的，生物治疗应选择在化疗药物作用消失后，免疫细胞数降至最低或开始恢复时实施，方能取得较好的效果。     

骨肉瘤-巨噬细胞共培养体系中单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的　研究骨肉瘤细胞及肿瘤浸润巨噬细胞中单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的表达情况。方法　建立骨肉瘤细胞与巨噬细胞的transwell体外共培养模型 ,以模拟体内骨肉瘤组织的微环境 ,应用RT PCR法及ELISA法检测 2种细胞中MCP 1表达情况。结果　共培养前 2种细胞中均表达MCP 1,共培养后骨肉瘤细胞中MCP 1的表达水平变化不明显 ,而巨噬细胞中其水平则显著变化 (P <0 .0 1)。结论　在骨肉瘤组织中浸润的巨噬细胞可能是MCP 1的重要来源之一 ,可通过正反馈的机制使更多单核细胞向肿瘤局部组织浸润 ,从而对肿瘤的生物学行为发生影响。     

瘤内/瘤周注射巨噬细胞集落刺激因子或(和)干扰素γ基因转染的巨噬细胞对肿瘤的治疗作用

目的观察巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）和干扰素γ（ＩＦＮγ）基因单独或联合转染的巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍ）对局部黑色素瘤的治疗效果及相关免疫机理。方法荷瘤小鼠经基因转染的巨噬细胞治疗后，观察其长期存活期并检测其体内抗肿瘤免疫功能。用４小时５１Ｃｒ释放法检测荷瘤小鼠脾细胞自然杀伤细胞（ＮＫ）、细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性，间接ＭＴＴ法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤活性，常规方法检测脾细胞诱导上清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素２（ＩＬ２）、γ干扰素（ＩＦＮγ）活性，局部肿瘤经治疗后行常规病理分析。结果经ＩＦＮγ基因及联合基因转染的巨噬细胞治疗后的荷瘤小鼠有２５％能长期存活，体外诱导的ＣＴＬ和小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性显著增强，脾细胞经诱导产生的细胞因子有不同程度的增加，与对照组相比差别显著。常规病理显示，ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ联合基因转染的巨噬细胞治疗的小鼠肿瘤局部有大量的淋巴细胞浸润。结论ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ基因转染的巨噬细胞瘤内瘤周注射对肿瘤有较好的治疗效果，其机制除了与巨噬细胞在局部直接接触杀伤瘤细胞有关外，宿主抗肿瘤免疫功能的增强亦起了重要的作用     

MiR-130b调控巨噬细胞极化的分子机制研究

目的:研究miR-130b对巨噬细胞极化的调控作用及机制。方法:选用人白血病单核THP-1细胞,通过PMA使其诱导为Mφ巨噬细胞,然后加入LPS诱导为M1或加入IL-4诱导为M2巨噬细胞;流式细胞仪检测标记物比例;应用Real-time PCR和Western blot方法检测特异性标志物和目的蛋白的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测特异性分泌因子的表达水平。结果:与Mφ巨噬细胞比较,LPS诱导的巨噬细胞中CD86高表达,TNFα和IL-1β表达和分泌水平均增多,符合M1巨噬细胞特征;IL-4诱导的巨噬细胞中CD206的阳性表达率升高,CCL22、CCL17表达和分泌水平均增多,符合M2巨噬细胞特征;M1细胞中miR-130b表达明显高于M2细胞(P<0.05);miR-130b过表达后的M2细胞中,CCL22 mRNA和蛋白表达减少,IL-1βmRNA和蛋白表达增多,PPAR-γ的蛋白表达降低。结论:MiR-130b可能通过靶向抑制PPAR-γ表达调节巨噬细胞极化。     

HMGB1对U937细胞VEGF-C／D表达影响的研究

目的：探讨HMGB1对单核巨噬细胞U937VEGF-C／D表达的影响及其在淋巴管生成中的作用。方法：以HMGB1作为干预因素，剂量效应组分别用含0、0．1、1、10、20、50和100mg／LHMGB1的培养液与单核巨噬细胞U937共培养8h，以RT-PCR检测U937中VEGF-CmRNA表达的变化。时间效应组以含HMGB1的培养液分别培养U937细胞0、2、4、8、12和24h，以RT-PCR和Westernblot检测细胞中VEGF-C／DmRNA和蛋白的变化。结果：HMGB1可有效诱导U937细胞中VEGF-C／D的表达。U937中VEGF-CmRNA的表达与HMGB1剂量成量效关系。对VEGF-C／D的诱导作用分别在12和4h时达到峰值。结论：HMGB1可诱导单核巨噬细胞U937中淋巴管生成因子VEGF-C／D的表达。     

转4-1BBL 基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究

 目的 研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM-CSF）的能力。方法 以丝裂霉素C（MMC）处理高表达转m4-1 BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞，制成肿瘤细胞瘤苗（TCV），体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后，观察其对脾细胞产生细胞因子（IL-2、TNF-α和GM—CSF）的影响。结果 TCV-4-1 BBL刺激后，脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高。结论 转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF。     

TSA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及其机制

目的:研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对肝癌细胞SMMC-7721的作用及其机理。方法:利用细胞计数,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,Tunel试验研究TSA对肝癌细胞SMMC-7721的作用;利用western研究TSA对肝癌细胞蛋白表达的影响。结果:TSA可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,并可诱导细胞凋亡。可阻滞肝癌细胞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期。可增加p53,p21,bax等基因的表达,降低BCL-2的表达。结论:去乙酰化转移酶抑制剂TSA可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长并诱导其凋亡,其主要通过调控一些肿瘤相关基因的表达起作用。     

In vitro anti-hepatoma effects of monocytes and kupffer cells isolated from hepatoma patients after treatment with biological immune stimulants

Monocytes (MC), lymphocytes (LC) and Kupffer cells (KC) were isolated respectively from blood and surgical liver samples of patients suffering from hepatocellular carcinoma (HCC). 13 patients were given BCG, mixed bacterium vaccine (MBV) and human white blood cell interferon (IFN), the other 3 patients were not treated with any biological immune stimulants (BIS) and served as controls. The cytostatic and cytotoxic effects of MC and KC on human hepatoma SMMC-7721 (TC) were assayedin vitro and the numbers of T total (Tt), T helper (Th) and T suppressor (Ts) cells were counted using CD monoclonal antibody immunofluorescence. The results were as follows: (1) On the 7th day after the first administration of BIS, the cytostatic and cytotoxic effects of MC on TC showed obvious increase over pre-administration. The activity of BIS was 1–5 times as high as that in the controls. (2) After 3 administrations, the cytostatic effect of MC on TC increased to the normal level (84%), while the controls remained as before (45%). (3) On the 7th day after first administration, cytostatic and cytotoxic effects of KC on TC were 0.5 and 1 times higher respectively than those of the controls. (4) The numbers of Tt and Th of patients given BIS increased continuously; on the contrary Ts decreased in number. These results indicate that combined use of BCG, MBV and IFN can actively enhance the immune anti-hepatoma function of patients suffering from HCC.     

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组（NC组）和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。     

氯化镉和顺铂联合对人肝癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的： 研究氯化镉和顺铂联合对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。 材料与方法： 采用MTT法测定不同浓度氯化镉和顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用;应用两药相互作用指数进行联合作用分析。 结果： 0.56、1.12、2.25 μg/ml的氯化镉联合0.25、0.5、1.0 μg/ml的顺铂可协同抑制SMMC-7721增殖,且随着作用时间延长,协同抑制作用增强(P<0.05或 P<0.01)。 结论： 氯化镉与顺铂联合应用可以协同抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤SP_2/O细胞与用人甲胎蛋白抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,经多次筛选,获得7株分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其培养液上清和腹水效价分别为10~(-2)和10~(-6～9-)。杂交瘤腹水经硫酸铵盐析,DEAE纤维素层析,或免疫吸附亲和层析法纯化,每ml腹水单克隆抗体的产量为1～2mg。用ELISA,免疫双扩散、聚丙烯酰胺凝胶电泳、间接免疫荧光法鉴定了单克隆抗体的特异性、亲和力、稳定性及IgG亚类。     

miR－338对人肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的：观察过表达miR－338对人肝癌细胞SMMC－7721增殖及迁移能力的影响。方法：化学合成miR－338寡聚核苷酸,并行测序确认。利用pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR 质粒构建miR－338真核表达载体。pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒载体瞬时转染SMMC－7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR－338的mRNA表达水平。高表达miR－338后,CCK－8法和划痕实验分别检测SMMC－7721细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果：设计的miR－338序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100％。pcD-NA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒瞬转后人肝癌SMMC－7721细胞 miR －338的表达量与对照组相比显著增加（P＜0．05）。miR－338过表达SMMC－7721细胞的增殖能力与各对照组相比均有显著下降（P＜0．05）;miR－338过表达细胞迁移速度降低。结论：上调的miR－338可抑制人肝癌SMMC－7721细胞的增殖及迁移能力。     

人剪切修复基因XPD转染对人肝癌细胞SMMC-7721的生物学影响

目的 将人剪切修复基因XPD稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞,观察转染后细胞内野生型p53、XPD、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)7、c-myc等基因表达的变化以及对细胞生长的影响,探讨野生型XPD基因与p53、CDK7、c-myc的相互作用及细胞凋亡机制.方法 将表达绿色荧光蛋白并含有人类全长野生型XPD的pEGFP-N2-XPD重组体质粒稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞中,选择培养基筛选单克隆稳定转染重组质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD)和稳定转染空载质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC.7721-pEGFP-N2),并将人SMMC-7721肝癌细胞作为空白对照,利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem blot法检测转染XPD基因后细胞内XPD、p53、CDK7、c-myc的表达量变化,并用细胞增殖力检测(MTT)法及流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡和细胞周期变化.结果 ①免疫荧光显微镜下,SMMC.7721.pEGFP.N2.XPD和SMMC-7721-pEGFP-N2细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明pEGFP-N2-XPD重组质粒和pEGFP-N2空载质粒成功转染.②RT-PCR检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD中p53 mRNA、XPD mR-NA表达量与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721相比均明显增高(P<0.01),CDK7 mRNA、c-myc mRNA在SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的表达量比两对照组明显降低(P<0.01),而两对照组各个基因的表达没有明显差异(P>0.05).③Western blot检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞的p53、XPD蛋白表达最较两对照组升高(P<0.01),CDK7、c-myc的蛋白相对表达量比两对照组降低(P<0.01),两对照组差异没有统计学意义(P>0.05).④M1Tr检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的细胞增殖力较对照组减弱(P<0.05),两对照组筹异没有统计学意义(P>0.05).⑤流式细胞仪检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞进入s期出现障碍,停滞在G1期的细胞增多.结论 将XPD成功稳定转染到人SMMC-7721肝癌细胞中,XPD、p53在转录和蛋白水平的表达明显升高,CDK7、c-myc表达明显降低,野生型XPD基因的过表达可能抑制CDK7、c-myc表达,改变细胞周期,并促进p53抑制肝癌细胞增长,促进细胞凋亡.     

重组人IL-24蛋白诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡

目的研究重组人IL-24蛋白（rhIL-24）选择性诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡的作用。方法重组由Igk前导肽、IL-24cDNA（不含自身信号肽）和myc—tag组成的融合基因（Igk7m），构建表达载体pcDNA3．1-Igk7m，稳定转染293细胞，表达并粗提分泌性rhIL-24蛋白。以人肝癌细胞株PLC／PRF／5（p53突变型）、SMMC-7721（p53野生型）和正常人肝细胞株WRL-68为靶细胞，用活细胞计数法和TUNEL法分析rhIL-24处理对培养的靶细胞生长和凋亡的影响。结果经测序鉴定，融合基因各片段的核苷酸序列和总阅读框架完全正确。应用Westernblot在筛选的转基因293细胞克隆和其培养上清中均检测到rhIL-24蛋白，分子量分别约为25kDa和35kDa。与WRL-68对照组相比，分泌性rhIL-24蛋白粗提液处理可显著抑制PLC／PRF／5和SMMC-7721肝癌细胞的生长增殖（P〈0．01）。rhIL-24蛋白处理还可显著增加PLC／PRF／5和SMMC-7721的凋亡细胞百分率（P〈0．01），而对正常肝细胞WRL-68无明显影响（P〉0．05）。结论rhIL-24蛋白能选择性诱导培养的肝癌细胞株PLC／PRF／5和SMMC-7721生长抑制和凋亡。     

丹参多酚酸盐通过线粒体途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

目的：研究丹参多酚酸盐(salvianolate)体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用及其可能机制。方法：不同质量浓度丹参多酚酸盐(0.5、1、2 mg/ml)与肝癌细胞共培养24 h后,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡,线粒体膜电位试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位变化;比色法测定1.0 mg/ml丹参多酚酸盐作用后肝癌细胞内caspase8、caspase9 及caspase3的活性,流式细胞仪检测培养体系内加入caspase9抑制剂(zLEHDfmk)或caspase3抑制剂(zDEVDfmk)后细胞凋亡率的变化,Western blotting检测肝癌细胞内线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl2表达水平。结果：丹参多酚酸盐显著诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡(P<0.05),同时线粒体膜电位随着药物浓度的升高而加剧下降(P<0.05)。1.0 mg/ml 丹参多酚酸盐处理肝癌细胞24 h后caspase-9与caspase-3的活性明显升高(P<0.05),而caspase-8的活性无明显变化(P>0.05);当培养体系内加入caspase-9或caspase3活性抑制剂后,丹参多酚酸盐诱导肿瘤细胞凋亡的作用明显降低(P<0.05)。Western blotting检测显示,丹参多酚酸盐处理组前凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达降低。结论：丹参多酚酸盐(0.5~2.0 mg/ml)剂量具有促进肝癌细胞凋亡的作用,且有剂量依赖的趋势,其机制与线粒体凋亡途径有关。     

Chemokine Expression Profiles of Human Hepatoma Cell Lines Mediated by Hepatitis B Virus X Protein

The hepatitis B virus X protein (HBx), which is encoded by hepatitis B virus (HBV), plays crucial roles in the tumorigenesis of HBV associated hepatocellular carcinoma (HCC). Recent studies suggest that the HBx is involved in regulation of host immune cytokines and chemokines in HBV-associated HCC patients. However, effects of the HBx on autocrine chemokine expression profiles of hepatoma cells, which were shown in modulation of tumor-immune cell interactions, have not been investigated comprehensively. In the present study, human hepatoma cell lines SMMC-7721 and HepG2 were transfected with HBx-expressing plasmid. Human chemokine antibody array 1 (RayBio®), which simultaneously detects 38 chemokine factors, was used to determine chemokine expression profiles. Real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) was used to further confirm the differential expression of chemokines. Chemokine antibody array revealed that all 38 chomekines were found to be expressed by SMMC-7721 and HepG2 cell lines. Interleukin-8 (IL-8) was obviously up-regulated, and epithelial neutrophil-activating protein 78 (ENA78), eosinophil chemotactic protein-1 (Eotaxin-1), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), MCP-2, MCP-3 and macrophage inflammatory protein-3β (MIP-3β) were significantly declined in both cell lines following transfection of HBx-expressing plasmid. Other chemokines showed little or no significant changes. HBx-induced differential chemokine expression levels were validated by real-time PCR. Hierarchical cluster analysis identified a distinction of chomekine expression profiles between HBX-expressing hepatoma cell lines and controls. Our findings provide new evidence that HBx is able to selectively regulate chomekines in hepatoma cells that may be involved in the regulation of tumor-immune cell interactions.