辛伐他汀对肺缺血再灌注损伤中肺泡Ⅱ型细胞的保护作用

目的 观察辛伐他汀对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)长期存活模型中肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的保护作用.方法 建立大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型,将实验动物分成3组:假手术组(Ⅰ组,仅予开胸,n=36)、缺血再灌注组(Ⅱ组,予左侧肺门阻断1 h后开放,n=36)、辛伐他汀组(Ⅲ组,术前3 d开始予辛伐他汀每天5 mg/kg灌胃持续应用至处死,余处理同Ⅱ组,n=36).分别于开胸后及缺血再灌注后0 h、4 h、1 d、3 d、7 d收集血及左肺组织标本,检测如下指标:血氧分压(PaO2)、组织髓过氧化物酶(MPO)水平、肺组织肺泡表面活性物质C(SP-C)表达及SP-C/增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光双染检测ATⅡ的增殖.结果 成功建立大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型.与Ⅱ组比较,Ⅲ组MPO值、PaO2值以及SP-C的mRNA相对值在缺血再灌注4 h和1 d差异均有统计学意义(P＜0.01),余时间点差异均无统计学意义(P＞0.05);SP-C/PCNA免疫荧光双染显示,Ⅲ组在缺血再灌注后1 d ATⅡ增殖水平较Ⅱ组明显增高.结论 ATⅡ细胞是辛伐他汀保护肺缺血再灌注损伤作用的新靶点,促进其增殖是辛伐他汀发挥保护作用的重要机制之一.

Abstract：

Objective To evaluate the protective effects on alveolar type Ⅱ cells induced by simvastatin in a rat lung ischemia-reperfusion injury (LIRI) long-term survival model. Methods 108 healthy SD rats were randomly divided into 3 groups: group Ⅰ, the sham group (n =36, no hilar blocking); group Ⅱ, LIRI group ( n = 36, left hilar blocking); group Ⅲ, simvastatin group ( n = 36, animals were orally lung tissue and blood samples were collected at basehne before hilar occlusion and 1 h after ischemia, 4 h,1 day, 3 days and 7 days after reperfusion respectively. The indices were determined as follows: the myeloperoxidase (MPO) activity of lung tissue, the arterial partial pressure of oxygen ( PaO2 ), pulmonary surfactant-C (SP-C) expression and proliferation of AT Ⅱ cells determined by SP-C/proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunofluorensence double staining. Results The rat LIRI long-term survival model was successfully established. As compared with group Ⅱ , the MPO activity, PaO2 and the SP-C mRNA level were significantly reduced in group Ⅲ at the time-points of 4 h and 1 day after reperfusion (P ＜0. 01 respectively). The number of SP-C/PCNA double positive AT Ⅱ cells displayed that as compared with Group Ⅱ , the proliferation of AT Ⅱ cells in group Ⅲ was significantly increased at day 1 after repeffusion.Conclusion AT Ⅱ cells might be a novel target of simvastatin-induced-attenuation of LIRI, in which enhancing the proliferation ability of AT Ⅱ is involved as one of the important mechanisms.     

蒸汽吸入性损伤犬支气管肺泡灌洗液的观察

为了探讨吸入性损伤后支气管肺泡灌洗液检测的意义，选用１２条本地健康杂种犬进行自身对照试验。采用蒸汽致伤造成重度吸入性损伤，在伤后１小时和５小时观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中（ＡＣＥ）活性的变化。结果表明，吸入性损伤后肺内大量炎性细胞渗出，脂质过氧化反应水平增高和肺毛细自管内皮细胞损伤。     

辛伐他汀对人肺泡Ⅱ型细胞缺氧复氧损伤的逆转

目的 探讨辛伐他汀在体外对肺泡Ⅱ型细胞( ATⅡ)缺氧复氧损伤的保护作用及其机制.方法以人ATⅡ来源的A549细胞株为对象,应用化学性缺氧模拟剂CoCl2建立体外缺氧复氧损伤模型.研究分为空白组、对照组及不同剂量辛伐他汀治疗组(5、10、20、30、50、100μmol/L).应用CCK-8 比色法检测细胞增殖率;AV/PI流式细胞双染检测细胞凋亡率;Western blot法检测ATⅡ特异性标志表面蛋白C(SP-C)和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,在A549细胞缺氧前应用低剂量辛伐他汀(5～20 μmol/L)预处理30 min,可促进A549细胞的增殖并显著抑制CoCl2引起的凋亡,同时显著增加SP-C和PCNA的蛋白表达;而高剂量辛伐他汀组(50～ 100 μmol/L)并没有观察到促进增殖、抑制凋亡的保护作用.给予L-甲羟戊酸竞争性抑制辛伐他汀,可逆转辛伐他汀对ATⅡ细胞的保护作用.结论 低剂量辛伐他汀可逆转ATⅡ细胞缺氧复氧损伤,其保护机制与抑制甲羟戊酸代谢通路相关.     

表皮细胞生长因子治疗吸入性损伤的临床观察

吸入性损伤是造成烧伤患者死亡的主要原因之一 ,也是阻碍烧伤患者治愈率提高的重要因素。笔者尝试使用表皮细胞生长因子 (EGF)以促进吸入性损伤后气管粘膜及肺泡上皮的修复 ,取得了较好的临床效果。一、资料与方法1.一般资料 :笔者单位 1995～ 2 0 0 1年收治重度烧伤患者74例 ,其中男 5 6例 ,女 18例 ,年龄 12～ 5 5岁。烧伤面积 <5 0 %TBSA者 10例 ,≥ 5 0 %TBSA者 6 4例。致伤原因 :铁 (钢 )水高温烟雾吸入伤 38例 ,汽油或酒精火焰烧伤 2 2例 ,其他14例。患者入院后参照文献 [1]方法诊断为吸入性损伤 ,其中轻度吸入性损伤 4例、中度 …     

蒸汽吸入性损伤犬支气管肺泡灌洗液的观察

为了探讨吸入性损伤后支气管肺泡灌洗液检测的意义，选用１２条本地健康杂种犬进行自身对照试验。采用蒸汽致伤造成重度吸入性损伤，在伤后１小时和５小时观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中细胞成份、总蛋白含量、丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性的变化。结果表明，吸入性损伤后肺内大量炎性细胞渗出，脂质过氧化反应水平增高和肺毛细血管内皮细胞损伤     

肺泡Ⅱ型细胞与急性肺损伤

肺泡Ⅱ型细胞(Alveolar typeⅡcells,Type Ⅱ alveolar epithelial cell,Type Ⅱ pneumocyte,以下简称Ⅱ型细胞)是一种多功能细胞,对维持肺泡的结构和功能具有重要意义.其主要功能有:(1)增殖功能.它是Ⅰ型、Ⅱ型细胞的祖细胞[1,2].在正常细胞更新和损伤修复过程中,Ⅱ型细胞可以分化为Ⅰ型细胞,也可通过有丝分裂补充Ⅱ型细胞数量,起到肺泡上皮干细胞的作用[3,4];(2)合成和分泌肺表面活性物质(Pulmonary surfactant,PS);(3)维持肺泡内外液体平衡;(4)近年还发现Ⅱ型细胞还具有免疫调节作用[5].     

测定胎盘型碱性磷酸酶判定烟雾吸入所致肺泡I型细胞损害

通过动态观察血浆及支气管肺泡灌洗液中ＰＬＡＰ的变化，探讨烟雾吸入所致肺泡Ｉ型细胞损害及其与肺损伤发生发展的关系，采用大鼠烟雾吸入伤模型，分别检测了正常对照及致伤２，６，１２和２４小时动物的动脉血气，肺水量、ＢＡＬＦ中总蛋白和白蛋白含量，ＢＡＬＦ和血浆中ＰＬＡＰ含量，并作了病理检查，结果表明：动物伤后出现急性呼吸衰竭和严重肺水肿，ＢＡＬＦ中总蛋白及白蛋白含量明显升高，血浆及ＢＡＬＦＰＬＡＰ水平亦显著     

支气管肺泡灌洗治疗重度吸入性损伤16例

重度吸入性损伤是烧伤早期死亡率高和影响预后的一个重要因素 ,及时诊断和治疗是救治成功的关键。 1996年 1月以来 ,我院共收治重度吸入性损伤 16例 ,利用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗 (ＢＡＬ) ,取得了较好的临床效果 ,报告如下。1.临床资料 :本组 16例 ,其中男性 14例、女     

肺灌洗及外源性肺表面活性物质治疗烟雾吸入性损伤的实验研究

为探讨肺灌洗与外源性肺表面活性物质（ＰＳ）治疗对严重烟雾吸入伤后内源性ＰＳ功能障碍和急性呼吸衰竭的防治效果,作者将重度烟雾吸入伤后Ｗｉｓｔａｒ大鼠经气管插管注入含ＰＳ的等渗盐水或等量盐水行肺灌洗,机械通气４小时,观察２４小时,检测动脉血气、肺水量、静态肺顺应性（Ｃｓｔ）、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）蛋白含量、ＢＡＬＦ表面张力特性和２４小时病死率等。结果显示：动物伤后立即出现严重缺氧和一氧化碳中毒。烟雾吸入组发生急性呼吸衰竭、高通透性肺水肿和ＰＳ功能障碍。烟雾吸入加灌洗加ＰＳ加机械通气组Ｃｓｔ和ＢＡＬＦ表面张力特性明显改善,氧合能力显著增强,肺水量和ＢＡＬＦ蛋白含量降低,２４小时病死率明显下降。烟雾吸入加灌洗加机械通气组也有一定疗效。作者认为,早期肺灌洗和外源性ＰＳ治疗能有效恢复烟雾吸入所致内源性ＰＳ功能抑制,改善肺功能,防止高通透性肺水肿和呼吸衰竭,降低早期病死率。     

犬烟雾吸入性损伤早期肺洗出液灌注大鼠肺所致损伤的研究

目的　研究犬烟雾吸入性损伤早期肺洗出液的生物学活性。　方法　获取犬急性烟雾吸入性损伤早期肺洗出液及正常犬肺洗出液。将Wistar大鼠随机分为A(2 8只 )、B(2 9只 )、C(37只 )组 ,每组各取 7只不作处理作为正常对照 ,其余大鼠肺部作如下处理 :A组注入等渗盐水 ,B组注入正常犬肺洗出液 ,C组注入致伤犬肺洗出液。处死各组中正常对照大鼠 ,并于灌注后 4、12、2 4h处死灌注大鼠 ,观察各组大鼠处死前的存活情况、处死后双肺大体变化及组织病理学改变。检测肺组织匀浆中 6 酮 前列腺素F1α/血栓素B2 (PGF1α/TXB2 )、肿瘤坏死因子α(TNF α)、髓过氧化物酶 (MPO)含量及肺毛细血管通透性。　结果　A、B组大鼠处死前均存活 ,C组大鼠非处死死亡 9只。犬吸入性损伤早期肺洗出液可引起大鼠肺产生类似于烟雾吸入性损伤样的病理变化。A、B组大鼠灌注后肺组织PGF1α/TXB2 均有升高倾向 ;C组大鼠灌注后PGF1α/TXB2 逐渐降低 (P <0.0 1),A、B组灌注后肺组织TNF α、MPO含量均无明显变化 (P >0.0 5 ),C组灌注后 4h肺组织TNF α、MPO含量显著增加 ,分别为 (1.0 2± 0 .0 4 )ng/ml、(1.0 1± 0.0 9)U/g肺组织湿重 ,随后下降 (P <0.0 5～ 0.0 1)。肺灌注后4hC组大鼠肺组织毛细血管通透性高于A、B组 (P <0.0 1)。结论　犬     

大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化和鉴定

目的：探讨大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）分离、培养及鉴定的方法。方法：采用Dobbs法提取ATⅡ。肺动脉灌洗减少肺内红细胞,气管灌洗除去肺泡腔内的白细胞,将胰蛋白酶、胶原酶灌入肺内消化分离细胞;采用免疫贴附法纯化细胞,将细胞悬液培养于覆被IgG的平皿中,有Fc段受体的细胞被黏附,而无Fc段受体的ATⅡ得以纯化。ATⅡ的鉴定采用电镜和肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）免疫组化染色,其在电镜下有特征性板层小体,免疫组化染色见胞浆有SP-A表达。结果：纯化后台盼蓝染色显示细胞活力为95%以上。通过SP-A免疫组化染色判定,纯化后ATⅡ纯度可达92%。结论：分离、纯化大鼠ATⅡ时,合适的胰蛋白酶浓度及作用时间对细胞活性有重要作用,大鼠IgG黏附纯化可以得到高纯度的ATⅡ,通过电子镜观察板层小体和免疫组化染色检测细胞SP-A表达可用于鉴定ATⅡ。     

重组人表皮生长因子治疗吸入性损伤的临床观察

重组人表皮生长因子 (recombinanthumanepidermalgrowthfactor,rhEGF)具有促进表皮细胞生长、加速创面愈合、缩短愈合时间的作用 ,且无毒、无化学和物理刺激性 ,黏膜耐受性好。但rhEGF应用于吸入性损伤的治疗及促进气管黏膜愈合的作用尚鲜见报道。笔者应用rhEGF对本单位收治的 2 0例吸入性损伤患者进行治疗 ,结果表明rhEGF对吸入性损伤受损气管黏膜的愈合有一定促进作用。一、资料与方法1.病例选择 :选择本单位近 3年收治的烧伤面积小于5 0 %TBSA、合并吸入性损伤的患者 4 0例 ,均为男性 ,年龄 17 5 2岁。致伤原因 :火焰烧伤 32例 ,…     

辛伐他汀通过PI3K/Akt通路缓解肺泡Ⅱ型细胞缺氧复氧损伤

目的 观察辛伐他汀( SIM)对缺氧复氧损伤肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的保护作用并探讨其机制.方法 体外培养人ATⅡ来源的A549细胞株,建立二氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧复氧损伤模型;不同浓度辛伐他汀(5～100 μmol/L)处理A549细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖率;Hoechst33342染色检测细胞凋亡;Western blot检测ATⅡ特征标志表面蛋白C(SP-C)及PI3K/Akt通路蛋白Akt、P70、mTOR、Caspase-3水平.结果 与对照组比较,缺氧前予低剂量SIM(5～20 μmol/L)预处理30 min,可显著促进A549细胞增殖、抑制其凋亡,并上调SP-C、p-Akt及下游增殖相关蛋白p-P70、mTOR水平,同时下调凋亡蛋白Caspase-3水平,两者差异有统计学意义(P＜0.01).与SIM组比较,给予PI3K抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)可拮抗SIM的保护作用,表现为SP-C、p-Akt、mTOR及p-P70蛋白水平下调,Caspase-3蛋白水平上调,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 辛伐他汀可缓解ATⅡ细胞缺氧复氧损伤,其机制与辛伐他汀活化PI3K/Akt通路有关.     

测定胎盘型碱性磷酸酶判定烟雾吸入所致肺泡I型细胞损害

通过动态观察血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中PLAP的变化,探讨烟雾吸入所致肺泡Ⅰ型细胞损害及其与肺损伤发生发展的关系,采用大鼠烟雾吸入伤模型,分别检测了正常对照及致伤2,6,12和24小时动物的动脉血气、肺水量、BALF中总蛋白和白蛋白含量,BALF和血浆中PLAP含量,并作了病理检查。结果表明:动物伤后出现急性呼吸衰竭和严重肺水肿,BALF中总蛋白及白蛋白含量明显升高;血浆及BALF中PLAP水平亦显著增加,且与BALF中蛋白含量的改变相关显著;病理检查亦见严重肺泡Ⅰ型细胞损害。提示PLAP不仅可作为肺泡Ⅰ型细胞损害的标志,而且与烟雾吸入伤后肺泡一毛细血管膜通透性增加有密切关系。     

丙泊酚对缺氧诱导的大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞凋亡的调控作用

目的 探讨丙泊酚预处理对缺氧条件下大鼠Ⅱ型肺泡七皮(ATⅡ)细胞凋亡的影响.方法 体外分离并培养大鼠ATⅡ细胞,将细胞分为三组:缺氧组(H组)、丙泊酚-缺氧组(P组)和对照组(C组).测定各组细胞存活率、早期凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及Bnip3LmRNA 表达水平.结果 与C组比较,H组和P组细胞存活率显著降低(P＜0.05)、早期凋亡率显著升高(P＜0.05),HIF-1α mRNA及Bnip3LmRNA表达显著增强(P＜0.05).与H组比较,P组上述指标显著降低(P＜0.05).结论 丙泊酚预处理可抑制缺氧条件下大鼠ATⅡ细胞凋亡,推测其与丙泊酚-HIF-1α-缺氧反应元件(HRE)轴的抑制有关.     

脂多糖对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮细胞存活率及钠-钾-ATPase的影响

目的观察脂多糖对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮(AT-Ⅱ)细胞存活率及钠-钾-ATPase(Na-K-ATPase)活性的影响。方法AT-Ⅱ细胞分离、纯化、培养24 h后平均分为三组。Ⅰ组在培养液中加入10μg/ml脂多糖(LPS);Ⅱ组在培养液中加入100μg/ml LPS。Ⅲ组(正常对照组)加入等容积生理盐水。分别测定给予处置48、h后AT-Ⅱ细胞Na-K-ATPase的活性、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及培养24 h后的细胞存活率。结果体外培养的AT-Ⅱ细胞经LPS(10、100μg/ml)作用4 h后Na-K-ATPase活性与Ⅲ组相比显著增强,8 h后差别依然存在。培养液中的LDH浓度在经LPS作用4 h及8 h后与Ⅲ组相比差异无显著意义。Ⅰ组24 h细胞存活率明显高于Ⅲ组。而Ⅱ组24 h细胞存活率较Ⅲ组相比差异无显著意义。结论两种浓度LPS对离体AT-Ⅱ细胞Na-K-AT-Pase活性有激活作用,且无细胞毒性作用,而10μg/ml的LPS可以提高AT-Ⅱ细胞的存活率。     

测定胎盘型碱性磷酸酶判定烟雾吸入所致肺泡Ⅰ型细胞损害

通过动态观察血浆及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＰＬＡＰ的变化，探讨烟雾吸入所致肺泡Ⅰ型细胞损害及其与肺损伤发生发展的关系，采用大鼠烟雾吸入伤模型，分别检测了正常对照及致伤２，６，１２和２４小时动物的动脉血气、肺水量、ＢＡＬＦ中总蛋白和白蛋白含量，ＢＡＬＦ和血浆中ＰＬＡＰ含量，并作了病理检查。结果表明：动物伤后出现急性呼吸衰竭和严重肺水肿，ＢＡＬＦ中总蛋白及白蛋白含量明显升高；血浆及ＢＡＬＦ中ＰＬＡＰ水平亦显著增加，且与ＢＡＬＦ中蛋白含量的改变相关显著；病理检查亦见严重肺泡Ⅰ型细胞损害。提示ＰＬＡＰ不仅可作为肺泡Ⅰ型细胞损害的标志，而且与烟雾吸入伤后肺泡—毛细血管膜通透性增加有密切关系。     

烟雾吸入性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响

目的 探讨烟雾吸人性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响。方法 选用54只Wistar大鼠，取其中6只作为正常对照组，其余48只制成烟雾吸人伤模型，作为吸人伤组。吸人伤组分别于致伤后2、6、12、24h及2、3、4、5d行支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞。观察(1)肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能的动态变化；(2)利用髓过氧化物酶(MPO)染色法观察肺泡巨噬细胞的染色阳性率；(3)利用流式细胞仪观察支气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡的动态变化。结果 (1)烟雾吸人伤早期(2～6h)肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能受损，吞噬率下降，12h后逐渐恢复正常。(2)肺泡巨噬细胞MPO染色阳性率在吸人伤后逐渐升高，24h达峰值，2～5d逐渐下降。(3)支气管肺泡灌洗液中细胞凋亡率在3．02％～12．95％之间，以伤后24h凋亡率最高。结论 气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡增加，中性粒细胞凋亡及肺泡巨噬细胞吞噬凋亡细胞参与了烟雾吸人伤大鼠恢复期肺内炎症消散的过程。     

地氟醚对大鼠肺泡Ⅱ型细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响

地氟醚(Desflurane,Des)作为一种新型的氟化麻醉剂,是否对Ⅱ型细胞Na+ -K+ -ATP酶产生同样的影响尚不清楚。本实验采用分离培养的大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞(ATⅡ细胞),观察地氟醚对Ⅱ型细胞Na+ -K+ -ATP酶活性的影响,并探讨其可能机制。     

Ⅱ型肺泡上皮细胞与急性肺损伤的研究进展

AECⅡ是肺泡壁的重要组成部分,也是ALI／ARDS发生、发展的重要参与者。AECⅡ可通过分泌炎症介质和促凝、抗凝因子参与ALl时全身炎症反应综合征和凝血反应失衡的形成。AECⅡ上Na^＋-K^＋-ATP酶活性以及数量的下调加重了．ALI时的肺水肿。肺组织内的AECII增生并转化为AECI以及间质细胞参与了肺损伤后的修复和纤维化的形成。而且,AECⅡ还具有免疫调节功能,参与肺组织内的防御反应。近年来研究发现,与AECⅡ相关的生物标志物SP—D和KL－6与ALI／ARDS肺损伤的严重程度及疾病的预后相关,但尚无对SP—D或KL－6与炎症反应相关性的研究。