过量维生素A酸对金黄地鼠胚胎神经管维生素A酸受体α、β基因表达的影响

目的：探讨过量维生素A酸(RA)对金黄地鼠胚胎神经管RA受体α和RA受体β基因表达的影响。方法：采用RT-PCR方法,半定量分析金黄地鼠神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RA受体α和RA受体βmRNA表达水平的变化。结果：过量RA可使RA受体α和RA受体βmRNA在金黄地鼠神经管中的表达水平呈现短时下降,而后又大幅上升的变化。结论：过量RA引起的RA受体α和RA受体βmRNA表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形相关。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在神经管畸形发生中的作用──免疫组织化学研究

给妊娠金黄地鼠灌服过量维生素Ａ酸后，在不同时间剖腹取胎，石蜡包埋、连续切片。用免疫组织化学方法，对神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质中的基质粘着分子——纤维粘连蛋白和层粘连蛋白进行定性、定位和半定量观察。结果显示，实验组各组胚胎的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的免疫组织化学染色均有不同程度的减弱。说明过量维生素Ａ酸可使神经上皮及其基膜和周围间充质中的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白降低，从而干扰了神经上皮细胞的正常增殖、迁移、生理性死亡和细胞粘着过程。这是维生素Ａ引起神经管畸形的一个重要途径。     

右归丸联合碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠骨髓基质细胞分化为 神经元样细胞

背景：既往研究证实补肾益精中药能体外诱导骨髓基质细胞转化为神经元样细胞。 目的：观察右归丸联合碱性成纤维细胞生长因子体外诱导大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞的分化作用。 方法：密度梯度离心法结合贴壁培养法培养大鼠骨髓基质细胞,将传3代的骨髓基质细胞用右归丸联合碱性成纤维细胞生长因子诱导向神经元样细胞分化,并设单独碱性成纤维细胞生长因子组和正常组为对照。 结果与结论：诱导7 d后,光学显微镜下观察右归丸联合碱性成纤维细胞生长因子诱导组部分细胞呈双极或多极神经元形态。免疫组织化学染色结果显示,与正常组和单独碱性成纤维细胞生长因子组相比,右归丸+碱性成纤维细胞生长因子组细胞中神经元特异性醇化酶、巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白阳性率明显增高(P < 0.05)。结果说明,右归丸联合碱性成纤维细胞生长因子可体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞。     

纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子与大鼠胎肢细胞碱性磷酸酶的活性(英文)

背景:纤维蛋白是一种天然的可生物降解、组织相容性好的高分子材料。碱性成纤维细胞生长因子是一种对中胚层和神经外胚层细胞促分裂作用的多肽生长因子。两者结合有利于干细胞在高度交联的凝胶支架内迁移,并且促进其增殖与分化。目的:观察纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子对大鼠胎肢细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法:实验分为4组:纤维蛋白凝胶组,纤维蛋白凝胶中加入正常培养基。纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子组,在纤维蛋白凝胶中加入含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基。碱性成纤维细胞生长因子组,加入10μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基。对照组,采用无凝胶正常培养基培养。无菌条件下分离培养大鼠胎肢细胞,取第3代细胞接种于以上培养基中。分别在第3,5,7,14,21,28天检测碱性磷酸酶活性、mRNA表达及细胞形态观察。结果与结论:在有纤维蛋白凝胶组内培养至7d细胞具有较长突起且连接成网,而在无纤维蛋白凝胶组内的细胞呈纺锤形或立方形;纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子培养7,14,21d碱性磷酸酶活性高于单纯纤维蛋白凝胶组和单纯碱性成纤维细胞生长因子培养组(P0.05)。各时间点纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子组碱性磷酸酶mRNA表达均较对照组增强(P0.01)。提示纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子有利于细胞形态发生,并明显增强碱性磷酸酶活性。     

载碱性成纤维细胞生长因子纳米缓释系统与骨髓间充质干细胞的增殖

背景：课题组运用发酵技术开发出了一种新型多聚羟基烷酸——羟基丁酸与羟基辛酸共聚物,不仅具有聚羟基烷酸的通性,而且其柔韧性与加工性能得到较大改善。 目的：检测羟基丁酸与羟基辛酸共聚物载碱性成纤维细胞生长因子纳米微球对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响。 方法：采用W1/O/W2超声乳化法制备羟基丁酸与羟基辛酸共聚物载碱性成纤维细胞生长因子纳米微球,采用全骨髓法培养骨髓间充质干细胞,按照培养液中所含成分不同分为3组：碱性成纤维细胞生长因子组、纳米微球组、对照组,其中前两组碱性成纤维细胞生长因子的有效质量浓度分别设为10,20,50 μg/L。 结果与结论：共培养第1,3天,碱性成纤维细胞生长因子组与纳米微球组吸光度值比较差异无显著性意义(P > 0.05),但吸光度值显著高于对照组(P < 0.05),即碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间充质干细胞具有明显促增殖作用;第5,7天纳米微球组吸光度值高于碱性成纤维细胞生长因子组(P < 0.01),即纳米微球缓慢释放碱性成纤维细胞生长因子,明显提高生物利用度;第10天纳米微球组细胞仍然有较强的增殖能力,与其他2组比较差异有显著性意义(P < 0.01),而此时碱性成纤维细胞生长因子组、对照组间差异已无显著性意义(P > 0.05)。结果说明纳米微球对碱性成纤维细胞生长因子具有良好的缓释作用,能发挥较为持久的生物学效应,可以持续促进骨髓间充质干细胞增殖。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在神经管畸形发生中的作用──…

给妊娠金黄地鼠灌服过量维生素Ａ酸后，在不同时间剖腹取胎，石蜡包埋，连续切片。用免疫组织化学方法，对神经上皮及其基膜，脊索和神经管周围间充质中的基质粘着分子──纤维粘连蛋白和层粘连蛋白进行定性，定位和半定量观察，结果显示，实验组各组胚胎的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的免疫组织化学染色均有不同程度的减弱。说明过量维生素Ａ酸可使神经上皮及其基膜和周围间充质中的纤维粘连蛋白和层粘连蛋白降低，从而干扰了神经上皮     

细胞生长因子对正常氧和低氧条件下犬骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的观察比较正常氧和低氧环境下,不同细胞生长因子对犬骨髓间充质干细胞迁移的影响。
　　方法抽取犬骨髓,采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行培养。在倒置显微镜下观察细胞的形态变化;取第3代细胞利用流式细胞术检测其表型特征;加入碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1,在正常氧和低氧条件下行迁移和划痕实验来观察细胞趋化能力。
　　结果细胞迁移情况与氧环境及细胞生长因子的存在和种类均有关联。碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1均能促进骨髓间充质干细胞的迁移,碱性成纤维细胞生长因子较其他细胞生长因子显示出更强的促进迁移作用,这种作用在低氧环境下更为明显。
　　结论低氧环境下骨髓间充质干细胞的迁移能力较正常氧环境下更强,碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1的存在均有利于骨髓间充质干细胞的迁移。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释体系诱导脂肪移植体早期血运重建

背景：脂肪移植吸收及其不可预测性直接影响该技术的临床应用,利用各种细胞因子来促进脂肪移植体早期血运重建,从而减少移植体吸收的技术在目前也有待提高。效果不稳定在于这些细胞因子在术后随血液和渗出液的流失而不能在较长时间内有效作用于血管内皮细胞。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子与葡聚糖颗粒形成缓释体对脂肪移植体早期血运重建的影响。 方法：制备2 mg/L的碱性成纤维细胞生长因子溶液及其同浓度的碱性成纤维细胞生长因子-葡聚糖缓释颗粒。SD大鼠12只取腹股沟脂肪行自体脂肪移植,左侧背部皮下植入脂肪珠加入重组型碱性成纤维细胞生长因子溶液(对照组),右侧背部皮下植入脂肪珠加碱性成纤维细胞生长因子-葡聚糖缓释颗粒(缓释组),在7,14 d随机方法处死动物各1只,用墨汁灌注微血管显像法观察移植体内部和包膜血管早期生成密度。移植后90 d,将剩余大鼠处死,取移植体测量体积。 结果与结论：在植入后7,14 d,包膜和移植体内血管计数缓释组均高于对照组(P < 0.01)。90 d后缓释组移植体的体积大于对照组(P < 0.05)。碱性成纤维细胞生长因子缓释体可以更好地促进脂肪移植体早期血运重建。实验结果说明,碱性成纤维细胞生长因子缓释体有利于减少术后脂肪移植体的吸收。     

外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤中p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达

背景：酸性成纤维细胞生长因子可以促进多种创面愈合,在内脏损伤修复中起重要促进作用。 目的：观察外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤大鼠后p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达。 方法：以大鼠肠系膜上动脉夹闭45 min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用改构体酸性成纤维细胞生长因子进行干预。分别于再灌注2,6,12,24 h取大鼠小肠组织标本,用于实验。 结果与结论：在正常大鼠,成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上。缺血-再灌注初期,p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长其逐渐增强,并于再灌注后6~12 h达高峰。经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达进一步增强,小肠黏膜损伤程度减轻。说明酸性成纤维细胞生长因子可通过上调成纤维细胞生长因子受体2和p38MAPK的表达促进肠缺血-再灌注损伤的修复。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染优化脐带间充质干细胞的培养

背景：目前多采取重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染的方法,将外源性碱性成纤维细胞生长因子基因转入脐带间充质干细胞内并持续表达,调控细胞增殖及定向分化,取得高效持久的治疗作用。 目的：了解采用重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染对体外培养的脐带间充质干细胞增殖及细胞周期的影响。 方法：体外培养脐带间充质干细胞,经重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染,分为对照组、空载病毒组、碱性成纤维细胞生长因子转染组。用RT-PCR,Western blot检测脐带间充质干细胞在转染前后碱性成纤维细胞生长因子基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、CCK-8观察细胞生长的优化作用,采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。 结果与结论：转染碱性成纤维细胞生长因子后,转染组与对照组、空载病毒组相比碱性成纤维细胞生长因子基因和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多,各组间差异有显著性意义(P < 0.05)。说明,通过重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染能促进体外培养的脐带间充质干细胞增殖,对其培养有优化作用。     

凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺致神经管畸形中的作用研究

为探讨凝集素受体在叶酸，维生素Ｃ防止歪磷酰酰胺致大鼠胚胎神经管畸形中的作用。方法：实验组和对照组孕鼠均于给环磷酰胺后２４小时剖腹取胎，常规石蜡包埋切片，用刀豆凝集素，花生凝集素和荆豆凝集素为分子探针作亲合组织杂色。对两组胚胎神经管的神经上皮，界膜及神经管周围间充质相应糖基进行定性，定位和半定一的比较观察。     

神经嵴细胞和胰岛因子1阳性细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系

目的 探讨迁移中的细胞视黄酸结合蛋白1(CRABP1)阳性神经嵴细胞、胰岛因子1(ISL-1)、阳性心肌前体细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系.方法 36只胚龄8.5～13d小鼠胚胎心连续石蜡切片,选用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗CRABP1和抗磷酸化组蛋白H3(PHH3)抗体,进行免疫组织化学及免疫荧光染色.结果 胚龄8.5～10d,ISL-1阳性心肌前体细胞相继出现在心背系膜、原始咽两侧、头面部、鳃弓核心间充质和心包腔背侧壁间充质,构成心管流出道发育的第二生心区.胚龄11～13d,ISL-1阳性细胞在咽前方聚集,形成特征性锥体形结构,并向升主动脉、肺动脉干及主肺动脉隔延伸.胚龄9d前,神经嵴细胞散在分布于ISL-1阳性细胞之间,流出道远侧端可见少量CRABP1和ISL-1双阳性细胞.胚龄10d,CRABP1阳性神经嵴细胞分布在ISL-1阳性鳃弓核心间充质周围.随着发育,弓动脉等处的神经嵴细胞逐渐失去CRABP1表达,开始表达α-SMA.结论 ISL-1阳性第二生心区是动态结构,胚龄8.5～10d时,在神经嵴细胞配合下,向心管动脉端添加心肌细胞;胚龄11d后,开始向平滑肌方向分化,参与升主动脉、肺动脉干和主肺动脉隔的发育.     

过量维甲酸对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体β表达的影响

目的探讨过量维甲酸(RA)对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体(RARβ)基因和蛋白表达的影响。方法采用原位杂交和免疫组织化学方法及图像分析,半定量分析金黄地鼠胚胎神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RARβ转录和表达水平的变化。结果正常对照组RARβ表达水平随胚龄增加呈先降低后升高并再次减弱的趋势。实验组在灌服过量RA后3、6h,RARβ表达水平明显低于正常对照组(P<0.01);14h时表达升高显著高于正常对照组(P<0.05);22h时其表达再次降低明显低于对照组(P<0.01);46、96h表达逐渐增强,96h时明显高于对照组(P<0.01)。结论过量RA引起的RARβ转录和表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形相关。     

用原位缺日翻译法比较两种细胞死亡的DNA状态

用原位缺日翻译法比较两种细胞死亡的ＤＮＡ状态（北京中医药大学组织学胚胎学教研室．北京１０００２９牛建昭，小路武彦，中根一穗）ＤＮＡ断裂存在于不同细胞周期中（增殖、分化、死亡）。为研究不同组织细胞核内ＤＮＡ链切断（ＤＳＢ），我们采用了缺口翻译法（ＩＮＴ...     

灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的 探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(CDk4)表达的影响.方法 给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况.结果 在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异.在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的.结论 灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形.     

The role of retinoic acid in the morphogenesis of the neural tube

We have examined the role of the signalling molecule, retinoic acid, in the process of neurulation and the subsequent growth and differentiation of the central nervous system using quail embryos that have developed in the absence of retinoic acid. Such retinoic acid-free embryos undergo abnormal neural tube formation in terms of its shape and structure, but the embryos do not display spina bifida or exencephaly. The neural tubes have a wider floor plate, a thicker roof plate and a different dorsoventral shape. Phalloidin staining and electron microscopy revealed alterations in the actin filaments and the junctional complexes of the cell layer lining the lumen. Initially the neural tubes proliferated at the same rate as normal, but later the proliferation rate declined drastically and neuronal differentiation was highly deficient. There were very few motoneurons extending neurites into the periphery, and within the neural tube axon trajectories were chaotic. These results reveal several functions for retinoic acid in the morphogenesis and growth of the neural tube, many of which can be explained by defective notochord signalling, but they do not suggest that this molecule plays a role in neural tube closure.     

灵芝孢子在预防维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨预先服用灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(cyclindependentproteinkinase4,Cdk4)表达的影响。方法于孕期小鼠E0d时给予灵芝孢子组的孕鼠胃饲灵芝孢子溶液,8g·kg-1·d-1。实验对照组的孕鼠胃饲等量溶剂。于E7.75d时,两组孕鼠一次性胃饲维甲酸,剂量为50mg/kg体重。正常对照组孕鼠胃饲等量灵芝孢子溶剂,但是在E7.75d时,仅给予维甲酸溶剂。空白对照组孕鼠常规饲养不作任何处理。在孕期E10.5d时取出4组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Westernblot检测胚胎神经管神经上皮Cdk4表达情况。结果实验对照组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞Cdk4的表达明显降低,而灵芝孢子组胚胎表达Cdk4的强度明显高于实验对照组。正常对照组与空白对照组相比Cdk4的表达无统计学意义(P>0.05)。结论灵芝孢子可能是通过增强神经管神经上皮细胞表达Cdk4降低维甲酸诱导胚胎小鼠神经管畸形的发生。     

Role of vitamin A in the formation of congenital heart defects

Retinoic acid, the biologically active form of vitamin A, is a critical player in normal development. The concentration of retinoic acid is highly regulated by the embryo to prevent either a deficit or an excess of this molecule, conditions that have been shown to produce cardiac defects that vary depending on the severity and the timing of the insult. The vast majority of these defects are associated with the valves or the membranous septa of the heart, suggesting a problem with the formation of the cardiac mesenchyme from both within and outside the heart. While the exact role of retinoic acid in cardiac development is not known, it is believed that retinoic acid influences development by up- or down-regulating cardiac specific genes. This review briefly discusses the role of cardiac mesenchyme and cardiac neural crest in septation of the heart. This is followed by a discussion of vitamin A metabolism and the cardiac defects associated with abnormal levels of retinoic acid. Finally, a mechanism is proposed concerning the ways abnormal levels of retinoic acid lead to similar cardiac defects by disrupting the production of the extracellular matrix. Anat. Rec. (New Anat.) 253:147–153, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生

目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.