茂名市首例甲型H1N1流感病例的实时荧光RT—PCR检测

[目的]对茂名市首例甲型H1N1流感病例进行病毒核酸检测,为甲型H1N1流感疫情的防控提供参考。[方法]采用实时荧光逆转录PCR法对采集的病人咽拭子标本进行甲型H1N1流感病毒核酸检测。[结果]共采集病人2份咽拭子标本,其中1份咽拭子标本的实时荧光RT—PCR检测结果显示H1及N1的RT—PCR反应体系扩增曲线有明显对数增长且Ct值分别为25．21（H1）和25．07（N1）,为甲型H1N1流感病毒核酸阳性;另1份咽拭子标本则呈阴性。后采集第3份咽拭子标本连同第1分标本送广东省疾控中心复检,结果2份标本的甲型H1N1流感病毒核酸检测均为阳性。[结论]这名病人为福建省第2例甲型H1N1流感病毒感染者的密切接触者,由于及时采用灵敏度高,特异性强,检测时间短的实时荧光逆转录PCR方法检测,快速确诊了病例,为疫情的控制争取了时间,防止了2代病例的出现。     

应用2种TaqMan-荧光定量PCR法快速检测甲型H1N1流感病毒

[目的]应用达安基因H1和N1两对引物检测试剂盒及美国CDC四对引物探针法对流感样病例进行核酸检测,以快速排除甲型H1N1流感病毒的感染.[方法]采用达安基因H1和N1两对引物检测试剂盒对流感样病例进行核酸检测,这些样本同时以美国CDC公布的针对甲型H1N1流感病毒的探针和引物序列以及国家CDC提供的针对季节性流感病毒的探针和引物序列进行检测,与达安基因的甲型H1N1试剂盒进行特异性、准确性的比较.[结果]达安基因甲型H1N1试剂盒和美国CDC的甲型H1N1四对引物法对季节性流感甲1、甲3、乙型的扩增都为阴性,对甲型H1N1确诊病例的病毒核酸扩增都是阳性,应用国家CDC的探针和引物检测为流感病毒核酸阴性的样本用达安基因的甲型H1N1试剂盒及美国CDC的甲型H1N1四对引物法的检测结果也都为阴性.[结论]达安基因的甲型H1N1试剂金及美国CDC的甲型H1N1四对引物法对甲型H1N1流感病毒的检测有高度的特异性,可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测流感病毒核酸.     

宜春市867例甲型H1N1流感PCR检测报告

目的通过流感病毒检测,了解宜春市普通人群甲型H1N1流感病毒的感染规律和流行动向,为制定预防和控制疫情扩散提供可靠依据。方法采用RT-PCR方法 ,对宜春市867份急性呼吸道感染患者的咽拭子,进行甲型H1N1流感病毒的核酸检测。结果甲型H1N1流感病毒核酸阳性173例,阳性率为20.0%(173∕867)。其中不同年龄组阳性率分别为﹤5岁9.1%、5~15岁33.3%、15~25岁28.9%、25~60岁10.7%、﹥60岁8.3%。结论宜春市流感样病例哨点监测显示,甲型H1N1流感病毒是该市2009年秋冬季的流行株,季节性流感次之。     

北京市甲型H1N1流感病毒病原学监测分析

目的 分析北京市2009年5-12月甲型H1N1流感病毒检测结果,探讨流感大流行时期甲型H1N1流感病原流行病学特征.方法 2009年5月1日至2009年12月27日,共采集101 852份咽拭子样本,北京市传染病网络实验室利用荧光定量PCR方法检测,并做统计分析.结果 101 852份检测样本中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性9843份,总阳性率为9.66%,其中5-6月阳性率为2.85%,7-8月阳性率为3.32%,9-10月阳性率为8.35%,11月阳性率为29.67%,12月阳性率为24.33%.可疑病例排查阳性率为8.40%,病例密切接触者阳性率为4.75%,门诊流感样病例(ILI)阳性率为11.46%,聚集性发热病例及其他病例阳性率为7.33%.年龄分布以5～14岁和15～24岁年龄段为主,男女性别构成比为1.5:1.结论 北京市2009年5-11月甲型H1N1流感病毒感染呈持续上升,12月呈下降趋势,具有一定的流行病学特征.     

四重RT—PCR快速检测2013新型H7N9禽流感病毒

目的建立能快速准确检测发热病人咽拭子样本中2013新型H7N9禽流感病毒的四重RT—PCR方法。方法针对甲型流感病毒的M基因设计通用引物,针对2013新型H7N9禽流感病毒的HA和NA基因设计特异性引物,选择人源看家基因beta—aetin设计质控引物,通过优化实验条件建立一步法四重RT—PCR反应体系。与商品化实时荧光RT—PCR试剂盒进行方法比对。结果成功建立四重一步法RT—PCR筛查2013新型H7N9禽流感病毒的检测技术。结论该方法简便、实用、成本低廉,适用于2013新型H7N9禽流感病毒的快速检测。     

吉林地区首例甲型H1N1型流感患者的实验室检测

全球性甲型H1N1流感进入中国内地以来，中国疾病预防控制中心加强了全国范围内的甲型H1N1型流感监测力度，流感的预警级别也从4级提升到5级，快速准确地提供甲型H1N1的实验室检测结果，对流感的流行趋势及流行株是否有变异有着重要的作用。     

菏泽市2009～2010年甲型H1N1流感病毒监测分析

目的 了解菏泽市人群感染甲型H1N1流感病毒的情况.方法 采集哨点医院流感样病例、暴发疫情及重症病例的鼻、咽拭子标本,采用荧光定量PCR进行流感病毒核酸检测.结果 2009年9月～2010年6月,共检测493例标本,甲型H1N1流感病毒核酸阳性210例,检出率42.60％.确诊病例男女比例为1∶1.04,主要集中在5～29岁(80.48％);分布在8个县区;11月份和12月份确诊病例占确诊病例总数的71.91％.结论 菏泽市甲型H1N1流感确诊病例以学生和青壮年人群为主,2009年11月份和12月份是流行高峰.     

三种实时荧光RT-PCR试剂在检测甲型H1N1流感病毒中的应用

〔目的〕结合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的检测引物和探针,探索合适的实时荧光RT-PCR试剂应用于国境口岸甲型H1N1流感病毒疑似标本的检测。〔方法〕通过对连续梯度稀释阳性对照品进行检测,从而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript 3种常用实时荧光RT-PCR试剂的灵敏度、信号强度、反应效率等因素。〔结果〕3种试剂的检测下限均为1:1000倍稀释阳性对照品;AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript检测的线性斜率分别为-5.517、5.214和-4.600;信号强度上Qiagen QuantiTect相对于其他2种明显偏弱。〔结论〕为国境口岸输入性甲型H1N1流感病例的检测和监控提供了有力的技术保障。     

甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测法的建立及其在南京地区甲流防控早期的应用

[目的]建立并应用Taqman探针实时荧光RT-PCR法10μl检测体系对91例输入性甲型H1N1流感疑似病例及密切接触者进行病毒核酸特异、灵敏、快速的检测和感染排除。[方法]采用美国CDC公布的探针和引物序列,比较了两种反应条件(无预扩增、有预扩增)和10μl、12.5μl及25μl3种反应体系的扩增效率;用预扩增10μl体系对季节性流感病毒核酸进行扩增;用预扩增程序及10μl体系对南京市91例输入性疑似病例及密切接触者的样本进行扩增,同时设置阳性对照和阴性对照。[结果]应用美国CDC公布的探针和四对引物序列,3种反应体系对甲型H1N1流感病毒都可以获得有效扩增,而且应用3种反应体积的扩增CT值没有统计学差异(P﹥0.05)。增加预扩增的反应条件下敏感度有显著提高(P﹤0.05)。用10μl反应体系及增加预扩增程序对季节性流感病毒核酸进行扩增,第2对引物(猪流感通用引物)与第3对引物(甲型H1N1流感引物)未获得阳性扩增曲线,甲1、甲3亚型病毒核酸的扩增只有第一对引物(甲型通用引物)与第四对引物(阳性内参)获得阳性扩增曲线,对乙型流感病毒核酸的扩增只获得阳性内参的扩增曲线。对南京市91例输入性甲流疑似病例及密切接触者进行了有效检测和感染排除,并检测到第一例输入性甲型H1N1流感病毒感染病例,其四对引物扩增结果均为阳性。[结论]该检测方法对甲型H1N1流感病毒有高度的特异性,对甲型流感病毒有通用性,10μl反应体系及增加预扩增程序可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测甲型H1N1流感病毒核酸,该方法可用于甲型H1N1流感病毒的日常检测并大大降低检测成本。     

4种甲型H1N1流感病毒试剂盒检测效果对比分析

目的对比分析4种甲型H1N1流感病毒检测试剂盒的实际检测效果,为试剂盒的开发和改良提供参考。方法采用Real-time RT-PCR法检测甲型H1N1流感病毒,利用SPASS 13.0软件进行数据分析。结果不同检测试剂盒其检出阳性率不同,其中试剂盒A和试剂盒C的检出阳性率均为100%,试剂盒B为95%,而试剂盒D检出阳性率仅为80%。以单个指标为研究对象,经方差分析及SNK检验,显示4种检测试剂盒对每个指标的检测效果都存在显著差异,其扩增效率有明显不同。结论试剂盒A、B和C均可检测甲型H1N1流感病毒而试剂盒C灵敏性稍高更适宜用于初筛,试剂盒D技术上需要进一步改进。     

SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测西尼罗病毒

目的建立快速、敏感和特异的检测西尼罗病毒的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR法，用于西尼罗病毒（WNV）疾病的早期诊断。方法采用RT—PCR扩增WNV基因片段，将其克隆至T载体，重组质粒测序并进行同源性分析；阳性质粒用于替代WNV，以阳性质粒为模板，建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法，并进行敏感性和特异性检测。结果经测序证实扩增片段属于WNV，所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR法可检测到10拷贝的西尼罗病毒RNA，而对其他黄病毒科成员日本脑炎病毒及登革热病毒的检测则为阴性，表明该方法特异。结论SYBRGreenⅠ荧光定量PCR简便快速，具有较高的敏感性和特异性，可以成为一种早期检测西尼罗病毒的新方法。     

重症及危重症甲型H1N1流感患者发病机制探讨

目的探讨重症及危重症甲型H1N1流感（甲流）患者的发病机制。方法分析某院收治的重症及危重症甲流患者外周血细胞在治疗前后的变化,同时通过流式细胞仪结合单克隆抗体动态观察危重症甲流患者淋巴细胞协同刺激分子与凋亡情况的变化。结果重症及危重症甲流患者治疗前白细胞数为（2.55±0.87）×109/L,淋巴细胞数为（1.02±0.54）×109/L,与治疗后白细胞数（6.95±4.36）×109/L及淋巴细胞数（2.13±0.78）×109/L比较,差异有统计学意义（分别t=3.28,P=0.01;t=9.52,P=0.00）;而治疗前红细胞数（4.10±0.45）×1012/L与治疗后红细胞数(4.14±0.39)×1012/L比较,差异无统计学意义（t=0.35,P=0.73）。随着病情的好转,危重症甲流患者淋巴细胞数逐渐增多,同时其表面的协同刺激分子CD28 、CD152表达降低,患者淋巴细胞的凋亡信号CD95也逐渐减低。结论甲流病毒诱导T淋巴细胞活化、增殖障碍及过度启动T淋巴细胞凋亡可能与淋巴细胞数及白细胞数量下降有关,这可能在重症及危重症甲流患者的发病机制中起非常重要的作用。     

乙型流感病毒的RT-PCR-SSCP法初筛分类

目的应用单链构象多态性（SSCP）对乙型流感病毒血凝素重链区（HA1）基因抗原决定簇集中区进行突变筛选，了解2001～2004年天津地区流行株HA1基因的变异特性。方法病毒培养液提取RNA后RT—PCR扩增HA1基因易发生变异308bp片段，经SSCP分类，选取各类代表株PCR产物纯化后进行核苷酸序列测定，用DNASTAR软件分析。结果天津地区近几年分离的乙型流感病毒根据SSCP电泳图谱不同分为5类。Victoria系易变区抗原表位有6个位点氨基酸不同于B／Hongkong／330／2001，Yamagata系易变区抗原表位有3个位点氨基酸不同于B／Beijing／76／98，有10个位点不同于B／Sichuan／379／99。Yamagata系与Victoria系相比缺失第163位氨基酸天冬酰胺（N）。O相与D相毒株间未发现氨基酸有差异。结论RCR-SSCP方法可作为初步筛查流感病毒代表株的方法。近几年天津地区乙型流感病毒两大谱系交替流行，且抗原性进一步发生漂移，Yarnagata系毒株为B／Beijing/76／98类似株。     

兰州市首起甲型H1N1流感暴发的核酸检测

目的:鉴别一起不明原因导致的突发性发热事件病原体。方法:提取样本中的RNA后,使用针对于甲型H1N1流感病毒相关的不同浓度引物、探针和DNA聚合酶缓冲液等作为反应成份,按照不同的扩增程序,利用逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法分别进行特异性DNA片段的扩增,对扩增产物的电泳图片和扩增图谱进行分析。结果:经RT-PCR方法检测后,分别扩增出235、527、153和80 bp的特异性片段,实时荧光PCR扩增曲线中,出现了与阳性对照一致的扩增图谱。结论:此次事件的病原体为甲型H1N1流感病毒,定性本次事件为甲型H1N1流感暴发事件。     

中国首例甲型H1N1流感确诊病例流行病学调查

2009年5月9日成都市疾病预防控制中心接到报告,1例美国归来的发热病例不能排除甲型H1N1流感,经过现场流行病学调查和实验室检测,并经中国疾病预防控制中心(CDC)复核诊断,5月11日该患者被诊断为我国首例输入性甲型H1N1流感确诊病例.     

Influenza A(H6N1) Virus in Dogs,Taiwan

We determined the prevalence of influenza A virus in dogs in Taiwan and isolated A/canine/Taiwan/E01/2014. Molecular analysis indicated that this isolate was closely related to influenza A(H6N1) viruses circulating in Taiwan and harbored the E627K substitution in the polymerase basic 2 protein, which indicated its ability to replicate in mammalian species.