IL-15对MDS患者CD34+细胞诱导增殖分化和抗凋亡作用

为了研究IL—15对体外培养的MDS CD34^＋细胞诱导增殖分化及凋亡的抑制作用，应用MACS免疫磁珠分离系统分离高富集度MDS CD34^＋细胞，建立以造血生长因子为基础的体外培养体系，用不同浓度的IL-15作用于MDS CD34^＋细胞，采用流式细胞术检测和免疫细胞化学染色等方法观察培养后的细胞表面抗原表达、细胞周期、凋亡指数及细胞形态的变化情况，并进行了定量分析。结果表明，MDS CD34^＋细胞经IL—15作用后，MDS CD34^＋细胞出现明显增殖和分化，细胞周期变异，增殖指数和细胞计数增加，形态学向成熟转化，实验组各表面抗原水平CD71、CD33和CD19均较对照组为高，细胞凋亡率则较对照组下降。结论IL—15对MDS CD34^＋细胞有一定的诱导增殖分化和抗凋亡作用，在MDS治疗方面可能有一定的应用前景。     

MDS与AA患者骨髓CD34+和CD71+CD45-细胞水平的变化

本研究旨在观察MDS和AA患者骨髓血CD34＋和CD71＋CD45-细胞数的变化。2010年1月至2013年10月在河北联合大学附属医院血液科门诊和住院的25例初治MDS和43例AA患者（其中SAA18例,NSAA25例）纳入本研究。对所有患者均进行血常规、骨髓涂片、骨髓活检、染色体核型分析以及骨髓血细胞免疫分型检测（主要是CD34＋、CD71＋CD45-细胞占有核细胞的比例）;比较CD34＋和CD71＋CD45-细胞在MDs组、AA（sAA、NSAA）组中的变化;比较MDS和NSAA组CD71＋CD45-细胞数≥15％或〈15％有核细胞数的患者的外周血白细胞数、血小板数和血红蛋白含量的差异。结果表明,MDS组CD34＋数明显高于AA组、NSAA组和SAA组（P〈0．05）;MDS组CD71＋CD45-细胞数明显高于SAA组（P〈0．05）,MDS组与NSAA组间差异无统计学意义。CD71＋CD45-≥15％的MDS组外周血小板数明显高于NsAA组（P〈0．05）;而CD71＋CD45-〈15％的MDS组白细胞、血小板数和血红蛋白含量与NSAA组比较均无统计学差异（P〉0．05）。结论：MDS组CD34＋细胞数显著高于AA组和sAA组。MDS纽CD71＋CD45-细胞数显著高于sAA组。CD71＋CD45-细胞≥15％的MDS组外周血小板数显著高于NSAA组。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34^＋细胞的研究进展

本文综述近年来对ＭＤＳ患者骨髓ＣＤ３４＾＋细胞的研究进展，表明其细胞数量与ＦＡＢ分型及预后密切相关，且其细胞的增殖和分化能力受损，其免疫表型对集落刺激因子的反应均发生改变；ＭＤＳ原发损伤是高凋亡，其ＣＤ３４＾＋细胞对Ｆａｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｂｃｌ－２等凋亡相关蛋白的表达异于正常，提示了ＭＤＳ患者骨髓ＣＤ３４＾＋细胞无论在数量上还是质量上均发生了明显异常。     

Th17/Treg细胞与MDS

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)是一组异质性造血干细胞恶性肿瘤,以造血缺陷相关的血细胞减少、髓样发育不良和髓内凋亡为特征,伴进展为急性骨髓性白血病的风险增加。尽管发现了许多与MDS临床表型有关的点突变,但并不能完全解释MDS的发病机制和临床表现。研究表明,不同免疫途径在MDS发病机制和疾病进展中起重要作用,并观察到多种自体免疫疾病和表现与MDS有关。现已证实,Th17细胞可引起自身免疫,而Tregs细胞抑制自身免疫;Th17细胞和Treg细胞共享一个由TGF介导的信号通路,因此,由炎性信号介导Th17细胞和Treg细胞的交互生成对自体免疫疾病发病至关重要。且研究发现,Th17细胞与Treg细胞与疾病严重程度及预后相关,可根据Th17细胞与Treg细胞数量、比例来评估病情。本文就Th17/Treg细胞生物学特点及其与MDS的关系及影响进行综述。     

骨髓增生异常综合征患者CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞特点及环孢素对其的影响

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastie syndrome,MDS)-难治性贫血(refractory anemia,RA)及难治性血细胞减少伴有多系发育异常(refractory cytopenia with multiple dysplasia,RCMD)患者CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞与白细胞介素(interleukin,IL)-10表达水平,评估环孢素对MDS患者CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞的影响。方法选择2016年1月至2018年1月于新疆维吾尔自治区人民医院25例MDS-RA及RCMD患者(MDS组)和13名健康对照(健康对照组),采用流式细胞术及酶联免疫吸附试验检测外周血标本CD4+CD25+FOXP3+Treg与IL-10表达水平,检测MDS-RA及RCMD患者在应用以环孢素为基础的免疫抑制方案治疗前、治疗6个月后及MDS组治疗有效及无效的CD4+CD25+FOXP3+Treg与IL-10的表达情况。结果全部25例患者中,13例(52%)有效,12例(48%)无效。MDS组CD4+CD25+FOXP3+Treg占CD4+T细胞比例显著高于健康对照组[(0.37±0.10)%与(0.12±0.06)%,t=2.02,P<0.001]。MDS组IL-10水平显著高于健康对照组[(7.16±1.27)μg/L与(2.75±1.06)μg/L,t=2.03,P<0.001]。MDS治疗有效组CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例低于无效组[(0.15±0.06)%与(0.26±0.08)%,t=1.71,P<0.001],有效组IL-10水平低于无效组[(3.22±1.01)μg/L与(4.25±1.22)μg/L,t=2.06,P=0.030]。25例MDS患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg比例与IL-10表达水平呈正相关关系(r=0.35,P=0.02)。结论MDS患者存在CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞与IL-10的表达升高,环孢素治疗后降低。     

骨髓增生异常综合征患者T细胞异常极化导致的负性造血调控

目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓T细胞极化状况及其与骨髓上清液中促凋亡因子TNF—α、INF-γ水平及造血细胞凋亡的关系。方法采用流式细胞术检测34例MDS患者骨髓T细胞极化亚群状况，用ELISA法检测骨髓上清液TNF—α、INF-γ水平，并用TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测骨髓造血细胞凋亡状况，分析三者间的相关性。结果①MDS患者骨髓，Th1细胞百分比[（10．1±1．6）％]和Tc1细胞百分比[（24．0±3．6）％]以及Tc1／Tc2值（50．0±11．1）明显高于正常对照[分别为（4．0±0．5）％，（5．8±0．6）％和13．4±2．7]；MDS患者骨髓上清液INF．1浓度[（58．6±21．7）μg／L]和TNF—α浓度[（15．7±3．8）μg／L]较正常对照[分别为0和（0．3±0．2）μg／L]明显升高；MDS患者骨髓造血细胞凋亡指数[（7．8±1．5）％]明显高于正常对照[（2．1±0．3）％，P〈0．05]。骨髓Th1细胞数与骨髓上清液INF-γ和TNF—α浓度呈正相关（r值分别为0．38和0．39，P〈0．05），并与造血细胞凋亡指数呈正相关（r=0．33，P〈0．05）。骨髓上清液INF-γ，和TNF—α浓度与造血细胞凋亡也呈正相关（r值分别为0．74和0．73，P〈0．01）。②难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）组（18例）Th1、Tc1细胞百分比，Tc1／Tc2值较正常对照明显升高（P值均〈0．01），T细胞向Ⅰ型反应极化；RCMD伴环形铁粒幼细胞增多（RCMD—RS）（4例）、RAEB—1（5例）、RAEB-2组（7例）T细胞未显示异常极化。③IPSS低危组病例Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常升高，而高危组T细胞未见异常极化。④染色体核型正常的RCMD患者骨髓Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常对照明显升高。而核型异常组T细胞未见异常极化。结论MDS患者骨髓中Th1、Tc1细胞比例增高，Th1／Th2、Tc1／Tc2平衡向Ⅰ型反应极化，其中以RCMD组、IPSS低危组和染色体核型正常组患者的T细胞I型反应极化明显。骨髓造血细胞过度凋亡与Th1细胞以及INF-γ和TNF—α水平呈正相关，提示Th1细胞通过分泌INF-γ和TNF-α导致造血细胞过度凋亡。     

10例MDS与MegA细胞形态学鉴别分析

骨髓增殖异常综合征(MDS)与巨幼细胞性贫血(MegA)是两组本质不同的疾病,前者是一种造血干细胞病,病因不明,预后不好;后者是与嘌呤和嘧啶代谢合成有密切关系的造血物质叶酸或VitB_(12)缺乏所致DNA合成障碍引起,病因明确,可以治愈。二者临床都以贫血为主要症状,细胞形态都有不同程度的病态表现,容易混淆。 1 对象与方法 病例:MDS病人10例,年龄15～72岁,中位年     

MDS-RA患者外周血活化T细胞水平检测

骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)是造血干细胞异常所致的恶性克隆性疾病 ,目前关于ＭＤＳ异常造血和活化Ｔ细胞关系的研究甚少。为此 ,我们利用流式细胞仪双标记技术 ,检测18例ＭＤＳ ＲＡ患者外周血活化Ｔ细胞的水平 ,以探讨细胞免疫功能异常对造血的影响。对象和方法1　研究对象　ＭＤＳ ＲＡ患者 18例 ,男 12例 ,女 6例 ,年龄 9～ 5 8岁 ,中位年龄 31岁 ,均符合ＭＤＳ的诊断标准[1] 。所有患者均为初治 ,2周内无感染、发热 ,亦未曾输过血 ,未用过细胞因子。正常对照 12名 ,年龄 2 0～ 42岁 ,中位年龄 33 .5岁。2　实验方法　采用直接免疫法 …     

MDS的免疫异常与免疫治疗——现状与思考

骨髓增生异常综合征(MDS)患者,尤其是低危组,免疫功能亢进导致了造血细胞凋亡亢进,进而引发难治性血细胞减少,免疫抑制治疗能够改善部分患者的血细胞计数,但亦有部分患者存在免疫功能低下,而且免疫抑制治疗效果差,甚至出现白血病转化.本文综述了近年来关于MDS免疫异常的研究和免疫抑制治疗的结果,并做初步讨论.     

骨髓增生异常综合征患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞、调控基因FOXP3的表达及意义

目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞）和调控基因FOXP3的表达及意义。方法分离22例MDS患者[MDS组,根据MDS分型标准分为：难治性贫血组（RA组）6例、难治性血细胞减少伴有多系发育异常组（RCMD组）11例、难治性贫血伴原始细胞增多组（RAEB组）5例]和8例正常健康者骨髓单个核细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞占CD4^＋ T细胞比例;提取骨髓单个核细胞RNA,采用RT-PCR检测FOXP3基因的表达水平。结果MDS组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;RA组、RAEB组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）;RCMD组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;RCMD组、RAEB组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与RA组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）;RA组、RCMD组CD4^＋ CD25^＋ Treg比例、FOXP3基因表达水平与RAEB组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论MDS患者CD4^＋ CD25^＋ Treg占CD4^＋ T细胞比例及FOXP3基因表达水平随预后危险级别的升高而升高,提示免疫异常是MDS疾病的发生、发展的一个促进因素。     

骨髓增生异常综合征CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子表达的研究

本研究检测骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子的表达，为进一步探讨MDS发病机制积累信息。以38例初治MDS患者为研究对象，依据FAB分型将他们进一步划分为RA／RARS、RAEB／RAEB-t组；以11例献血员为正常对照，应用流式细胞术检测两组外周血CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子CD28、CD154、CTLA-4、PD-1、CD25的表达。结果表明：MDS组CD28表达下降，CD154升高，CTLA-4、PD-1、CD25表达明显升高。随着疾病恶性程度的增高，RAEB／RAEB-t组CTLA-4、PD-1的表达以及CTLA-4／CD28比值亦较RA／RARS组升高。结论：MDS患者CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子表达存在异常改变，其表达异常可能在MDS的发病机制中起一定作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜发病中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者中的表达及意义。方法采用流式细胞技术分别检测20例健康人、33例初诊ITP患者,22例治疗后ITP患者CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25+CD127dimTreg细胞的表达水平。将初诊ITP患者根据病情分为重型组和轻型组,治疗后ITP患者根据治疗疗效分为治疗有效组和无效组。将各组计量资料进行统计学分析。结果初诊ITP患者CD4+CD25highTreg细胞、CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),且重型ITP组明显低于轻型ITP组(P<0.01,P<0.05),结果具有统计学意义。治疗后患者CD4+CD25highTreg细胞、CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例升高(P<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.05);治疗有效组CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例均高于治疗无效患者(P<0.05),结果具有统计学意义。结论 CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的表达水平在ITP发病、疾病进展中具有重要的临床意义。     

外周血中CD4~+CD25~+与CD8~+CD28~-调节性T细胞与Graves病的关系研究

目的分析Graves病(GD)患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T(Tr)细胞的变化。方法选择该院内分泌科门诊或住院部43例GD患者为研究对象,其中内分泌科门诊确诊的19例GD患者为试验初发组。接受治疗且甲状腺功能恢复正常的24例GD患者为治疗缓解组;选择同期健康体检者20例为健康对照组。采用流式细胞术检测3组外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr细胞水平。结果试验初发组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平为(4.56±4.14)%,明显低于健康对照组的(8.84±4.45)%,差异有统计学意义(P0.05),CD8+CD28-Tr细胞水平为(14.95±5.38)%,与健康对照组的(10.65±6.37)%比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗缓解组外周血中CD4+CD25+Tr细胞水平为(6.99±6.35)%,与健康对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),但其CD8+CD28-Tr细胞水平为(20.48±6.07)%,高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 CD4+CD25+Tr细胞水平可能与GD发病有关,CD8+CD28-Tr细胞可能与GD病程发展有关。     

人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA^＋CD25^＋Treg表达相关性探讨

目的探讨人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA的表达与CD4^＋CD25^＋Treg表达的相关性。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4^＋CD25^＋Treg的比例。结果哮喘患儿组CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4^＋CD25^＋Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4^＋CD25^＋Treg发育障碍的重要因素。     

骨髓增生异常综合征患者CD4+CD25+调节性T细胞及血清白细胞介素-10表达水平的变化及意义

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及血清白细胞介素(IL)-10的变化及意义.方法 选取2010年10月至2012年12月江苏省兴化市人民医院血液科收治的23例初诊MDS患者为研究对象,纳入研究组,再根据MDS国际预后评分系统(IPSS)将其分为4个亚组,分别为高危型组(n=5),中危Ⅰ型组(n=11),中危Ⅱ型组(n=4),低危型组(n=3).选择同期于本院就诊的10例非恶性免疫性血液病患者纳入对照组.分别采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究组各亚组及对照组患者CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平,并运用统计学方法进行分析比较.研究组各亚组与对照组患者年龄、性别构成比等基线资料比较,差异均无统计学差异(P＞0.05).本研究遵循的程序符合江苏省兴化市人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员批准,征得受试对象的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①研究组CD4+ CD25+ Treg比例和血清IL-10表达水平分别为(6.89±1.28)％和(7.02±1.83) μg/L,显著高于对照组的(2.72±0.46)％和(3.72±1.76) μg/L,差异均有统计学意义(t=5.263,3.824;P＜0.05).②研究组4个亚组中,CD4+CD25+ Treg比例及血清IL-10表达水平整体比较,差异均有统计学意义(F=10.464,9.898;P＜0.05).其中,低危型组和中危Ⅰ型组,以及中危Ⅱ型组和高危型组CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);而低危型组和中危Ⅱ型组,低危型组和高危型组,中危Ⅰ型组和中危Ⅱ型组,以及中危Ⅰ型组和高危型组CD4+ CD25+ Treg比例及血清IL-10表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③研究组中,MDS患者外周血CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平呈正相关关系(r=0.326,P=0.022).结论 CD4+ CD25+ Treg的数量和(或)功能失衡在MDS的发生、发展过程中起着重要作用,且CD4+ CD25+Treg比例及血清IL-10表达水平随预后危险级别的升高而升高,提示免疫异常是MDS发生、发展的一个促进因素.因此,CD4+ CD25+Treg有望成为MDS免疫靶向治疗的新靶点.     

糖尿病合并肺部感染外周血调节性T细胞的检测分析

目的 探讨糖尿病合并肺部感染与CD4+CD25+调节性T细胞的关系.方法 用流式细胞仪分别检测健康对照组32例,单纯糖尿病组20例,糖尿病合并肺部感染组23例的CD4+、CD8+、CD4+CD25+T细胞,计算出CD4+/CD8+、CD4+CD25+/CD4+的比值;用统计学方法比较各组T细胞亚群,用因子分析法分析糖尿病合并肺部感染者T细胞亚群等常见因素的内在联系.结果 糖尿病、糖尿病合并肺部感染组CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD25+/CD4+比健康对照组高,CD4+、CD4+/CD8+比健康对照组低,且差异有统计学意义;糖尿病合并肺部感染者年龄、病程、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+ 、CD4+CD25+ 、CD4+CD25+/CD4+7个指标之间存在中等偏强的内在联系.结论 CD4+ CD25+T细胞升高可能是糖尿病合并肺部感染难治的原因之一,糖尿病合并肺部感染者常见的7项指标之间存在一定的内在联系.     

调节性T淋巴细胞与反复体外受精-胚胎移植的研究

目的探讨外周血中调节性T淋巴细胞与反复体外受精-胚胎移植失败之间的相关性。方法用双荧光标记流式细胞分析技术,检测20例原因不明反复体外受精-胚胎移植失败患者、20例正常非孕妇女及18例第一周期体外受精-胚胎移植成功妇女外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞及CD4^＋CD25^highT细胞的水平。结果反复体外受精-胚胎移植失败患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞及CD4^＋CD25^highT细胞的百分率分别为（7．89±1．16）%和（1．06±0．33）％,低于正常非孕组的（11．73±1．05）％（P〈0．01）和（1．36±o．53）％（P〈0．05）,也低于第一周期体外受精-胚胎移植成功组的（9．67±1．87）％（P〈0．05）和（1．39±0．37）％（P〈0．05）。结论外周血中调节性T细胞的减少可能与反复体外受精-胚胎移植失败的发生有关。     

CD4+CD25+和CD8+调节性T细胞的作用机制

调节性T细胞（Treg）主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对CD4^＋和CD8^＋效应性T淋巴细胞的增殖起抑制作用,因此在移植物抗宿主病、自身免疫病、过敏性疾病等的发病机制和临床治疗中有潜在的应用价值.本文重点介绍CD4^＋CD25^＋Treg和CD8^＋Treg的作用机制,并简述调节性T细胞研究面临的挑战与展望.