病毒性乙型肝炎与PHSAR相关性探讨

采用ELISA法对1344例临床血清标本进行乙肝病毒(HBV)标志物和多聚人血清白蛋白受体(PHSAR)检测,在HBV标志物阳性者314例中,PHSAR阳性107例占34.1％,在HBsAg、HBeAg、抗-HBc三者同时阳性的81例中,PHSAR阳性54例占66.67％;在HBsAg、抗-HBe、抗-HBc同时阳性的125例中,PHSAR阳性15例占12.0％;在HBsAg、抗-HBc阳性的67例中,PHSAR阳性25例占37.3％;而在HBsAg阴性1030例标本中PHSAR均为阴性,提示PHSAR可作为HBV感染急性期及病毒复制的标志之一,其存在表明HBV在体内复制活跃,传染性较强。     

聚合人血清白蛋白受体试剂研制与临床应用

本文应用ELISA技术研制建立成套试剂,检测病人血清中聚合人血清白蛋白受体(PHSAR)。对试剂的精密度、特异性、稳定性、敏感性及准确性进行了研究;并与放射免疫(RIA)固相法进行比较,其符合率为92.6%。经临床检测411例病人,结果乙肝病人PHSAR检出率为49.5%(35/71),门诊可疑乙肝病人阳性率为27.4%(93/340),健康体检者检出率10.5%(13/124),HBsAg(一)供血员80例阳性率为0%。另对PHSAR与HBsAg、HBeAg的关系进行了探讨。     

硝酸纤维素膜酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒核心抗原

将待测血清中乙型肝炎病毒(HBV)与抗-HB_s制成复合物,抽滤浓集于硝酸纤维素膜上,经3mol/L NaCNS处理后直接用酶标记抗-HBc染色。其方法简便易行,敏感性、特异性和重复性均可满足常规工作要求。测定结果表明,血清HBcAg与HBsAg、抗-HBc、聚合人血清白蛋白受体(PHSAR)密切相关,可显著提高乙肝诊断水平。     

乙肝病毒外膜大蛋白检测及其对判定HBV DNA复制的意义

 目的 探讨血清乙肝病毒外膜大蛋白(LHBs)检测对于判定HBV DNA复制的临床意义.方法采用酶联免疫方法检测LHBs,Pre - S1和HBV M,采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA.结果(1)在HBeAg阳性血清中,HBV DNA与LHBs、Pre -S1之间的阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);(2)在HBeAg阴性血清中,HBV DNA与LHBs的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).HBV DNA与Pre -S1之间的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05);(3) 90份乙肝患者血清中LHBs水平与HBV DNA拷贝数呈良好相关性(r=0.918),Pre - S1水平与HBV DNA拷贝数的相关系数为0.765.结论 血清LHBs水平能反映HBV DNA复制程度,其与HBV DNA的相关性优于pre - S1,可作为评判HBV DNA复制新的血清学指标.     

乙肝病毒外膜大蛋白检测的临床意义

目的:探讨乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)检测的临床意义.方法:随机选取203例乙肝患者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-LP、Pre-S1蛋白及HBV M,实时定量PCR方法检测HBV DNA.结果:LP的检出阳性率与HBV DNA的检出阳性率相关性具有统计学意义,且HBV DNA 拷贝数的对数值与HBV-LP 表达具有相关关系(r＝0.902);LP检出阳性率与Pre-S1蛋白检出阳性率差异具有统计学意义;不同HBV M模式检测LP检出阳性率差异不具有统计学意义,但26例HBeAg阴性患者血清LP检测为阳性.结论:血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性;血清中HBV-LP的检测是对HBV M检测的补充.     

血清病毒检出核苷(酸)类似物耐药突变的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突变特点分析

目的分析经核苷(酸)类似物治疗并已在血清病毒中产生耐药基因突变的慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)反转录酶(RT)区的基因突变特点。方法收集2010年7月-2011年8月于解放军302医院住院的慢性乙肝患者30例,均经6个月以上的核苷(酸)类似物抗病毒治疗并已在血清中检测到耐药相关突变。采集与血清检测同一时间点的全血标本30份并分离PBMCs,提取总DNA,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化+滚环扩增+跨缺口PCR方法扩增HBV cccDNA的RT区,分析9个位点的核苷(酸)类似物耐药相关变异。结果 30份样本中,16例检出HBV cccDNA,检出率为53.3%,PBMCs中HBV cccDNA检出率与HBeAg阳性率、血清ALT水平及血清HBVDNA载量均无显著相关性。在16例HBV cccDNA检出者中,B基因型5例,占31.3%,C基因型11例,占68.8%,与血清HBV基因分型结果一致。但是,与血清HBV均检出耐药突变株不同,16例PBMCs cccDNA中检出的病毒均是无核苷(酸)类似物耐药相关突变的野生株。结论在经核苷(酸)类似物治疗的慢性乙肝患者血清中HBV DNA产生耐药突变的情况下,PBMCs中HBV cccDNA仍以原始野生株为优势种群,推测PBMCs可能是体内HBV野生株的"存储库"。     

HBV不同模式感染者血清HBV-DNA与Pre-S_2相关性研究

目的　探讨HBV感染者不同模式血清Pre S2 与HBV DNA之间的关系。方法　应用聚合酶链反应技术 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)对 742例HBV感染者血清 ,同时进行HBV DNA和Pre S2 检测。结果　HBeAg阳性血清中 ,HBV DNA和Pre S2 阳性率分别为 89.8%和 88 3 % ,均明显高于HBsAg阳性 (第二、三模式 )血清中HBV DNA(阳性率为 2 1 8%和 5 5 6 % )和Pre S2 (阳性率为 6 3 2 %和 81 2 % )的阳性率 (P <0 .0 1)。结论　HBeAg(+ )患者血清中 ,HBeAg ,HBV DNA和Pre S2 三者有较好的相关性 ,均可表示病毒复制活跃 ;HBsAg(+ )患者血清中 ,Pre S2 阳性率 (分别为 6 3 2 %和 81 2 % )明显高于HBV DNA阳性率 (2 1 8%和 5 5 6 % ) (P <0 .0 1) ,此时Pre S2 (+ )不能作为判断HBV复制活跃的确切指标。     

定量聚合酶链反应检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

采用信号引物能量转换定量聚合酶链反应（PCR）检测104例不同HBV感染患者血清HBV DNA含量。结果：不同HBV感染患者HBV含量范围在10^4.49-10^9.93拷贝／ml，其中急性乙肝含量显著低于慢性乙肝、乙肝后肝硬变和原发性肝癌患者的含量（P＜0.05和P＜0.01)；HBeAg( )患者的含量显著高于HBeAg(-)／抗－HBe( )患者的含量（P＜0.001)；相关分析显示：血清HBV DNA含量与血清ALT水平无明显相关。结论：HBV感染的慢性化可能与血清HBV DNA含量高有关，肝损伤与血清HBV DNA含量无明显关系；e系统血清传换后，HBV并未停止复制，只是复制水平降低，应用定量PCR检测血清HBV DNA含量有助于HBV感染患者预后的判断和重新评价HBV感染的自然史及HBVM的临床意义。     

慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。     

一种国产基因芯片用于乙型肝炎病毒P基因突变的检测

目的：验证国产基因芯片检测HBV—P基因突变的准确性和敏感性。方法：选择14例服用拉米夫定48周时HBV—DNA定量检测仍阳性的慢性乙型肝炎病人的血清标本，用HBV基因突变检测基因芯片检测患者血清中HBV—DNA聚合酶基因，观察发生YMDD变异的情况。同时用聚合酶链反应(PCR）技术扩增上述血清标本中编码HBV—DNA聚合酶的P基因片段并直接测序，以对比检查P基因发生YMDD变异的情况。结果：14例患者血清标本用基因芯片均检出HBV—DNA，9例为野生株，5例发生YMDD变异，其中3例为M552I(YIDD)变异，2例为M552V(YVDD)变异，同时均伴有L528M变异。与用PCR扩增产物直接测序的结果完全相同。结论：国产HBV基因突变检测芯片具有特异性强、灵敏性高、快速、简便等优点，可以替代繁琐的DNA序列测定和分析，可作为临床监测HBV—DNA变异的常规方法。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

1348例小儿血清乙肝病毒标志物模式状态的临床分析

近年来,我院采用ELISA法检测了1348例小儿乙型肝炎病毒(HBV)各类感染人群和各型乙型肝炎血清中HBV—M,现就其各种模式状态与临床的关系分析如下。     

慢性乙型肝炎1 646例肝脏组织学病变与血清HBV-DNA定量关系的研究

目的　观察慢性乙型肝炎 (CHB)肝脏病变程度与血清HBV DNA定量水平的关系。方法　对 1 646例CHB以Menghini法行肝脏穿刺活体组织学检查和应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术进行血清HBV DNA定量检测,其中 142例CHB患者于 0 5~8年后再次行肝脏穿刺活体组织学检查,并将其肝脏病变与血清HBV DNA定量的关系进行了近期及远期动态观察。结果　血清HBeAg阳性的CHB患者肝脏病变程度与血清HBV DNA定量水平并不相关 (P>0 05 ),但HBeAg阴性患者则显著相关 (P<0 05 )。动态观察显示无论HBeAg阳性与阴性的CHB患者,血清HBV DNA定量持续高水平者其远期肝脏病变较降为低水平的CHB患者明显加重 (P<0. 05 )。结论　血清HBV DNA定量水平可作为HBV DNA阴性CHB患者肝脏病变程度的有效预测指标。血清HBV DNA定量持续高水平的CHB患者预后差。抗病毒治疗是CHB患者的治疗关键。对CHB患者动态复查血清HBV DNA定量有助于预测远期预后。     

昆明地区HBV感染的免疫学调查

目的 调查昆明地区HBV感染血清模式的分布特征,探求其免疫相关机制.方法 调查2000-2006年昆明地区的98 462例血清"两对半"检测结果,并选取其中涵盖了全部HBV感染模式的426份血清,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量,同时检测血清ALT及AST活性.以50份HBV血清标志全部阴性血清为对照.结果 共发现12种HBV感染血清模式,其中4种模式:"HBeAAg( )","HBeAg( )、抗-Hbe( )、抗-HBc( )","HBeAg( )、抗-HBc( )","HBsAg( )、HBeAg( )、抗-Hbe( )、抗-HBc( )"模式检出率均较低(P＜0.05),属于少见模式;在其余8种模式中,"HBeAg( )"模式检出率低于另外7种模式(P＜0.05),在12种模式中,"大三阳"模式、"HBsAg( )、抗-HBc( )"模式及4种少见模式HBV-DNA阳性率、复制水平及血清ALT和AST活性异常增高率均较高(P＜0.05);"抗-HBs( )、抗-Hbe( )、抗-HBc( )"模式及"抗-Hbe( )、抗-HBc( )"模式的HBV-DNA阳性率分别为6.0%(3/50)、8.0%(4/50),HBV-DNA平均含量为1.074×103copies/ml,同时伴有2.0%(1/50)及6.0%(3/50)的血清ALT或AST异常升高,显著高于对照组(P＜0.05).结论 昆明地区HBV感染血清模式丰富,以7种模式较常见;近年来随着少见模式的出现,临床应加强对HBV复制及肝功能指标的观察以监测病情的活动性,一些被认为仅是既往感染而非"乙肝"标志的血清模式也可能出现HBV复制和肝功能异常,应引起临床重视.     

应用荧光定量聚合酶链反应检测血清、肝组织中HBV-DNA含量观察HGV感染对慢性乙型肝炎HBV复制的影响

目的　探讨庚型肝炎病毒 (HGV)感染对慢性乙型肝炎 (CH B)患者乙型肝炎病毒 (HBV)复制的影响。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、过氧化物酶与抗过氧化物酶复合物 (PAP)法免疫组织化学、荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 6例CH B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测 ,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA ,HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量进行了对比研究。 结果　血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为 8例 (1 4 3 % )、1 0例 (1 7 9% )。血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关 (P <0 .0 1 ) ,但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达。血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　HGV感染对CH B患者HBV复制无影响。肝脏是HGV的复制场所 ,但可能亦有肝外组织器官中复制。HGV至多具有微弱的致病性 ,但仍然需要进一步研究。     

生物素标记HBV RNA探针的制备及应用

本文首次采用SP_(65)特殊质粒与人类的乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)重组。制备了Bio—HBV RNA探针,能特异地与HBV DNA杂交。并将该探针与缺口转移(Nick—translation)方法标记的Bio—HBV DNA探针进行了比较。结果显示出Bio—HBV RNA探针的敏感性比Bio—HBV DNA探针的敏感性提高10倍。本实验还分别应用了两种探针同时检测了70例乙肝病人血清中HBV DNA。阳性率各为31.42％,28.57％(P>0.25)。并对Bio—HBV RNA探针应用于临床检测乙肝病毒DNA的效能进行了初步的探讨。     

多聚人血清白蛋白受体的检测及临床意义

多聚人血清白蛋白(PHSA—R)出现于人受乙型肝炎病毒(HBV)感染后的血清中,它与HBV复制指标HBeAg之间密切相关,它的出现提示HBV在复制,传染性强,病情在活动。为了探讨它与HBeAg之关系,及阐明其临床意义,我科对105例肝病患者血清中PHSA—R进行了检测。105例中所受HBV感染者98例(包括3例肝硬化)及7例非乙型肝炎病毒感染者,现将结果小结于下。 临床资料 一、一般资料:105例患者均系我科1987年元月～9月住院患者;年龄分布于5～55岁之间,     

斑点杂交试验检测血中乙型肝炎病毒DNA的应用

斑点杂交技术(又称32PHBV—DNA探针),是近年建立的检测乙型肝炎病毒(HBV)感染的特异性强、灵敏度高的方法,对乙型肝炎的研究有重要意义。我们应用这一新技术检测HBV感染各类患者的血清HBV—DNA。现将结果报告如下:     

前—S2蛋白与HBeAg,HBV—DNA及肝组织内HBcAg,HBsAg的初步研究

本文对各型HBV感染者50例的同份血清作了Pre-S_2蛋白与HBeAg、HBV-DAN检测,并与同期肝组织内HBcAg,HBsAg的关系进行了初步研究。50例HBV感染者均系1984～1988年收治的患者,其中重型肝炎9例,慢性活动性肝炎(CAH)18例,无症状HBsAg携带者(AsC)18例,甲乙型肝炎重叠感染者5例。 检测方法:(1)血清Pre-S_2蛋白ELISA检测药盒及血清HBV-DVA(斑点杂交试验)药盒均(?)北京医科大学肝病研究所提供。(2)HBeAg(?)-HBe药盒由302医院免疫室提供(ELISA)     

乙肝患者血液、精液、唾液及尿液中HBV-DNA等的检测

本文采用斑点杂交法和放射免疫法检测乙肝患者血液、唾液、尿液以及精液中的HBV-DNA和DNA-P。血清中HBV-DNA和DNA-P的阳性检出率基本一致。精液、唾液和尿液中HBV-DNA阳性者,血清中HBV-DNA均阳性。血清中HBV-DNA阴性者,唾液、尿液中均未检出HBV-DNA。血清中HBeAg阳性与否,在血清、精液,唾液、尿液中均能检出HBV-DNA。文章认为:(1)血清中HBV—DNA、DNA-P的检出率最高,传染性较强。(2)血清中HBeAg阴性者,四种体液中亦可检出HBV-DNA,不能排除其传染性。(3)唾液中HBV—DNA的检出率为45.45％,其流行病学意义值得重视。(4)精液中检出HBV-DNA,父系垂直传播也是值得研究的一个问题。