大鼠脑梗死灶周围巨噬细胞游走抑制因子的表达及其变化规律

目的研究大鼠脑梗死灶周围巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的表达及变化,探讨MIF在脑梗死过程中的作用及意义。方法采用电凝法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为假手术组8只和脑梗死组48只,其中脑梗死组又分为4 h、12 h,1 d、3 d,1周、2周6个时间点,每个时间点8只,应用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR技术检测脑梗死大鼠梗死灶周围MIF蛋白含量及其mRNA的表达水平。结果脑梗死组大鼠梗死灶周围MIF蛋白及mRNA表达在梗死后逐渐升高,梗死后4 h、12 h,1 d、3 d明显高于对照组(P<0.05)。大鼠梗死灶MIF蛋白含量与mNSS评分和MIF mRNA呈正相关(r=0.661,P=0.000;r=0.733,P=0.000)。结论大鼠脑梗死灶周围MIF蛋白及其mRNA表达水平呈先增高后恢复正常的变化规律,提示MIF在脑梗死病变过程中发挥重要作用。     

脑缺血再灌注大鼠局灶性脑缺血预处理后Nogo-A及NgR的表达

目的观察局灶性脑缺血预处理干预后大鼠脑内Nogo-A、NgR表达的情况。方法建立脑缺血再灌注及预处理模型,将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血预处理组,每组又分为1、2、7 d 3个亚组,预处理时间为10 min,免疫组化法检测大鼠缺血海马区Nogo-A、NgR的表达,RT-PCR方法检测大鼠缺血海马区NgR mRNA的表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组在1、2、7 d 3个时间点Nogo-A及NgR表达均增高;脑缺血预处理干预后,Nogo-A及NgR在各个时间点的表达较缺血再灌注组均明显降低(P<0.05)。结论局灶性脑缺血预处理的干预可以降低大鼠脑内Nogo-A及NgR的表达而提高脑缺血耐受的神经保护作用。     

外周型苯二氮卓受体在大鼠肝星状细胞上的表达

目的:探讨外周型苯二氮卓受体(PBR)在大鼠肝星状细胞(HSC)上的表达。方法:采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养大鼠HSC;应用实时监测荧光定量PCR技术(RT-PCR),于造模第4、6、8周时检测大鼠HSC PBR mRNA的水平。结果:在第4、6、8周时模型组大鼠较同期正常组大鼠的HSC PBRmRNA的表达量明显增加(P<0.01);模型组大鼠随着造模时间的延长,HSC PBR mRNA的表达量逐渐增加,差异有显著性意义(P<0.01或P<0.01);而不同时期正常组大鼠HSC PBR mRNA的表达差异无显著性意义。结论:肝纤维化过程中,HSC PBR mRNA的表达水平显著增加。     

胞二磷胆碱、硫酸镁联用对大鼠局灶脑缺血后梗死体积、细胞凋亡及Caspase-3 mRNA表达的影响

目的研究胞二磷胆碱、硫酸镁联用对局灶脑缺血大鼠的神经保护作用。方法用大脑中动脉栓塞法制作局灶脑缺血模型,观察胞二磷胆碱、硫酸镁单用及不同剂量联用7天后,大鼠神经功能缺损、脑梗死体积、凋亡细胞数及Caspase-3 mRNA表达。结果与对照组相比,胞二磷胆碱、硫酸镁单用及两药联用组脑梗死体积较小,Caspase-3mRNA表达、凋亡细胞数均较少,差异有显著性(P<0.05)。两药联用组脑梗死体积、Caspase-3 mRNA表达、凋亡细胞数较两药单用组减少(P<0.05)。不同剂量两药联用组相比各项指标均无显著差异(P>0.05)。结论胞二磷胆碱与硫酸镁联用对局灶脑缺血的神经保护有协同作用。     

不同程度慢性间歇低氧对大鼠齿状回Nogo-A和NgR表达的影响

目的观察不同程度慢性间歇性低氧对大鼠齿状回神经细胞Nogo-A和NgR的影响及意义。方法将成年雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、5%间歇低氧组、10%间歇低氧组,每组15只。又按时间分为7、14和28d 3个时间点,每个时间点5只。5%间歇低氧组和10%间歇低氧组分别暴露于间歇性低氧条件下(暴露时间8h/d)。HE染色观察齿状回神经细胞形态变化,应用免疫组织化学法检测Nogo-A和NgR的表达水平。结果与对照组比较,5%间歇低氧组和10%间歇低氧组齿状回神经元结构受损,神经元密度明显减少(18.45±3.05,22.36±2.96 vs 28.96±4.12,P<0.05),于28d达高峰,且以5%间歇低氧组更显著(P<0.05);各时间点Nogo-A和NgR蛋白表达均增加(P<0.05),于28d达高峰,以5%间歇低氧组更显著(P<0.05)。结论不同程度慢性间歇性低氧可以引起大鼠齿状回Nogo-A和NgR表达水平增加,神经元结构受损和密度减少,可能与其抑制神经纤维修复有关。     

二甲双胍对糖尿病大鼠心肌病理变化及凋亡相关基因的影响

目的观察二甲双胍对2型糖尿病大鼠心肌病理变化及心肌细胞中survivin、p27、c-myc及c-fos mRNA和蛋白变化的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,35只糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和二甲双胍组,另选15只大鼠作为正常对照组。喂养6周后,利用光镜和病理染色观察心肌病理改变,用RT-PCR检测心肌survivin、p27、c-myc及c-fos mRNA表达,用Western blot检测心肌survivin、p27、c-myc及c-fos蛋白表达。结果正常对照组心肌纤维排列整齐,心肌间质及血管周围间质成分少;糖尿病组心肌细胞肥大、水肿,心肌纤维排列紊乱,细胞间隙增宽,心肌间质成分明显增多,血管周围基质明显增多,可见较多炎性细胞浸润;二甲双胍组心肌纤维排列整齐,细胞间隙较窄,心肌间质和血管周围基质较少,少量炎性细胞浸润。二甲双胍组c-fos mRNA和蛋白的表达与正常对照组比较无显著性差异,但明显高于糖尿病组(P<0.05);二甲双胍组p27 mRNA和蛋白的表达明显低于正常对照组(P<0.05),且与糖尿病组比较无显著性差异(P>0.05);二甲双胍组c-myc mRNA和蛋白的表达与正常对照组和糖尿病组比较无显著性差异(P>0.05);二甲双胍组survivin mRNA和蛋白的表达低于正常对照组,高于糖尿病组,但无显著性差异(P>0.05)。结论糖尿病大鼠心肌病理改变与survivin、p27、c-fos mRNA及蛋白表达有关。二甲双胍对糖尿病心肌具有保护作用,其分子机制可能与改变心肌c-fos mRNA及蛋白的表达有关,而可能与survivin、p27、c-myc mRNA及其蛋白表达水平无关。     

辛伐他汀对COPD模型大鼠凋亡相关蛋白caspase-3的影响

目的探讨辛伐他汀对COPD模型大鼠肺组织凋亡相关蛋白caspse-3表达的影响。方法将30只大鼠随机分为正常组、对照组和治疗组,治疗组和对照组采用熏香烟加气管内滴入LPS法建立大鼠COPD模型,香烟暴露2周后治疗组给予辛伐他汀2.5 mg/kg治疗6周,正常组不作干预。8周后处死所有大鼠,HE染色观察大鼠肺组织病理改变,应用RT-PCR及免疫组织化学技术检测大鼠肺组织caspase-3基因及蛋白的表达。结果①肺组织病理学:对照组可见肺气肿和气道周围炎症性改变,治疗组肺气肿及气道周围炎症浸润较对照组减轻。②RT-PCR结果:与正常组相比,对照组和治疗组caspase-3 mRNA表达增多(P均<0.05);与对照组相比,治疗组caspase-3mRNA表达减少(P<0.05)。③免疫组化结果:与正常组相比,对照组和治疗组caspase-3表达增多(P均<0.05);与对照组相比,治疗组caspase-3表达减少(P<0.05)。结论辛伐他汀通过降低caspase-3基因及蛋白的表达,减少COPD大鼠肺组织细胞凋亡,在COPD中起到保护性作用。     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨外源性IL-10对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA表达的影响.方法:60只清洁级SD雄性大鼠,随机分为生理盐水对照组(N组,8只)、CCl4组(C组,28只)和IL-10干预组(I组,24只)3组,于造模第7周和第11周分别随机选取一批大鼠,分离肝星状细胞并提取总RNA,以半定量RT-PCR方法检测各组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA表达的水平.结果:随着肝纤维化的进展,C组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA的表达增加并呈增强趋势(与N组比较,P＜0.01;与第7周比较,Col-ⅠP＜0.01;Col-Ⅲ P＜0.05).造模第7周,Ⅰ组Col-Ⅲ mRNA的表达量低于C组(P＜0.01);造模第11周,两种胶原Ⅰ组的表达量均进一步下降(与C组比较,P＜0.01;与第7周比较,Col-ⅠP＜0.05;Col-ⅢP＜0.01),与正常组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:随着肝纤维化进展,肝星状细胞内Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA的表达增加,外源性IL-10能显著降低两者的表达.     

双丁酸环腺苷酸促进脑缺血再灌注大鼠轴突再生和运动功能恢复

目的 观察给予外源性环腺苷酸类似物--双丁酸环腺苷酸(db-cAMP)对脑缺血再灌注(I/R)大鼠轴突再生、患肢运动功能恢复、RhoA信号通路活动的影响,探讨其临床应用可能性及机制.方法 将大鼠分为正常组、假手术组、脑I/R对照组、脑室注射生理盐水组(生理盐水组)和脑室注射db-cAMP组(db-cAMP组),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉I/R模型,脑室灌注在造模前完成.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测缺血灶周边脑组织生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA和RhoA mRNA的表达,用Zea Longa评分法对患肢运动功能进行评分. 结果脑I/R对照组大鼠缺血灶周边脑组织GAP-43 mRNA的表达在造模术后6 h略有降低,第24小时开始增高,第7天达到高峰,第14天开始降低但仍高于假手术组(P＜0.05,P＜0.01).脑I/R对照组大鼠缺血灶周边脑组织RhoA mRNA表达于造模术后6 h开始增高,第48小时达到高峰,之后开始下降,第7天和14天仍高于假手术组(P＜0.01).db-cAMP组大鼠缺血灶周边组织GAP-43 mRNA在造模术后各时间点均高于脑I/R对照组和生理盐水组大鼠,第7天最显著(P＜0.05,P＜0.01).db-cAMP组大鼠缺血灶周边组织RhoA mRNA在造模术后各时间点均显著低于脑I/R对照组和生理盐水组大鼠(P＜0.05,P＜0.01).脑I/R对照组,生理盐水组和db-cAMP组大鼠在造模术后各时间点神经功能缺损评分呈相同变化趋势, db-cAMP组大鼠在造模术后第14天神经功能缺损评分显著低于脑I/R对照组和生理盐水组(P＜0.05).结论 db-cAMP能够促进脑I/R损伤轴突再生和运动功能的恢复,其机制与抑制RhoA信号通路活动有关.     

B型钠尿肽在大鼠心肌纤维化中的变化及卡维地洛的干预作用

目的研究异丙基肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌纤维化过程中血清B型钠尿肽(BNP)和心肌BNP mRNA表达变化的意义,以及β-受体阻断剂卡维地洛的干预作用。方法将46只SD大鼠随机分为4周模型组(n=10)、8周模型组(n=9)、卡维地洛组(n=11)、4周对照组(n=8)和8周对照组(n=8)。模型组及卡维地洛组大鼠给予皮下注射ISO 10mg.kg-1.d-1,两个对照组给予皮下注射等量0.9%氯化钠溶液,共7d,至4周时,将4周模型组和4周对照组大鼠处死,同时卡维地洛组开始给予卡维地洛10mg.kg-1.d-1灌胃,8周模型组和8周对照组给予等量蒸馏水灌胃,共4周,至第8周末处死剩余大鼠,各组大鼠均测心重指数(HWI),MASSON染色后测心肌胶原积分(CVF),ELISA法检测血清中BNP水平,RT-PCR法检测心肌BNP的mRNA表达。结果 4周模型组HWI、CVF、血清BNP水平及心肌BNP mRNA表达较4周对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);8周模型组较4周模型组上述指标均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。血清BNP与心肌BNP mRNA表达呈正相关(r=0.647,P<0.01)。卡维地洛组与8周模型组比较,上述指标水平均下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BNP可作为心肌纤维化早期诊断和严重程度的指标,卡维地洛可以有效改善心肌纤维化严重程度,降低血清BNP水平,使BNP的表达量降低。     

强制性运动疗法对脑缺血后大鼠神经功能重塑的影响及机制探讨

目的 观察强制性运动疗法对脑缺血后大鼠神经功能重塑的影响,并探讨其机制.方法 将90只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、运动疗法组各30只,3组大鼠均用3.5％水合氯醛1 mL/kg腹腔麻醉,取左侧颈部直切口,分离左颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉（ECA）,电凝ECA分支,离断ECA.假手术组到此步为止,模型组、运动疗法组制备左侧大脑中动脉闭塞模型;脑缺血模型成功后7d,运动疗法组建立强制性运动疗法模型.参照改良的Bederson氏6级评分标准对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用原位杂交检测缺血侧大脑皮质及梗塞灶边缘区Nogo受体（NgR）及轴突再生脑源性神经营养因子（BDNF） mRNA,免疫印迹检测NgR、BDNF蛋白.结果 与模型组比较,运动疗法组在制模后2、4、8周神经功能缺损评分明显降低,NgR mRNA及蛋白表达降低,BDNFmRNA及蛋白表达升高（P均＜0.01）.结论 强制性运动疗法可以明显改善大鼠脑缺血后神经功能,其机制可能与下调NgR的表达、上调BDNF表达,从而促进神经功能重塑有关.     

用定量RT-PCR方法检测脑梗死半影区内凋亡相关基因的表达

目的 建立脑梗死后脑组织凋亡相关基因表达定量检测的精确、可靠的方法.方法 采用SYBR Green荧光定量RT-PCR法,结合免疫组织化学,测定自发性高血压大鼠脑梗死后不同时相点几种凋亡相关基因的表达水平,包括：caspase 3/CPP32、rIAP、caspase 2等,同时比较其与半影区凋亡细胞数的相关性.结果 在脑梗死半影区,凋亡细胞数量自3 h开始逐渐升高,24 h达到高峰,然后保持较高水平.而caspase 3/CPP32自8 h才升高,12 h达到高峰,3 d时便迅速回落到正常水平,而rIAP,在8 h升高一倍,然后迅速降至正常,caspase 2表达水平在脑梗死后与假手术组比较无明显改变.结论 caspase 3/CPP32是影响神经元凋亡的重要因素,但非唯一的和必不可少的,在脑缺血后,caspase 3/CPP32等的激活或许与神经元凋亡的加重有关.     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后血管生成素-1和-2的动态表达变化

目的检测相关细胞因子血管生成素-1(Ang-1)、Ang-2在大鼠局灶性脑缺血／再灌注后表达的动态变化。方法采用免疫组化及原位杂交技术。结果在正常脑组织及缺血／再灌注后均发现Ang-1蛋白及Ang-1 mRNA的中等程度的广泛表达，在再灌注48h时达到高峰，此后虽有所下降，但仍为持续的阳性表达。Ang-2蛋白及Ang-2 mRNA在对照组及假手术组中均呈阴性表达，在MCAO后6h于梗死灶内的一些单个细胞中发现，在12～24h后达到高峰，这种表达一直持续到72h。结论Ang-1、Ang-2在脑损伤的过程中起着重要的作用。     

大鼠局灶性脑缺血Activin A及其受体ActRⅡA表达变化及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血激活素A(Act A)及其受体ⅡA(ActRⅡ)的表达变化规律及意义.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用光镜、免疫组化方法检测大鼠局灶性脑缺血后梗死体积、病理变化,免疫组化染色观察Act A、ActRⅡA免疫阳性表达. 结果正常组织有极低水平的Act A、ActRⅡA表达,免疫组化显示缺血3 h后在周边区Act A、ActRⅡA阳性细胞数量显著高于假手术组(P<0.05),并随缺血时间延长而逐渐增高,于24 h达高峰.结论 局灶脑缺血损伤可诱导内源性神经元Act A高表达,并可能通过特异性跨膜信号受体ActRⅡA发挥靶源性作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Nogo-A表达和神经元凋亡

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后轴突生长抑制因子Nogo-A表达和神经细胞凋亡。方法：36只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、1d,2d、3d、7d、14d组,每组4只。应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,分别用TUNEL法和免疫组织化学法观察神经细胞凋亡和Nogo-A表达。结果：假手术组海马、皮质和纹状体区可见少量凋亡神经细胞。再灌注2h凋亡细胞逐渐增多,3～7h达高峰,随后下降。Nogo-A表达于再灌注2h开始明显增加,并一直保持在较高水平。结论：脑缺血再灌注后Nogo-A表达增高,细胞凋亡也增加。     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质胎盘生长因子及其受体Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响及其促进脑内血管再生的作用

目的 观察电针对SD大鼠局灶脑缺血再灌注后大脑皮质胎盘生长因子及其受体Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨电针促进局灶脑缺血再灌注后脑内血管再生的可能机制.方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组,将模型组和电针组分为局灶脑缺血2 h再灌注1、3和7天三个亚组.取双侧"合谷"穴为电针刺激穴位.采用免疫组织化学法检测胎盘生长因子及其受体Flt-1蛋白在缺血区大脑皮质的分布及其表达;逆转录聚合酶链反应检测缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和Flt-1 mRNA的表达;免疫印迹法定量检测缺血区侧大脑皮质胎盘生长因子蛋白的表达.结果 与正常对照组比较,模型组和电针组各时间点缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和蛋白及Flt-1 mRNA和蛋白的表达增加(P<0.05);电针组各时间点缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和蛋白及Flt-1 mRNA和蛋白的表达比模型组增加更为明显(P<0.05).结论 电针上调了局灶脑缺血再灌注大鼠缺血区大脑皮质的胎盘生长因子和Flt-1的表达,胎盘生长因子/Flt-1可能促进脑缺血后脑内血管再生.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡分子C/EBP同源蛋白的表达变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后凋亡分子C/EBP同源蛋白的表达变化,探讨该分子对神经细胞凋亡的影响。方法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,逆转录聚合酶链反应法、免疫组织化学染色分别测定大鼠脑缺血半暗带区再灌注后不同时相C/EBP同源蛋白mRNA及蛋白的表达变化;缺口末端标记法测定神经细胞凋亡。结果模型组C/EBP同源蛋白mRNA表达于再灌注后12h达高峰,其蛋白表达于再灌注后24h达高峰,与神经细胞凋亡变化趋势相平行。结论大鼠脑缺血再灌注可诱导C/EBP同源蛋白表达,C/EBP同源蛋白在缺血再灌注所致神经细胞凋亡中可能发挥重要作用。     

大鼠脑梗死后神经前体细胞移行及电针作用的研究

目的研究成年大鼠脑梗死后电针作用对内源性神经前体细胞移行的影响。方法采用易卒中型肾性高血压大鼠(RHRSP),电凝法凝闭大脑中动脉(MCAO)。用Garcia评分、HE染色、免疫荧光等方法观察电针对脑梗死后1周、2周、3周、4周大鼠脑内梗死灶体积,行为学评分及5-溴脱氧尿核苷(Bromodeoxyuridine,Brdu)、Doublecortin(DCX)阳性细胞数的干预作用,并与脑梗死组和对照组比较。结果电针治疗后前3周梗死体积较脑梗死组缩小(P<0.05);电针后2d与3d大鼠行为学评分较梗死组高(P<0.05);MCAO后梗死灶边缘有Brdu阳性细胞和DCX阳性细胞分布。电针组Brdu阳性细胞较脑梗死组明显增加(P<0.05),电针组DCX阳性细胞数在1周末明显高于脑梗死组(P<0.05)。结论电针促进神经功能恢复,减小脑梗死体积,并使缺血灶周移行的神经前体细胞增多,可能与其改变脑内微环境密切相关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对caspase-3表达的影响

目的观察雌二醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与caspase-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为假手术组（n=8）、手术对照组和雌二醇组。后两组又根据再灌注时间的不同各分为3、6、12、24h四个小组,每小组8只。线栓法制作脑缺血-再灌注（I/R）损伤模型。缺血2h分别再灌注3、6、12、24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及caspase3的表达。结果假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及caspase-3阳性细胞。雌二醇组较手术对照组脑梗死体积显著缩小（P〈0.05）,凋亡细胞数减少（P〈0.05）;caspase-3表达减弱（P〈0.05）。结论雌二醇通过下调caspase-3的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。