血清α-L-岩藻糖苷酶:一种新的诊断原发性肝癌的标志?

鉴于曾发现3例原发性肝癌(PHC)患者血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)活力增加,作者等进行一项研究,以探索AFU是否为PHC一个可能的标志。对32例PHC、24例转移性肝癌和36例肝硬化共96例患者作1.AFU,2.AFP,3.肝功能试验包括SGPT、SGOT、AKP、5′-NT、γ-GT、胆红素、PT、γ-球蛋白及白蛋白和4.肝闪烁摄象、     

血清α—l—岩藻糖苷酶对原发性肝癌诊断价值的进一步探讨

本文用显色多肽基质法检测血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)共167例,结果进一步证明AFU 检测对原发性肝癌(PHC)(72例)诊断敏感性及特异性分别达75. 0％及90. 5％;在 AFP 阴性或低滴度阳性 PHC 病例中的阳性率达83. 3％;AFU 与AFP 联合检测使诊断 PHC 的阳性率上升为93. 1％。且随病情好转和恶化而下降和上升。血清AFU 值 EdmondsonⅡ级肝癌明显高于Ⅲ级。PHC 肿瘤组织 AFU 含量明显低于非肿瘤组织,提示 AFU 为分泌型肝癌标志物。     

DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定

目的:提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶γ(DNA polymeraseγ,Polγ),鉴定其纯度和活性.方法:运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,并用Bradford法检测蛋白浓度.经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量,Western blotting验证蛋白.用α-~(32)P- dTTP掺入法,液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Polγ的活性.结果:成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,经SDS-PAGE鉴定,有一个大约140 kDa的亚基单位,Western blotting证实为Polγ.对其进行150倍纯化,收得率为6%,酶的总活力为4.81 U,比活力为36.17 U/mg.结论:HeLa细胞的线粒体Polγ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高,可用于体外药物线粒体毒性的检测.     

血清α-L-岩藻糖苷酶及超氧化物歧化酶对原发性肝癌诊断价值的探讨

本文报告检测血清α-L-岩藻糖苷酶(简称AFU)及超氧化物歧化酶(简称SODs)对原发性肝癌(简称PHC)的诊断价值。结果提示二种方法联合测定可提高诊断PHC的阳性率及正确率,AFU检测PHC的特异性高于SODs。SODs增高并非肿瘤患者所特有。提示单独检测SODs对PHC诊断价值不大。     

检测血清α-L-岩藻糖苷酶对原发性肝癌的诊断意义

应用ELISA法检测了54例原发性肝癌和其他肝病患者血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)水平。结果显示原发性肝癌患者血清AFU浓度显著高于其他疾病组和对照组(P<0.01)。AFU对原发性肝癌的诊断敏感性为74.1％,特异性为98.8％,准确度为88.9％,且AFU水平与甲胎蛋白(AFP)及肝癌直径大小之间无相关性,提示血清AFU检测对原发性肝癌的诊断及鉴别诊断有一定价值,尤其对AFP阴性肝癌及小肝癌具有更重要的意义。     

原发性肝癌血清α—L—岩藻糖苷酶活性升高的机制

为了探讨原发性肝癌血清α-L—岩藻糖苷酶(AFU)活性升高的机制,本文观察了人和鼠肝癌组织中AFU的变化以及原发性肝癌血清AFU,蛋白结合岩藻糖和AFU激活物的含量和相互关系。结果:人、鼠肝癌组织AFU比活性明显降低,而宿主肝AFU比活性升高并与相应血清AFU呈正相关;原发性肝癌血清中AFU、蛋白结合岩藻糖、AFU激活物含量都明显增高,但三者关系发生紊乱。提示原发性肝癌血清AFU活性升高是多因素综合作用的结果。     

DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定

目的: 提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶gamma(DNA polymerase gamma, Pol gamma), 鉴定其纯度和活性. 方法: 运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Pol gamma, 并用Bradford法检测蛋白浓度. 经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量, Western blotting验证蛋白. 用alpha-(32)P-dTTP掺入法, 液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Pol gamma的活性. 结果: 成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Pol gamma, 经SDS-PAGE鉴定, 有一个大约140 kDa的亚基单位, Western blotting证实为Pol gamma. 对其进行150倍纯化, 收得率为6%, 酶的总活力为4.81 U, 比活力为36.17 U/mg. 结论: HeLa细胞的线粒体Pol gamma通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高, 可用于体外药物线粒体毒性的检测.     

α—L—岩藻糖苷酶的研究进展

本文综述了近年来关于α-L-岩藻糖苷酶(AFU)研究的文献资料,重点反映检测血清AFU的临床应用价值,如良恶性肝病、糖尿病、卵巢肿瘤、白血病和岩藻糖苷(贮积)病患者血清中AFU活力变化情况及变化机理。对AFU基础研究、检测方法和有关动物实验也作了简要介绍。     

岩藻糖相关指标联合检测在原发性肝癌诊断中的应用价值

目的 探讨联合检测α-1,6岩藻糖基转移酶(FUT8)、岩藻糖基化的甲胎蛋白(AFP-L3)和α-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌(PLC)诊断中的应用价值.方法 选择92例PLC患者(PLC组)和42例非原发性肝癌患者(NPLC组),采用ELISA法检测血清FUT8和AFP-L3,采用电化学发光法检测血清AFU.结果 PLC组血清FUT8阳性62例(67％)、AFP-L3阳性69例(75％)、AFU阳性65例(71％),NPLC组分别为1例(2％)、3例(7％)、5例(12％);两组比较,P均＜0.05.FUT8诊断PLC的敏感性为67.39％、特异性为76.87％、准确性为91.04％,AFP-L3分别为75.00％、92.86％、80.60％,AFU分别为70.65％、88.10％ 、76.12％,三者联合检测分别为91.30％、90.48％、97.61％,三者联合检测诊断PLC的敏感性、准确性与单项检测比较,P均＜0.05.结论 血清FUT8、AFP-L3和AFU联合检测有助于PLC的诊断.     

血清α-L-岩藻糖苷酶对慢性乙型肝炎肝脏损害程度诊断价值的观察

血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)对原发性肝癌(PHC)诊断的较好敏感性和特异性,已受到临床的广泛重视。最近发现重型肝炎患者的病情的变化和死亡率与AFU活性变化也有密切关系。我们通过对593例慢性乙型肝炎患者的血清AFU的     

联合检测血清α-L-岩藻糖苷酶、甲胎蛋白对原发性肝癌患者的临床意义

探讨血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和甲胎蛋白(AFP)的联合检测对原发性肝癌(PHC)诊断的临床意义.应用自动生化分析仪测定正常人,非PHC的其它恶性肿瘤组,PHC组患者血清AFU的含量,应用时间分辨荧光免疫分析测定血清AFP含量.PHC、肝转移癌、胰腺癌均高于正常对照组(P＜0.01或P＜0.05),PHC阳性率高90.9%.AFU与AFP之间无相关性(P＞0.5).血清AFU在PHC中敏感性较高.联合检测AFU、AFP对明显提高PHC的诊断具有实用价值.     

血清α-L-岩藻糖酶、γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ对原发性肝癌诊断价值的研究

甲胎蛋白(AFP)是原发性肝癌(PHC)临床诊断中最特异的肿瘤标志物,但由于受肝癌细胞分化程度等因素的影响,阳性率最高不超过70％。1984年以来已有文献报道α-L-岩藻糖酶(AFU)活力测定可作为一种新的诊断PHC标志物以及它的诊断价值。我们选择具有特异性、敏感性的AFU及γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ(γ-GTP-Ⅱ)进行联合检测,以探讨其作为新的肿瘤标志物对PHC的诊断价值。     

特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:实现特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化并鉴定其生物学活性.方法:构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠杆菌DH5α,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行纯化、浓度检测,并鉴定其对肝癌细胞的结合活性,免疫组织化学检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性.结果:测序显示成功构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,表达96 h抗体收获量最大,二聚体表达量为30 mg/L菌液,为大肠杆菌的300倍.抗肝癌单链抗体二聚体BDM与三种肝癌细胞结合,而与正常肝细胞不结合,结合效价为1:128.免疫组织化学显示二聚体与肝癌组织结合的阳性率比肝硬化、胃癌、正常肝组织高,差异有统计学意义.结论:成功制备了高表达量、高特异性、较好的活性及稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM,为制备免疫纳米颗粒及开展肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗奠定了基础.     

肝癌患者血清AFP、AFU和SHCSP的联合检测

为探讨多种肝癌标志物联合检测对原发性肝癌的临床诊断价值。对79例经B超、计算机断层扫描(CT)诊断为肝癌的患者进行了甲胎蛋白(AFP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和特异性肝癌蛋白(SHCSP)的联合检测。单项AFP、AFU和SHCSP法在PHC组的阳性检出率分别为75．95％、72．15％及70．89％，AFP法与AFU法两项联检阳性率为91．14％，AFP法与SHCSP法两项联检，阳性率为89．87％，三项联检的阳性率97．47％，均显著高于任何单项检测的阳性率(χ^2＝15．87，P＜0．005)。AFU法和SHCSP法在19例AFP阴性的PHC病例中，阳性检出率分别为73．6％和68．42％。采用多种肿瘤标志物联合检测，可明显提高肝癌患者的诊断率，对肝癌的早期诊断，尤其对AFP阴性的肝癌诊断具有更重要的临床应用价值。     

幽门螺杆菌重组中性粒细胞激活蛋白蛋黄抗体的制备

目的:制备高效价的.抗Nap蛋黄抗体(IgY).方法:大量诱导、培养重组菌pQE30-NapA-DH5α获得重组蛋白Nap,经Ni2 -NTA树脂纯化后,Bradford法测定蛋白浓度.用纯化的Nap蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY.ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化.将效价高的Nap-IgY用硫酸铵沉淀法纯化浓缩,间接ELISA法检测效价,Bradford法测定蛋白含量.Western blot检测制备的Nap-IgY的抗体活性.结果:Nap重组蛋白主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.37 g/L.免疫鸡的蛋黄提取物可与Nap发生特异性反应,IgY效价随免疫时间增加而升高,在110 d达最高效价.经纯化浓缩后,Nap-IgY的效价为1:12800,蛋白浓度为23.67 g/L.结论:成功制备了高浓度、高效价的Nap特异性IgY.     

人血清反应因子基因的原核表达及鸡卵黄多克隆抗体的制备

目的 在原核系统中表达人血清反应因子(serum response factor,SRF)基因,制备鸡卵黄抗SRF抗体并鉴定其特性.方法 构建SRF表达载体PGEX-T-2-SRF,并在大肠杆菌中以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达.表达产物经谷胱甘肽-S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行鉴定.用纯化的SRF免疫海蓝白母鸡,制备鸡抗SRF抗体.抗体的效价及特异性用蛋白质印迹技术进行测定和分析,免疫荧光鉴定其在心肌细胞中的定位.结果 构建的重组质粒PGEX-4T-2-SRF在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清液中,纯化的SRF经SDS-PAGE鉴定呈单一条带.以纯化的SRF免疫制备了鸡抗SRF抗体.蛋白质印迹技术结果表明,该抗体可与原核表达的SRF特异性结合,抗体效价为1:5000.免疫荧光证实该抗体可以和心肌细胞的细胞核特异性结合.结论 在原核细胞中表达了SRF制备的鸡抗SRF的抗体对SRF能进行特异性结合.     

AIDS患者血浆α-L-岩藻糖苷酶(AFU)活性测定的分析

目的了解AIDS患者血浆α-L-岩藻糖苷酶(A F U)活性的检测情况。方法采用速率法对312例AIDS患者和102例正常人血浆α-L-AFU活性进行检测,对检测结果进行统计学分析。结果 AIDS患者AFU与正常对照组比较有显著差异(P0.01)。结论 AFU的检测在AIDS患者的病情监测中具有很重要的价值。     

肝癌血清AFP、CEA、GGT和AFU水平检测的临床意义

<正>肝癌临床确诊时多已处于中晚期,临床尚缺乏治疗中晚期肝癌的行之有效方案,早期诊断显得尤为重要~([1])。随蛋白质组学技术不断发展和分子生物学研究的不断深入,临床有关血清标志物的研究逐渐增多,每种标志物在肝癌诊断中有其独特优劣势~([2])。血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、γ-谷氨酰转肽酶同工酶(GGT)和α-L-岩藻糖苷酶(AFU)是现阶段应用于临床诊断原发性肝癌的常用肿瘤标志物~([3])。目前有关肝癌血清AFP、CEA、GGT和AFU水平     

柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1的分离纯化

目的 提取和分离纯化柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1.方法 使用40 mmol/L NH4 HCO3缓冲液作为提取液对柏树花粉致敏蛋白进行粗提取,利用离子交换层析初步纯化其主要致敏蛋白Cup a 1,收集400 mmol/L NH4 HCO3组分的洗脱液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对收...     

CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶抗体的制备及鉴定

目的制备CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)抗体,为其后续研究提供实验材料。方法体外表达CTX-M-38型ESBLs;采用扩散洗脱法回收与纯化CTX-M-38型ESBLs蛋白;采用传统动物免疫技术制备酶蛋白抗体;分别采用间接酶联免疫吸附试验、辛酸沉淀法及Western blot印迹杂交技术,完成抗体滴度检测、抗体纯化及特异性鉴定。结果 SDS-PAGE中约30 kD处出现明显蛋白条带;所制备酶蛋白抗体滴度为1∶16 000;Western blot印迹杂交显示不同稀释度的抗体均与同一蛋白条带(约30 kD)反应,此条带与CTX-M-38型EBSLs蛋白大小相一致。结论制备酶蛋白抗体滴度及特异性较好,可用于后续研究。