有机阴离子转运肽在药物转运中的作用

溶质运载蛋白家族（solute carrier family,SLC）和ATP结合盒转运蛋白家族(ATP binding cassette family,ABC)在药物吸收、消除和组织分布中起重要作用。本综述将对有机阴离子转运肽（organic anion transporting polypeptide,OATP）的最新命名、分类、组织分布、功能及在药物转运中的作用加以介绍。     

Mer-/-视网膜色素上皮细胞在吞噬光感受器外节盘膜中的基因表达谱的改变

目的： 研究在视网膜色素上皮细胞（RPE）吞噬光感受器外节盘膜（POS）时,由于RPE的Mer基因敲出（Mer-/-）后,所导致的基因表达谱的改变。 方法： 将RPE从Mer-/-小鼠（实验组）和野生型小鼠（对照组）中分离出后,并培养至第3代。在实验组和对照组中,将提取的POS加入含有20nMGas6和Protein S的培养液中,以激活Mer受体通道所介导的RPE特异性吞噬POS。在刺激吞噬后3小时和12小时终止实验,在两组中分别通过显微镜评价RPE吞噬POS的能力,通过基因表达谱芯片筛选出差异表达的基因。并且,在相同的实验条件下,在实验组和对照组中,分别重复3次吞噬实验,采用QPCR,对于其中5个差异表达的基因进行确认。 结果： 显微镜下观察到不论在3小时还是12小时,与对照组相比,实验组中内吞的POS颗粒少。在基因表达谱芯片中发现,反应3小时和反应12小时,实验组中分别有38个和45个已知基因上调,68个和59个已知基因下调。与对照组相比,实验组中RPE内吞POS能力的下降与基因表达谱中差异表达的基因相一致,比如,发现信号转导（WNT,MAPK）、吞噬（Vav3, Hsd11b1）、细胞骨架成份（Myo7a）和代谢等方面相关的基因在不同的时间点均有不同的表达谱改变。QPCR结果发现Vav3、Hsd11b1、Myo7a、Rtn2等基因的表达变化与基因芯片结果相一致。 结论： Mer-/-基因敲出后的RPE在吞噬过程中随时间变化而出现的不同的基因表达谱的改变,给研究Mer受体通道介导的RPE吞噬POS的分子机制提供了新的研究方向和线索,特别有利于MerTK基因突变所致的人类视网膜色素变性患者发病机制的研究。     

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的　观察血小板源性生长因子 (PDGF)对人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)增殖和移行能力的影响 .方法　将体外培养的第 46代人视网膜色素上皮细胞分为DMEM组(改良型Eagle培养液 )和含有 2 0mL·L-1小牛血清的DMEM组(2 0 g·L-1DMEM ) ,每组分别加入不同浓度 (0 .1,1,5 ,10 ,5 0和 10 0 μg·L-1)的PDGF ,然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用 ;应用hRPE损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察PDGF对hRPE移行的影响 .结果　①增殖作用 :0 .110 0 μg·L-1的PDGF均能促进hRPE的增殖 ,DMEM组 10 μg·L-1时促增殖作用最明显 ,增殖率达15 3% ;2 0 g·L-1DMEM组 5 0 10 0 μg·L-1的增殖率为 174% ,作用最强 .②移行作用 :PDGF能够显著促进hRPE的移行 ,并呈剂量依赖性 ,5 0 10 0 μg·L-1时促移行能力最强 ,DMEM组移行率为 5 10 % ,2 0mL·L-1FBS +DMEM组达 6 40 % .结论　PDGF能够促进hRPE的增殖和移行 ,有血清时可以加强这种作用 ,提示它在PVR的发病过程中可能发挥了重要作用     

IL-1β对人视网膜色素上皮细胞胶原合成的作用

目的：观察白介素－１β（ＩＬ－１β）对培养的人视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥＣ）胶原合成的作用,方法：用＾３Ｈ－脯氨酸参入和免疫细胞化学方法观察ＩＬ－１β对培养的人ＲＦＥＣ胶原合成活性的影响。     

白藜芦醇对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度白藜芦醇保护组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200mg/L过氧化氢,白藜芦醇保护组加入不同浓度(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)后加入200μmol/L过氧化氢。采用CCK-8检测细胞抑制率,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量。结果通过CCK-8法检测发现50mg/L、100mg/L白藜芦醇保护组作用2h,8h,24h可以明显降低细胞抑制率,且与氧化损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组50mg/L、100mg/L SOD活性与氧化损伤组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L 2h、8h、24h MDA含量与氧化损伤组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇对过氧化氢诱导的人RPE细胞氧化损伤有一定的保护作用,提示白藜芦醇对AMD的预防和治疗有一定的作用。     

肝脏、小肠、脑和肾脏中的转运子在药物消除和组织选择性分布中的作用

转运子在药物的体内处置过程中发挥着重要作用。多种转运子,如有机阴离子转运多聚肽、有机阴离子转运子及多药耐药相关蛋白以其广泛的底物特异性和转运子基因产物的多样性参与到机体的解毒系统中。由于转运子的组织选择性表达和底物特异性,转运子将在小分子药物向靶组织的传输中发挥重要作用。此外,多药耐药相关蛋白通过把它们的底物转运到组织外,从而在小肠、血脑屏障和血脑脊液屏障中发挥屏障作用。本文叙述了转运子的组织选择性分布及其在药物消除过程中的作用研究进展。     

结缔组织生长因子在TGF-β2诱导的视网膜色素上皮细胞纤维化中的作用

目的 探讨不同浓度2型转化生长因子-β(TGF-β2)对视网膜色素上皮细胞(RPE)生物学特性及纤维化指标结缔组织生长因子(CTGF)的调控.方法 RPE细胞分别用0,1,5,10,15 ng/ml TGF-β2处理,并用CCK-8检测细胞增殖活性确定合适的TGF-β2浓度范围.根据CCK-8结果确定后续实验分为0,1...     

金雀异黄素诱导培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 :探讨金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)的促凋亡作用 .方法 :将不同浓度的金雀异黄素作用于培养人视网膜色素上皮细胞 ,通过TUNEL染色和光、电镜的形态学观察 ,观察金雀异黄素对培养hRPE凋亡的诱导作用 .结果 :不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡 ,5 0mg·L-1 金雀异黄素作用 2 4h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现 ,作用时间在 2 4 ,4 8和 72h ,其凋亡细胞百分数的中位数分别为 7.6 % ,9.8%和 1 3.7% ;当金雀异黄素浓度为 75和1 0 0mg·L-1 时 ,以上 3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为 1 0 .3% ,1 6 .4 %和 2 3.4 % ;1 5 .4 % ,2 1 .2 %和 35 .8% .透射电镜观察 ,5 0mg·L-1 浓度作用于细胞 ,胞核内染色体出现边集 ,表现凋亡的早期征象 ;75mg·L-1 作用呈现典型的凋亡特征 ;1 0 0mg·L-1 作用于细胞 ,除凋亡细胞外 ,部分细胞出现胞质的进行性溶解 ,有胞膜破坏现象 ,坏死细胞比例增多 .结论 :金雀异黄素可诱导RPE凋亡的发生 ,并有剂量和时间效应关系 .1 0 0mg·L-1 金雀异黄素使RPE坏死     

阴离子交换蛋白阻滞剂DIDS对人视网膜色素上皮细胞非特异性吞噬过程的影响

目的：探讨阴离子交换蛋白在人视网膜色素上皮（RPE）细胞非特异性吞噬过程中的作用。方法：体外培养人RPE细胞，以荧光包被的乳胶株作为吞噬标记物，建立RPE细胞吞噬模型。使用不同浓度阴离子交换蛋白阻滞剂DIDS（1、10、100、200、300、500和1 000 μmol•L^-1）预处理RPE细胞，37℃孵育6 h，利用流式细胞术定量检测RPE细胞对乳胶珠的吞噬指数。结果：经6 ｈ孵育，未加DIDS的对照组RPE细胞对乳胶株的吞噬指数为(35.1±1.6)%，加入1 μmol•L^-1 DIDS的RPE细胞吞噬指数为(34.1±2.1)%（P>0.05），加入10μmol•L^-1 DIDS的RPE细胞吞噬指数为(28.7±1.9)%，10 μmol•L^-1的DIDS显著地抑制了RPE细胞对乳胶株的吞噬作用（P<0.05），并且随着DIDS浓度的增加（100、200、300、500及1 000 μmol•L^-1），RPE细胞吞噬指数逐渐降低［吞噬指数分别为(23.0±1.2)%、(17.0±1.5)%、(12.0±1.6)%、(7.0±2.2%)及(5.0±2.5)%］，与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论：抑制阴离子交换蛋白的活性将导致人RPE细胞非特异性吞噬功能的障碍，阴离子交换蛋白可能参与人RPE细胞的非特异性吞噬过程。     

Immunocytochemical characteristics of cultured human retinal pigment epithelial cells

Rehnal Pigment epithelial cells (RPEC), as one ofthe most ~t cell layers in the eye, po~ a nof fUnctions cmcial in PreServing the integhty Of the visualsystem. The hantenance of healthy RPEC is critical fornOImal retinal funCtion, and the etiologies Of many retinaldisolders may have their Prifnaly origins in the pigment epitheliam. The PIDlilbmtion of RPEC in foe yi~s and onthe surfaCe Of retina is the pathological cause Of Pmlifelative yi~whnOPathy (PVR). On the other hand the a…     

转染反义Bcl-2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的 :观察转染反义Bcl 2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPE)凋亡的影响 .方法 :用Annexin V fluo ,琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL分别观察柔红霉素诱导正常RPE与转染反义Bcl 2的RPE的凋亡作用 .结果 :Annex in V fluo法在 4h即可检测到凋亡细胞膜的变化 ,琼脂糖凝胶电泳在 36h可检测到确切的梯状带纹 ,1 80 μg·L-1 柔红霉素作用 72h转染组与正常组凋亡指数分别为 0 .5 9和 0 .4 5 (P <0 .0 1 ) .结论 :转染反义Bcl 2可增加柔红霉素诱导的RPE凋亡的敏感性 .     

高胰岛素对不同糖浓度下视网膜色素上皮细胞活性氧表达的影响

目的：探讨高浓度胰岛素对不同糖浓度下体外培养的视网膜色素上皮（ RPE）细胞活性氧（ ROS）生成的影响。方法：体外培养人RPE（ARPE-19）,随机分成空白对照组（葡萄糖5．6 mmol· L-1）、高胰岛素组（葡萄糖5．6 mmol· L-1＋胰岛素104 U· L-1）、高糖组（葡萄糖30 mmol· L-1）、高胰岛素＋高糖组（葡萄糖30 mmol· L-1＋胰岛素104 U· L-1）4组,正常糖（5．6 mmol· L-1）或高糖（30 mmol· L -1）浓度下培养72 h,再按分组给予104 U· L-1胰岛素干预24 h后,以2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（ DCFH-DA）法检测RPE细胞中ROS的表达量。结果：高胰岛素组、高糖组和高胰岛素＋高糖组ROS的产生量均明显多于空白对照组（t＝24．0、4．203、19．562,P＜0．05）,高糖联合高胰岛素组RPE细胞ROS表达最高。结论：高浓度胰岛素促进RPE细胞ROS生成增加,可能是临床上胰岛素强化治疗导致糖尿病视网膜病变恶化的原因之一。     

原代人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养

目的 :观察对原代人视网膜色素上皮 (retinalpig mentepithelium ,RPE )细胞进行冻存和复苏培养的效果 .方法 :将 6只尸供眼 ,常规酶消化法分离、纯化的人原代RPE细胞 ,分为两组 ,实验组为即刻进行常规梯度降温液氮冷冻保存 ,1wk后行常规复苏培养 ;对照组为细胞直接进行后续实验 .台盼蓝拒染观察细胞存活率及生长状态 ;计算细胞贴壁率 ;初步计算克隆形成率 .结果 :RPE细胞存活率分别为试验组 (90± 7) % ,对照组 (87± 1 5 ) % ,两组相比无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;两组接种细胞贴壁率从 2 4h开始分别为 (5 .0±3.1 ) %～ (6 1 .0± 7.3) %和 (1 5 .0± 6 .3) %～ (6 0 .0± 3.3) % ;培养 4 8h之前 ,两组之间存在统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,4 8h之后组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;培养 5 ,7和 1 0d初步克隆形成率两组分别为 (1± 0 ) % ,(1± 1 ) % ,(3± 1 ) %和 (1±0 ) % ,(3± 1 ) % ,(2± 1 ) % ,组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ,n=3) .冻存后复苏培养的RPE细胞生长状态良好 ,增生活跃 ,与对照组类似 .结论 :对原代人RPE细胞进行冻存 ,复苏培养的RPE细胞活性、存活能力、单细胞分裂增生能力不受影响 .     

Effects of PDTC on the Proliferation and PCNA Expression of Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is oneof the most common eye diseases that couldlead tosevere vision i mpairment and tend to cause blind-ness .It has beenfound that the abnormal prolifer-ation of retinal pigment epithelium(RPE) plays akey role in the onset and development of PVR.Under pathologic status ,such as rhegmatogenousdetachment of retina and severe ocular trauma ,RPE cells may migrate and proliferate because ofthe sti mulations of cytokines or chemokines ,thusmay lead to path…     

羊膜对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖影响的实验研究

目的　观察羊膜是否对视网膜色素上皮细胞 (Retinalpigmentepithelial ,RPE)的生长有影响 ,探讨羊膜用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (Proliferativevitreoretinopathy ,PVR)的潜在可能性。方法　运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆在不同浓度 (4 0、80、160 μg ml)及不同作用时相点 (2 4、48、96h)对人RPE增殖的影响。 结果　①在第 2 4小时 ,3个浓度羊膜匀浆均对人RPE增殖起抑制作用 ,而且随浓度增加抑制作用减弱 ,抑制率 (5 0 774%、2 7 3 87%、14 80 2 % )间相差显著 (P <0 0 5 ) ;在第 48、96小时 ,羊膜匀浆在低浓度时 ,对人RPE增殖起抑制作用 ,而在中、高浓度为促增殖作用 ,其中在第 48小时抑制率 (4 494%、-0 944 %、-3 693 % )间相差不显著 (P >0 0 5 ) ,在第 96小时时抑制率 (8 3 88%、-9 42 5 %、-17 65 1% )间相差显著 (P <0 0 5 )。②羊膜匀浆浓度为 40 μg ml ,各时相点对人RPE均为抑制增殖 ,抑制率间相差非常显著 (P <0 0 1) ;在浓度为 80 μg ml、160 μg ml时 ,随着作用时间延长 ,羊膜匀浆对人RPE增殖的作用逐渐由抑制变为促进作用 ,抑制率间相差显著 (P <0 0 5 )。结论　羊膜匀浆在低浓度 ,短时间内对人RPE增殖有抑制作用 ,而在高浓度、长时间则对RPE增殖有促进作用。羊膜匀浆用     

视网膜下液促使视网膜色素上皮细胞膜上蛋白激酶C变化的机制分析

目的：研究视网膜下液（SRF）能否引起体外培养的视网膜色素上皮（RPE）细胞浆内蛋白激酶C（PKC）的激活和转位，探讨SRF与RPE细胞中PKC信号系统变化的关系。方法：实验对象为体外培养的RPE细胞；不同的刺激因素分别在不同的时间刺激RPE细胞，通过细胞裂解和离心获取细胞浆和细胞膜蛋白粗提液，用同位素^32P标记和液体闪烁计数法检测细胞浆和细胞膜PKC活性水平。结果：SRF和佛波酯（PMA）都可以激活RPE细胞浆中的PKC（c-PKC），并使其由胞浆向胞膜转位，但胞膜上PKC（m-PKC）活性峰值水平和出现的时间不同。结论：SRF可引起RPE细胞膜上PKC的活性发生变化，变化的幅度与增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）的分级呈正相关。