DREAM短发卡质粒载体的构建及在C6细胞中沉默DREAM基因的效应

目的 构建表达下游调控元件的拮抗分子(DREAM)基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对C6细胞DREAM基因的干扰作用,为研究DREAM基因功能提供有力工具.方法 为了构建pRNAT-U6.1/Neo载体介导DREAM shRNA表达的质粒,针对DREAM的19碱基大小的片段,分别设计3对寡核苷酸和1条非特异性阴性对照序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pRNAT-U6.1/Neo载体(命名为pRNAT-DREAM),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生DREAM shRNA的质粒.用构建成功的4条质粒转染C6细胞,分别采用Realtime PCR和蛋白印迹检测其DREAM基因的mRNA和蛋白表达.结果 酶切、连接后构建成的质粒,经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变.在培养的神经胶质细胞中转染率为85%左右,pRNAT-DREAM-Ⅱ和pRNAT-DREAM-Ⅲ显著抑制DREAM基因的表达.结论 成功构建了能表达DREAM shRNA的质粒载体pRNAT-DREAM-Ⅱ、pRNAT-DREAM-Ⅲ,此项研究结果 为DREAM信号通路的深入研究奠定了基础.     

从药物预防糖尿病的DREAM试验中觉醒

当前糖尿病的流行趋势使得一种能够预防糖尿病的药物显得格外引人注目。然而，虽然最近的研究证据对此亦显示出支持，但Victor Montori，William Isley和Gordon Guyatt认为它还没有变为现实。[编者按]     

FIRST CERVICAL CANCER VACCINE:FROM PIPE DREAM TO PIPELINE

Ｔｈｅｒｅａｒｅｓｅｖｅｒａｌｓｔｒｏｎｇｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｅｖｅｒｇｅｎｅｔｉｃａｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｖａｃｃｉｎｅ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔｓｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｎｇｉｎａ...     

DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

目的构建表达DREAM基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(rAAV)载体,并观察感染PC12细胞后DREAM蛋白表达受抑制情况。方法设计并合成shRNA对应的2条互补的寡核苷酸链,pDC316-EGFP-U6质粒经BamHⅠ和HindⅢ双酶切与退火后的寡核苷酸连接,构建pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6质粒,以其为模板设计引物并引入EcoRⅠ和SalⅠ位点,PCR产物酶切后与pSANV2.0连接构建重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,酶切测序证实后,重组腺相关病毒介导将pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP感染PC12细胞,Western blot检测DREAM蛋白表达水平。结果经PCR、酶切及测序证实,重组腺相关病毒载体质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP构建成功,包装成病毒感染PC12细胞48 h后,Western blot结果显示与对照组细胞相比,DREAM蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论成功构建和筛选出介导特异性shRNA-DREAM的重组腺相关病毒载体。     

携带DREAM基因shRNA的慢病毒载体的构建及其对坐骨神经缩窄损伤大鼠的镇痛作用

目的：构建含下游调控元件的拮抗分子（downstream regulatory element antagonistic modulator,DREAM）基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体, 利用RNA干扰技术抑制DREAM基因表达,开展对神经病理性疼痛基因治疗的实验研究。方法：将靶向大鼠DREAM基因的shRNA重组到慢病毒穿梭质粒中,将重组质粒pKCSHR-puro/GFP-DREAM和慢病毒包装系统共转染293T细胞包装成慢病毒,收集病毒上清并进行载体病毒滴度的测定。将纯种健康清洁级成年雄性SD大鼠36只随机分为6组: 正常对照组(N)、假手术组(S),根据干预手段的不同将大鼠坐骨神经缩窄损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve, CCI）模型组分为4组:CCI(C0)组, CCI疼痛模型建立后不给任何干预措施,生理盐水对照（C1）组,空白载体对照（C2）组,LV-shRNADREAM慢病毒载体治疗（C3）组。该3组大鼠于CCI后第7天分别于蛛网膜下腔注射生理盐水、空白载体、LV-shRNADREAM慢病毒载体。观察各组大鼠术后3,7,10,14,21 d的疼痛行为学的改变。实验结束取腰段脊髓荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Realtime-PCR测定DREAM基因的mRNA 含量、Western印迹测定DREAM 蛋白含量。结果：测序分析证实载体构建成功,成功进行慢病毒包装,得到病毒液滴度为1.0×108 IFU/mL慢病毒载体。鞘内注射LV-shRNADREAM慢病毒载体后, CCI大鼠热痛阈和机械痛阈的异常明显得到改善（P<0.01）, 腰段脊髓神经细胞DREAM基因mRNA和 DREAM蛋白的表达均显著降低（P<0.01）。结论：成功构建了携带大鼠DREAM基因有效shRNA的慢病毒载体,慢病毒携带的短发夹干扰ＲＮＡ能干扰脊髓中DREAM的表达,为神经病理性疼痛的治疗提供了实验基础。     

对人的全面的辩证的认识

医学科学研究的主要对象是人,医务工作者的崇高职责是“治病救人”。因此如何认识人,在医疗实践和医学科学研究中具有重要的意义。一、人是自然的生物,人体是部分和整体的统一体。人不是上帝创造的,也不是超自然的、非物质的、神秘的、抽象的东西,人是有血     

论合道德的人性的安乐死与不道德的非人性的安乐死

安乐死问题的争论，关键是准确把握安乐死的实质以及对最基本人权——生命权的尊重。对濒临死亡或者逼近死亡的病人．能否实施安乐死，是否任何形式的安乐死都可以实施。反对主动安乐死，提倡实施被动安乐死，反对安乐死问题上的无痛苦致死术，实施无痛苦死亡。     

妊娠期妇女的生理的局部性的变化分析

妊娠是胚胎和胎儿在母体内发育成长的过程.这是一个非常复杂、变化极其协调的生理过程.妊娠时,因胎儿成长的需要,母体所有的器官、系统均会产生连续性的变化.这种生理性的变化,是正常生物功能的延续,以渐进的方法 发生,来调整其功能,以供给胎儿生长过程中所需之氧气和养分.     

前列腺癌的MRS的研究

近年来前列腺恶性肿瘤呈明显上升趋势,自20世纪70年代以来,超声、CT、MRI、核医学等医学影像学检测方法发展迅速,但对早期肿瘤诊断的敏感性及特异性不强.因此,有待新的检查技术的开展.三维磁共振波谱成像(MRS)能动态地监测细胞内的代谢变化,助于诊断早期前列腺肿瘤,特别对中央带前列腺癌(PCa)的检出有重要价值.就MRS对前列腺癌的特异性和敏感性做一综述.     

深静脉栓塞的的临床研究

目的 对42例深静脉拴塞(DVT)的诊断和溶拴治疗进行初步临床研究。方法 从DVT患者的远端静脉慢滴入尿激酶(UK)和中药三七总甙(血塞通)，并在拴塞部位上方用皮条阻滞浅静脉，以减少静脉的回流，治疗前后均作深静脉造影对照。结果 本组深静脉造影的再通率为82％。结论 从患肢远端静脉滴入溶栓剂进行溶栓治疗优于全身用药。本方法简单易行，易于推广应用，再通率与时限、病因有关。     

语言的任意性的思考

自从索绪尔在其普通语言学课程讲义中提出“语言符号是任意的”以来,语言学家对这一提法的“是与否”的论证就从没停息过。在这一过程中,人们加深了对语言本质的认识,促进了与之相关的其他学科的发展。本文试图对语言符号的任意性提出自己的一些看法。并非索绪尔最先指出语言中的音义关系带有约定性,不过,却是索绪尔首先为音义关系的任意性确定了在理论体系中头等重要的地位。他认为语言不是分类命名集,不是给已经存在的概念范畴命名,相反是在语言系统中创造出概念范畴,这就从根本上否定了孤立的符号单位具有外在于系统的价值。     

绿化的杀菌作用的观察

<正> 绿化有良好的环境效应为人所共知,如对于调节微小气候、防尘降尘、吸收有害气体、减弱噪声等已有不少报导。除此之外,树木还有杀菌作用,也有过少量报导。为了观察亚热带地区城镇绿化的杀菌作用,我们对百色城绿化进行综合考察之后,于一九八二年四月又对百色城不同绿化地区的空气含菌量进行了监测,初步发现了定的效应。     

新发现的传染病的特点

20世纪70年代以来,全球新发现的传染病有40多种,其特点是:①病毒是主要病原体;②相当部分是动物源性传染病;③人群对新传染病缺乏免疫力;④缺乏特效治疗和免疫预防;⑤新传染病给社会做成一定恐慌.     

麻辣的还是牛肉的

寝室老大一次大姨妈来了．正巧赶在中午．我们几个都去食堂吃饭了，所以老大就去楼下的小卖店去买，我们寝室楼下的小卖店有一个微波炉，好多不愿意去食堂吃饭的MM们就到那用微波炉煮方便面（我想每个大学都应该有吧），所以一到中午的时候本来就不大的小卖店就人满为患．老板娘更是忙得不可开交。     

紫丁香的化学成分的研究

紫丁香(Syringa oblata Lindl)别名丁香、紫花丁香为木犀科(Oleaceae)丁香属(Syringa) 植物,该植物约19种,我国有15种.地域分布广泛,多分布于辽宁、北京、河北、陕西、河南等地.     

长期卧床的老年患者的护理的重要性

由于老龄本身机体功能的问题导致老年患者的人数增加[1],所以老年患者成了社区卫生院在床患者的主体,尤其是长期卧床的老年患者逐渐增多,更需要得到注重的护理.     

分枝杆菌的分子生物学的进展

由于分枝杆菌的生长很慢,它很适用于近代分子生物学技术。在遗传工程方面、分枝杆菌促进了免疫反应性的分析,提供了大量与此反应性有关的来源,可能还和治疗上的应用有关。 遗传操作的对象是4种嘌吟或嘧啶碱基,即A(腺嘌呤Adenosine)、C(胞嘧啶Cyfosine)、G(鸟嘌呤Guanine)和T(胸腺嘧啶Thymine)。这     

证的研究的思考

回顾了关于证与辨证的含义，阐述了证与辨证的关系，以及影响证的因素和西医辨病与中医辨证的根本区别，对现行关于证的本质的研究方法进行了反思，并提出了证的本质研究应从影响证的因素过一基础方面逐步系统地展开的观点。