幽门螺杆菌耐药分子生物学检测的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种重要的人类致病菌,随着其耐药率在全球范围内不断增加,抗生素耐药成为H.pylori根除失败的主要原因。因此,充分利用和改进现有的H.pylori耐药检测方法,选择敏感抗生素是H.pylori根除成功的关键。传统的H.pylori培养及药敏试验费时费力,受外界影响大,分子生物学方法用于检测H.pylori耐药快速、方便、可靠而成为研究热点。本文将对当前H.pylori耐药分子生物学检测的主要方法作一综述,旨在为H.pylori耐药检测方法的选择提供参考,促进H.pylori耐药分子生物学检测的临床应用,以便推进H.pylori个体化精准治疗。     

幽门螺旋杆菌对克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星耐药的研究进展

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染可导致慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤。而H.pylori根除治疗失败与克拉霉素、甲硝唑及左氧氟沙星高的耐药率有关。现已证实这些抗生素的耐药机制与H.pylori基因突变有关。提高对这些抗生素耐药机制的了解对发展和证实以活检组织为基础的耐药性检测方法很有必要。快速检测H.pylori耐药的基因突变有助于H.pylori根除治疗方案的选择。     

幽门螺杆菌耐药相关基因突变检测芯片的建立

幽门螺杆菌（H.pylori）感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌之间的相关性已得到确认.H.pylori对抗生素耐药是导致根除治疗失败的主要原因.目的：建立H.pylori耐药相关基因突变检测芯片,用于指导临床个体化治疗.方法：根据文献数据筛选出7个与根除治疗常用抗生素（克拉霉素、甲硝唑阿莫西林、喹诺酮类、四环素、呋喃唑酮）耐药相关的基因及其单核苷酸多态性（SNP）位点,优化芯片探针设计和反应条件,采用多重PCR技术联合所建立的芯片,检测25例胃黏膜样本的H.pylori耐药相关基因突变情况.测序验证芯片检测结果.结果：25例H.pylori阳性胃黏膜样本的芯片检测结果均与测序结果相符.包括DNA抽提、多重PCR、芯片杂交、数据分析等在内的整个检测流程仅需6h,且重复性和灵敏度十分理想.结论：H.pylori耐药相关基因突变检测芯片能快速、平行、高通量地检测H.pylori耐药相关突变位点,结果准确、可靠.     

宁夏地区不同年龄人群幽门螺杆菌的耐药性分析

目的研究宁夏地区不同年龄人群幽门螺杆菌(H.pylori)感染者对常用抗菌药物的耐药性。方法选择2021年7至12月就诊于宁夏回族自治区人民医院、宁夏中西医结合医院、固原市原州区人民医院、吴忠市人民医院、石嘴山市第二人民医院、中卫市人民医院、银川市第一人民医院消化内科H.pylori专病门诊, 既往无H.pylori治疗史, 经14C尿素呼气试验证实为H.pylori感染, 且行胃镜检查的患者1 040例。在胃镜下留取胃黏膜标本行H.pylori体外培养, 获得的H.pylori菌株行H.pylori耐药表型检测。药敏试验采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法。记录患者既往抗生素使用情况, 分析≤44、45～59、≥60岁组患者H.pylori的原发耐药特征。统计学方法采用卡方检验。结果对1 040例H.pylori感染者的胃黏膜标本行H.pylori体外培养, 共获得538株H.pylori菌株, 培养阳性率为51.7%, 187例患者可提供既往抗生素使用史。对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星的原发耐药率高, 耐药率分别为95.5%(514/538)、44.6%(240/538)、45...     

基于全基因组测序对双重耐药幽门螺杆菌外排泵基因变异的研究

背景世界上50%以上的人口感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori).随着抗生素的广泛使用,抗生素耐药成为H. pylori感染患者根除失败的主要原因.目前有不少研究报道外排泵基因过表达和耐药的产生相关.目的为了未来的H. pylori感染治疗有更多方法,探索外排泵基因的变异与双重耐药菌株耐药性产生的内在联系.方法使用13C呼气试验及药物敏感试验进行双重耐药菌株及敏感菌株的筛选,用特异性PCR的常规方法进行耐药基因突变位点的验证,基于Mi Seq平台,对10例临床菌株进行全基因组测序,以鉴定双重耐药表型与敏感表型的外排泵基因的单核苷酸变体(single nucleotide variants, SNV)并分析,参考菌株使用ATCC26695.结果H.pylori药敏试验结果显示,丽水地区H.pylori对克拉霉素及左氧氟沙星都具有较高的耐药率.采用特异性PCR法在5株临床双重耐药菌株中检测到23S r RNA基因及gyr A的点突变,在5株临床敏感菌株中未检测到.全基因测序检测了涉及多耐药性的Tol C同源物的四个基因簇(HP0605-HP0607, HP0971-HP0969,HP1327-HP1329和HP1489-HP1487)的遗传变异.在双重耐药性H. pylori菌株中发现一个突变的SNV.结论丽水地区抗生素使用应严格监控,避免滥用. Tol C同源基因的基因簇与H. pylori菌株的抗生素耐药性相关.全基因组测序对基因型与表型的关系有了新的认识.     

上海市青浦区幽门螺杆菌抗生素耐药情况的研究

背景：幽门螺杆菌（H．pylori）对抗生素的耐药率在世界范围内呈上升趋势,但存在地域差异。目的：调查上海市青浦区H．pylori对5种根除治疗方案中常用抗生素的耐药情况。方法：选取青浦区两所医院因上消化道症状行胃镜检查、快速尿素酶试验阳性并符合纳入和排除标准的患者,取胃窦黏膜分离培养H．pylori．采用Kirby-Bauer纸片扩散法行药敏试验。结果：成功分离培养出120株H．pylori临床菌株,对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星和呋喃唑酮的耐药率分别为82．5％、22．5％、36．7％、41．7％和0．8％。耐药率与患者性别无关;慢性胃炎菌株对左氧氟沙星的耐药率显著高于十二指肠溃疡菌株（P〈0．05）。60．8％的菌株对两种以及两种以上抗生素联合耐药。结论：青浦区H．pylori对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星的耐药情况相当严重且多重耐药率高。初次根除治疗失败后．再次治疗时可在药敏试验指导下选择有效抗生素。呋喃唑酮可作为当地根除治疗方案的一线用药．     

1134例幽门螺旋杆菌培养及药敏分析

目的 了解嘉兴地区H.pylori感染、耐药情况及依据药敏试验行抗H.pylori治疗后,H.pylori根除的情况.方法 选取1134例上消化道疾病患者胃黏膜组织,于微需氧环境的分离培养基上培养.采用抗生素药敏试验纸片琼脂扩散法(简称K-B法),对分离到的H.pylori菌株进行药物敏感试验,抗生素选用甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、呋喃唑酮、庆大霉素及左氧氟沙星.所有H.pylori培养阳性患者,均依据药敏试验结果进行抗H.pylori治疗,4周后复查.结果 1134例患者中,H.pylori分离培养阳性者341例,阳性率30.07%.病理组织学检测阳性者477例,阳性率42.06%,明显高于分离培养阳性者(P<0.001).对341例分离培养的H.pylori菌株进行药敏试验.甲硝唑耐药率最高,左氧氟沙星最低,依次为甲硝唑(99.12%)、阿莫西林(46.04%)、克拉霉素(34.02%)、呋喃唑酮(16.42%)、庆大霉素(6.45%)、左氧氟沙星(0.59%).细菌对抗生素的敏感度左氧氟沙星最高.甲硝唑最低,依次为左氧氟沙星(20.51%)、庆大霉素(18.43%)、阿莫西林(17.04%)、呋喃唑酮(16.92%)、克拉霉素(15.54%)、甲硝唑(10.33%).结论 依据药敏试验进行抗H.pylori治疗,是抗H.pylori治疗的最佳选择.     

继往开来：我国首部幽门螺杆菌感染治疗指南的制定

为规范幽门螺杆菌(H.pylori)感染的治疗, 中华医学会消化病学分会幽门螺杆菌学组于2021年制定了我国首部H.pylori感染治疗指南, 即《2022中国幽门螺杆菌感染治疗指南》。本部指南的制定遵循世界卫生组织推荐的标准流程, 采用了研究对象、干预措施、对照、结局(PICO)方法和推荐等级的评估、制定与评价(GRADE)系统, 具有极高的科学性、严谨性。本部指南综合了大量国内外最新研究成果, 对《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》的精华条款进行了保留、补充和完善, 聚集于广大临床医师在H.pylori感染治疗中的关键问题, 包括铋剂四联方案、药敏试验检测指导下或根据抗生素用药史调整的个体化方案、高剂量双联方案、中药、胃黏膜保护剂、益生菌的应用问题, 以及青霉素过敏患者、难治性H.pylori感染患者的治疗问题。     

铋剂四联方案与高剂量双联方案治疗幽门螺杆菌感染的对比研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)的抗生素耐药是全球性问题。2017年, 世界卫生组织将耐克拉霉素的H.pylori列为抗生素研究和开发的高度优先细菌。铋剂四联方案(BQT)是目前国内外指南推荐的一线和补救治疗方案, 但仍存在不良反应多、患者依从性差、可能增高抗生素耐药率、治疗成本高等局限性。由于H.pylori对阿莫西林的耐药率低, 高剂量双联方案(HDDT)再次引起学者们的关注。近期的临床研究结果显示, HDDT有较高的H.pylori根除率。本文对BQT与HDDT在根除H.pylori方面的作用机制和疗效对比研究进展进行综述, 为临床治疗提供理论基础。     

根据H. pylori培养药敏治疗H. pylori感染无效患者危险因素分析

背景目前我国幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染率高达50%,而我国较高的抗生素耐药率是H. pylori根除失败的主要原因,因此H. pylori培养及药敏可优化抗生素选择,避免出现抗生素耐药情况.而基于药敏试验的四联根除治疗方案仍对部分患者无效,因此,本文旨在明确这部分患者临床特点及根除失败危险因素.目的了解根据H. pylori培养药敏治疗H. pylori感染无效患者的临床特点及危险因素.方法共收集320位H. pylori培养及C14呼气试验皆阳性患者,根据药敏试验结果予以基于敏感抗生素的四联抗H. pylori治疗,通过收集患者年龄,性别,城市/农村, C14呼气试验结果,有无溃疡,有无非甾体抗炎药(nonsteroidal antiinflammatory drugs, NSAIDs)用药史,有无胃癌家族史,有无高血压病、糖尿病、脂肪肝病史、是否吸烟、饮酒,病理有无萎缩、肠化、VacA/CagA、H. pylori定植部位相关信息,比较根除成功组与失败组临床特点,并分析其危险因素.结果两组患者在年龄、性别、户籍、胃癌家族史、高血压病、糖尿病、脂肪肝、饮酒、吸烟、肠化、NSAID用药史方面无明显统计学差异.而H. pylori根除失败组患者的C14呼气试验DMP值400、萎缩情况、合并消化性溃疡以及胃体定值于胃体数高于根除成功组,差异有统计学意义,其中DMP值400,H. pylori定值于胃体为独立危险因素.结论 C14呼气试验DMP值400、H. pylori定值于胃体、存在萎缩、合并消化性溃疡的患者H. pylori根除质量效果欠佳,其中DMP值400, H. pylori定值于胃体为独立危险因素.     

河南省幽门螺杆菌对利福昔明的药物敏感性及常用抗菌素耐药情况研究

目的了解河南省~(13)C呼气试验结果阳性的患者中分离的幽门螺杆菌(H.pylori)对利福昔明的药物敏感性及其他6种常用抗菌素(克拉霉素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、四环素、甲硝唑、阿莫西林)的耐药情况,以掌握河南省H.pylori对上述抗菌素的药敏谱,指导临床用药。方法选取2019年4月至2019年12月在我院行~(13)C-快速尿素酶呼气试验检查(~(13)C-UBT)且结果为H.pylori阳性的河南省患者为本次研究对象。常规胃镜操作下取胃黏膜组织样本,送我院H.pylori实验室培养鉴定,获得H.pylori菌株,针对上述7种抗生素进行药敏试验。结果在248例送检胃黏膜组织标本中成功分离H.pylori菌株共154例,体外药敏试验分析,H.pylori对克拉霉素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、阿莫西林、甲硝唑、利福昔明耐药率分别为29.22%、27.92%、11.04%、5.84%、83.77%、7.79%。未能发现对四环素耐药的H.pylori菌株。对上述所有抗生素均敏感的菌株共9例,占总菌株的5.84%;58例菌株对单种抗生素耐药,占总菌株的37.66%;87例H.pylori菌株对多种抗生素耐药,占总菌株的56.49%。结论河南省H.pylori对利福昔明的药物敏感性较高,可作为抗H.pylori的药物选择;对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星的耐药率较高,且存在交叉耐药,不宜作为河南省临床抗H.pylori的首要选择;对呋喃唑酮、阿莫西林、四环素耐药率较低,亦可选择上述药物用于临床常规治疗。     

幽门螺杆菌感染的治疗——当前的挑战

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染与胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病密切相关。H.pylori在我国的感染率、耐药率高,根除率低,且根除后再感染率高,因此,强化H.pylori感染者根除治疗对降低我国H.pylori感染率具有重要意义。2017年我国H.pylori处理共识中建议首选铋剂四联疗法进行经验性治疗,近年也有不少新策略被提出,如辅以益生菌、中医中药、疫苗等方案。最佳的H.pylori治疗方案应结合药敏试验、地区耐药率、个人抗生素暴露史、PPI基因型、经济效益比等多方面综合考虑,做到"个体化精准治疗"尤为重要。为此,本文就H.pylori感染现状及当前治疗现状作一概述。     

南京地区幽门螺杆菌耐药现状及近5年变化趋势

目的调查南京地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对多种抗生素的耐药现状及近5年变化趋势,为本地区根除H.pylori经验性用药提供依据。方法于2017年7月至2019年7月收集经呼气试验或快速尿素酶试验证实为H.pylori阳性的736例患者胃黏膜组织标本行H.pylori分离培养,采用Kirby-Baner(KB)药敏纸片法行药敏试验。并将其结果与2014年5月至2015年5月H.pylori药敏检测结果进行比较。结果药敏试验显示,2017年7月至2019年7月H.pylori对阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、四环素和甲硝唑的耐药率分别为3.80%、42.53%、25.95%、1.49%、1.08%、84.78%。2017年7月至2019年7月接受初次根除与非初次根除H.pylori对阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、四环素和甲硝唑的耐药率分别为2.53%vs 7.65%、33.82%vs 68.85%、18.63%vs 48.09%、0.72%vs 3.83%、0.72%vs 2.19%、82.64%vs 91.26%。与2014年5月至2015年5月相比,甲硝唑增幅最大,由2014年5月至2015年5月的60.5%升至近期84.78%,其次为克拉霉素,从29.5%升至42.53%,左氧氟沙星从14.7%升至25.95%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论本地区H.pylori感染者初次根除时对阿莫西林、呋喃唑酮、四环素耐药率较低。对于非初次根除患者,临床医师应结合地区耐药率、个人抗生素暴露史、经济效益比、药物不良反应、药物可获得性等多方面综合考虑。     

幽门螺杆菌检测方法研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)感染与多种消化道疾病密切相关, 准确检测H.pylori对其诊治至关重要。近年来, 有大量研究针对常规H.pylori检测方法的缺陷进行了优化改良或建立了全新的方法, 为多种场景下准确、快速、直观、经济地检测H.pylori提供了方向。用于检测H.pylori的分子生物学技术飞速发展, 不仅在内镜活体组织检查样本和粪便、唾液等非侵入性样本中均可应用, 而且在预测药物敏感性方面尤具优势。现对近期国内外H.pylori新型检测手段的研究进展进行综述。     

江津地区幽门螺杆菌耐药情况分析

目的分析江津地区幽门螺杆菌(H.pylori)的耐药情况,探讨对H.pylori耐药菌株合理使用抗生素的方法。方法对首次做胃镜检查H.pylori尿素酶试验阳性的患者,检查前2周内未服用过抗菌、铋剂等药物,用琼脂稀释法和E-test法检测H.pylori对阿莫西林、克拉霉素和甲硝唑的耐药情况,同时行药敏试验检测H.pylori的药物敏感情况。结果江津地区H.pylori菌株对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑和克拉霉素双重耐药分别为1.8%(1/57)、15.8%(9/57)和54.4%(31/57);H.pylori菌株对呋喃唑酮高度敏感,对左氧氟沙星、青霉素敏感。不同性别和病种对甲硝唑和克拉霉素的耐药率无显著性差异(P>0.05)。结论重庆市江津地区H.pylori对甲硝唑和克拉霉素耐药现象已经相当普遍,对阿莫西林的耐药情况也不容忽视。医生应选择敏感药物使用,必要时适当延长抗H.pylori用药时间以增强疗效。     

幽门螺杆菌对呋喃唑酮的耐药状况及耐药机制的研究

目的了解福建省福州地区上消化道疾病患者幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H．pylori）对呋喃唑酮的耐药情况,探讨H．pylori对呋喃唑酮的耐药机制。方法分离培养获得63株H．pylori,用琼脂稀释法进行体外抗生素敏感试验,检测H．pylori对呋喃唑酮的耐药率,挑选出耐药菌株,提取细菌DNA,PCR扩增porD、oorD基因,PCR产物扩增后测序,比较耐药菌株和标准菌株的基因序列。结果共检测出4株耐药菌株,福州地区H．pylori对呋喃唑酮的耐药率为6．35％,呋喃唑酮耐药与年龄无关。PCR从H．py—lori基因组DNA中扩增出592bp的H．pyloriporD基因和465bp的H．pylorioorD基因,与标准菌株的基因序列比较,耐药H．pylori的porD基因和oorD基因出现点突变。结论福州地区H．pylori对呋喃唑酮的耐药率较低,porD和oorD基因突变可能与H．pylori对呋喃唑酮的耐药有关。     

幽门螺杆菌抗生素异质性耐药研究进展

细菌的异质性耐药是指不同亚群对抗生素的敏感性不同,这些耐药亚群可以在抗生素的存在下存活,影响治疗的效果。近年来,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对抗生素的耐药率不断增加导致其根除治疗效果不佳。随着对异质性耐药了解的深入,部分研究提示异质性耐药的产生可能是导致H.pylori根治失败的重要原因之一。本文对H.pylori异质性耐药的相关文献进行梳理,就其可能的形成原因和现有的检测方法作一概述。     

山西省243株幽门螺杆菌药物敏感性及克拉霉素耐药基因突变特征分析

目的 了解山西幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）对5种抗生素药物敏感性及其克拉霉素耐药相关基因突变特征.方法 收集临床分离的H.pylori243株,采用纸片扩散法检测H.pylori对5种抗菌药物的敏感性.选取所有耐克拉霉素及相当数量的敏感菌株,提取基因组DNA,PCR法扩增23SrRNA基因功能区并测序,测序结果采用DNAStar软件包分析.统计结果分析采用x2检验和Fisher精确概率法.结果 临床分离的243株H.pylori,药敏结果显示对甲硝唑,克拉霉素,阿莫西林,左氧氟沙星和呋喃唑酮5种药物的耐药率分别为：75.3％（183/243）,7.4％（18/243）,7.4％（18/243）,12.4％（30/243）,8.6％（21/243）,5种药物的耐药率有统计学意义（P＜0.05）.结论 H.pylori临床菌株对甲硝唑,左氧氟沙星,克拉霉素、阿莫西林及呋喃唑酮存在不同程度的耐药,以对甲硝唑耐药率最高.克拉霉素耐药菌株23SrRNA基因突变以A2143C为主,此突变可能与该地区H.pylori耐药性有关,此外,还发现了A2214G位点的突变.     

Hp耐药的现状

体外药敏试验显示Hp对多数抗菌药物敏感,但适合临床应用的药物较少,主要有克拉霉素、甲硝唑、阿莫西林和呋喃唑酮等.由于Hp根除疗法的推广应用,Hp对部分抗生素的耐药性可能变得日益严重,已明显影响到部分Hp的治疗方案根除率.检测Hp对抗菌药物敏感性的方法主要有琼脂稀释法、纸片扩散法(K-B法)和E-试验等.由于部分抗生素的耐药与Hp菌株的基因突变有关,也可通过耐药基因的分子生物学方法进行快速检测.近年有代表性的Hp耐药性研究见表2.     

幽门螺杆菌临床分离株耐药特点分析

目的:探讨幽门螺杆菌(H pylori)对常用抗生素的耐药特点.方法:将来自不同患者的胃镜活检标本分别涂布接种幽门螺杆菌培养基后37℃微需氧环境下培养96 h,得61株H pylori临床分离株.对其采用Kirby-Bauer法行甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮4种抗生素药敏试验,并分析其特点.结果:H pylori临床分离株对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮4种抗生素的耐药率分别为54.1%,37.7%,41.0%和45.9%.4种抗生素耐药率比较无统计学差异(P>0.05).甲硝唑耐药存在性别差异(P=0.037).甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林耐药与患者用药史相关(P= 0.028;P=0.034;P=0.005).4种抗生素耐药与患者疾病类型及年龄无关(P>0.05).结论:4种抗生素耐药率均较高.耐药率与用药史相关,与疾病类型及年龄未见相关性.