流式细胞术检测供体猪α-1,3-Gal和人源CD46的表达

目的检测基因修饰猪细胞表面α-1,3-半乳糖(α-Gal)抗原敲除情况和人源蛋白CD46(hCD46)的表达情况,为异种器官移植提供可靠的供体。方法采集500μl野生型(wild type,WT)、α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)、hCD46和GTKO/hCD46巴马小型猪血液,分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。异硫氰酸荧光素标记的植物凝集素(FITC-GSIB4)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测α-Gal抗原敲除情况,异硫氰酸荧光素标记的hCD46膜辅蛋白抗体(antiCD46-FITC)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测h CD46蛋白表达情况。结果 GTKO和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面α-Gal检测呈阴性,WT和hCD46巴马猪检测呈阳性,与测序结果一致;hCD46和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面hCD46蛋白检测呈阳性,WT和GTKO巴马猪检测呈阴性,与PCR鉴定结果一致。结论建立了微量血液流式细胞术直观检测供体猪α-Gal抗原和人源CD46蛋白表达的方法。     

人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨

目的探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P0.05)。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P0.01)。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义(P0.05)。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。     

敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因五指山小型猪的繁育和鉴定

目的总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流式细胞术对人、野生型五指山小型猪、GTKO五指山小型猪外周血单核细胞(PBMC)的α-1,3-半乳糖(αGal)表型进行检测;比较GTKO五指山小型猪与野生型五指山小型猪血常规指标的差异。结果 GGTA1基因型的遗传符合孟德尔定律;GGTA1-/-猪的PBMC流式检测无荧光表达,与基因型鉴定结果一致;GTKO五指山小型猪雌性猪初产窝产仔数为(6.8±1.8)只,经产窝产仔数为(8.3±2.2)只;血常规检测的各项指标与野生型五指山小型猪差异均无统计学意义(均为P0.05)。结论连续2代GTKO五指山小型猪遗传稳定,繁殖力正常。GTKO五指山小型猪可作为异种器官移植研究的可靠供体。     

异种移植排斥机理的探讨

补体的激活是超急性排斥的中心环节,为了研究经典及旁路途径在这种排斥中的作用,本研究建立了体外超急性排斥模型.选择猪血管内皮细胞为靶,人血清为天然抗体和补体源,用四唑盐法(methyl thagolyl tetragoliam,MTT)行补体依赖的细胞毒反应(complement-dependent cytotoxicity,CDC).人血清能溶解58±5%的猪血管内皮细胞.加入EGTA阻断经典途径后人血清的溶细胞率降为51±3%(P<0.01).同样Clq缺乏的人血清仅溶解37±7%猪血管内皮细胞(P<0.001).人血清50℃加热20min,阻断旁路途径后,其溶细胞率降为42±5%(P<0.001).B因子缺乏的人血清(阻断旁路途径)仅溶42±10%的猪血管内皮细胞(P<0.001)同种猪血清及加热灭活补体的人血清不溶猪血管内皮细胞.将经典途径及旁路途径缺陷的人血清等体积混合,血清的细胞毒作用恢复正常.同样,Clq缺乏人血清和B因子缺乏人血清分别加入Clq和B因子后,血清细胞毒作用亦恢复正常.在这一体外异种超急性排斥模型中,补体经典和旁路两条途径均参与超急性排斥反应.提示抑制猪/人之间的超急性排斥应考虑补体两条途径均激活的问题.     

人源化基因修饰猪红细胞与人血清免疫相容性的体外研究

目的 探讨野生型（WT）、四基因修饰（TKO/hCD55）和六基因修饰（TKO/hCD55/hCD46/hTBM）猪红细胞与人血清的免疫相容性和免疫差异。方法 收集20名不同血型志愿者的血液,将WT、TKO/hCD55和TKO/hCD55/hCD46/hTBM猪红细胞、ABO-相容（ABO-C）及ABO-不相容（ABO-I）人红细胞分别暴露于不同血型人血清中,检测血凝集、抗原抗体结合（IgG、IgM）水平和补体依赖细胞毒性,评估2种基因修饰猪红细胞与人血清的免疫相容性。结果 ABO-C组未出现明显凝集;WT组和ABO-I组凝集水平高于TKO/hCD55组和TKO/hCD55/hCD46/hTBM组（均为P<0.001）。WT组猪红细胞裂解水平高于ABO-C组、TKO/hCD55组和TKO/hCD55/hCD46/hTBM组;ABO-I组猪红细胞裂解水平高于TKO/hCD55组、TKO/hCD55/hCD46/hTBM组（均为P<0.01）。TKO/hCD55组猪红细胞IgM和IgG结合水平均低于WT组和ABO-I组;TKO/hCD55/hCD46/hTBM组猪红细胞IgG和...     

转人CRP基因在异种移植中的研究

目的：研究转入补体调节蛋白（CRP）DAF、MCP和CD59基因对抑制人补体激活从而克服超急性排斥反应的作用。方法：利用显微注射建立转人衰变加速因子（hDAF)小鼠和猪的模型和转梁hMCP及hCD59真核表达质粒的猪内皮细胞（EC）,研究小鼠和猪EC表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白（CRP）对异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果（1）转人DAF基因小鼠心脏用新鲜人血连续丛外灌注,转基因组心脏搏动时间（174．6min)比对照组（106．5min)明显延延长。（2）转hDAF基因猪心脏异位移植给猕猴、移植心最长存活90h,受者死亡前移植心仍有功能,移植心病理检查未见超急性排斥反应病理改变。（3）转DAF基因基因猪EC死亡率在不同浓度血清时均明显低于对照组,在转hDAF基因猪EC上再分别转染hMCP及hCD59真核表达质粒,转hDAF hMCP或hDAF hCD59在不同血清浓度时EC死亡率较单纯hDAF组明显下降（P＜0．05）。结论,转人DAF及MCP、CD59补体调节蛋白基因能克服人对异种器官或组织的超急性排斥反应。     

人血清对猪血管内皮细胞的细胞毒效应研究

目的 探讨异种(猪/人）超急性排斥的发生机制。方法 人血清为天然抗体和补体源。用四唑盐法行补体依赖的细胞毒反应，建立体外超急性排斥模型。结果 正常人血清能溶解猪血管内皮细胞；而Clg缺乏及B因子缺乏的人血清对猪血管内皮细胞的溶解率较低(P＜0．01)；同种猪血清及灭活补体的人血清不溶解猪血管内皮细胞；将经典或旁路途径有缺陷的人血清等体积混合，其细胞毒作用恢复正常。结论 治疗猪/人之同的超急性排斥应考虑补体旁路途径激活的问题。     

异种移植超急性排斥机理的实验研究

为了研究补体经典和旁路途径在超急性排斥中的作用，选择猪血管内皮细胞为靶，人血清为天然抗体和补体源，用四唑盐法（MTT）行补体依赖的细胞毒反应（CDC）。人血清能溶解（58±5）％的猪血管内皮细胞；加入乙二醇四乙酸阻断经典途径后人血清的溶细胞率降为（51±3）％（P＜0．01）；入血清50℃加热20分钟，阻断旁路途径后，其落细胞率降为（42±5）％（P＜0．01）；将经典途径和旁路途径分别被阻断的人血清混合，血清的细胞毒作用恢复正常。在这一体外超急性排斥模型中，补体经典和旁路两条途径均参与超急性排斥。提示抑制猪-人之间的超急性排斥应考虑补体旁路途径激活的问题。     

转录因子诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞抑制人补体介导的异种细胞毒作用

目的 探讨转录因子SP1诱骗性寡核苷酸(decoy ODNs)转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响.方法 将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV-40-PED分为3组.转染组:SV-40-PED转染了SP1 decoy ODNs;错配组:SV-40-PED转染了错配的decoy ODNs;空转染组:SV-40-PED仅用转染试剂oligofectamine作用.转染后26 h,采用细胞爬片免疫荧光技术、蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应及乳酸脱氢酶释放试验进行检测,分别观察各组SV-40-PED胞膜α-半乳糖残基(α-Gal)、蛋白质和α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)mRNA等表达的变化,以及转染了SP1 decoy ODNs的SV-40-PED对人血清补体介导的细胞毒作用的影响.结果 转染组SV-40-PED胞膜α-Gal的荧光表达明显减弱,部分胞膜可见点状荧光缺损,而空转染组和错配组仍可见明亮的绿色荧光.转染组蛋白表达水平均有不同程度的下降,相对吸光度(A值)仅为未转染组的52.6%.转染组α1,3-GT基因异构体1和2 mRNA的相对表达量分别为0.42±0.20和0.27±0.12,空转染组分别为0.72±0.17和0.50±0.19,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);错配组与空转染组相比,差异无统计学意义(P>0.05).体积分数为20%和40%的人血清对空转染组和错配组SV-40-PED均有不同程度的杀伤,而对转染组SV-40-PED的杀伤明显减弱(P<0.05).结论 经SP1 decoy ODNs转染的猪血管内皮细胞可以抑制人血清补体介导的异种细胞毒作用.     

一种新的非Gal异种移植抗原——FAM234A的鉴定

目的探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未知抗原。采用流式细胞术测定PAEC表面结合的猴抗猪细胞抗体的平均荧光强度(MFI),用以表示PAEC表面抗原的含量。利用慢病毒介导的短发夹核糖核酸(shRNA)敲减PAEC中的FAM234A基因,检测该细胞结合的猴抗猪细胞抗体含量是否减少,以确定该基因是否为潜在的移植抗原。结果 PAEC中的非Gal抗原能够在猴体内引发大量的猴抗猪细胞抗体。在GTKO小型猪的PAEC中用shRNA敲减FAM234A基因后,PAEC结合的猴IgG抗体减少。结论 FAM234A是一种新的非Gal异种移植抗原。     

五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测

目的本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测。方法分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTA1基因敲除类型进行鉴定;30只藏酋猴分别与五指山小型猪进行淋巴细胞毒实验;供受体ABO血型鉴定。结果供体为GGTA1基因敲除猪,GTKO猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)植物凝集素细胞染色未检测出荧光,表明GGTA1基因敲除成功,与基因型鉴定结果一致。通过淋巴细胞毒实验选定28#与供体PBMC毒性最小的藏酋猴做为备选受体。血型鉴定显示供受体血型一致。结论通过对GTKO五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测选定合适的受体,可有效减少异种移植HAR和AR的发生率。     

人抗猪异种抗原糖表位的探讨

对猪血管内皮划种抗原糖受体表位进行研究，用４个糖结合物中和人天然抗体，经中和后的人血清再与猪血管内皮细胞行补体依赖的细胞毒反应（ＭＴＴ法）。牛血清白蛋白为阴性对照。Ｎ－乳四糖、Ｈ血型物质及猪胃粘膜粗提液能中和人天然抗体。它们均含有Ｇａｌ（β１，３）ＧｌｃＮＡｃ。猪胃粘膜粗提液显示出极强的中和作用，它的主要结构为ＧｌｃＮＡｃ（α１，４）Ｇａｌ。用唾液酸复兽这些有效基因，则糖结合物失去中和人天然抗体的     

异种移植排斥机理的探讨

补体的激活是超急性排斥的中心环节，为了研究经典及旁路途径在这种排斥中的作用，本研究建立了体外超急性排斥模型。选择猪血管内皮细胞为人靶，人血清为天然抗体和补体源，用四唑盐法（ＭＴＴ）行补体依赖的细胞毒反应（ＣＤＣ）。人血清能溶解５８±５％的猪血管内皮细胞。加入ＥＧＴＡ阻断经典途径后人血清的溶细胞率降为５１±３％（Ｐ〈０．０１）。同样Ｃｌｑ缺乏的人血清仅溶解３７±７％猪血管内皮细胞（Ｐ〈０．００１）。     

重组腺相关病毒载体表达抗表皮生长因子受体抗体对胰腺癌细胞株抑制作用的研究

目的 构建能在体内长期表达抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体的重组腺相关病毒(rAAV)载体,观察其对人胰腺癌细胞株的抑制作用.方法 将抗人EGFR单链抗体可变区(SCFV)基因插入腺相关病毒载体的Kpn Ⅰ和BglⅡ位点,构建成含抗EGFR单链抗体基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-anfiEGFR).设立对照组(rAAV1-EGFP组)和实验组(rAAV1-anti EGFR组),观察抗EGFR单链抗体蛋白的表达情况.采用Western blot检测抗体蛋白的表达、CCK-8法和流式细胞仪检测6种人胰腺癌细胞株(PCT-3、SW1990、Capan-1、ASPC-1、MiaPaCa-2及PANC-1细胞)的抑制率和凋亡率.两组比较采用t检验.结果 抗EGFR单链抗体蛋白能在6种人胰腺癌细胞株中表达,对照组和实验组胰腺癌ASPC-1细胞抑制率分别为1.1%±2.4%和15.1%±3.5%,两组比较,差异有统计学意义(t=6.598,P＜0.05).对照组和实验组PANC-1细胞凋亡率分别为7.0%±3.0%和11.4%±2.5%,两组比较,差异无统计学意义(t=1.952,P＞0.05);对照组和实验组SW1990、ASPC-1、Capan-1、PCT-3、MiaPaCa-2细胞凋亡率分别为1.1%±0.8%、1.5%±0.7%、1.7%±1.2%、1.1%±0.7%、2.2%±1.1%和17.6%±2.2%、46.9%±3.9%、20.0%±2.8%、12.1%±1.6%、31.1%±2.5%,两组比较,差异均有统计学意义(t=12.208,19.846,10.405,10.909,18.327,P＜0.05).结论 成功构建了携带抗EGFR单链抗体基因的rAAV载体,其表达的抗EGFR单链抗体蛋白对人胰腺癌细胞株有明显的抑制作用.     

异种肝移植术后组织因子激活介导受体凝血功能障碍的机制

目的探讨异种肝移植术后导致受体凝血功能障碍的组织因子(TF)激活机制。方法实施3例α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪-藏酋猴异种脾窝异位辅助性肝移植术。观察受体术后凝血功能变化情况。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学染色检测移植术前及术后不同时间点受体原肝和移植肝组织的猴TF及猪TF信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达情况。检测正常对照猴、移植术前受体猴及移植术后2 h受体猴的外周血单核细胞(PBMC)的复钙时间以评价受体凝血状态。结果 3例受体在术后均出现了不同程度的凝血功能障碍,表现为纤维蛋白原水平降低、血小板计数减少。猴TF蛋白在术后受体原肝中呈阳性表达,在术前及术后的移植肝中呈阴性表达;而猪TF蛋白在原肝和移植肝中始终为阴性表达。术后2 h,猴TF mRNA在原肝中较术前上调(2.10±0.24)倍,而猪TF在移植肝中较术前上调(1.42±0.15)倍,两者比较差异有统计学意义(P=0.014)。与正常对照猴PBMC和移植术前受体猴PBMC比较,术后2 h受体猴PBMC复钙时间明显缩短,差异均有统计学意义(均为P0.001)。结论在异种肝移植术后凝血功能障碍发生时,受体原肝TF激活程度显著高于移植肝TF。受体原肝TF激活是导致异种肝移植术后凝血功能障碍的主要原因。     

创伤性休克后血浆黏附分子的变化及不同复苏液的影响

目的　探讨创伤性休克兔中性粒细胞黏附分子CD11b、血清可溶性细胞间黏附分子(sICAM ) 1的动态变化及不同复苏液的影响。方法　 72只创伤性休克模型兔分为 6组 ,林格氏液组按失血量 2倍输入乳酸林格氏液 ,其他各组按 6ml/kg分别输入右旋糖酐 40、70 6代血浆、7.5 %氯化钠和 2 0 %白蛋白。分别采用流式细胞仪、酶联免疫吸附法检测CD11b、sICAM 1表达值。结果　各实验组休克 1hCD11b及sICAM 1表达增高 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,并于12h达最高值 (林格氏液组 85 .6± 12 .1,60 9.3± 10 1.3 ;高渗盐组 77.5± 10 .3 ,5 18.5± 87.2 ;白蛋白组 78.2± 10 .7,5 2 2 .4± 88.3 ;P <0 .0 1)。高渗盐和白蛋白组 2 4、48hCD11b和sICAM 1分别为5 9 .2± 6.9,5 4.6± 5 .9;3 60 .1± 68.4,2 74.4± 40 .1;5 8.9± 6.4,5 5 .0± 5 .8;3 5 2 .6± 65 .3 ,2 70 .2±3 8.2 ,较林格氏液组 (72 .3± 10 .1,65 .8± 8.3 ;5 0 2 .6± 84.5 ,3 42 .4± 63 .1)降低 (P <0 .0 5 ) ;高渗盐和白蛋白组 (8.3 % )复苏 48h动物死亡率较林格氏液组 (4 1.7% )低 (P <0 .0 5 )。结论　创伤性休克时PMNCD11b和sICAM 1表达增加 ;采用 7.5 %氯化钠或 2 0 %白蛋白复苏时表达值及死亡率较乳酸林格氏液低。     

CEP55通过H3K9三甲基化对膀胱癌细胞增殖能力的影响

目的探索中心体蛋白55(centrosome protein 55, CEP55)对膀胱癌细胞增殖能力的影响及相关分子机制。方法利用蛋白免疫印迹检测正常膀胱组织细胞(SV-HUC-1)与膀胱癌细胞(T24)CEP55、H3K9 me3的表达量。将膀胱癌细胞T24分为实验组和对照组, 实验组细胞转染siRNA-CEP55, 对照组细胞转染siRNA-MOCK。利用蛋白免疫印迹实验检测各组细胞CEP55、H3K9、H3K9me3的表达量, 利用CCK8实验检测各组细胞的增殖能力。结果蛋白免疫印迹实验结果表明, 膀胱癌T24细胞CEP55表达量为0.83±0.15, H3K9me3表达量为1.01±0.19。膀胱上皮SV-HUC-1细胞CEP55表达量为0.35±0.09, H3K9me3表达量为0.44±0.10, 膀胱癌细胞CEP55、H3K9me3的表达均高于正常膀胱细胞(均P<0.05)。siRNA-CEP55成功降低膀胱癌细胞T24 CEP55的表达。实验组T24细胞吸光度为1.109±0.105, 明显低于对照组细胞的2.208±0.104, CEP55低表达会降低T24细...     

转人CD46基因抑制人补体在转基因小鼠心脏组织中的沉积

目的 观察转人源性膜辅助蛋白(CD46)基因对转基因小鼠心脏中人补体沉积的抑制作用.方法 以近交系昆明小鼠为对象,采用显微注射法制备转人CD46基因小鼠,用逆转录聚合酶链法(RT-PCR法)检测外源基因的整合情况.以Fo代转基因小鼠11只为实验组,同窝非转基因小鼠10只为对照,快速切取小鼠心脏,用改良的Langendorff法经小鼠主动脉逆行灌注预先制备的含补体的B型血人血浆.观察并记录小鼠心脏搏动时间;采用免疫荧光和免疫组织化学法检测小鼠心脏组织中补体C3c及C9的沉积情况.结果 Fo代转基因小鼠外源基因的整合率为33.3%.实验组小鼠心脏搏动时间为(42.6±20.6)min(15～77 min),长于对照组的(20.2±12.5)min(7～40 min),差异有统计学意义(P＜0.01).实验组小鼠心脏组织中补体C3c及C9的沉积均少于对照组.结论 通过显微注射法制备的转人CD46基因小鼠,其外源基因可稳定表达;转人CD46基因可以抑制人补体C3c及C9在转基因小鼠心脏组织中的沉积.     

环状RNA PRKCH通过微小RNA-142-3p/肿瘤坏死因子受体相关因子6轴调控炎症刺激软骨细胞生物学特征

目的探究环状RNA(circRNA)-PRKCH通过微小RNA(miRNA, miR)-142-3p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴调控炎症刺激软骨细胞生物学特征的作用及分子机制。方法比较30例骨关节炎患者与30例正常人外周血血清中circ-PRKCH的表达差异, 并在ATDC5细胞中探究circ-PRKCH对细胞增殖、凋亡以及炎性因子分泌等生物学特性的影响。预测并验证circ-PRKCH的下游miRNA、靶基因以及分子间的调控关系。两组间比较应用Student’st检验。结果 circ-PRKCH在骨关节炎患者外周血血清中的表达水平(7.130±1.489)显著高于正常人(2.354±0.982, t=14.670, P<0.01), 并且在脂多糖(LPS)刺激的ATDC5细胞中, circ-PRKCH的表达水平升高(7.890±0.354比1.000±0.757, t=-14.289, P<0.01)。干扰circ-PRKCH同时抑制miR-142-3p或过表达TRAF6可恢复炎症对ATDC5细胞增殖活性的抑制作用(1.541±0.050比0.571±0.0...     

A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用及其机制

目的探讨A型肉毒毒素(BTXA)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 0(对照组)、0.2、0.4、0.8 U/ml的BTXA作用于增生性瘢痕成纤维细胞48 h, 噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力, Hoechst染色检测细胞凋亡, 免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的激活情况, 多组间两两比较采用q检验。结果 0.2、0.4、0.8 U/ml BTXA组细胞活力(0.50±0.02、0.42±0.02、0.34±0.01比0.58±0.02, F=26.352, P<0.05)、bcl-2(0.61±0.03、0.43±0.02、0.22±0.01比0.68±0.04, F=31.983, P<0.05)、PI3K(0.89±0.05、0.45±0.03、0.24±0.01比1.23±0.08, F=31.093,...