腺病毒载体在肿瘤靶向性治疗中应用的研究进展

肿瘤已经成为威胁人类健康和生命的重大疾病之一，有效地治疗肿瘤是当前医学研究的迫切任务。基因治疗在肿瘤治疗中的应用正在快速发展。肿瘤基因治疗常用的病毒载体有腺病毒载体、逆转录病毒载体及腺病毒相关病毒载体。腺病毒在体内能有效地感染肿瘤细胞，已经在肿瘤的基因治疗研究与实践中显示出了较好的应用前景，本文对其研究进展综述如下。[第一段]     

基因治疗病毒载体的研究进展

基因转移载体是基因治疗的重要组成部分,包括病毒载体和非病毒载体。目前应用的病毒载体主要有逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒、慢病毒载体、单纯疱疹病毒载体等。不同的病毒载体各有利弊。随着对病毒载体的不断改造完善,提高其基因转移效率和安全性,病毒载体将在基因治疗中继续发挥重要作用。     

腺病毒载体的研究进展

近年来,随着基因治疗和重组疫苗研究的深入,作为其基础的载体的研究有了突飞猛进的发展.腺病毒载体是目前基因治疗中应用最广泛的一种病毒载体[1],本文就腺病毒载体的研究进展作一综述.     

腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体目前广泛地应用于肿瘤的基因治疗。随着对腺病毒分子结构、功能以及感染机制的进一步深入了解,人们在降低其免疫原性,增强基因导入特异性,增强感染和表达效率等方面进行了许多探索,开发具有肿瘤靶向性的溶瘤腺病毒载体是其发展方向与研究热点。本文对腺病毒载体的生物学、构建策略及其在肿瘤基因治疗中的应用进行综述。     

第三代腺病毒载体的改良与应用

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、低致病性、高滴度及不整合入宿主细胞染色体等优点,广泛应用于基因治疗.第一、二代腺病毒载体仍有许多不足之处,在其基础上发展了第三代腺病毒载体.第三代腺病毒载体与前者相比,具有低免疫原性及高容量等优点,在基因治疗中表现出独特优势.然而,由于辅助病毒污染的存在及病毒产量有待提高,第三代腺病毒载体的临床应用仍面临一定困难.     

腺病毒载体纯化及在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒是一种线性无包膜的双链DNA病毒,用于载体构建的主要是人类2型和5型腺病毒.现在通过对腺病毒的改造,已经成功构建出第一代、第二代、第三代和条件复制型腺病毒载体.随着腺病毒载体在蛋白质表达中的广泛使用,对高产量、高纯度腺病毒载体的需求量逐渐增大,因此近年来在传统纯化腺病毒载体的基础上发展出各种纯化新方法.同时,由于腺病毒载体自身的一些优点,使其在疫苗和肿瘤基因治疗中也得到了较为广泛的应用.     

重组腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

腺病毒载体转导目的基因具有效率高、滴度高、在体内不与宿主细胞染色体整合等优点,使腺病毒载体在肿瘤的基因治疗研究与实践方面得以广泛运用。本文就三代腺病毒载体的构建与改进,腺病毒载体介导的肿瘤基因治疗策略及其应用进展进行了简要地综述,并讨论了在肿瘤基因治疗中仍需解决的安全问题和面临的挑战。     

慢病毒载体在基因治疗中的应用研究进展

基因治疗(gene therapy)是上世纪末发展起来的一项新技术,其利用基因转移技术纠正或补偿基因缺陷和异常,达到治疗疾病的目的,是当今医学研究的前沿.随着分子生物学、生物化学等学科的发展和基因序列的不断深入研究,极大地带动了基因治疗技术的发展,已成为治疗先天遗传性、免疫性、某些感染性、血液性疾病以及肿瘤尤其是恶性肿瘤的新焦点.其中借助于慢病毒载体(Lentivirus vector,LV)对疾病进行基因靶向治疗又是研究热点区域中的热点.而某些病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体等,均或多或少地存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性.如逆转录病毒载体存在无法高效转导非分裂期细胞,腺病毒载体在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应等.     

壳聚糖纳米粒作为基因治疗载体的研究进展

20 0 3年底 ,首个基因治疗药物—重组人P5 3腺病毒注射液[1～ 3 ] 在我国批准临床应用 ,标志着基因治疗进入了新时代。在基因治疗三要素 :目的基因、表达载体、递送载体中 ,递送载体的构建和改进 ,一直是基因治疗研究的重点。基因递送载体有病毒载体和非病毒载体。前者作为一种     

基因治疗中的新型载体

自从首次在临床上应用逆转录病毒载体治疗重症联合免疫缺陷综合征以来,已有10 余年的时间.目前,基因治疗载体系统的研究与开发获得了长足进展.由于病毒性载体在临床上暴露出一系列安全问题,使得低毒或无毒性载体的研究越来越受到重视,建立和发展高效、安全、可控、简便、实用的基因治疗载体系统,已经成为心血管疾病基因治疗的热点课题.本文将近几年来基因治疗发展中出现的五种新型载体的结构特点、研究进展及临床应用作一综述.     

携带野生型p53基因的重组腺病毒载体的构建

应用同源重组方法成功地构建了携带野生型Ｐ５３基因的复制缺陷型重组腺病毒，通过光镜电镜、酶切、ＰＣＲ共扩增等方法证实了构建载体的正确性，并使常规的同源重组方法进一步改进，简化了载体构建的操作程序，结果准确，成功率高。本结果可用于以腺病毒为载体进行肿瘤、心血管疾病等基因治疗的研究。     

重组腺病毒相关病毒载体基因治疗研究进展

在基因治疗的研究过程中，已经报道过的载体包括病毒性载体和非病毒性载体，但都因其目的基因表达的一过性和较为严重的宿主免疫排斥反应而使其应用受限。相比之下，重组腺病毒相关病毒载体（rAAV载体）有明显的优势：（1）对宿主没有致病性；（2）能稳定转染宿主细胞，具有较长时期的基因表达能力；（3）极低的免疫原性；（4）有广泛的宿主群，可转染分化及未分化细胞。本文就rAAV载体在基因治疗中的研究进展做一综述。     

纳米基因载体的研究进展

近年来，基因治疗迅速发展。基因治疗的主要过程是目的基因的获取和高效的基因转染。基因治疗成败的关键是基因治疗的载体系统。高效、安全是载体应具备的最基本条件。目前基因转染常用的载体有病毒型载体和非病毒型载体。病毒型载体在当前批准进入临床试验的基因治疗中占75％，转染效率通常在90％以上，但病毒蛋白有诱发机体产生免疫反应、体内潜在的病毒复制、生产成本高、不能反复应用、无靶向性等缺点。特别是在1999年的基因治疗临床试验中出现腺病毒载体致人死亡事件后，人们把注意力与希望逐步转向非病毒载体。非病毒型载体虽然制备简单、无免疫原性和比较安全，但是转染效率低是其致命缺点，尤其是在血清蛋白存在的情况下。所以寻找一种既高效又安全的基因载体是基因治疗领域面临的最紧要课题。     

腺病毒载体的改进策略

腺病毒载体具有多种优点,有望成为理想的基因转移载体并广泛应用于临床.但由于其基因转导的有效性、靶向性方面的不足及宿主的免疫原性,使许多具有潜力的临床基因治疗方案被搁浅.本文回顾了腺病毒的发展历程,提出了六点腺病毒载体的改进策略,以期对以后的腺病毒载体研究有所帮助.     

腺病毒载体及其应用

随着疾病分子水平机理研究的不断深入,基因治疗已成为很多疾病防治及医学研究工作新的切入点。理想的基因治疗方案需具备有效性与安全性,因此安全有效的基因转导载体及技术是决定基因治疗成败的关键。在众多的基因转导载体中,重组腺病毒载体能利用病毒自身感染宿主细胞的特点,简便有效地将目的基因导入靶细胞,并使其有效表达。而且腺病毒为DNA病毒,极少发生插入突变,载体操作方便、宿主广泛、容易增殖,并具有携带外源基因容量大,可表达接近翻译后成熟水平蛋白质等特点,已被广泛用于多种疾病的基因治疗。本文拟就腺病毒载体的构建,载体效能…     

含有CD基因的腺病毒载体的构建

目的 :构建携带CD基因和LacZ报告基因的腺病毒载体。方法 :先将真核表达载体质粒 pCI中的转录框架构建入腺病毒载体中 ,后再将CD和LacZ基因分别装配到框架的多克隆位点内。结果 :经过酶切鉴定成功地构建了分别携带CD基因和LacZ报告基因的腺病毒载体 ,对肿瘤的前药转换基因治疗有重要意义。     

肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展

肿瘤基因治疗是通过载体将遗传物质转移入宿主细胞,使肿瘤细胞凋亡,包括原发瘤和转移瘤。目前,应用于肿瘤基因治疗的载体分为病毒载体和非病毒载体,病毒载体的转移效率高,其中腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、反转录病毒载体和疱疹病毒载体等已广泛应用于基础研究和临床试验。     

以Ad-Easy载体系统快速构建PTEN重组腺病毒表达载体

目的 应用Ad-Easy腺病毒载体系统构建携带抑癌基因PTEN的重组腺病毒表达载体.方法 用插入有抑癌基因PTEN和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTrack-CMV转化已经含有腺病毒骨架载体pAdEasyl的E.coliBJ5183(Ad-1 cells)进行同源重组,获得重组腺病毒质粒,经Pac Ⅰ线性化后,转染293细胞.结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的293细胞出现细胞病变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因,荧光显微镜能观察到293细胞内有绿色荧光.结论 腺病毒Ad-Easy系统是一种较为简便、快速的构建重组腺病毒的好方法,且生成的病毒滴度高、转导效率好,为进一步研究PTEN基因应用于癌症基因治疗提供实验基础.     

腺病毒载体的研究进展

基因治疗正在成为肿瘤治疗的有效手段,用于携带外源基因的载体在肿瘤的基因治疗中发挥了重要作用。其中腺病毒载体因宿主范围广、感染率高、病毒相对容易制备且不会与受染细胞发生整合等诸多优点,成为基因治疗中应用最为广泛的载体系统。肿瘤的基因病毒治疗是指在肿瘤特异性增殖病毒中加入抗癌基因,将肿瘤的基因治疗与病毒治疗各自的优势结合起来,可靶向杀伤肿瘤细胞,保护正常细胞免受严重伤害。     

PTEN cDNA重组腺病毒载体的构建

目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN.方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,产生重组PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,通过脂质体介导将pAdPTEN cDNA转染至HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒AdPTEN,并测定其滴度.结果:产生具有感染能力的重组腺病毒AdPTEN,滴度约为5×109pfu/ml.结论:成功构建出含有PTEN cDNA的具有感染能力的腺病毒,并可获得较高的病毒滴度,为进一步研究PTEN基因的功能和相关肿瘤的基因治疗提供有效的基因转移载体.