自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞内胞浆游离钙浓度及氯沙坦治疗后的变化

目的　观察自发性高血压大鼠 (SHR)和正常血压对照鼠 (WKY)主动脉平滑肌细胞 (SMC)内胞浆游离钙浓度 ([Ca2 + ] i)与氯沙坦治疗后的变化 ,探讨 [Ca2 + ] i 在氯沙坦降压中的作用。方法　治疗前组 :SHR ,10只 ;氯沙坦治疗组 :SHR ,7只 ;正常对照组 :WKY ,7只。其中氯沙坦治疗组饲氯沙坦 2 0mg/(kg·d) ,连续 6个月。上述 3组大鼠均检测鼠尾动脉收缩压 ,进行SMC培养 ,检测SMC培养细胞内 [Ca2 + ] i。结果　治疗前组SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内[Ca2 + ] i显著高于WKY(P <0 0 0 1) ,经氯沙坦 6个月治疗后 ,SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内 [Ca2 + ] i 显著下降 (P <0 0 1)。鼠尾动脉收缩压的下降幅度和SMC内 [Ca2 + ] i 的下降幅度呈正相关 (r =0 65 3 ,P <0 0 5 )。结论　SHR的SMC内存在钙代谢紊乱 ,氯沙坦通过纠正细胞内钙代谢异常而达到降压的目的。     

TGF-β和ERK1/2在自发性高血压大鼠主动脉中的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和转化生长因子-β(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)和血管内皮细胞(EC)中的表达及其意义。方法将SHR分为4、8、16和20周龄组,采用免疫组化和Western blot方法检测主动脉血管EC和VSMC中ERK1/2和TGF-β1蛋白的表达。结果 SHR从8周龄开始血压升高,20周龄组收缩压达到(180±21)mmHg;Western blot检测显示,ERK1/2和TGF-β1在SHR16和SHR20周龄组VSMC和EC中的表达与4周龄组相比增高(P<0.05),且ERK1/2和TGF-β1蛋白积分光密度值与血压呈正相关;ERK1/2免疫组化结果显示,在SHR16和20周龄组,主动脉中内皮细胞阳性率分别为72.69%和70.14%、VSMC阳性率分别为35.01%和28.54%,明显高于SHR4周龄组(P<0.01);在SHR主动脉中,TGF-β1免疫组化表达均为阴性。结论在SHR动脉血管平滑肌细胞和内皮细胞中ERK1/2和TGF-β1的表达随着血压的增高呈现增加的趋势,推测ERK1/2和TGF-β1相互共同作用参与主动脉血管改变。     

PPAR-γ在自发性高血压大鼠血管平滑肌表达的增龄性变化

目的研究过氧化物酶体活化增殖受体γ（PPAR-γ）在自发性高血压大鼠（SHR）动脉血管平滑肌的表达随龄性变化。探讨PPAR-γ与高血压的发生发展关系。方法采用免疫组织化学方法检测PPAR-γ在不同周龄SHR血管组织表达变化。同时培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）。用RT—PCR检测PPAR-γmRNA。用Western Blot分析PPAR-γ蛋白在不同周龄大鼠原代及低代培养的VSMCs表达。采用同龄同种系正常血压的京都种大鼠（WKY）作为对照组。结果PPAR-γ在SHR血管组织的表达有随着鼠龄增加而增强的趋势。而24周与16周相比表达不再增加,PPAR-γ在4周和24周SHR和WKY表达差异无统计学意义。而8周和16周SHR的PPAR-γ表达明显高于WKY．在VSMCs。4周、8周和16周SHR和WKY的PPAR-γmRNA以及蛋白表达随着鼠龄的增加而增加．4周和24周SHR与WKY相比PPAR-γ mRNA以及蛋白表达差异无统计学意义。但是PPAR-γ表达量在8周、16周SHR VSMCs表达高于WKY,24周时在SHR VSMCs表达不再增加。表达量与同龄WKY相当。结论PPAR-γ的表达随着血压、血管平滑肌增殖和鼠龄的变化而有所不同。此变化提示PPAR-γ参与了高血压的发生发展。     

不同年龄自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca^2＋转运功…

应用不同年龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌原代与传代细胞（ＶＳＭＣ），观察Ｃａ＾２＋转运功能障碍及某些相关因素的变化，结果表明：（１）在血压未升高的ＶＳＭＣＣａ＾２＋内流已较同龄对照组ＷＫＹ大鼠明显增加，而Ｃａ＾２＋外流量较ＷＫＹ大鼠显著降低。表明ＳＨＲＶＳＭＣ膜Ｃａ＾２＋转运功能障碍在血压升高前就已发生，并随年龄及血压增高有加重趋势；（２）ＶＳＭＣｃＡＭＰ及钙调素含量变化与细胞膜Ｃａ＾２＋     

DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

PTEN蛋白在人脑星形细胞肿瘤中的表达及其意义

目的：探讨PTEN蛋白在不同分化程度的星形细胞肿瘤组织中的表达。方法：应用S-P免疫组化技术检测46例星形细胞肿瘤中PTEN蛋白的表达。结果：脑星形细胞肿瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率为63.4%,低分化（Ⅲ~Ⅳ级）星形细胞肿瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达显著低于高分化（Ⅰ~Ⅱ级）星形细胞肿瘤（p〈0.01）;且病理分级与PTEN蛋白的阳性表达呈负相关（r=-0.612,p〈0.01）。结论：PTEN基因表达缺失与脑星形细胞肿瘤的分化程度与演进密切相关。     

川芎嗪对高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞游离钙的影响

目的研究川芎嗪对自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响。方法以体外培养的自发性高血压大鼠和正常血压对照大鼠的心肌细胞及动脉平滑肌细胞为实验模型，用Fura-2荧光法检测细胞内游离钙浓度。结果自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度显著高于正常血压对照大鼠。川芎嗪对自发性高血压大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度具有显著抑制作用，并呈现量效关系。较高剂量的川芎嗪对正常血压对照大鼠心肌和血管平滑肌细胞的游离钙浓度也有抑制作用；而较低剂量的川芎嗪不仅无抑制作用，还使正常血压对照大鼠心肌细胞游离钙浓度显著升高。结论川芎嗪具有钙离子拮抗剂的特性，其在高血压防治中的作用，值得进一步探讨。     

内皮素对大鼠主动脉平滑肌作用的研究

浓度为1.0～18.0nmol/L的内皮素可引起大鼠主动脉产生浓度依赖性收缩,其EC_(50)为3.75±0.75nmol/L。正常对照组中平滑肌细胞S+G_2M期细胞的比例基本稳定在26.3～29.6％的范围内;浓度为10.0和100.0pmol/L的内皮素可使S+G_2M期细胞呈浓度依赖性(P<0.01)和时间依赖性(P<0.01)增加。10.0pmol/L的内皮素作用30min后ATP含量经短暂升高后维持在低水平。结果表明内皮素具有缩血管作用及促进平滑肌细胞增生的作用,上述作用可能在高血压发病机制中有一定的意义。     

自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统的关系

目的以２０周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压大鼠（ＷＫＹ）胸主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为模型，探讨ＳＨＲＡＳＭＣ异常增殖和自身肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）的关系。方法用３Ｈ－ＴｄＲ参入量和倍增时间（ＤＴ）反映ＡＳＭＣ的增殖能力，放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）浓度，紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性。结果（１）ＳＨＲＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ，ＤＴ显著短于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。基础状态下，ＳＨＲＡＳＭＣ合成ＡｎｇⅡ、ＡＣＥ以及分泌ＡｎｇⅡ的量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１）。（２）在含２％ＦＣＳ的培养基中，１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲ、ＷＫＹ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量分别提高到对照组的３．３倍、２．２倍（Ｐ＜０．０１），ＳＨＲＡＳＭＣ在不同浓度ＡｎｇⅡ刺激时的３Ｈ－ＴｄＲ参入量显著高于ＷＫＹ（Ｐ＜０．０１），１０－６ｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ使ＳＨＲＡＳＭＣ细胞数增加７２．５±２３．１％（Ｐ＜０．０１），ＷＫＹＡＳＭＣ细胞数无显著增加，１０倍浓度ＡｎｇⅡ的Ｓａｒａｌａｓｉｎ对ＳＨＲ、ＷＫＹ３Ｈ－ＴｄＲ参入的抑制率分别为６６．７±３．３％，４４．７±９．９％（Ｐ＜０．０１）     

凋亡相关基因Bcl-6和Bax在高血压大鼠血管平滑肌细胞中的表达

目的 :探讨高血压病血管平滑肌细胞凋亡相关基因的表达情况。方法 :Wistar大鼠两肾一夹型高血压模型 ,4周后处死 ,采用免疫组织化学方法 ,观察肾细小动脉平滑肌细胞中Bcl- 6和Bax表达。结果 :实验期间 ,高血压组动脉血压从14 9± 2 4kPa(112± 18mmHg)升高到实验结束时的 2 6 4± 4 4kPa(198± 33mmHg) ;高血压组肾脏小叶间动脉Bcl - 6染色阳性率 (12 96 % )明显高于对照组 (5 2 1% ,P <0 0 1) ;入球动脉、小叶间动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)中Bcl - 6阳性率(1 70 %和 5 2 2 % )均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;Bax基因蛋白在高血压组肾脏弓形动脉及其VSMC染色阳性率 (分别为1 90 %和 0 90 % )低于对照组 (11 4 3%和 1 6 0 % ) ,P <0 0 5 ;高血压组叶间动脉VSMC中Bax染色阳性率 (2 99%和1 18% )均明显低于对照组 (P <0 0 1) ;在高血压组入球动脉中 ,Bcl- 6和Bax基因蛋白染色之间存在相关性 (χ2 =4 0 0 ,P<0 0 5 ) ;肾细动脉Bcl- 6基因蛋白染色阳性率 (3 0 2 % )明显低于小动脉 (13 6 0 % ) ,P <0 0 1。结论 :两肾一夹型高血压时 ,肾细、小动脉血管平滑肌细胞凋亡相关基因Bcl- 6 /Bax比值升高 ,使得凋亡减少 ,平滑肌细胞数目增多     

依那普利和洛沙坦对自发性高血压大鼠血管重塑的影响

目的：观察自发性高血压大鼠胸主动脉结构的改变,以及依那普利和洛沙坦的保护作用。方法：雄性自发性高血压大鼠自１０周龄始,给予依那普利,洛沙坦,或二者半剂量合用６周,并以年龄、性别、数量相同的未治疗自发性高血压大鼠和正常组作对照。测量收缩压和血管壁胶原含量,计算机图象分析血管外膜面积、中膜面积、管腔面积和管壁厚度。结果：自发性高血压大鼠未治疗组的收缩压、血管壁胶原含量、外膜面积、中膜面积和管壁厚度均显     

自发性高血压大鼠不同时期肾脏中一氧化氮合酶的变化

目的；观察自发性高血压大鼠（SHR）高血压产生不同时期一氧化氮合酶（NOS）各亚型在肾脏中的分布及变化，方法：应用免疫组织化学方法用NOS亚型的3种特异抗体（NOS1，NOS2和NOS3）分别对SHR高血压产生各时期肾脏NOS各亚型（bNOS,eNOS,iNOS)的表达进行检测。结果：在正常对照组Wistar Kyoto(WKY)中，NOS1主要在球旁斑细胞中有强阳性反应，而在其它部位如内髓收集管，内髓升支粗段，肾小球和血管中未发现阳性反应，在第4周，第9周和第14周染色无明显变化，与WKY比较，SHR在第4周时bNOS表达明显增多，第9周bNOS阳性细胞数集依然增多，但不如第4周时明显，在第14周时WKY与SHR未见明显区别，而两种大鼠肾脏中eNOS和iNOS的变化无显著差异，结论：SHR不同时期一氧化氮合酶（NOS）各亚型在肾脏中的分布及变化可能参与高血压发病机制，球旁斑细胞内生成的NO参与调节球旁区的血管舒张反应。     

自发性高血压大鼠血管紧张素Ⅱ－1型受体基因的表达

应用反转录一聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ－１型受体（ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ－１Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＴＲ１）ｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠不同组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ的分布，证明ＡＴＲ１ｍＲＮＡ广泛存在于不同组织中，其中以肾脏含量为最高，其次为心脏和小脑；自发性高血压大鼠（ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＲａｔ，ＳＨＲ）肾、心组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ较正常对照大鼠（Ｗｉｓｔａｒ－ＫｙｏｔｏＲａｔ，ＷＫＹ）明显下隆。     

自发性高血压大鼠血压波动、昼夜模式及靶器官损伤

分析造成高血压靶器官损伤的多元因素。方法 :以自发性高血压大鼠 (SHR)为动物模型 ,进行 2 4h动态血压监测 ,分析血压波动性、血压昼夜模式与靶器官损伤的关系。结果 :SHR不同的时间段的收缩压波动性、舒张压波动性均与靶器官损伤显著正相关 ,且相关程度较血压水平与靶器官损伤的相关更为密切 ;非勺型血压SHR的靶器官损伤较勺型血压SHR明显严重。结论 :血压波动性、血压昼夜模式是影响SHR靶器官损伤的重要因素     

用mRNA差异显示法比较SHR和WKY大鼠肾脏组织的基因表达

目的用ｍＲＮＡ差异显示技术观察ＳＨＲ与ＷＫＹ大鼠肾脏组织在ｍＲＮＡ表达水平上的差异。方法取１２周龄的ＳＨＲ及ＷＫＹ大鼠，提取肾脏总ＲＮＡ，用含１２个寡聚核苷酸的Ｔ１１Ａ或Ｔ１１Ｇ引物进行逆转录，用Ｔ１１Ａ、ＡＰ１～３，Ｔ１１Ｇ、ＡＰ６，Ｔ１１Ｇ、ＡＰ７～８引物对逆转录产物进行多聚酶链式反应，反应产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影。结果每一种引物组合在单一电泳泳道上可显示７０～１００条基因表达条带，其中绝大多数代表肾脏基因表达的条带是相同的，但其中显示的４条ＳＨＲ大鼠肾脏基因表达的条带与相对应的ＷＫＹ大鼠肾脏基因表达的条带出现了差异。讨论ｍＲＮＡ差异显示技术对于快速筛选ＳＨＲ及ＷＫＹ大鼠肾脏组织的差异表达基因是适用的。     

黑木耳多糖对兔动脉粥样硬化斑块中FAK表达的影响

目的：通过黑木耳多糖对兔动脉粥样硬化斑块中FAK的表达的影响,探讨黑木耳多糖降血脂和抗氧化以外的抗AS形成机制。方法：将40只健康雄性新西兰白兔随机分为三组：①空白对照组（正常组）8只,喂基础饲料;②阳性对照组（模型组）16只,高脂高胆固醇饲料喂养;③木耳多糖组（预防组）16只,每天每兔给高脂高胆固醇饲料＋5克木耳多糖喂养。12周末所有实验用兔麻醉处死,行主动脉粥样硬化病理形态学观察。通过HE染色、免疫组织化学染色对斑块内的病变进行定位、定量分析。结果：FAK在正常组呈弱阳性表达,而在模型组和预防组中血管内膜和中膜呈阳性表达。预防组与模型组对照的结果显示,FAK在预防组中的表达较模型组明显减少。结论：黑木耳多糖可抑制动脉粥样硬化斑块中FAK的表达,从而减少血管平滑肌细胞参与的动脉粥样硬化形成,发挥抗AS形成的作用。     

PTEN表达变化在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的 探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)在支气管哮喘大鼠气道中表达的变化及其在气道重塑中的作用.方法 将20只大鼠随机分为对照组和哮喘组,以卵蛋白制成哮喘模型,苏木精-伊红染色观察支气管-肺组织形态学改变,免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(PCNA)、PTEN在气道中的表达,RT-PCR检测气道PTEN mRNA表达.结果 与对照组比较,哮喘组大鼠气道平滑肌增生肥厚,PCNA表达显著增强,PTEN表达则显著减弱,两者呈负相关(r=-0.823,P<0.01).结论 PTEN基因失活可能在支气管哮喘气道重塑的形成中起重要作用.     

P16和PTEN蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨抑癌基因p16、PTEN蛋白的表达与食管鳞癌的关系,为食管鳞癌预后判断提供依据。方法采用免疫组织化学法检测67例食管鳞癌标本中p16、PTEN蛋白的表达。结果p16蛋白阳性表达率为47.8%,PTEN蛋白阳性表达率为58.2%。p16、PTEN蛋白表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移情况显著相关,且p16与PTEN蛋白的表达具有正相关（r=0.782,P〈0.005）。结论p16、PTEN蛋白联合检测可提高对食管鳞癌预后预测的敏感性。     

自发性高血压大鼠主动脉内皮细胞形态和通透性变化研究

应用血管内皮细胞平铺技术、SEM及三级切片技术,动态观察了自发性高血压大鼠主动脉内皮细胞在不同血压下的形态改变。用伊文思蓝活体染色、辣根过氧化酶反应等方法观察了不同血压下动脉内膜通透性变化。实验结果表明,高血压因素能直接损伤动脉内皮细胞,导致动脉内膜通透性增强。研究认为高血压是引起动脉内皮细胞损伤的重要因素之一,内皮细胞的损伤是动脉粥样硬化发生的起点。     

VEGF在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达研究

目的:探讨VEGF在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达意义.方法:用免疫组化SP法,检测15例甲状腺滤泡性腺瘤、21例甲状腺滤泡癌中VEGF的表达.结果:在甲状腺滤泡性腺瘤、滤泡癌中,VEGF表达阳性率分别为20.0%、61.9%,差异有显著性(P＜0.05).结论:VEGF是鉴别甲状腺良恶性滤泡性肿瘤及判断其生物学行为的重要参考指标.