脊髓损伤后线粒体超微结构和呼吸功能的变化

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后伤段脊髓线粒体超微结构的改变和线粒体呼吸功能的变化。[方法]48只SD大鼠，随机分为：对照组（假手术组）和脊髓损伤组（SCI组），每组又分为处理后6、12、24h三时相组，每组8只，采用Allen＇s打击法造成大鼠脊髓损伤模型，在各时相提取伤段脊髓线粒体，透射电镜观察线粒体超微结构的改变；Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能，根据线粒体呼吸耗氧量换算出R3、R4、RCR、P／O比值。[结果]SCI组脊髓组织线粒体体积增大，嵴稍肿胀，嵴内腔扩大，部分线粒体出现膜结构不清、嵴紊乱，部分神经细胞内的高尔基器、内质网稍肿大。随着损伤后时间的延长，可见部分线粒体嵴断裂溶解、膜破裂和线粒体数量减少等。SCI组在伤后6、12h和24h R3、RCR和P／O显著低于对照组，R4显著高于对照组，有极显著统计学意义（P〈0．01）。[结论]大鼠脊髓损伤后线粒体的超微结构发生明显改变；伤段脊髓线粒体呼吸功能明显下降。     

甲基强的松龙对脊髓损伤后伤段脊髓线粒体功能的影响

目的：探讨脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离钙的变化和早期使用甲基强的松龙（MP）对其的影响。方法：54只SD大鼠，随机分组为假手术组（对照组）、脊髓损伤组（SCI组，采用Allen’s打击法造成大鼠脊髓损伤模型）和脊髓损伤后应用MP治疗组（MP组），每组又分为处理后6h、12h、24h三个时间相，每个时间相6只。在各时间相处死动物后提取伤段脊髓线粒体，测定线粒体呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P／0）和线粒体内游离Ca^2＋浓度。结果：SCI组在伤后6h、12h和24hR3、RCR和P／0显著低于对照组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度显著高于对照组。差异有显著性（P〈0．01）；伤后6h和12h MP组R3、RCR和P／0高于SCI组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度低于SCI组，差异有显著性（P〈0．01）；MP组R3、R4和RCR在6h和12h时与对照组之间无显著性差异，24h时R3、RCR和P／0低于正常对照组，有显著性差异（P〈0．05）。结论：脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋浓度明显受到影响，线粒体内膜通透性增加，线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用甲基强的松龙可明显改善线粒体的呼吸功能，抑制Ca^2＋内流，保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

黄连素在脊髓损伤中对线粒体的保护作用及机制

目的探讨黄连素对脊髓损伤(SCI)后线粒体氧化损伤的作用和可能机制。方法将36只C57小鼠随机分为假手术组、SCI组(伤后立即腹腔注射10 mg/kg生理盐水)和黄连素组(SCI后立即腹腔注射10 mg/kg黄连素),每组12只。使用PSI-IH脊髓打击器建立小鼠SCI模型,于损伤后24 h处死小鼠,取脊髓组织。使用全自动酶标仪检测各组小鼠脊髓组织线粒体内丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;用蛋白质印迹法检测脊髓组织caspase-3、cleaved caspase-3的表达及细胞质内和线粒体内细胞色素C(Cyt C)的表达;用免疫荧光双标染色法检测脊髓组织中神经细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,SCI组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平升高,GSH、SOD水平降低;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平增高,线粒体内Cyt C表达水平降低;脊髓组织中神经元凋亡比例增高;差异均有统计学意义(P 0.05)。与SCI组相比,黄连素组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平降低,SOD和GSH水平增高;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平降低,线粒体内Cyt C表达水平增高;脊髓组织中神经细胞凋亡比例减少;差异均有统计学意义(P 0.05)。结论黄连素可减轻SCI小鼠脊髓组织中神经细胞凋亡,这可能与其抑制线粒体氧化损伤、减少Cyt C释放、降低凋亡蛋白表达有关。     

颈髓损伤对颈髓线粒体膜流动性与线粒体呼吸功能的影响

目的:探讨颈髓损伤后颈髓线粒体膜流动性变化与线粒体呼吸功能的关系。方法:采用Allen法造成猫颈髓损伤,观察颈髓伤后线粒体膜流动性、磷脂酶A2(PLA2)活性、线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比值(P/O)、氧化磷酸化效率(OPR)的变化。结果:颈髓损伤后2～72h线粒体膜PLA2活性较假手术对照组明显增高(P<005),而线粒体膜流动性、线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比值(P/O)、氧化磷酸化效率(OPR)均较假手术对照组明显降低(P<005)。结论:表明颈髓损伤后PLA2激活与膜流动性降低密切相关,提示颈髓线粒体膜流动性降低在颈髓损伤后线粒体呼吸功能损害的病理生理过程中起重要作用。     

大黄附子汤对重症急性胰腺炎肠黏膜上皮细胞线粒体超微结构和离子泵的影响

目的 观察大黄附子汤(DHFZT)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮细胞(IEC)线粒体离子泵Na+-K+-三磷酸腺苷(ATP)酶和Ca2-ATP酶以及超微结构的影响.方法 72只SD大鼠,随机分成3组:对照组、SAP组(模型组)及治疗组,每组再按1、3、6、12h分为4个亚组(n=6).经胰胆管注入5％牛磺胆酸钠(4 ml/kg)建立SAP模型.造模后0、4、8h对照组和模型组用0.9％ NaCl,治疗组用DHFZT保留灌肠(1ml/100 g).测定血清肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)、二胺氧化酶(DAO)及IEC线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2-ATP酶水平;电镜、光镜观察胰腺、小肠结构变化.结果 经DHFZT治疗后,治疗组大鼠较模型组IEC线粒体Na+-K+-ATP酶[μmol Pi/mg(protein,h),1 h:6.35±0.49比6.24 ±0.46,3 h:7.01±0.57比5.45±0.39,6 h:6.57 ±0.58比4.81±0.32,P＜0.05;12 h:5.98 ±0.39比4.24±0.29,P＜0.01]、Ca2+-ATP酶[μmol Pi/mg (protein·h),3 h:5.25±0.46比4.46±0.39,P＜0.05;6 h:4.68±0.41比3.49±0.30,12 h:4.85 ±0.35比3.26±0.28,P＜0.01]均增高,线粒体结构损伤显著减轻,血清iFABP和DAO显著降低[iFABP(μmol/L):6 h:74.67±8.57比132.46±16.43,12 h:121.48±14.35比243.43±35.91,P＜0.01;DAO(g/L):3 h:100.03±16.99比178.43±26.38,P＜ 0.05;6 h:135.58±20.86比258.32±36.31,12 h:172.55±22.53比288.49±40.29,P＜0.01].结论 DHFZT通过升高SAP时IEC线粒体离子泵Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性,维护IEC及其线粒体超微结构,降低血清iFABP、DAO水平.     

环孢霉素A对大鼠脊髓损伤早期环氧化酶-2与肿瘤坏死因子α表达的影响

目的:观察环孢霉素A(CsA)对大鼠脊髓损伤(SCI)早期环氧化酶-2(Cox-2)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨CsA对大鼠SCI的作用。方法:180只大鼠随机分成对照组、损伤组和损伤后CsA治疗组(治疗组),每组60只。用25g.cm致伤损伤组和治疗组大鼠T8~T11脊髓,对照组不损伤脊髓。治疗组于术后1h予尾静脉注射CsA(2.5mg/kg),之后每隔12h给药1次,对照组和损伤组在相同时间点尾静脉注射相同体积生理盐水。损伤组和治疗组于术后2h、6h、12h、24h、48h和72h处死动物取损伤段脊髓标本,对照组在相应时间点取相应节段脊髓标本,切片后分别行HE染色观察脊髓组织损伤情况、免疫组织化学EnVision法检测TNF-α、免疫组织化学SP法检测Cox-2,并对TNF-α和Cox-2进行定量分析。结果:对照组各时间点脊髓无出血、水肿等变化。损伤组和治疗组伤后2h、6h脊髓灰质可见水肿、出血,但无坏死,周围白质无明显改变;12h、24h脊髓灰质出现广泛灶性出血及出血后形成囊腔,神经元肿胀,部分细胞核浓缩,染色增强,白质见少量红细胞渗出,髓鞘轻度肿胀;48h、72h脊髓灰质中出现神经元固缩、坏死、溶解,细胞体积变小,有大量小胶质细胞增生和中性粒细胞浸润,白质中可见较多红细胞渗出,髓鞘肿胀和大量空泡,周围有炎性细胞浸润和胶质细胞增生;治疗组各时间点的病理改变均较损伤组轻。对照组大鼠脊髓Cox-2呈可疑阳性表达;损伤组和治疗组伤后2h Cox-2即有表达,6h达到高峰,之后逐渐下降;损伤组在伤后72h Cox-2表达仍较对照组高(P<0.05),而治疗组到伤后48h即恢复到对照组水平(P>0.05),治疗组各时间点Cox-2表达均较损伤组低(P<0.05);对照组大鼠脊髓TNF-α呈可疑阳性或弱阳性表达;损伤组和治疗组伤后2h即有TNF-α表达,12h达到高峰,之后逐渐下降;损伤组在伤后72h TNF-α表达仍较对照组高(P<0.05),而治疗组在伤后72h即恢复到对照组水平(P>0.05),治疗组各时间点TNF-α表达均较损伤组低(P<0.05)。结论:CsA能显著降低大鼠SCI后早期损伤脊髓组织中Cox-2和TNF-α的表达,从而减轻脊髓继发性损伤。     

内皮素受体拮抗剂对损伤脊髓早期保护作用

目的评价非选择性内皮素(ET)受体拮抗剂PD145065对损伤脊髓的保护作用,证实ET参与脊髓损伤(SCI)后继发损伤的假设并探讨其作用机制。方法压迫法致伤大鼠脊髓(50g,1min)。损伤前10min鞘内注射PD145065或生理盐水,观察脊髓血流(SCBF)、丙二醛(MDA)、细胞内钙(［Ca2+］i)、伊文思兰(EB)及水含量变化。结果伤区SCBF在伤后5min即有明显下降,为基线的(75.23±9.21)%,2h降为(57.06±7.35)%;伤区邻近血流下降较慢,伤后30min降为(79.82±7.98)%。伤区及邻近区伤后4h?SCBF都未恢复。伤段脊髓组织中MDA、［Ca2+］i、EB和水含量均高于假手术组(P＜0.05)。PD145065明显改善了伤区SCBF,消除了伤区邻近段SCBF的下降。PD145065预处理组脊髓中MDA、［Ca2+］i、EB和水含量均低于生理盐水组(P＜0.05)。结论PD145065对损伤脊髓早期有明显保护作用,ET及其受体可能通过多种途径参与SCI后的继发损伤。临床应用ET受体拮抗剂对SCI可能有治疗作用。     

牛磺酸对烫伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性的保护作用

目的 了解牛磺酸对大鼠烫伤后心肌线粒体成分和酶活性变化的影响.方法 将120只大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ度烫伤.分为烫伤组(60只),伤后腹腔注射等渗盐水(4mL·kg-1·1%TBSA-1);牛磺酸治疗组(60只),伤后腹腔注射20 g/L牛磺酸液(200 mg/kg).伤后1、3、6、12、24、48 h处死大鼠.取心肌组织检测心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素c氧化酶(CCO)、超氧化物歧化酶(SOD)、Ca2+-腺苷三磷酸酶(ATPase)活性和细胞色素c、细胞色素aa3、丙二醛(MDA)、细胞质及线粒体内ca2+含量.另取10只大鼠作为对照组,模拟烫伤不予补液,1 h后处死大鼠取心肌组织检测以上指标.结果 烫伤组大鼠伤后1 h CCO活性即开始下降,伤后6、12 h下降最明显,而SDH活性在伤后6 h下降最明显,且各时相点均低于对照组;牛磺酸治疗组CCO和SDH下降不明显,伤后3、6、12 h CCO活性与烫伤组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).伤后3、6、12、及24 h烫伤组心肌线粒体细胞色素c和细胞色素aa3均显著降低.而牛磺酸组虽然有所下降,但以上4个时相点的值均高于烫伤组(P＜0.05).烫伤组SOD活性在伤后3、6、12 h均显著性下降,ca2+ATPase活性在伤后3、6、12及24 h均有不同程度下降;而牛磺酸治疗组虽然有所下降,但以上4个时相点SOD、Ca2+-ATPase值均高于烫伤组(P＜0.05).伤后3～48 h烫伤组、牛磺酸治疗组MDA值均高于对照组(P＜0.05),但牛磺酸治疗组低于烫伤组(P＜0.05).伤后1 h烫伤组大鼠心肌线粒体中Ca2+即开始升高为13.7±1.5,伤后3、6、12、24 h分别为24.8±2.6、29.7±3.1、16.3±1.9及13.5±1.7.均高于对照组(10.7±1.6,P＜0.05);心肌细胞质中ca2+在伤后3、6、12、24 h也明显高于对照组(P＜0.05).伤后3、6、12及24 h牛磺酸治疗组大鼠心肌线粒体中ca2+浓度分别为16.8±2.8、18.7±1.9、10.5±1.8及13.3±1.7,均低于烫伤组.结论 牛磺酸对烫伤大鼠心肌线粒体成分和酶活性破坏具有保护作用,其机制与提高线粒体清除氧自由基的能力和减轻Ca2+超载有关.     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 观察褪黑素(melatonin,MT)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后脊髓组织细胞凋亡的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠66只,随机分为三组Sham组(假手术组)、A组(单纯SCI组)及B组(MT治疗组).Sham组仅切除椎板未损伤脊髓;A、B两组采用改良Allen法制成大鼠SCI模型,术后立即分别腹腔注射等体积无水乙醇、褪黑素(100 mg/kg);Sham组于术后48 h、A和B组于术后8、24、48、72 h和7 d分别进行神经功能评分和测定伤段脊髓组织凋亡细胞数.结果 A组凋亡细胞百分率伤后24 h开始升高,48 h达到高峰,72 h开始下降;B组凋亡细胞百分率伤后24 h、48 h及72 h与A组相比明显减少,差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01);B组神经功能比A组有明显提高(P＜0.05).结论 SCI后应用MT可以抑制脊髓组织神经细胞凋亡,从而对脊髓损伤起保护作用.     

白细胞介素-10对大鼠脊髓诱导型一氧化氮合酶基因表达的干预作用

目的　探讨诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA在损伤脊髓组织中的表达规律及白细胞介素 (IL) 10的干预作用。方法　将 64只SD大鼠随机分为 3组 :单纯脊髓损伤 (SCI)组、IL 10组及假损伤组 (Sham组 )。除Sham组不致伤脊髓外 ,均以改良Allen(10 g× 5cm)打击法制作大鼠急性SCI模型 ,IL 10组于脊髓损伤后 3 0min腹腔注射IL 10溶液 10 μg ,分别于伤后 3、12、2 4、48及 72h处死 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定损伤脊髓组织iNOSmRNA的表达情况 ,并与单纯SCI组和Sham组作对照。结果　脊髓无损伤时未发现iNOSmRNA表达 ,损伤后逐渐出现表达上调 ,于伤后 12h明显增强 ,2 4h达高峰 (0 .60 85± 0 .0 166) ;IL 10组中 2 4h亚组iNOSmRNA表达 (0 .5 70 5± 0 .0 2 0 3 )出现抑制性改变 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　IL 10可明显抑制大鼠脊髓损伤后iNOSmRNA的高表达     

氨基胍对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的作用机制研究

目的氨基胍(aminoguanidine,AG)能显著减轻脑外伤及中风动物模型脑水肿,提高神经功能恢复程度。探讨AG对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后脊髓水肿的作用及相关机制。方法取成年雄性SD大鼠150只(体重230～255 g),分为对照组(A组,25只)、假损伤组(B组,25只)、SCI后未治疗组(C组,25只)和SCI后AG治疗组(75只);AG治疗组按给药剂量分为AG 75 mg/kg组(D组,25只)、AG 150 mg/kg组(E组,25只)和AG300 mg/kg组(F组,25只)。A组未行任何处理,B组仅行椎板切除术但不治疗;C、D、E、F组制备静压型大鼠SCI模型后,C组腹腔注射5%DMSO,D、E、F组腹腔注射相应剂量AG。于造模后0、12、24、48 h用干湿重法检测受损脊髓组织含水量以筛选最佳剂量,进一步用伊文思兰(Evans blue,EB)法评测血-脊髓屏障功能,用RT-PCR检测水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测AQP4蛋白表达。结果脊髓组织含水量检测示,E组在造膜后12、24、48 h对SCI后脊髓组织水肿有明显抑制作用(P<0.05),选择该剂量组用于后续实验。造模后12、24、48 h,E组EB含量明显低于C组(P<0.05),降低血-脊髓屏障通透性。RT-PCR检测结果示造模后12、24、48 h,B、E组AQP4 mRNA表达明显低于C组;Western blot检测示造模后24、48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组;免疫组织化学染色示造模后48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);但各指标各时间点B、E组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性SCI后大鼠经150 mg/kg AG治疗后,能降低AQP4表达,改善脊髓水肿,减轻损伤。     

钝性胸部创伤后心功能障碍与心肌细胞内ATPase变化的关系

目的探讨心肌细胞内三磷酸腺苷酶（ATPase）的变化在钝性胸部创伤（BCT）后心功能障碍发生机制中的意义。方法采用随机数字表法将36只兔分为6组：正常对照组（创伤前）,伤后2h、4h、8h、12h和24h组,每组6只。用BIM-Ⅱ型生物撞击机建立BCT模型,经右颈总动脉插管至左心室测左室压力,在创伤后2h、4h、8h、12h和24h各时间点测定血流动力学指标和心肌匀浆组织、线粒体及胞浆内ATPase活性。结果与对照组比较,创伤后2h时2h组左心室收缩期末压（LVESP）、左心室内压最大上升速率（＋dp／dtmax）、等容收缩压（IP）、实测心肌最大收缩速度（Vpm）明显下降（P〈0．05）,在伤后4～12h时4h组、8h组、12h组恢复至创伤前水平（P〉0．05）;等容舒张期左室内压下降时间常数（T）、左心室舒张期末压（LVEDP）、左室内压最大下降速率（-dp／dtmax）在伤后24h组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05,0．01）。伤后2h组、4h组心肌匀浆组织、线粒体及胞浆ATPase活性下降（P〈0．05,0．01）,分别至伤后8～12h时分别恢复至创伤前水平（P〉0．05）。相关分析表明：LVEDP和-dp／dtmax与心肌匀浆组织Na^＋-K^＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．674,-0．691,P〈0．05）,与Ca^2＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．613,-0．642,P〈0．05）;与心肌细胞线粒体Na^＋-K^＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．622．-0．616,P〈0．05）;与心肌细胞胞浆Ca^2＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．672,-0．658,P〈0．05）,与心肌细胞胞浆Na^＋-K^＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．627,-0．632,P〈0．05）,与心肌细胞胞浆Mg^2＋-ATPase活性改变呈明显负相关（r=-0．677,-0．661,P〈0．05）。结论BCT后左心室收缩／舒张功能受到损害,尤以舒张功能障碍为主,心肌细胞中ATPase活性下降可     

Transplantation of adipose-derived stem cells via renal artery protects against acute ischemic kidney injury

Objective To explore the therapeutic effect of adipose derived stem cells (ASCs) transplanted via left renal artery on rat acute ischemia reperfusion kidney injury（iAKI） and the distribution of ASCs in different organs. Methods ASCs were isolated from inguinal subcutaneous adipose tissue of male SD ras. iAKI model was set in male SD rats by clipping bilateral renal pedicles for 45 min (ischemia reperfusion model). The iAKI rats were randomized into two groups (n=30): control group (renal intra-arterial administration of 500 μl PBS) and ASCs transplantation group (renal intra-arterial administration of 5×105 ASCs). Rats were sacrificed at 12, 24, 48, 72 hours and 1 week after reperfusion to measure renal function by serum creatinine (Scr). Renal pathology, cell apoptosis, inflammation and cell proliferation were analyzed by optical microscope. Distributions of ASCs were measured by fluorescent microscopy. Results ASCs at its third passage had the capacities for adipogenic and osteogenic differentiation, postive for CD29, CD90, and negative for CD34, CD45. Compared with control group, Scr in ASCs transplantation group were significantly lower at all time points (P＜0.05); score of left renal tubular interstitial damage degree in ASCs transplantation group was markedly lowerat 12 hours, 24 hours, 48 hours (P＜0.05); TUNEL and macrophage infiltration score in ASCs transplantation group were significantly lower (P＜0.05); proliferating antigen increased at 48 hours and decreased at 72 hours and 1 week (P＜0.05). Meanwhile, comparing with right kidneys in ASCs transplantation group, score of left renal tubular interstitial damage degree was markedly lower at 24 hours(P＜0.05); the number of TUNEL positive cells at 1 week was observably lower (P＜0.05); macrophage infiltration score were dramatically lower at 12 hours, 48 hours, 72 hours and 1 week; proliferating antigen increased at 48 hours and decreased at 72 hours and 1 week (P＜0.05). Fluorescence microscope observation showed that residence time of ASCs in kidney was more than 7 days, but the number of ASCs significantly reduced after 48 hours, few Dil positive cells could be observed in lung, liver, spleen and heart. Conclusions ASCs transplantation via renal artery can significantly improve renal function and ameliorate pathological damage, relieve apoptosis and macrophage infiltration, and enhance the repair process after iAKI. It may due to renal intra-arterial transplantation increasing the amounts of ASCs migrated into the kidney in iAKI and reducing ASCs distribution in other organs.     

自吞噬在脂多糖诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用

目的 评价自吞噬在脂多糖(LPS)诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将培养的HL-1细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)不予任何处理,继续培养24h;LPS组在细胞培养液中加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬诱导剂纳巴霉素组(R组)在细胞培养液中加入纳巴霉素(终浓度0.2 μg/ml),孵育48 h时加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬抑制剂三甲基嘌呤组(3-MA组)在细胞培养液中加入加入3-MA(终浓度10 mmol/L),孵育48 h时加入LPS(终浓度1μg/ml).各组孵育4h时测定自吞噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达水平,并观察线粒体超微结构,计算自吞噬体数量,测定线粒体光密度值、线粒体膜电位(JC-1).于孵育24h时测定细胞凋亡率和Caspase-3活性.结果 与C组比较,LPS组LC3Ⅱ表达水平、线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高,自吞噬体数量增加,JC-1降低(P＜0.05);与LPS组比较,R组LC3Ⅱ表达水平和JC-1升高,自吞噬体数量增加,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性降低,3-MA组LC3Ⅱ表达水平和JC-1降低,自吞噬体数量减少,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高(P＜0.05).R组线粒体超微结构损伤较LPS组减轻,3-MA组较LPS组加重.结论 自吞噬可减轻LPS诱导的HL-1心肌细胞损伤,机制可能与清除受损线粒体,改善线粒体功能,抑制细胞凋亡有关.     

Effect of angiotensinⅡ type 1 receptor blocker on the 12-lipoxygenase activity and P-cadherin expression in type 2 diabetic rat glomeruli

Objective To investigate the effect of angiotensinⅡ(AngⅡ) type 1 receptor blocker (ARB) on 12-lipoxygenase (12-LO) activity and P-cadherin expression in type 2 diabetic rat glomeruli. Methods Podocytes were stimulated by 10-7 mol/L AngⅡ for 24 hours. 12(S)-HETE (1 mg•kg-1•d-1) and AngⅡ (400 ng•kg-1•min-1) were infused to rats by osmotic mini-pump for 1 week and 2 weeks respectively. Rats fed with high fat diet received low dose streptozotocin (STZ) to make type 2 diabetes and divided into 2 groups: low dose STZ (DN group), low dose STZ＋ARB treatment (Losartan group). Rats fed with regular chow were used as control group. All the rats were sacrificed after 6 weeks. Urine, blood, kidney cortical tissue and isolated glomeruli by sieving method were collected at the end of study respectively. ELISA, RT-PCR and Western blotting for related target were performed respectively. Results AngⅡincreased 12(S)-HETE levels in podocytes and glomeruli (all P＜0.01). AngⅡ levels in the glomeruli were significantly increased by 12(S)-HETE stimulation (P＜0.01). Blood glucose, kidney/body weight and 24 hour urinary protein were increased in DN group compared with that in control group (all P＜0.01). However, urine protein, Kidney/body weight were decreased in Losartan group compared with DN group (all P＜0.05). Increment of 12(S)-HETE content and decrement of P-cadherin expression were observed in DN glomeruli compared with that in control group(all P＜0.01). These abnormalities were prevented by administration of the losartan (all P＜0.05). Conclusions AngⅡ can down-regulate glomerular P-cadherin expression via activation of 12-LO.ARB can ameliorate the progression of DN via up-regulation of glomerular P-cadherin through inhibition of 12-LO activation in type 2 DN rats.     

盐酸戊乙奎醚后处理对大鼠肢体缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚后处理对大鼠肢体缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠144只,体重220～250 g,随机分为4组(n=36):对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和盐酸戊乙奎醚后处理组(IPHC组).IR组、IPO组和IPHC组采用弹力橡皮筋环扎大鼠双后肢近心端3 h,再灌注24 h的方法建立肢体缺血再灌注模型.再灌注即刻IPO组于双下肢近心端进行后处理,再灌注30 s、缺血30 s,重复3次;IPHC尾静脉注射盐酸戊乙奎醚0.15 mg/kg,用生理盐水稀释为1 m1.分别于再灌注即刻、1、3、6、12和24 h时,采集下腔静脉血样后,各放血处死大鼠6只,取后肢股四头肌组织,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性、TNF-α和IL-10含量,测定股四头肌组织MDA含量,SOD、氧化物酶(MPO)、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性及HIF-1α表达,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,IR组、IPO和IPHC组血清LDH、CK的活性和TNF-α、IL-10的浓度升高,股四头肌组织SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性降低,MPO活性和MDA含量升高,HIF-1α表达上调(P＜0.05或0.01);与IR组比较,IPO组和IPHC组血清LDH、CK的活性和TNF-α浓度降低,IL-10浓度升高,股四头肌组织SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性升高,MPO活性和MDA含量降低,HIF-1α表达下调(P＜0.01),病理学损伤减轻;与IPO组比较,IPHC组血清LDH活性和TNF-α浓度降低,CK活性和IL-10浓度升高,股四头肌组织SOD、MPO的活性和MDA含量降低,HIF-1α表达下调(P＜0.05或0.01),Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 盐酸戊乙奎醚后处理可减轻大鼠肢体缺血再灌注损伤,其机制与其抑制炎性反应和脂质过氧化反应,减轻细胞内钙超载,改善细胞能量代谢等有关.     

锁骨下动脉损伤不同时间再通血对周围神经及肌肉的影响

目的 探讨锁骨下动脉损伤不同时间再通血对周围神经及肌肉的影响.方法 以大鼠锁骨下动脉损伤为实验模型.将25只SD大鼠分为5组,每组5只.A组:对照组;B组:缺血6 h再通组;C组:缺血12 h再通组;D组:缺血18 h再通组;E组:缺血24h再通组.阻断锁骨下动脉再通后30d对热辐射缩足反射潜伏期(PWTL)、潜伏期、最大运动诱发电位波幅、Na+-K+-ATP酶浓度、乙酰胆碱酯酶(AchE)浓度进行测定.结果 测量PWTL,D组延长,与A、B、C组间差异有统计学意义(P＜0.05);E组进一步延长,与A、B、C、D组间差异有统计学意义(P＜0.05);而A、B、C组间差异无统计学意义.潜伏期A组与B组间差异无统计学意义,C组开始出现延长,C、D两组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.05),C、D两组间差异无统计学意义,E组与A、B、C、D组差异均有统计学意义.最大运动诱发电位的波幅A组与B组间差异无统计学意义,A、B组与C、D、E组差异有统计学意义(P＜0.05),C、D、E组间差异无统计学意义.Na+-K+-ATP酶的浓度A、B、C、D组各组之间未见明显差异,E组结果较前四组有明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).各组之间AchE浓度差异并无统计学意义.结论 锁骨下动脉损伤后12 h内再通前足感觉在30d内可恢复正常,18 h及24h再通,前足感觉迟钝30d内不能回复正常.潜伏期及最大运动诱发电位的波幅超过12 h后,30d测量会有明显变化.缺血时间超过2h,Na+-K+-ATP酶浓度降低在30d内不能回复到正常.再通时间在24h以内,AchE浓度不会受到明显的影响.     

心肌钙敏感受体在高位脊髓损伤大鼠心肌损伤中的作用

目的 探讨心肌钙敏感受体(CasR)在高位脊髓损伤大鼠心肌损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠18只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组:假手术组(S组,n＝6)和高位脊髓损伤组(SCI组,n＝12).采用砝码(10 g)从5 cm高处沿中空玻璃管垂直自由落下撞击C7脊髓的方法制备高位脊髓损伤模型.SCI组于高位脊髓损伤后12和24h(T1,2)时,S组于T1时取血样,测定血清肌酸激酶(CK)和CK-MB活性,取心肌组织,在透射电镜下观察心肌超微结构,分别采用荧光定量PCR法和Western blot法检测心肌CaSR mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,SCI组血清CK和CK-MB活性升高,心肌CaSR mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05);与T1时比较,SCI组T2时血清CK活性升高,CK-MB活性降低,心肌CaSR mRNA表达上调(P<0.05),CaSR蛋白表达差异则无统计学意义(P＞0.05).SCI组T1,2时心肌超微结构呈现不同程度的损伤改变.结论 大鼠高位脊髓损伤后心肌CaSR表达上调,该变化可能是高位脊髓损伤后心肌损伤的机制之一.