新疆喀什地区维吾尔族耳聋人群常见基因突变的研究

目的 采用中国人群遗传性聋常见突变基因类型对新疆喀什地区耳聋人群进行筛查,探究新疆维吾尔族耳聋人群基因突变的检出率及其意义.方法 选取维吾尔族非综合征性聋患者174例作为研究对象,通过病史采集,血样抽取和DNA提取后对所选样本的35delG、176-191del16、235delC、299-300delAT、2168A＞C(H723R)、IVS7-2A＞G、1555A＞G、1494C＞T进行检测,对于位点缺失样本进行序列测定.采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析.结果 GJB2是主要的突变基因,187delG在维吾尔族耳聋人群中首次发现,也是新发现的GJB2基因的病理性突变;SLC26A4突变在维吾尔族耳聋人群中的检出率低,与对照组比较差异无统计学意义(x2=0.000,P=1.000);mtDNA 12S rRNA突变在维吾尔族耳聋人群中的检出率低,在对照组中未检出;20例有明确耳聋家族史的患者中17例未检出突变.结论 维吾尔族耳聋人群耳聋基因常见突变有其特点,基因全序列分析和家系研究对丰富维吾尔族耳聋基因的突变谱是必要的.

Abstract：

Objective To investigate the frequency of the mutations in Uyghur nonsyndromic deafness groups in Kashgar region of Xinjiang province by means of screening the common mutations of known deafness genes in China. Methods One hundred and seventy-four Uyghur patients with hearing loss were involved in this study. Questionnaire survey was conducted and peripheral blood samples were collected for polymerase chain reaction. Screening was performed for 35delG, 176-191del16, 235de1C, 299-300delAT, 1555A ＞ G, 1494C ＞ T, 2168A ＞ G and IVS7-2A ＞ G. DNA sequence analysis was performed for the samples with absent signals at some loci. SPSS 17.0 software was used to analyze the data. Results Mutation of GJB2 was the most common among the three known deafness genes. 187delG was found for the first time in Uyghur groups with hearing loss and was a new pathological mutation of GJB2. The mutation rate of SLC26A4 was low in the experimental group with no significant difference when compared with the control group. The mtDNA 12S rRNA mutation rate in the deaf group was low but not detected in the control group.In addition, mutations were not dectected in 17 cases among the 20 patients with positive family history.Conclusion The mutation rate and dominant mutation of Uyghur ethnic nonsyndromic deaf groups have their own characteristics, it is necessary to conduct a sequence analysis and a stemma studying for an aim of perfecting the mutation spectrum of Uyghur deafness gene.     

GJB3在携带GJB2单等位基因突变的中国耳聋人群中的突变分析

目的 在GJB2病理性单等位基因突变携带者中进行GJB3基因编码区序列分析,探讨GJB2与GJB3双基因模式遗传致聋的可能性.方法 对从全国24个省市自治区3323例重度-极重度感音神经性耳聋患者中筛查出的108例携带GJB2病理性单等位基因突变的耳聋患者进行GJB3基因编码区全序列测序,分析测得序列,对所发现突变或变异编码氨基酸的物种进化保守性进行分析,结合听力正常对照人群中GJB3基因编码区测序结果,对考虑为携带GJB3突变及GJB2病理性单等位基因突变的耳聋患者进行家系分析.结果 108例携带GJB2病理性单等位基因突变的耳聋患者中共检测到7种GJB3基因变异类型,其中错义突变3种,静止变异4种.5例携带GJB3基因的错义变异(V84I,A194T,N166S),结合对照组检测结果,V84I为中国人群GJB3基因的多态改变,GJB3基因N166S和A194T可能为导致常染色体隐性非综合征性耳聋的的病理性突变.结论 GJB3与GJB2可能以双基因模式遗传导致耳聋,其致病机制还待进一步阐明.     

采用第二代测序技术发现一个中国耳聋家庭SLC26A4基因突变

目的 明确一例非综合征型耳聋患者的致病基因.方法 收集患儿及其父母的血样,提取基因组DNA,采用SNaPshot技术和第二代测序技术进行耳聋基因检测,采用聚合酶链反应(PCR)直接测序方法对检测出的SLC26A4基因突变进行验证.结果 该耳聋患儿的SLC26A4基因存在p.V306GfsX24和p.P516PfsX11复合杂合突变,其父亲存在p.V306GfsX24杂合突变,母亲存在p.P516PfsX11杂合突变.结论 SLC26A4基因p.V306GfsX24和p.P516PfsX11复合杂合突变是导致该患者耳聋发生的原因.第二代测序技术可准确检测耳聋基因的新突变,具有一定的临床应用价值.     

内蒙古赤峰市特教学校耳聋患者线粒体12SrRNA基因突变分析

目的利用基因筛查的方法调查内蒙古赤峰市特教学校耳聋患者的分子学病因,着重进行线粒体12SrRNA基因序列突变分析。方法调查对象来自赤峰市特教学校耳聋患者134例,对照组为中国北方听力正常者75例。所有受检患者均采集外周血并提取DNA,应用特定引物进行线粒体12SrRNA基因测序,对发现携带线粒体12SrRNA基因突变的患者行详细的病史调查、临床资料分析。结果134例耳聋患者中,1例携带线粒体12SrRNA基因1555A>G突变,3例携带1095T>C变异,所有4例突变携带者均有明确的氨基糖苷类药物应用史。对照组中1例携带1095T>C变异。结论线粒体12S rRNA基因在中国北方散发耳聋人群中具有一定的突变比例,赤峰地区聋哑人群的耳聋病因与线粒体12SrRNA突变关系较密切,1095T>C变异很可能和1555A>G突变一样与母系遗传氨基糖苷类药物性聋有密切关系。     

213个遗传性耳聋家庭的产前诊断和生育指导

目的 通过回顾遗传性耳聋家庭产前诊断的临床实践,总结耳聋产前诊断的相关流程策略与经验.方法 2005年7月至2011年4月,213个耳聋家庭参加研究.其中,205个家庭已生育1个耳聋患儿,除1个家庭妻子为听力正常个体而丈夫为耳聋患者外,其余204个家庭的父母均听力正常;8个家庭为首次生育,包括2个耳聋夫妇家庭.除了1个家庭是经家系研究确定为POU3F4c.647G ＞A杂合突变导致X伴性耳聋外,其余212个家庭均行常见耳聋基因检测,包括GJB2、SLC26A4分析和线粒体基因(mtDNA) 12S rRNA检测,明确分子病因和后代再发风险.接受产前诊断时,母亲妊娠11 ～30周,根据妊娠时间,行适当的产前诊断取材并提取胎儿DNA,测定胎儿基因型,预测胎儿听力状态.结果 后代再发风险为25％的家庭共209个,其中,再生育家庭204个,先证者均为GJB2或SLC26A4纯合或复合突变,父母均为相同基因GJB2或SLC26A4突变携带者;5个首次生育家庭中的夫妇同为GJB2或SLC26A4突变携带者.后代再发风险为50％的家庭共3个,1个家庭先证者及父亲均为SLC26A4复合突变,母亲为SLC26A4突变携带者;1个家庭妻子为POU3F4突变携带者;1个家庭为耳聋夫妇,丈夫为SLC26A4复合突变,妻子同时携带mtDNA A1555G突变和SLC26A4杂合突变.后代再发风险为100％的家庭1个,夫妇均为GJB2纯合或复合突变,但妻子从精子库选择健康人精子,人工受精后怀孕.产前诊断结果显示:213个家庭共行产前诊断226例次(11个家庭进行了2次产前诊断,1例家庭行3次产前诊断),180例次检测结果显示胎儿仅携带一个父系或母系突变,或未携带任何已知突变,该180个胎儿均已出生,随访听力均正常;46例次检测结果显示胎儿与先证者基因型相同,或同时携带了父母的突变,父母自愿选择终止妊娠.结论 耳聋基因诊断结合产前诊断可以有效预防耳聋家庭生育或再生育聋儿,严谨规范的流程与策略是耳聋产前诊断临床安全顺利实施的保证.     

西北五省573例非综合征型耳聋患者线粒体 DNA A1555G突变分析

目的：分析西北地区非综合征性耳聋人群中线粒体DNA A1555G突变发生频率。方法：通过标准化的流行病学调查设计、行政组织、标本采取和线粒体DNA 12SrRNA A1555G筛查方法进行西北5个省市自治区的重度感音神经性耳聋患者的一般情况和分子病因学调查。结果：收集来自西北5个省市573例非综合征性重度至极重度感音神经性耳聋病例,筛查出线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变病例31例。结论：在西北五省,线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变检出率高于全国平均水平,通过干预可有效减少药物性耳聋的发生。     

23个非综合征型耳聋家系GJB2 基因突变分析

目的　分析内蒙古地区23个非综合征型耳聋家系缝隙连接蛋白β2（gap junction protein beta 2,GJB2）基因突变特点,探讨该耳聋家系遗传学病因。方法　对内蒙古地区23个非综合征型遗传性聋家系共122人进行问卷调查、听力学检查,提取外周血DNA,经聚合酶链反应（PCR）扩增GJB2 基因编码区进行直接测序,运用DNAStar软件进行测序结果分析。结果　共检测到8个家系46名家系个体存在8种GJB2 基因核酸序列改变。包括5种致病突变及3种多态性改变,明确了6个耳聋家系的遗传学病因为GJB2 基因纯合突变所致。GJB2 基因突变在23个家系中的检出率为33%（8/23）,在122个家系个体的检出率为33%（37/122）,在62例耳聋患者中的检出率为60% （37/62）。c.235delC突变检出率最高,为52%（32/62）,其次为c.299-300delAT,突变携带率为8%（5/62）。结论  内蒙古地区家系遗传性聋GJB2 基因突变有较高的携带率,c.235delC位点是最常见的致病位点,其次为c.299-300delAT。以散发耳聋患者为根源,对其亲属进行耳聋基因筛查可以更加高效的发现潜在的耳聋基因突变携带者。     

新疆维吾尔族和汉族非综合征型遗传性聋患者线粒体DNA 12S rRNA A1555G、GJB2及GJB3基因突变研究

目的 分析新疆地区维吾尔族和汉族非综合征型遗传性聋患者线粒体DNA、GJB2、GJB3 基因突变情况,探讨新疆地区维吾尔族非综合征型遗传性聋人群中上述基因突变位点及突变频率与汉族耳聋人群的差异.方法 对93名新疆地区非综合征型遗传性聋患者进行耳聋病因问卷调查和纯音听阈测试,另选取110名听力正常人作为对照组.耳聋组中维吾尔族43例,汉族50例;对照组中维吾尔族56例,汉族54例.收集血样,提取DNA后经聚合酶链反应(PCR)扩增.GJB3基因PCR产物直接测序;针对线粒体DNA 12S rRNA A1555G点突变进行限制性内切酶分析,挑选阳性者进一步测序.对83例非综合征型遗传性聋患者和98例正常人行GJB2基因测序,其中耳聋组维吾尔族43例,汉族40例,对照组维吾尔族46例,汉族52例.结果 93名患者中检测到GJB3基因33C-T2例、766G-A 2例、357C-T 7例以及798C-T4例.8例患者存在线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变,其中维吾尔族2例,汉族6例.在耳聋患者中,发现9种GJB2碱基改变:109G-A、233-235delC、79G-A、196G-A、341A-G、564G-A、380G-A、71G-A及35delG.对照组检测到GJB3基因357C-T 4例、798C-T 5例及93C-T 2例.对照组发现9种GJB2基因碱基改变:341A-G、380G-A、457G-A、79-G-A、109G-A、281A-G、21G-T、171G-T及368C-A.线粒体DNA A1555G突变频率在汉族耳聋组与对照组之间差异具有统计学意义(P＜0.05).GJB2基因79G-A突变在两个民族耳聋组和对照组的分布差异均具有统计学意义(P值均＜0.05);而341A-G突变在耳聋组两个民族之间的分布差异具有统计学意义(P＜0.05).GJB3基因798C-T的突变频率无论在耳聋组还是对照组,维吾尔族和汉族之间的差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).结论 新疆地区线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变检出率较高.GJB3 基因突变并非新疆地区非综合征型遗传性聋患者的主要致病原因.该地区GJB2和GJB3突变具有种族和地域性特点.     

不同年龄的重度耳聋患者常见耳聋基因突变的阳性率分析

目的 分析中国常见耳聋基因突变在不同发病或就诊年龄组重度耳聋人群中的阳性检出率,为更有效地应用临床耳聋基因诊断提供依据.方法 839名经听力学检查确诊为双耳重度以上感音神经性耳聋的先证者,接受了一项或多项常见耳聋基因检测,包括GJB2编码区测序、SLC26A4编码区测序、线粒体DNA C1494T及A1555G突变基因芯片检测.将839例受检者按发病年龄和就诊年龄各分为四组(0～10岁,11～30岁,31～50岁,50岁～).分别对每组受检者的常见耳聋基因突变阳性检出率进行统计分析.结果 GJB2和SLC26A4基因均在发病年龄为0～10岁组中的阳性检出率最高(分别为22.10%和34.32%)(P=0.003,P=0.000).CJB2和SLC26A4基因突变均在就诊年龄为0～10岁组中的阳性检出率最高(分别为24.69%和34.52%)(P=0.000,P=0.000).线粒体DNA1555/1494位点突变则分别在发病年龄为0～10岁组中和就诊年龄为11～30岁组中阳性检出率最高(分别为2.45%和2.36%),但无显著性差异(P=O.357).结论 双耳重度感音神经性耳聋患者常见耳聋基因突变检出率高:发病年龄及就诊年龄为10岁以下的双耳重度感音神经性聋患儿应常规进行耳聋基因诊断.     

connexin 26基因突变与国人遗传性无综合征耳聋相关性分析

目的分析国人遗传性无综合征耳聋与缝隙连接蛋白26（connexin 26,Cx 26）基因突变相关性,从分子水平探讨该病的发病机理。方法收集国人35个无综合征耳聋家系中138名成员,99例散发的无综合征耳聋患者以及100份健康对照个体的外周血DNA样本共337份;采用聚合酶链反应-单链构像多态性（polymerase chain reaction-single stand conformational     

Etiologic and diagnostic evaluation: Algorithm for severe to profound sensorineural hearing loss in Brazil

Abstract

Objective: Evaluation of the effectiveness of imaging and genetic testing, and establishment of a cost-effective diagnostic protocol for the etiologic diagnosis of sensorineural hearing loss (SNHL) in Brazil. Design: Prospective cohort study. Study sample: Analysis of 100 unrelated Brazilian patients with severe to profound bilateral SNHL submitted to cochlear implant (CI) between 2002 and 2010 at the University of Campinas hospital. The study was based upon three groups: individuals with congenital, progressive, and sudden SNHL. Results: After the diagnostic investigation, the number of cases with unknown etiology was reduced from 72 to 42 (a 42% reduction); 25% of cases were due to environmental factors, 19% to genetic causes, and 14% to inner-ear abnormalities or other clinical features. The genetic and imaging findings contributed to the diagnosis of SNHL in 19% and 20% of the cases analysed, respectively. Molecular testing mainly contributed to the diagnosis of patients with congenital SNHL, while the contribution of radiologic examination was higher for individuals with progressive or sudden SNHL. A sequential diagnostic protocol was proposed based on these data. Conclusions: The proposed diagnostic workup algorithm could provide better optimization of etiologic diagnosis, as well as reduced costs, compared to a simultaneous testing approach.     

赤峰市特教学校重度感音性聋分子病因学分析--GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告

目的 调查内蒙古赤峰市聋哑学校重度感音性耳聋病因学情况。方法 对赤峰市聋哑学校140名学生进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试。所有受检学生均采集外周血并提取DNA．进行线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变检测、GJB2基因突变检测。结果 1例（0．71％）存在线粒体DNA A1555G点突变；16例（11．43％）存在GJB2 235delC纯合突变，19例（13．57％）存在GJB2 235delC杂合突变。结论 赤峰市耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率，并呈现明显的地域特点。通过聋病分子诊断，可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。     

山西太原129例重度非综合征型感音神经性耳聋基因的筛查

目的应用耳聋基因芯片对重度极重度非综合征型感音神经性耳聋患者进行筛查。方法采集本地区聋哑学校和门诊散发的重度极重度非综合征型感音神经性耳聋患者129人的外周血并提取DNA,应用耳聋基因芯片检测GJB2,GJB3,SLC26A4,线粒体DNA(mitochondrial,mtDNA)12SrRNA热点突变位点。结果该耳聋人群中与筛查位点有关的耳聋比例占41.09%,共检出GJB2基因突变26例(20.16%);mtDNA突变8例(6.2%);SLC26A4基因突变21例(16.28%);未检出GJB3基因突变。结论本组耳聋人群中与筛查位点有关的耳聋比例高达41.09%,GJB2突变是该人群遗传性聋的最常见病因,SLC26A4突变为第二常见病因。     

全聋型和重度平坦型突发性聋的治疗及预后

目的了解全聋型和严重平坦型突发性聋的治疗效果及影响预后的因素。方法对2003年1月至2006年10月就诊的62例听力损失为中重度以上（0．25、0．5、1、2、4kHz的平均纯音听阈≥56dB）的突发性聋患者进行研究。其中18例单独应用血栓通（三七总皂苷）治疗，19例应用泼尼松加血栓通治疗，25例应用甲泼尼龙加东菱迪芙加血栓通治疗。结果单独应用血栓通的有效率为22．2％（4／18），显效率为5．6％（1／18），应用泼尼松加血栓通的有效率为57．9％（11／19），显效率为36．8％（7／19），联合应用甲泼尼龙、东菱迪芙、血栓通的有效率为68．0％（17／25），显效率为60．0％（15／25）。经统计学处理，应用皮质类固醇激素加血栓通和或加东菱迪芙治疗中重度以上的平坦型或全聋患者的疗效要明显好于单独应用血栓通（P〈0．05）。全聋患者伴眩晕的比率[88．2％（15／17）]明显高于严重平坦型患者[26．7％（12／45）]，且疗效较差。结论严重平坦型预后较好，以大剂量皮质类固醇激素和东菱迪芙为主的联合治疗的效果较好；全聋型往往伴有眩晕，预后较差。     

SLC26A4基因IVS7-2A＞G突变在中国不同地区和民族重度感音聋患者中分布频率的观察

目的进行全国范围的SLC26A4基因IVS7-2A〉G突变的分子流行病学调查，为大前庭水管综合征的快速筛查和临床基因诊断提供证据。方法应用自主研制的SLC26A4基因IVS7-2A〉G突变检测试剂盒对来自全国不同省市的1979例散发的非综合征性聋患者进行IVS7—2A〉G突变筛查，比较不同地区、民族的IVS7-2A〉G突变携带频率。结果在中国大陆不同地区1979例耳聋患者中发现SLC26A4IVS7—2A〉G纯合突变90例，杂合突变155例，总的携带率12．38％。不同地区间的携带率比较差别有统计学意义（X^2=34．4899，P〈0．05），华中地区最高，西南地区最低；不同民族比较差别有统计学意义（X^2=35．4456，P〈0．05），汉族携带率最高为13．88％，藏族最低携带率为0。不同民族间的两两比较汉族与我国西部地区的少数民族比较差别有统计学意义，西部地区少数民族之间比较差别无统计学意义。结论中国非综合征性聋患者中IVS7-2A〉G突变携带率相当高，中国不同地区、民族间SLC26A4基因IVS7-2A〉G突变可能存在明显的差异，SLC26A4的基因诊断可作为大前庭水管综合征的快速筛查方法。     

老年人重度和极重度聋双耳助听效果评价

目的评价老年人重度和极重度聋双耳助听效果。方法比较单耳和双耳助听后的言语识别率。结果　单耳助听后的言语识别率,单音节词为７７．５３±２．０７％,双音节词为８６．８２±４．３６％。双耳助听后的言语识别率,单音节词为８６．４７±１．８７％,双音节词为９１．６５±２．１８％。双耳助听效果显著优于单耳。结论双耳助听不仅可显著改善言语分辨能力,而且可使声源定向能力亦获显著改善。非常适合双耳重度和极重度聋的老年人。     

非综合征型聋患者线粒体DNA A1555G突变频率分析

目的分析甘肃地区非综合征型聋患者线粒体DNA 12SrRNA A1555G的突变频率。方法收集甘肃地区五所聋哑学校802例聋哑学生血样，经基因组DNA提取后进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增线粒体DNA目的片段，用A1w26I限制性内切酶检测A1555G点突变，对酶切阳性病例的PCR产物纯化后进行直接测序验证酶切结果，分析线粒体DNA 12SrRNA A1555G在甘肃地区的突变频率。结果802例聋哑学生中有67例经酶切及直接测序证实为线粒体DNA A1555G突变，突变频率为8．4％（67／802）。其中有15例母系家庭成员中还有2例以上耳聋患者。结论线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变在甘肃地区非综合征型聋患者中占有很高的比例，高于国内外其他地区的相关报道。此研究结果不仅为绘制中国人群线粒体DNA A1555G突变频谱增添新的内容，也为因地制宜地开展耳聋基因诊断、实施遗传咨询及积极预防耳聋的发生有重要的指导意义。