乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤及ADMA/NOS/NO信号机制

目的探讨乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及ADMA/NOS/NO信号机制。方法用不同浓度的乙醇与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛（MDA）、非对称性二甲基精氨酸（AD-MA）、一氧化氮（NO）的含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性等指标,观察乙醇对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系（乙醇处理细胞24 h）和时-效关系（终浓度为100 mmol/L的乙醇分别于处理0、3、6、12、24、48 h后观察检测指标）。实验分为正常对照组（加入与处理组等体积的D-Hank’s液,乙醇浓度为0 mmol/L）、乙醇处理组（终浓度分别为25、50、100、200mmol/L的乙醇）、乙醇＆VitC组（乙醇终浓度为100 mmol/L,VitC终浓度为100 mg/L）和阳性对照组（终浓度为500μmol/L的过氧化氢）。结果50-200 mmol/L乙醇能显著改变细胞形态、降低细胞活性（OD值：0.91±0.10-0.58±0.04,细胞生长抑制率：0.00±0.00-35.57±3.13,P〈0.01）;能显著性诱导内皮细胞MDA升高（258.72±7.36-524.07±8.25,P〈0.01）。50-200 mmol/L的乙醇还能显著性诱导：内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性下降（6.27±0.10-0.47±0.23,P〈0.05）及总NOS活性下降（10.69±0.54-3.77±0.32,P〈0.05）;NO含量降低（191.61±7.96-88.38±5.07,P〈0.05）。而且上述生物学效应均具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较也具有显著性（P〈0.05或P〈0.01）。100 mmol/L乙醇处理时细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性及ADMA含量最高,且分别在处理后24 h到达最高峰。VitC均能扭转上述生物学效应,且具有显著性（P〈0.01）。结论50-200 mmol/L的乙醇能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

降血压肽对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究降血压肽ACEIP对脐静脉内皮细胞释放内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的影响。方法按150,300,600μg／ml不同剂量的降血压肽作用于脐静脉内皮细胞,进行细胞生长试验及细胞培养液中NO、ET含量的检测。结果与空白对照组比较,不同剂量的降血压肽可升高培养液中NO含量。降低ET含量;去甲肾上腺素的促进脐静脉内皮细胞的生长以及其促进脐静脉内皮细胞分泌ET、降低培养液中NO含量的作用可被降血压肽拮抗。结论降血压肽对血管内皮细胞功能具有保护作用。     

镁对人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的 :　观察 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的人脐静脉内皮细胞 DNA氧化损伤的影响。方法 :　取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养。实验分四组 :1 .阴性对照。 2 .阳性对照 ,培养液中加H2 O2 。 3 .补镁组 ,培养液中加不同浓度的 Mg SO4 。 4.补 H2 O2 与镁组 :培养液中加 H2 O2 与镁。用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长。结果 :　与 H2 O2 组相比 ,H2 O2 +Mg2 + 各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小。结论 :　 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的 DNA氧化损伤有明显的拮抗作用。     

较低剂量甲醛诱导人脐静脉内皮细胞损伤的时相特征及机制

目的观察较低剂量甲醛(formaldehyde,FA,浓度为40μmol/L)诱导人脐静脉内皮细胞损伤时相特征及一氧化氮(NO)含量变化的时相规律,分析甲醛在诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HU-VEC-12株)与甲醛浓度为40μmol/L的DMEM培养基孵育。分别处理一定时间后(0,4,12,24,48,72h)H-E染色-光学显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞的活性;丙酮酸二硝基苯腙比色-分光光度法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)浓度;硝酸还原酶法测定培养液中NO浓度;生化分析法测定内皮细胞一氧化氮合酶活性;免疫细胞化学法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白表达;RT-PCR法测定eNOS和i NOS的mRNA表达。结果较低浓度甲醛呈时间依赖性地促进细胞LDH漏出,以及内皮细胞上清液MDA和NO的产生;降低eNOS的活性,抑制eNOS在蛋白和基因水平的表达;增加i NOS活性,促进i N-OS在蛋白和基因水平的表达。结论甲醛诱导HUVEC-12细胞损伤,机制可能与其抑制eNOS的活性及表达,诱导i NOS的活性及表达,增加病理性NO产生,从而导致内皮细胞损伤。     

芍药苷对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的 保护作用

摘要:目的　探讨芍药苷对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法　体外培养HUVEC,以200 μmol/L H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤建立模型,同时以100、200、400 μmol/L的芍药苷分别干预,显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝（MTT）法检测HUVEC活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性及一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）法检测内皮素-1（ET-1）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制因子（PAI-1）的含量。结果　与模型组比较,芍药苷中、高剂量组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低、ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论　芍药苷对H2O2诱导的HUVEC损伤具有明显的保护作用。     

镁对入脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的观察Mg2+对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响.方法取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养.实验分四组1.阴性对照.2.阳性对照,培养液中加H2O2.3.补镁组,培养液中加不同浓度的MgSO4.4.补H2O2与镁组培养液中加H2O2与镁.用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长.结果与H2O2组相比,H2O2+Mg2+各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小.结论Mg2+对H2O2诱导的DNA氧化损伤有明显的拮抗作用.     

茶多酚对甲醛致人脐静脉内皮细胞损伤保护作用

目的观察茶多酚对甲醛致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响。方法体外常规培养内皮细胞,实验设正常对照组、甲醛损伤组(0.1 mmol/L)、茶多酚组(2.5、5、10、20 mg/L)。其中茶多酚先与细胞预孵12 h后加入甲醛,置CO₂培养箱培养4 h,检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活力及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮和细胞中谷胱甘肽含量,免疫细胞化学法检测核转录因子(NF-κB)。结果2.5、5、10、20 mg/L茶多酚组LDH、MDA含量分别为2 021.02、1 878.17、1 748.56、1 625.72 U/L和3.50、3.30、2.99、2.68 nmol/mL,均分别低于甲醛损伤组,差异有统计学意义(P<0.01);SOD与GSH活力分别为24.16、24.67、25.56、26.02 U/mL和0.334、0.364、0.445、0.449μmol/mg prot均高于甲醛损伤组(P<0.01);茶多酚各组NF-κB活力与甲醛组比较明显下降(P<0.01)。结论茶多酚可提高内皮细胞抗氧化酶活性,减轻甲醛所致氧化损伤。     

pLXSN-Tum-5致人脐静脉内皮细胞凋亡作用及机制

目的 探讨pLXSN-Tum-5病毒颗粒对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的生长抑制和诱导凋亡作用及机制。方法 采用不同浓度的pLXSN-Tum-5病毒颗粒作用HUVEC,利用噻唑蓝法和Hoechst-33342染色法检测细胞生长及其形态变化;RT-PCR和Western blotting方法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达变化。结果 与对照组（pLXSN）比较,pLXSN-Tum-5病毒颗粒转染组HUVEC的存活率明显降低,呈剂量效应关系;细胞内可见凋亡小体;对照组HUVEC内Bcl-2和caspase-3 mRNA和蛋白表达分别为（0.721±0.041）、（0.654±0.034）和（0.956±0.032）、（0.356±0.054）;与对照组比较,20 μmol/L pLXSN-Tum-5病毒颗粒转染组HUVEC内Bcl-2和caspase-3 mRNA和蛋白水平[分别为（1.134±0.0524）、（1.012±0.0641）和（1.612±0.067）、（0.712±0.0647）]明显上调（P<0.05）。结论 Tum-5可抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC凋亡,其机制可能与上调Bax/Bcl-2和caspase-3表达有关。     

S-腺苷同型半胱氨酸升高与人脐静脉内皮细胞损伤及整体基因组甲基化的关系分析

目的:探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)升高对血管内皮细胞的损伤效应与整体基因组甲基化的关系。方法:以永生化的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)为研究对象,用不同浓度的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH)抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24、48、72h,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,电子显微镜观察细胞器超微结构变化,反相高效液相色谱法(reversed phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定胞内SAH浓度,荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)测定Hcy的浓度,MTT法检测细胞生长增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,胞嘧啶延伸法检测整体基因组DNA甲基化水平。结果:HUVEC经DZA处理后,形态学上出现凋亡或坏死特征,培养基中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度下降,胞内SAH含量升高,细胞的生长增殖能力降低并出现凋亡现象,整体基因组的甲基化水平降低。结论:SAH升高能导致血管内皮细胞的损伤,且这种作用与整体基因组甲基化水平有关,SAH可能是动脉粥样硬化形成过程中的潜在生物标志分子。     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

人脐静脉（Human Umbilical Vein,HUV）是培养血管内皮细胞的常用来源之一,与动物血管内皮细胞相比,人脐静脉内皮细胞（HUVEC）可使实验条件更符合人体情况,结果更具有意义;而与人动脉内皮细胞相比,其取材方便,操作简单,混有杂细胞少,因此,HUVEC的培养日益为广大研究所重视.本在诸多研究HUVEC培养经验的基础上,改进并建立了一套操作性强、成功率高、细胞获得多的人脐静脉内皮细胞培养方法.报告如下.     

MTT法检测通心络对血管内皮细胞增殖的影响

目的　研究通心络 (TXL)对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (ECV -3 0 4)增殖的影响。方法　制备通心络含药血清 ,用5 % ,10 % ,15 %TXL含药血清分别作用培养的ECV -3 0 4细胞 4h ,8h。通过细胞形态学、MTT法检测TXL含药血清对ECV -3 0 4细胞增殖的影响。结果　通心络组光密度 (OD)值明显高于对照组 (P <0 0 1) ,含药血清培养 8h的OD值明显高于 4h的 (P <0 0 5 )。结论　TXL促进ECV -3 0 4细胞增殖。     

三羟异黄酮对氧化损伤内皮细胞保护作用的实验研究

目的研究植物雌激素的有效成分三羟异黄酮对胆固醇致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,探讨植物雌激素的抗氧化功能。方法体外培养HUVEC,将细胞分为5组：正常对照组、胆固醇损伤组（胆固醇50mg/L＋终浓度为10μmol/L的CuSO4溶液）、胆固醇损伤的同时加入三羟异黄酮不同剂量,GST低剂量组（22.5μmol/L）、中剂量组（45μmol/L）和高剂量组（90μmol/L）。培养结束后,测定上清培养液中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、丙二醛（MDA）含量以及一氧化氮（NO）生成量。结果胆固醇损伤组的GSH-Px活力和NO生成量明显下降,MDA含量升高,与正常对照组和GST不同剂量组比较差异有显著性（P〈0.05）,而正常对照组和GST不同剂量组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论胆固醇可以诱导内皮细胞损伤,三羟异黄酮可能有阻止胆固醇对HUVEC的损伤作用。     

γ-分泌酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响

目的探讨Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对正常人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响。方法分别用不同浓度DAPT（15、30、45、60μM/L）处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）12h、24h和48h,MTT法测定内皮细胞活力;粘附实验测定处理24h后细胞粘附率;TUNEL法检测处理24h后细胞凋亡率;Western法检测Notch信号通路受体Notch1的表达。结果 MTT检测显示DAPT显著抑制HUVECs存活（P〈0.01）,并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果显示DAPT（24h）可以显著减弱HUVECs粘附能力（P〈0.01）;TUNEL检测显示DAPT（24h）可以显著增加HUVECs凋亡率（P〈0.01）;Westernblot结果显示DAPT使HUVECs中Notch1表达显著下降（P〈0.01）。结论 DAPT可阻断Notch信号通路,抑制正常人脐静脉内皮细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

镁对人脐静脉内皮细胞增殖活力的影响

目的：探讨镁对人脐静脉内皮细胞增殖活力的影响及对心血管系统的保护作用。方法：在改进人脐静脉内皮细胞培养方法的基础上,用MTT法检测Mg^2对传统2－3代人脐静脉曲皮细胞增殖活力的影响,实验分为空白对照组LH2O2组;补镁组;H2O2 Mg^2组,结果：补镁各剂量组OD值高于空白对照组,H2O2＋Mg^2各剂量组OD值高于H2O2组,均具有显著性差异。结论：提示镁对内皮细胞增殖有明显的促进作用。     

甲型流感病毒感染致人血管内皮细胞凋亡的初步研究

目的探讨甲型流感病毒感染对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响。方法 用纯化的甲型流感病毒体外感染人血管内皮细胞后,用RT-PCR法检测病毒整合细胞并复制状况,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及免疫印迹检测细胞凋亡。结果琼脂糖电泳结果显示,H1N1病毒能感染血管内皮细胞且能复制。MTT结果显示,尽管H1N1病毒不能完全抑制血管内皮细胞的增殖,但能使细胞增殖能力明显下降。流式细胞术结果显示甲型流感病毒感染组的Annein V染色阳性的血管内皮细胞比例明显高于对照组。免疫印迹结果显示病毒感染24、32 h后,细胞出现断裂的PRAP蛋白条带。结论甲型流感病毒能感染人血管内皮细胞及增殖,并能诱导血管内皮细胞凋亡。     

金黄色葡萄球菌对人脐静脉内皮细胞黏附及内化与诱导细胞凋亡的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌(SAU)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附、内化及诱导细胞凋亡的发生、发展的机制和致病意义。方法常规方法制备SAU悬液,分别感染HUVEC细胞30 min、1、24、h。采用光学显微镜和荧光显微镜观察SAU对HUVEC的黏附、内化情况,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析SAU对HUVEC细胞诱导凋亡的影响。结果SAU与HUVEC共育30 min发现有细菌黏附细胞表面,1 h后有少量细菌侵入胞内,并伴有凋亡现象的发生,随着时间的延长,内化的细菌数没有增加,凋亡现象通过流式细胞仪、DAPI荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析明显的被观测到。结论SAU通过黏附、内化侵入内皮细胞并诱导内皮细胞发生凋亡。     

氟对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察不同浓度的氟对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响.方法 利用二甲基噻唑二苯基四唑溴(MTT)比色法、流式细胞仪及免疫组织化学法观察不同浓度的(120、240、360、480、600、720、840、960 μmol/L)氟化钠染毒24 h对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞增殖活性的影响.结果 氟化钠的浓度在120～240 μmol/L时,增殖细胞核抗原表达阳性率高于正常对照组(P＜0.01),240 μmol/L时的阳性率最高约为80%;吸光度(A)值和细胞分裂增殖指数(PI)值也高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01);360～480 μmol/L氟化钠染毒组上述指标与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05);当氟化钠的浓度增加到600 μmol/L以上时,增殖细胞核抗原的表达、A值及PI值均低于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),以960μmol/L时增殖抗原表达阳性率最低(约为20%),并且随着浓度增高上述指标呈下降趋势.结论 低浓度的氟化钠能促进脐静脉血管内皮细胞增殖活性,高浓度时抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖活性,且随着氟浓度的增加,抑制作用逐渐增强.     

染铅对大鼠脾脏NOS、NO、SOD、MDA的影响

目的 探讨染铅对大鼠脾脏一氧化氮合酶（NOS）活力、一氧化氮（NO）含量的影响及其与血铅相互关系。方法 Wistar大鼠经饮水（加0，18．4，184．0mg/L醋酸铅，分别供对照组、低剂量组、高剂量组自由饮用）染毒，测定脾脏NOS活力、NO含量、SOD活力、MDA含量。结果 NOS活力高剂量染铅组7d时显著低于对照组和低剂量组（P＜0．05），90d高于对照组和低剂量组（P＜0．05），低剂量组90d高于对照组（P＜0．05）；NO含量高剂量组和低剂量组60d、90d时均显著低于对照组（P＜0．05）；SOD活力高剂量组14d、30d、60d、90d时均低于对照组（P＜0．05），低剂量组30d、90d时显著低于对照组（P＜0．05）；MDA含量高剂量组14d、60d、90d时均显著高于对照组，60d时显著低于低剂量组，90d时显著高于低剂量组（P＜0．05），低剂量组在各时点与对照组比较，差异无显著性（P＞0．05）。血铅与脾脏NO含量呈倒S型剂量－效应曲线；血铅与脾脏SOD活力呈倒抛物线型剂量－效应曲线；血铅与脾脏MDA含量呈正抛物线型剂量－效应曲线。结论 铅可引起大鼠脾脏NOS活力、NO含量、SOD活力、MDA含量改变，表明铅可引起体内氧应激反应导致脂质过氧化损伤。