肺腺癌细胞系耐药及凋亡相关基因的表达和逆转

目的 探讨顺铂耐药肺腺癌细胞系Ａ５４９＾ＤＤＰ的耐药,凋亡相关基因的表达及其与亲代细胞Ａ５４９的差异,观察差异表达基因的反义寡核苷酸的逆转作用。方法 将人工合成的反义,正义硫代脱氧寡核苷酸（Ｓ－ｏｌｉｇｏｄｌｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,Ｓ－ＯＤＮ）经脂质体包后转染Ａ５４９＾ＤＤＰ细胞,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ水平,免疫细胞化学及流式细胞－抗体检测相应蛋白及增殖抗原Ｋｉ－６７     

肺癌组织中bcl—2的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

探讨凋亡相关基因ｂｃｌ－２在肺癌中的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系。方法对３８例肺癌组织及２１例肺部良性组织,应用原位杂交技术检测了ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达情况;应用ＴＵＮＥＬ技术对细胞凋亡情况进行了检测;应用免疫组织化学法对增殖核抗原（ＰＣＮＡ）等进行检测。并分别定义凋亡指数和增殖指数。结果肺癌组织ｂｃｌ－２基因及ＰＣＮＡ的表达明显高于肺癌良组织,Ｐ〈０．０１,肺癌组织中中凋亡指数和增殖指数（３．     

辐射诱导鼻咽癌细胞系凋亡及其相关基因的研究

目的Ｘ线诱导人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ和ＣＮＥ－２凋亡及其相关基因的研究。方法应用ＤＮＡ荧光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２、免疫组化、ＲＴ－ＰＣＲ、ＤＮＡ杂交等方法进行观察和检验。结果一定剂量照射后,ＣＮＥ凋亡指数与时间、剂量有相关性,ＣＮＥ和ＣＮＥ－２两种细胞系存在明显不同的凋亡反应。免疫组化方法检测,ＣＮＥ的ｂｃｌ－２蛋白呈强阳性,而ＣＮＥ－２为阴性;进一步采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测,发现ＣＮＥ－２存在ｐ５３ｍＲＮＡ扩增产物,而ＣＮＥ却不存在。ＣＮＥ和ＣＮＥ－２的ｐ５３及ｂｃｌ－２基因的ＤＮＡ杂交结果均为阳性,但ＣＮＥ细胞ｐ５３基因的２．８ｋｂ片段较５．６ｋｂ片段明显减弱,说明在ＣＮＥ中存在ｐ５３基因的部分缺失。结论人鼻咽癌细胞系的凋亡指数有时间、剂量相关性;ＣＮＥ、ＣＮＥ－２两种细胞系的凋亡指数有明显差异,可能与ＣＮＥ中抗凋亡基因ｂｃｌ－２的过度表达及ｐ５３基因部分缺失密切相关。     

RT—PCR定量检测GST—πmRNA的表达

目的：建立一个用于测定临床样本中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｍＲＮＡ表达水平的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量技术。方法：根据共扩增ＰＣＲ定量原理，通过多对引物的特异性分析和动力学筛选，建立了以β－ａｃｔｉｎ作内参，底片扫描定量的ＲＴ－ＰＣＲ法，并对３０例食管癌组织和癌旁组织ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平进行了检测。结果：本方法灵敏度高、重复性好（批内ＣＶ＜１６％；批间ＣＶ＜３０％）、不用同位素标记，ＧＳＴ－π／β－ａｃｔｉｎ比值不受肝素、ＳＤＳ等的影响。２３例食管癌组织的ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平（１．９８±０．７６）明显高于２１例癌旁组织表达水平（１．０２±０．５８）（Ｐ＜０．０１）。结论：所建立的方法能反映ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达的微小差异并能作批量分析，ＧＳＴ－πｍＲＮＡ可作为食管癌的肿瘤基因标志。     

肝癌多药耐药细胞株P—gp,MRP,GST—π表达水平的观察

为研究人肝癌多药耐药细胞株的耐药机理，应用ＢＥＬ－７４０２细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）的浓度，长期筛选培养，得到肝癌多药耐药株ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ。经ＭＴＴ法检测ＢＥＬ－７４０２对长春新碱（ＶＣＲ）等８种抗癌药的抗性提高了２７倍～１１００倍。采用流式细胞技术检测了细胞株表面ＭＤＲ１蛋白Ｐ－ｇｐ、多药耐药相关蛋白ＭＲＰ及谷脱甘肽硫转移酶ＧＳＴ－π的表达；用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了ＭＤＲ及ＭＲＰ基因表达水平。流式细胞分析发现，９３．５％～９７．４％的ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞表面Ｐ－ｇｐ表达阳性；８４．７％～９０．２％的ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞表面ＭＲＰ表达阳性；ＢＥＬ－７４０２细胞与ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞ＧＳＴ－π的表达无明显变化。ＲＴ－ＰＣＲ证实此细胞株中有ＭＤＲ及ＭＲＰｍＲＮＡ的较高表达。     

肺癌组织酸性谷胱甘肽S—转移酶基因测定及其临床意义

研究运用ＲＴ－ＰＣＲ方法对５１例手术切除肺癌组织和相应的癌周正常肺组织进行ＧＳＴ－πｍＲＮＡ水平检测。结果表明：ＧＳＴ－πｍＲＮＡ在正常肺组织和肺癌组织中表达阳性率分别为１９．６％（１０／５１）和５１．０％（２６／５１），两者之间具有明显差别。ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达与肿瘤病理类型、组织分化、ＴＮＭ分期等均无明显的相关性（Ｐ＞０．０５）。上述结果表明肺组织细胞在恶变过程中ＧＳＴ－πｍＲＮＡ水平表达明显增加，提示ＧＳＴ－π基因是肺癌肿瘤标志之一，同时在肺癌先天性耐药机制中占有重要的作用     

汉防已甲素对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖抑制和诱导凋亡的机制研究

目的　探讨汉防已甲素（Ｔｅｔ）对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖和凋亡的影响。方法　将人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９设不同浓度Ｔｅｔ处理组,并设立空白对照组。采用ＭＴＴ法观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞体外生长的抑制作用;采用透射电镜、流式细胞术观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ １０９细胞凋亡的影响;采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、ＲＴ-ＰＣＲ观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞凋亡相关蛋白和ｍＲＮＡ表达的影响。结果　Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞的抑制作用呈时间 剂量依赖性（Ｐ＜０.０５）,Ｔｅｔ干预４８、７２ｈＥｃａ-１０９细胞的ＩＣ５０分别为（２０.８８６±０.２１５）μｍｏｌ／Ｌ和（１４.３５２±０.１０２）μｍｏｌ／Ｌ。３０μｍｏｌ／ＬＴｅｔ处理细胞４８ｈ后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成。分别以２０、３０、４０μｍｏｌ／Ｌ的Ｔｅｔ干预Ｅｃａ-１０９细胞４８ｈ后,流式细胞术显示早期凋亡率依次为０.１２％、０.３４％和０.３１％,中晚期凋亡率依次为４.０２％、７.４３％和７７.４２％;ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示,Ｂｃｌ-２蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度的增加而逐渐下调（Ｐ＜０.０５）,Ｂａｘ蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度增加而逐渐上调（Ｐ＜０.０５）,而ｐ５３蛋白水平在处理前后无明显变化。结论　Ｔｅｔ可以抑制食管癌Ｅｃａ-１０９细胞生长,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Ｂｃｌ-２表达,上调Ｂａｘ表达有关。     

核酶对人肺腺癌细胞多药耐药的逆转

目的 探讨针对多药耐药基因（ｍｄｒｌ）的核酶对肺腺癌细胞多药耐药的逆转作用。方法以ｍｄｒｌ ｍＲＮＡ ８８０位点为靶位点,通过脂质介导,将抗ｍｄｒｌ核酶表达质粒（ｐＨ β Ａｐｒ－ｌ ｎｅｏ／ｍｄｒｌ－Ｒｂ）导入肺腺癌耐药细胞株Ａ５４９／Ｒ。分别采用ＲＴ－ＰＣＲ、流式细胞仪检测术、罗丹明聚集及ＭＴＴ方法,观察细胞的ｍｄｒｌ ｍＲＮＡ、Ｐ糖蛋白（Ｐ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｐｇｐ）表达和对阿霉素敏     

细胞凋亡及其相关基因与乳腺癌预后关系的研究

目的：分析乳腺癌中凋亡细胞数量、凋亡相关基因－－ｂｃｌ－２、ｐ５３的表达、细胞增殖标志物ＰＣＮＡ（增殖细胞核抗原）的表达,与影响乳腺癌预后的因素（肿瘤大小,ＴＮＭ分期,淋巴结转移情况,雌孕激素受体情况等）之间的关系及其对预后的影响。方法：凋亡细胞的检测采用原位ＤＮＡ缺口末端标记ＴＵＮＥＬ法,ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ、ＥＲ（雌激素受体）及ＰＲ（孕激素受体）检测采用免疫组化ＬＳＡＢ法。结果：本组２     

bcl—2基因与乳腺癌发生发展的相关性

ｂｃｌ－２是调控细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）的重要基因，其产物能抑制细胞凋亡或称程序性细胞死亡（ＰｒｏｇｒａｍｅｄＣｅｌＤｅａｔｈ，ＰＣＲ）过程，在人乳腺癌细胞中有不同程度的表达。本文就ｂｃｌ－２基因及其相关蛋白质的特性、生物学作用，以及ｂｃｌ－２...     

非小细胞肺癌端粒酶活性与端粒酶RNA、端粒酶催化亚单位的相关性及其意义

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)端粒酶活性（telomerase activity,TA)、端粒酶RNA（telomerase RNA,hTR）端粒酶催化亚单位（telomerase catalytic subunit,hTRT/hEST2)编码基因的表达,彼此间相关性及其预后意义。方法 TRAP－PCR（telomerase repeat amplification protocol PCR)检测TA,RT－PCR检测hTR,原位杂交检测hTRT/hEST2mRNA表达。结果 非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2 mRNA阳性率分别为68．4％（26／38）、55．2％（32／58）和74．1％（43／58）,TA与hTRT/hEST2阳性相关（r=0.84,P=0.01),与hTR无相关性（r=0.16,P=0.23）。低分化以及有淋巴结或远处转移者TA及hTRT/hEST2阳性率增高;TA及hTRT/hEST2阳性组中位生存期（10．4个月,7．5个月）低于阴性组（13．5个月,14．7个月;P＝0．074,P＝0．01）,hTR阳性组中位生存期（12．9个月）略高于阴性组（11．5个月,P＝0．23）,仅hTRT/hEST2阳性与阴性组生存期差异有显著性;多因素Cox回归分析hTRT/hEST2对生存期有影响。结论 非小细胞肺癌TA、hEST2阳性与阴性组生存期差异有显著性;多因素Cox回归分析hTRT/hEST2对生存期有影响。结论 非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2表达高于癌旁正常组织;hTRT/hEST2够能反应TA活性,二者为NSCLC恶性表型增高的标志;hTRT/hEST2具有独立的预后意义。     

非小细胞肺癌耐药相关基因表达与细胞凋亡相关性及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（Non－Small CellLung Cancer,NSCLC）多种耐药相关基因MRP、MDR1、c－erbB－2表达与细胞凋亡及相关基因bc1－2、c－myc的关系与意义。方法RT－PCR、免疫组化分析多种耐药、凋亡相关基因mRNA及蛋白表达,原位末端标记Terminaldeoxynucleotidyltransferase（TdT）－mediatedbiotind UT Pnickend－labeling,TUNEL检测凋亡细胞。结果63例NSCLCMRP、MDR1、c－erbB－2、bc1－2、c－mycmRNA阳性率分别为81．0％（51／63）、38．1％（24／63）、47．6％（30／63）、65．1％（41／63）、76．2％（48／63）,均高于相应的蛋白表达水平（分别为74．6％、34．9％、46．0％、61．9％、71．4％）,二者具高度相关性（相关系数r＝＋0．76以上,P＜0．02）,5例癌旁组织仅2例c－myc弱阳性,余皆阴性。c－myc、bc1－2与c－erbB－2呈正相关（r＝＋0．54,P＝0．001,r＝＋0．48,P＝0．023）,与MRP、MDR1无相关性。凋亡指数与bc1－2负相关（r＝－0．58,P＝0．017）,与MRP、MDR1、c－erbB－2、c－myc无相关性;腺癌及鳞癌化疗有效组凋亡指数均数（27．2±2．1,30．5±1．8）高于化疗无效组（9．4±1．3,12．6±2．4）（P＝0．001,P＝0．004）,bcl－2、MRP、c－erbB－2阳性率（31．8％,40．9％,22．9％）低于化疗无效组（77．4％,90．3％,67．5％）（P＝0．03,P＝0．01,P＝0．01）,但两组间MDR1、c－myc表达无显著差异（P＝0．06,P＝0．28）。三种以上耐药及凋亡相关基因共表达者中位生存期（8．6个月）明显短于3种以下共表达者（15．5个月）（P＝0．01）。结论NSCLC耐药不仅与多种耐药基因有关,亦涉及细胞凋亡及其相关基因表达,多种耐药及凋亡相关基因共表达与生存期有关。     

Repression of the telomerase catalytic subunit by a gene on human chromosome 3 that induces cellular senescence

The cellular senescence program is controlled by multiple genetic pathways, one of which involves the regulation of telomerase and telomere shortening. The introduction of a normal human chromosome 3 into the human renal cell carcinoma cell line RCC23 caused repression of telomerase activity, progressive shortening of telomeres, and restoration of the cellular senescence program. We attributed the repression of telomerase activity to the marked downregulation of the gene encoding the catalytic subunit of telomerase (hEST2/hTRT) but not another protein component (TP1/TLP1) or the RNA component of telomerase. These results suggest that a senescence-inducing gene on chromosome 3 controls hEST2/hTRT gene expression either directly or indirectly and support the notion that hEST2/hTRT is the major determinant of telomerase enzymatic activity in human cells. Mol. Carcinog. 22:65–72, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc. This article is a US Government work and, as such, is in the public domain in the United States of America.     

High telomerase activity and high HTRT mRNA expression differentiate pure myxoid and myxoid/round-cell liposarcomas

Molecular markers characterizing the transition of a myxoid to a more round-cell liposarcoma have not been described. To examine whether telomerase activity, hTRT and hTR mRNA expression were associated with tumor progression in myxoid liposarcoma, we investigated a total of 28 myxoid liposarcomas (13 pure myxoid tumors, 14 mixed-type tumors, and 1 pure round-cell variant) from 19 patients. Telomerase activity was detected by using the fluorescent PCR-based TRAP-assay. Expression of hTRT and hTR mRNAs was determined by the semi-quantitative RT-PCR. On the basis of only one tumor sample per patient, telomerase activity was found in 9 of 9 myxoid/round-cell liposarcomas and in 3 of 10 pure myxoid tumors. Elevated hTRT expression was found in 13 of 17 liposarcomas. All telomerase-positive tumors showed hTRT expression, whereas there were 3 cases showing hTRT expression without telomerase activity. HTR mRNA expression was elevated in all 19 liposarcomas. Thus, only the levels of telomerase activity and of hTRT mRNA expression differentiated pure myxoid liposarcoma and myxoid/round-cell liposarcoma (p < 0.003 and p = 0.029, respectively). We believe that high levels of telomerase activity and of hTRT expression are associated with tumor progression from low-grade pure myxoid to higher-grade malignant round-cell liposarcoma, and may consequently represent a useful prognostic marker for this histological sub-type of soft-tissue tumors.     

不同病变胃粘膜端粒酶活性及其亚单位的检测

目的：探讨端粒酶及其亚单位（ＴＰ１、ｈＴＲ、ｈＴＲＴ）在胃粘膜癌变过程中的作用。方法：端粒酶的检测采用端粒末端重复序列扩增技术（ｔｅｌｏｍｅｒｉｃ　ｒｅｐｅａｔ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ）,端粒酶亚单位的检测采用ＲＴ－ＰＣＲ法。结果：端粒酶阳性检出率在慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中分别为２４．６％（１４／５７）、３８．９％（７／１８）、３７．５％（３／８）及９２．３％（６０／６５）,正常胃粘膜未检测到端粒酶活性,与以上各病变组织有显著性差异（Ｐ＜０．０５～０．０１）,而慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和异型增生组织中端粒酶阳性率亦明显低于胃癌组织（Ｐ＜０．０１）;端粒酶的表达与临床病理指标无相关性;ＲＴ－ＰＣＲ定性检测发现端粒酶亚单位ｈＴＲ和ＴＰ１在大多数胃粘膜中都有表达,而ｈＴＲＴ主要在胃癌及部分癌前组织中表达,且在胃癌中ｈＴＲＴ的表达与端粒酶活性之间具有明显的相关性（Ｐ＜０．０１）。结论：端粒酶不仅在胃癌组织中高表达,在部分癌前组织中也有表达。提示端粒酶在胃癌的发生过程中可能具有重要作用;端粒酶亚单位ｈＴＲＴ不仅可能作为胃癌的诊断指标,而且还可能作为胃癌基因治疗的靶     

LRP,MRP,MDR1基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨肺耐药蛋白（ｌｕｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＲＰ）,多药耐药蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＲＰ）,和多药耐药基因（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｅ,ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ在非小细胞肺癌（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ,ＮＳＣＬＣ）中的共表达及临床意义。方法 ＲＴ－ＰＣＲ检测ＮＳＣＬＣ冰冻组织中上述耐药     

THE CORRELATION BETWEEN THE EXPRESSION OF MULTIDRUG RESISTANCE RELATED GENE AND CELL APOPTOSIS AND CLINICAL SIGNIFICANCE IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER

The mechanisms about multidrug resistance (MDR) which are studied widely in present include overexpression of multidrug resistance protein such as MDR1/P-gp, MRP (multidrug resistance related protein), LRP (lung resistance protein), increased detoxification of Glutathione / Glutathione - S - transferase II.[1-3] Recent studies have showed that inhibition of cell apoptosis and overexpression of apoptosis related gene is another reason for the MDR.[4] But there are few reports about the …