p16基因转染对肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83—a的生长抑制作用

目的 探讨肿瘤抑制基因p16对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法 应用FuGene转染方法将p16基因的表达质粒转入一对分别具高、低转移能力的肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83－a中。对p16蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线、克隆形成率、原位末端标记分析和流式细胞术分析。结果 p16基因的过表达只能使AGZY83－a和Anip973的G1期细胞比例提高,但细胞生长曲线、克隆形成率均未发生改变,原位末端标记分析也未发现凋亡信号。结论 本实验结果提示p16基因在AGZY83－a和Anip973中的过表达不能抑制它们的生长。     

野生型p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用 ,为胃癌发生的分子基础和基因治疗提供理论依据。方法　采用亚克隆技术将p16克隆入真核表达载体pCI中 ,用Lipofectamine ,将p16基因转染入胃癌细胞株 ,观察p16基因的表达对胃癌细胞株生长的影响。结果　p16基因克隆入真核表达载体 ,转染胃癌细胞后 ,可抑制胃癌细胞的生长。经Dotblot和Westernblot杂交证实 ,在mRNA和蛋白质水平均有外源性p16基因的表达。结论　野生型p16基因导入p16基因功能缺失的细胞 ,能恢复其抑制癌细胞生长的功能。     

野生型p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用。为胃癌发生的分子基础和基因治疗提供理论依据。方法 采用亚克隆技术将p16克隆入真核表达载体pCI中，用Lipofectamine，将p16基因转染入胃癌细胞株，观察p16基因的表达对胃癌细胞株生长的影响。结果 p16基因克隆入真核表达载体。转染胃癌细胞后，可抑制胃癌细胞的生长。经Dot blot和Westernblot杂交证实。在mRNA和蛋白质水平均有外源性p16基因的表达。结论 野生型p16基因导入p16基因功能缺失的细胞，能恢复其抑制癌细胞生长的功能。     

高转移肺腺癌细胞系A2和A549中p16表达的研究

「目的」探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用。「方法」用ＦｕＧｅｎｅ传染方法将ｐ１６的表达质粒分别转入两个ｐ１６未表达的具高转移能力的肺腺癌细胞系Ａ２和Ａ５４９中，并对转染前后的肿瘤细胞进行了细胞生长曲线、凋亡检测、电镜和流式细胞仪分析。「结果」发现Ａ２、Ａ５４９细胞系转染后的细胞生长曲线的斜率要比转染前低得多，电镜分析也可看出转染前后的细胞形态发生了改变，但均未检测到凋亡信号。经流式细胞仪分析发现：转染后的细胞系均在Ｇ０～Ｇ１期发生阻滞。「结论」ｐ１６基因在Ａ２、Ａ５４９细胞中表达可以抑制其生长。对于发生了ｐ１６基因突变或缺失而导致ｐ１６蛋白在数量或功能上发生改变的恶性肿瘤，外源性ｐ基因的导入不失为一种治疗恶性肿瘤的有效途径。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的 观察外源性野外型ｐ５３对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３突变的人肺巨细胞癌系８０１－Ｄ。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺｉＰ－ｐ５３。用基因枪介导外源基因。经Ｇ４１８筛选得到转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３。用ＰＣＲ检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３体外长期传代有外源性ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显     

p53基因对人胃癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

p53基因异常是人类肿瘤中最常见的基因变异之一．是最有希望用于肿瘤基因治疗的目的基因。在人胃癌组织中有较高频率的p53基因缺失和突变，为探讨p53基因用于胃癌治疗的可行性，我们采用脂质体介导方法将外源性野生型p53基因转染一株p53基因有部分缺失的人胃癌BGC823细胞，获得较高的转染效率，对转染后细胞DNA，RNA和蛋白进行分析．结果表明外源性p53基因已整合人细胞并获稳定表达，表达有外源性野生型p53基因的细胞生长速度，软琼脂集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。这一结果进一步证明p53基因在胃癌发生发展过程中起重要作用．本研究为采用野生型p53基因转染进行胃癌基因治疗提供了细胞学实验依据。     

重组人p53腺病毒注射液(今又生)对人肺腺癌细胞生长及化疗敏感性研究

背景与目的在肺癌中,p53突变是最常见的基因改变之一,p53基因的突变常导致细胞对化疗不敏感。有研究表明导入野生型p53基因能增加化疗药物的敏感性。本研究的目的是探讨重组人p53腺病毒注射液(Adp53,今又生,Gendicine)对人肺腺癌细胞生长及化疗敏感性的影响。方法将重组腺病毒载体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌细胞株GLC82(含突变型p53基因)及A549(含野生型p53基因),并联合应用化疗药物顺铂(DDP),通过Westernblot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法和流式细胞术观察对细胞生长及细胞周期、凋亡的影响。结果通过Westernblot证实了外源p53基因能在GLC82及A549细胞中高效表达。MTT法观察到Adp53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性效应。100MOIAdp53与0.5mg/LDDP联合应用后72h,对A549细胞的生长抑制率达43.13%±0.72%,显著高于单用Adp53组(23.44%±0.54%,P<0.001)和DDP组(14.17%±1.39%,P<0.001);对GLC82细胞生长的抑制率达63.73%±0.92%,显著高于单用Adp53组(41.51%±0.59%,P<0.001)和DDP组(56.11%±1.12%,P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,Adp53与DDP联合应用能使细胞阻滞于G0G1期,S期细胞比例明显减少。Adp53+DDP组A549细胞凋亡率为28.99%±1.07%,显著高于单用Adp53组(15.35%±1.31%,P<0.001)和DDP组(1.74%±0.77%,P<0.001);Adp53+DDP组GLC82细胞凋亡率为62.98%±2.43%,显著高于单用Adp53组(20.88%±0.71%,P<0.001)和DDP组(6.91%±1.52%,P<0.001)。结论重组人p53腺病毒注射液能抑制肺腺癌细胞的生长,并不受内源性p53状态的影响。它与抗癌药DDP联用能显著增加肺腺癌细胞的化疗敏感性。     

Ad—p53与Ad—p16联合对人肺腺癌GLC—82细胞作用的研究

目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用,通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下,Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞,对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强,表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合,可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的　观察外源性野生型p53对有p53基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法　用PCR SSCP及DNA测序 ,选择p53突变的人肺巨细胞癌系 80 1 D。构建野生型p53表达质粒PZiP p53。用基因枪介导外源基因。经G41 8筛选得到转染细胞系 80 1 D p53。用PCR检测外源基因 ,观察转染细胞恶性生长的变化。结果　转染细胞系 80 1 D p53体外长期传代有外源性p53基因存在 ,转染细胞生长明显受到抑制 ,集落形成抑制率达 96% ,裸鼠异种移植致瘤性降低 ,肿瘤生长明显缓慢。结论　外源性野生型p53经基因枪导入有p53基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中 ,且明显抑制所转染的癌细胞的恶性生长。     

p53p21双基因转染对肝癌细胞生长的抑制作用研究

 目的　研究 p5 3和 p2 1双基因对肝癌细胞的联合基因治疗效果。 方法　通过磷酸钙 -DNA共沉淀法将p5 3和 p2 1双基因真核共表达载体及单基因表达载体引入肝癌细胞SMMC 772 1,用直接镜检 ,DNAladder检测法和四甲基偶氮唑 (MTT)法等研究细胞生长情况。结果　转染外源 p5 3p2 1双基因的肝癌细胞SMMC 772 1与未转染及单基因转染的肝癌细胞SMMC 772 1相比 ,其增殖速度显著下降。结论　p5 3和p2 1双基因对肝癌细胞的联合基因治疗效果比较明显 ,对肝癌基因治疗的进一步研究具有指导意义。     

外源性P73基因对WtP53型人肺腺癌细胞A549化疗敏感性的影响

目的 研究外源p73基因转染wtp53型人肺腺癌A549细胞对其化疗药物敏感性的影响。方法 用脂质体介导的转染技术。将含有全长人野生型p73α cDNA和野生型p53 cDNA的真核表达重组质粒分别导入A549细胞，观察基因转染前后肿瘤细胞对化疗药物顺铂和阿霉素敏感性的变化。结果 A549-p73α细胞可以稳定地表达P73α蛋白，其生长速度较未转染p73α和转染wtp53基因的A549细胞明显减慢，克隆形成数下降，凋亡细胞明显增多。与未转染组比较，在原本没有抑制和杀伤作用的化疗药物浓度作用下A549-p73α细胞生长明显受到抑制，顺铂和阿霉素的IC50值分别降低为约1／6和／70。结论 研究显示外源性p73基因的导人增加了wtp53型人肺腺癌A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药物的敏感性，为p73基因用于治疗wtp53不能发挥作用的恶性肿瘤提供实验依据。     

p16基因抑制食管癌细胞生长的研究

目的 探讨ｐ１６基因对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌致癌机理的研究和基因治疗提供理论基础。方法 我们采用基因转染技术,将全长野生型ｐ１６ ｃＤＮＡ转染到经亚硝胺诱发的人胎儿食管癌细胞系中,该细胞内源性ｐ１６基因已发生纯合性缺失。结果 转染ｐ１６基因的食管癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约４倍。对细胞周期分析表明,处在Ｇ０￣Ｇ１期的细胞由３３．７％增加到６８．６％。经Ｄｏｔ     

p53调控的肺癌细胞顺铂敏感性相关基因片段的分离和克隆

目的 克隆野生型p53(wtp53)影响人大细胞肺癌801一D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。方法 采用转基因方法补偿801-D细胞p53功能，分别提取经IC50浓度顺铂刺激的转染wtp53细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp53细胞RNA，用银染mRNA差异显示方法分离差异表达基因，反转录点杂交和巢式PCR进行确证。阳性片段进行克隆及序列分析。结果 获得6条阳性片段，2条含有开放阅读框架(ORF)，其中1条片段部分与核糖核苷还原酶α链有56％同源性，另一片段D1含有一个长ORF，与已知cDNA序列同源率很低。结论 p53对801-D细胞顺铂敏感性的影响有明显的基因水平改变，可能诱导了相关基因表达。     

p73基因对人肺腺癌细胞H1299化疗敏感性的影响

背景与目的:实验证明野生型p53基因能增强大多数非小细胞肺癌的化疗敏感性。p53基因的同源体p73与其在结构和功能上都具有高度的相似性。本研究拟探讨p73基因对人肺腺癌细胞株H1299化疗敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将p73α基因导入人肺腺癌细胞株H1299,G418筛选获得稳定表达P73α的阳性细胞克隆。Westernblot检测转染细胞中P73α蛋白的表达;MTT法检测细胞存活率,观察转染细胞对阿霉素、顺铂的敏感性变化;采用流式细胞仪和TUNEL法检测.p73646化疗药诱导前后转染细胞凋亡的变化;克隆形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:转染p73α基因的H1299细胞可以稳定高表达P73α蛋白。MTT实验提示顺铂和阿霉素的IC50值分别减少了86.2%和99.2%,转染细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度(1.25μmol/L的顺铂或0.05μmol/L的阿霉素)作用下生长明显受到抑制。流式细胞术显示p73α基因转染后顺铂诱导的细胞凋亡率从10.1%升高到38.4%(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率从12.1%升高到49.3%(P<0.01)。克隆形成实验显示p73α基因转染能明显降低化疗后H1299细胞的克隆形成数(P<0.01),对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为1.8和2.6倍。结论:转染p73基因可以提高H1299细胞对阿霉素、顺铂等化疗药的敏感性。该作用可     

E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响

目的　探讨腺病毒 5型早期区 1A(Ad5E1A)基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响 ,为人肺腺癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法　用本室构建的真核表达重组质粒pcDNA3 E1A ,通过脂质体介导将E1A基因转入人肺腺癌细胞系 (Anip 973) ,经G418筛选获得稳定表达E1A基因的转染细胞 (Anip 973 E1A)。通过体内、外实验 (生长速度、倍增时间、软琼脂集落形成、裸鼠致瘤性及转移能力等 ) ,观察E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响。结果　体外实验显示 ,Anip 973 E1A细胞生长速度减慢 ,倍增时间延长 ;软琼脂集落形成能力显著降低 ,亲本Anip 973、Anip 973 vect和Anip 973 E1A细胞集落形成率分别为 19.7%、17.2 %和 2 .3% ,集落形成抑制率为 86 .6 %。体内实验显示 ,Anip 973 E1A细胞组出瘤时间晚 ,肿瘤体积小 ,有 2只裸小鼠至实验结束未触及肿瘤 (2 /6 ) ,抑瘤率为 6 0 .1%。第 2 1天计数肺转移灶 ,亲本Anip 973、Anip 973 vect和Anip 973 E1A细胞组肺转移灶数目分别为 16 .1± 3.2、15 .4± 3.8和 7.3± 2 .3个 ,转移抑制率为 5 2 .6 %。结论　E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的恶性表型 ,降低裸鼠致瘤性 ,减少肺转移灶形成 ,为人肺腺癌E1A基因治疗提供了实验依据。     

p16基因与肺癌关系研究进展

肿瘤抑癌基因p16对于肺癌的早期诊断非常重要,启动子的异常甲基化、第二号外显子的纯合子缺失、基因点突变、蛋白及mRNA的缺失表达都与肺癌的发生关系密切,且与肺癌的基因治疗、药物靶向治疗有关.     

转染p16基因对人肺腺癌细胞放射效应的影响

目的 :探讨p16基因与人肺腺癌细胞放射效应的关系。方法 :免疫组化、Westernblot方法检测人肺腺癌细胞株Anip973、AGZY83a的p16蛋白表达 ,FuGene转染方法把 p16表达载体转入这两个细胞株 ,进行细胞存活曲线、流式细胞仪 (FCM )分析细胞周期分布。结果 :p16蛋白表达AGZY83a为 87.4 % ,明显高于Anip973(5 2 % ) ,细胞存活曲线显示低表达的Anip973与转染后Anip973p16的Dq值有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,D0 值间无显著差异 (P >0 .0 5 )。p16蛋白高表达的AGZY83a与AGZY83ap16间D0 值、Dq值均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;流式细胞仪测定细胞周期结果显示 ,Anip973转染 p16基因后出现G2 M期比例增加 ,S期比例减少。结论 :转染 p16基因后可能通过改变细胞周期分布及抑制细胞对照射后的亚致死性损伤修复 ,来改变p16蛋白低表达的人肺腺癌细胞株Anip973的放射效应 ,而对于高表达的AGZY83a则无显著影响。